激光捕获显微切割技术在石蜡切片中的应用

激光捕获显微切割（1asercapture microdissection，LCM）技术是在显微镜下从组织切片中高选择性地分离、纯化单一类型细胞群或单个细胞的新技术，可有效地克服组织中细胞异质性造成的偏差。本研究通过应用LCM技术从甲状腺疾病组织中精确分离目的细胞后，结合PCR技术检测显微切割病变甲状腺上皮细胞中的目的基因及人微小病毒B19基因组，并探讨了福尔马林固定的石蜡切片在LCM技术中的应用。     

激光捕获显微切割技术及其在脑研究中的应用

激光捕获显微切割(lasercapturemicrodissection,LCM),是一项利用激光在显微镜下从组织切片中分离单一类型细胞群的技术。以LCM技术为基础,结合蛋白质、核酸等分子生物学研究方法进行基因诊断、表达谱或蛋白质组学的研究,从根本上解决了细胞异质性问题。本文就LCM技术在脑科学中的应用及所涉及到的脑组织固定、切片、染色、捕获等关键环节做一综述。     

激光捕获显微切割技术的原理及应用

激光捕获显微切割是一项在显微镜下从组织切片中分离、纯化单一类型细胞群或单个细胞的技术。它成功地解决了组织中的细胞异质性问题 ,是分子病理学和肿瘤基因组学研究的一项革命性技术。该技术与各种分子生物学研究方法的结合使人们对生长发育、疾病演进过程分子水平的定性、定量分析更加准确易行。本文概述了该技术的原理、基本方法及其应用前景     

激光捕获显微切割技术的原理及应用

激光捕获显微切割是一项在显微镜下从组织切片中分离、纯化单一类型细胞组群或单个细胞的技术,它成功地解决了组织中的细胞异质性问题,是分子病理学和肿瘤基因组学研究的一项革命性技术。该技术与各种分子生物学研究方法的结合使人们对生长发育、疾病演进过程分子水平的定性、定量分析更加准确易行。本概述了该技术的原理、基本方法及其应用前景。     

组织切片显微切割技术及其在肿瘤研究中的应用

随着对肿瘤分子生物学研究的日益深入 ,人们越来越渴望从含有多种细胞的组织切片上 ,获取某一特定的同类细胞或某个单一细胞 ,从而进一步对这些或这个细胞内癌基因、抑癌基因或酶等进行分析研究。例如为了阐明肿瘤发生的分子生物学机制 ,人们十分想深入了解在不典型增生、原位癌、浸润癌和转移癌这些癌发生发展不同阶段的特定细胞内 ,其分子生物学的改变各有什么不同 ?在由前一阶段向后一阶段进展时 ,其关键的分子生物学改变是什么等重要的信息。但是以往的各种技术所获得的细胞都不可能是单一的同类细胞群 ,而是一个多种细胞成分的混合体 ,…     

免疫组织化学-激光显微切割-聚合酶链反应技术在胃癌石蜡切片中检测p53突变的应用

目的 探索在石蜡切片中应用免疫组织化学-激光显微切割-聚合酶链反应(PCR)技术,检测进展期胃癌p53蛋白表达阴性或阳性的p53基因外显子5～8的突变情况。方法 对41例进展期胃癌标本进行p53蛋白的免疫组织化学标记,再用激光显微切割(LMD)技术切取p53表达一致的癌组织及远离癌灶的正常胃黏膜腺体。经消化后直接进行p53基因外显子5～8的PCR扩增、单链构象多态性分析及直接测序。结果 41例进展期胃癌标本均扩增出特异的目的条带。其中有11例p53蛋白表达阳性,15例p53基因检测到突变。蛋白表达阳性者中有8例突变(8／11);表达阴性者中有7例突变(7／30,23．3％)。p53蛋白表达和p53基因突变具显著相关(P=0．004)。结论 免疫组织化学-LMD-PCR技术应用于石蜡切片可获得满意的结果,此技术可将细胞特定基因的结构状态和表达水平很好地结合起来检测分析。     

激光捕获显微切割技术在实践中的应用和体会

组织是由大量的不同类型的相互影响的细胞群组成的复杂的三维结构,这对于分析、比较正常与病变组织产生了很大障碍。通过常规病理技术所获得的细胞往往是由多种细胞组成的复合体,因而所提取的DNA、RNA或蛋白质不能代表特定疾病特有标志的单一同类细胞的信息,而且复合组织中细胞在生化与物理性状方面容易受到周围类型细胞及远距离刺激的影响。     

激光捕获显微切割细胞的全基因组DNA扩增

组织是多种细胞群体相互作用、相互依存的三维空间结构 ,这使得在相当长的一段时间内难以准确、深入地从分子水平研究某类特定细胞基因结构和功能的动态变化。肿瘤组织包括瘤细胞、其发源的正常细胞、淋巴细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等多种成分。在肿瘤分子病理学和基因组学研究中 ,排除非肿瘤细胞污染对实验结果的影响尤为重要[1] 。激光捕获显微切割 (ｌａｓｅｒｃａｐｔｕｒｅｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ ,ＬＣＭ)是在显微镜下从组织切片中分离、纯化单一类型细胞群或单个细胞的技术[2 ] 。它能有效地解除组织中细胞异质性造成的…     

激光捕获显微切割技术结合MicroRNA芯片技术应用于肿瘤

人体组织由细胞和细胞间基质组成,肿瘤也不例外。除了肿瘤细胞之外,肿瘤还含有血管、结缔组织等基质。目前,常规对肿瘤样品基因表达量的研究实际上是对肿瘤细胞和基质混合物的研究。基质细胞往往没有癌变,因此对肿瘤细胞和基质混合物进行研究往往会掩盖掉肿瘤细胞中并不是很明显的基因表达异常。     

激光捕获显微切割纯化的人正常支气管上皮与肺鳞癌组织的定量蛋白质组学研究

目的:建立肺鳞癌(human lung squamous carcinoma,HLSC)组织与正常支气管上皮(normