静脉移植骨髓间充质干细胞促进脊髓损伤后GDNF基因的表达

[目的]探讨经静脉移植骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠脊髓损伤(SCI)后胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响。[方法]MSCs提取自成年Wistar大鼠的股骨干骨髓,经原代培养、鉴定及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)核标记。以改良Allen′s打击装置制作大鼠T10节段脊髓损伤(SCl)模型,于伤后立即缝合切口并经尾静脉注射移植MSCs。实验共分为3组MSCs尾静脉移植组(A组)、生理盐水注射组(B组)、正常对照组(C组)。术后不同时间点应用免疫组化法和逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)观察MSCs移植后的存活状态以及不同时间点GDNF基因的表达变化。[结果]免疫组化结果MSCs经尾静脉移植后在损伤脊髓平面可以检测到迁移及存活,标记细胞呈棕黄色的核标记,以损伤区域为多并向周围迁移,移植术后第14d,A组Brdu阳性细胞较多,最远于距离损伤区2.5cm处可检测到。B及C组则均未检测到阳性细胞。RT-PCR结果移植术后第1、3、5d,A组表达量呈逐渐升高趋势,B组呈一过性表达升高,C组无变化。各时间点A组GDNFmRNA的表达量明显高于B组,P<0.05。免疫组化结果移植术后第7、14、28dGDNF的表达量明显高于B组,P<0.05。[结论]骨髓间充质干细胞经尾静脉移植后可迁移至脊髓损伤区域,并上调胶质细胞源性神经营养因子基因的表达,是该移植方式修复大鼠脊髓损伤的机制之一。     

Ephrin-B1在大鼠脊髓损伤的表达

[目的]探讨红细胞生成素诱导肝癌细胞株配体-B1 (Ephrin-B1)在大鼠脊髓损伤的表达变化.[方法]将60只成年Wistar大鼠分正常组、假手术组、伤后3、7、14 d及28 d组.假手术组大鼠不损伤脊髓,损伤组大鼠采用Allen's氏打击法损伤T10脊髓.分别在各个时间点取材,免疫荧光和Western Blot检测Ephrin-B1蛋白表达情况.[结果]免疫荧光结果显示Ephrin-B1在正常、假手术和损伤脊髓的灰质和白质中均有表达,但在损伤脊髓组织中表达较高,脊髓组织中的星形胶质细胞表达Ephrin-B1.Western Blot显示损伤组比对照组Ephrin-B1蛋白含量显著增加(P＜0.01),从伤后3d开始持续到伤后28 d;伤后14 d蛋白含量达到高峰,明显高于对照组及伤后其他组(P＜0.01);伤后28 d蛋白含量较14 d减少(P＜0.01),与伤后7d相比无显著性差异(P＞0.05).[结论]Ephrin-B1在大鼠脊髓损伤后表达升高,伤后14d表达升高显著,表达于脊髓的星形胶质细胞.     

脊髓损伤后血管内皮生长因子的表达及细胞凋亡

目的 观察大鼠急性脊髓损伤后不同时间点血管内皮生长因子(VEGF)的表达及局部脊髓组织细胞凋亡的情况,进一步了解脊髓损伤后的病理变化情况.方法 雌性SD大鼠,随机分为对照组(A组)、脊髓损伤组(B组),每组各30只.所有大鼠行T12节段椎板切除开窗,暴露脊髓.A组只打开椎板,不打击脊髓.B组按改良Allen法(以10 g×6 cm力撞击脊髓)制作大鼠急性脊髓损伤模型.各组分别于伤后1、3、5、7、14、28 d随机处死5只,损伤部位取材,VEGF、细胞凋亡免疫组化染色及在光镜下观察,计算VEGF阳性细胞数及凋亡细胞数.结果 A组脊髓中央管周围和脊髓软脊膜见少量VEGF表达,其它部位未见表达;B组脊髓损伤后VEGF在脊髓损伤及损伤周边区高表达,5 d达高峰,7 d和14 d表达仍较明显,28 d见少量表达;B组各时间点VEGF表达和A组相比差异均有统计学意义(P<0.05).A组各时间点凋亡细胞少见,B组则较明显,凋亡细胞在脊髓损伤后逐渐增多,1 d达高峰,3 d和5 d仍较多,7、14、28 d仍有表达;B组各时间点细胞凋亡和A组相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论 VEGF参与急性脊髓损伤后系列病理改变,且持续时间较长.急性脊髓损伤后较长时间内存在着继发性细胞凋亡现象.     

成年大鼠SCI后神经生长导向因子Netrin和Slit的表达及定位

目的：观察成年大鼠急性脊髓损伤（SCI）后不同时点Netrin和Slit的表达及分布，探讨再生轴突的导向机制。方法：成年SD大鼠40只，随机分为SCI后2、4、7、14d组和对照组共5组，每组8只．SCI组采用Allen’s法制作SCI模型．按时间点顺序取材，免疫荧光激光共聚焦扫描检查Netrin—1和Slit2蛋白在损伤脊髓局部的表达及定位。结果：SCI后2d，大鼠脊髓损伤部位即出现Netrin-1和Slit2的同步表达上调．而后均迅速增强并于1周时达到峰值，且二者在轴突胞膜上均有表达．之后缓慢下调；SCI后同一时点Netrin-1在脊髓中均匀表达，而Slit2则在脊髓前、后角及中央管等不同部位存在表达差异。结论：成年大鼠SCI后脊髓中枢存在吸引因子Netrin-1和排斥因子Slit2的同步高表达及轴突胞膜上共同表达，这可能是SCI后星形胶质细胞反应性增生的一种表现，可能对轴突导向性再生起关键性作用。     

神经生长导向因子Slit2在成年大鼠急性脊髓损伤后的表达

目的观察Slit2在大鼠急性脊髓损伤后不同时点表达量的变化和分布，探讨轴突再生导向机制。方法成年SD大鼠采用Allen’s法制作脊髓损伤（SCI）模型，分别于损伤后第2、4、7、14天取材，半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析Sht2 mRNA表达水平变化，免疫组织化学法观察Slit蛋白在损伤脊髓区的分布情况。结果RT—PCR提示脊髓损伤后Slit2即开始出现转录上调，表达量持续增高并于第7天达到顶峰，之后逐步下降；免疫组织化学提示Slit2阳性信号先后出现在急性SCI区灰质胶质细胞及神经元胞质中，以前、后角及中央管周围较为聚集。结论大鼠SCI后有Slit2表达上调出现并在损伤脊髓灰质广泛分布，可能是轴索再生过程中生长锥导向性生长的关键调节者。     

大鼠脊髓损伤急性期睾丸生精细胞凋亡及Fas和Bcl-2蛋白表达的改变

目的 研究脊髓损伤急性期对成年大鼠睾丸生精功能障碍的影响及其机制.方法 80只SD雄性大鼠随机分为脊髓损伤组(40只)和脊髓非损伤组(40只),采用原位细胞凋亡TUNEL法检测脊髓损伤后第1、2、4、8、1 6天睾丸生精细胞的形态及数量变化.采用免疫组化SABC法检测大鼠脊髓损伤后第1、2、4、8、16天睾丸生精细胞Fas、Bcl-2表达情况.结果 大鼠脊髓损伤后睾丸TUNEL标记阳性凋亡细胞第4天开始出现,多表达于初级、次级精母细胞及精原细胞,至第16d,随时间点推移阳性凋亡细胞数逐渐增多.脊髓损伤后第4～16d损伤组睾丸生精细胞Fas表达与非损伤组比较显著增强(P＜0.05),Bcl-2表达损伤组与非损伤组差别无显著性(P＞0.05).结论 大鼠脊髓损伤急性期存在睾丸生精细胞凋亡现象,睾丸生精功能障碍与Fas高表达密切相关,和Bcl-2表达无明显相关性.     

神经节苷脂对大鼠脊髓损伤后微管相关蛋白-2表达的影响及意义

[目的]通过观察单唾液酸四己糖神经节苷脂(monosialotetrahexosyl gangliosides,GM-1)对于大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)表达及运动功能恢复是否能够产生影响来探讨CM-1对大鼠脊髓损伤后神经细胞的保护作用及其机制.[方法]Wistar雌性大鼠66只(体重260～300 g),随机取6只作为正常对照组,余60只采用改良Allen's打击法于T9-11节段椎管制作大鼠急性SCI模型,并随机分为GM-1组(A组)和生理盐水对照组(B组)两组,每组各30只.分别于术后1、7、14、28、56 d采用Rivilin斜扳试验、改良Tarlov评分评价大鼠后肢运动功能恢复程度后处死取材,每组各时相点6只.以组织学和免疫荧光染色观察大鼠脊髓损伤的修复情况.[结果]术后7d起,Rivilin斜扳试验和Tarlov评分在A、B组间比较有显著性差异(P<0.0105),即A组功能恢复明显优于B组.术后56 d:HE染色示A组大鼠脊髓损伤处无明显空洞和瘢痕组织,有各种形态细胞形成,部分细胞有明显分化特征;B组脊髓断端被瘢痕组织填塞,可见大量炎性细胞和成纤维细胞浸润,并有较大脊髓空洞形成.免疫荧光染色发现,A组各时相点MAP-2表达呈阳性细胞数较B组高,差异有统计学意义(P <0.0105).[结论]SCI后,动物神经功能的恢复与MAP-2的表达呈一定的相关性;GM-1可通过增强脊髓损伤后MAP-2的表达来保护大鼠受损后脊髓的神经元.     

嗅鞘细胞移植调节星形细胞活性促进急性脊髓损伤大鼠神经功能恢复

[目的]探讨嗅鞘细胞(OECs)对急性脊髓损伤大鼠星形胶质细胞(AST)激活的影响。[方法]乳鼠嗅球制备嗅鞘细胞,制备急性脊髓损伤模型,随机分为3组,空白组:T_(9-11)椎板去除;对照组:T_(10)脊髓损伤,DMEM/F_(12)移植;实验组:T_(10)脊髓损伤,OEC移植。行BBB评分和体感诱发电位检测评价神经功能,Western Blot检测GFAP、CSPG、bFGF表达变化,观察脊髓损伤后星形胶质细胞激活情况及OEC移植对其影响。[结果](1)脊髓损伤后GFAP阳性细胞数目增加,实验组少于对照组,尼氏染色及NF-200阳性细胞数目实验组多于对照组,差异有统计学意义;(2)Western Blot:脊髓损伤后GFAP、CSPG表达增加,bFGF表达下降,OEC干预后,GFAP、CSPG表达较对照组下降。bFGF表达增加;(3)神经功能:脊髓损伤BBB评分及SEP显示治疗组大鼠神经功能得到改善。[结论]嗅鞘细胞移植可抑制星形胶质细胞增殖,调节因子分泌,促进大鼠脊髓损伤恢复。     

基于Notch/STAT3信号通路探讨bFGF对大鼠脊髓损伤的治疗机制

目的 探讨bFGF对脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）大鼠的治疗作用及Notch/STAT3信号通路的影响。方法 取10周龄雄性SD大鼠40只,采用自由落体打击法建立T10节段SCI模型,其中32只造模成功随机分为模型组、bFGF组,每组16只;另取16只SD大鼠仅暴露T10棘突、硬脊膜和脊髓,作为假手术组。造模后bFGF组腹腔注射100μg/kg bFGF(1次/d,共28 d),模型组和假手术组大鼠同法注射生理盐水。造模后观察各组大鼠存活情况,于造模前及造模后即刻、14 d、28 d行BBB评分评估后肢功能。造模后28 d取损伤部位脊髓组织,行HE、Nissl和碘化丙啶（propidium iodide,PI）染色,观察脊髓组织病理变化、神经元存活（尼氏体数量）和凋亡（PI红染细胞数量）情况;免疫组织化学染色和ELISA法分别检测组织中星形胶质细胞活化标志物[胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）]及炎症因子[IL-1β、TNF-α、干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)]水平;Western b...     

大鼠脊髓损伤后Wnt信号分子的表达变化

目的:探讨大鼠脊髓损伤后不同时期Wnt信号分子Wnt-1、β-连锁蛋白(β-catenin)及糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在脊髓损伤局部的表达情况.方法:50只成年雌性SD大鼠随机均分为对照组和实验组,麻醉下手术显露T9～T11椎板,切除T10全椎板,实验组大鼠用NYU打击器以10g×5cm的打击能量致伤T10脊髓,对照组只行全椎板切除,不致伤脊髓.分别于术后1d、3d、5d、7d、14d每组各取5只大鼠,取以损伤区为中心共15mm范围内(对照组取相应部位)脊髓组织,提取总RNA,采用半定量RT-PCR的方法检测脊髓组织中Wnt-1、β-catenin及GSK-3β的mRNA表达量.结果:脊髓损伤后1d和3d时Wnt-1和β-catenin出现高表达,5d后其表达逐渐减弱,14d左右其表达基本恢复到正常水平,而在脊髓损伤后1d和3d时GSK-3β呈低表达,5d后其表达逐渐增强,各时间点之间差异有显著性(P<0.05).对照组中Wnt-1和β-catenin及GSK-3β均呈低表达,各时间点表达无显著差异(P<0.05).结论:大鼠脊髓损伤后损伤局部脊髓组织中Wnt-1,β-catenin及GSK-3β的表达发生变化,提示Wnt信号在脊髓损伤后的早期被激活,其可能与脊髓损伤后的修复再生有关.     

Immunofluorescence laser confocal expression and localization study of rat nerve growth guidance cues Netrin-1 and Slit2 after spinal cord injury

Objective： To observe the expression and distribution of adult rat axon guidance cues Netrin- 1 and Slit2 at different time points after spinal cord injury and to investigate the guidance mechanism of regenerated axons. Methods： Twenty adult Sprague Dawley （SD） rats were divided randomly into five groups with 4 in each. Four groups of them were used to make Allen＇s spinal cord punch models and we took materials randomly from one of them on the 2nd, 4th, 7th and 14th day respectively after operation. The left one group was taken as the control group. Immun- ofluorescence laser confocal scan was used to examine the co-expression and localization of Netrin- 1 and Slit2 proteinsin the injured site of the spinal cord. Results： Within two weeks after SCI, the expression of Netrin- 1 and Slit2 proteins increased temporarily and there was co-expression of them on the neuron plasma membrane. Conclusions： Synchronous high expression and co-expression of axon attractant Netrin-1 and repellent Slit2 are found in the adult rat injured spinal cord in the damaged local and vicinity parts, and probably, they act as the key regulators of axon guidance regeneration.     

Expression and effect of Caspase-3 in neurons after tractive spinal cord injury in rats

Thereisextensiveapoptosisafterinjuryofthecentralnervoussystem.Apoptosisisarathercomplicatedprocess,involvingwithsubtleregulationsofmacromolecules,likecellreceptor,adaptormolecule,proteaseandinhibitor.Among them,Caspaseproteasefamilyisthecoreinthe processo…     

急性脊髓损伤后促红细胞生成素受体的表达及其意义

目的探讨急性脊髓损伤后促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPO-R)在脊髓内的表达。方法Wistar大鼠69只,随机分为三组：正常对照组(5只,不手术,作为后两组的对照)、假手术组(仅行椎板切除术)和脊髓损伤组。根据术后时间点不同后两组又分为1h、6h、12h、24h、3d、7d、14d和28d八个亚组(每组4只)。采用RT-PCR、Western blot免疫印迹法和免疫组织化学染色法检测EPO及EPO-R的表达。结果正常对照组、假手术组和脊髓损伤组在各时相点均未发现有EPO表达。正常对照组、假手术组未发现EPO-R的表达,脊髓损伤组在伤后1h未见EPO-R mRNA和蛋白的表达,6h开始有表达,12h有明显的表达,至24h达到高峰,3d和7d时仍维持在高表达水平,未见减弱,14d开始下降,至28d时仍有EPO-R蛋白的表达。免疫组化显示EPO-R阳性细胞主要位于神经元、少突胶质细胞、血管内皮细胞和脊髓中央管内室管膜细胞。结论大鼠急性脊髓损伤后脊髓内大量表达EPO-R,这是外源性EPO与EPO-R结合产生神经保护作用的分子基础。     

碱性成纤维细胞生长因子基因修饰的骨髓基质干细胞/乙交酯-丙交酯共聚物复合体对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因修饰的骨髓基质干细胞( BMSCs)与乙交酯-丙交酯共聚物(PI(A)构成的复合体移植于大鼠脊髓半横切处对大鼠脊髓修复的疗效。方法 240只T,半横切脊髓损伤大鼠随机平均分成4组（每组60只）后行相关材料移植：A组移植bFGF-BMSCs+PLGA,B组移植bF(F-BMSCs,C组移植BMSCs,D组仅用生理盐水冲洗。术后3d、2周、3周、8周、12周时每个时间点各组随机取12只大鼠先行BBB运动功能评分及SEP监测;后处死大鼠并取损伤区脊髓组织,6只用于RT-PCR检测bFGF基因mRNA的表达,6只用于免疫组化检测神经丝蛋白-200、生长相关蛋白-43、胶质纤维酸性蛋白的表达,并采用HE染色行形态学观察。结果 BBB评分结果：2周之前各组BBB评分均小于2分,差异均无统计学意义(P＞0.05);3周以后各组评分恢复加快且 A组评分高于其他组,差异均有统计学意义(P＜0.05)。SEP监测结果：术前所有大鼠均可监测剑SEP,术中SEP显示达到潜伏期延长10％或波幅降低50％的脊髓损伤标准,术后3周之前所有大鼠均监测不到SEP,8周之后各组只有部分大鼠能监测到SEP。RT-PCR结果、HE染色及免疫组化结果均显示A组较其他组可明显促进轴突再生。结论 大鼠脊髓半横切损伤后,单纯BMSCs移植可在一定程度上促进神经再生,移植bFGF-BMSCs可改善治疗,而移植bFGF-BMSCs+ PLGA复合体可进一步提高疗效。     

Effect of basic fibroblast growth factor on the expression of glial fibrillary acidic protein after tractive spinal cord injury in rats

Basicfibroblastgrowthfactor(bFGF) isanewneurotrophicfactor(NTF)andhasbeencloselystudiedinrecentyears.1 Itsneurotrophiceffectsincludepromotioninneuronalregenerationandsurvival. StudieshavefoundthatexogenousbFGFpumpedintothemarroworthesheathcandecreasetissu…     

小剂量格列本脲对大鼠急性脊髓损伤后继发性损害的影响

目的 探讨格列本脲对大鼠脊髓损伤后继发性损害的保护作用.方法 90只SD大鼠随机分为3组,每组30只,即单纯椎板切除组(对照组)、脊髓损伤组(损伤组)与脊髓损伤后格列本脲治疗组(治疗组).HE染色及电镜观察脊髓损伤后病理变化;免疫组织化学法检测脊髓损伤后45min、6 h、24 h、3 d、7 d的磺脲类药物受体1(sulfonylurea receptor type 1,SUR1)表达变化,利用IPP 6.0软件对SUR1的表达进行定量分析.采用BBB评分评价大鼠后肢功能的恢复.并对大鼠血糖进行定量检测.结果 HE染色显示:脊髓损伤后脊髓出血和胶质细胞增生随时间延长而加重,治疗组的组织出血、小胶质细胞增生和中性粒细胞浸润均较损伤组轻.电镜观察:治疗组的炎症细胞浸润、髓鞘板层结构破坏及线粒体肿胀程度等均较损伤组明显减轻.免疫组织化学染色显示:除45 min时SUR1尚未表达外,其余各时间点治疗组的SUR1表达均较损伤组弱.术后24 h,损伤组SUR1表达达高峰,此后随时间逐渐下降.三组各时间点的SUR1平均光密度经单因素方差分析,差异有统计学意义.治疗组大鼠BBB评分明显高于损伤组大鼠,各组差异有统计学意义.治疗组大鼠的血糖稍下降,但三组差异并无统计学意义.结论 格列本脲治疗能显著减轻脊髓的继发性损伤,促进脊髓功能恢复.格列本脲通过抑制SUR1的表达而发挥脊髓保护作用.     

腰椎间盘突出症患者髓核组织中受体相互作用的丝氨酸苏氨酸激酶1表达和临床意义

目的:探讨腰椎间盘突出症(lumbar disc herniation,LDH)患者髓核组织中受体相互作用的丝氨酸苏氨酸激酶1(receptor-interacting protein serine-threonine kinases 1,RIPK1)表达和临床意义.方法:选取2016年1月至2018年1月治疗40例L...     

超短波对大鼠坐骨神经损伤后脊髓内GAP-43和CGRP表达的影响

目的探讨超短波对坐骨神经损伤后大鼠脊髓中GAP-43和CGRP表达的影响。方法60只成年雌性SD大鼠制成右侧坐骨神经钳夹损伤模型，随机分为超短波治疗组和非治疗对照组。免疫荧光方法观察术后1周、2周、4周、8周和12周不同时间点两组大鼠脊髓中GAP-43和CGRP表达的动态变化规律。结果大鼠坐骨神经损伤后脊髓内GAP-43和CGRPmRNA表达增强。术后1、2、4和8周超短波治疗组的变化与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），且GAP-43的表达在时间上早于对照组。结论超短波在早期能够明显增加GAP-43和CGRP的表达量，提示早期应用超短波治疗能够促进周围神经的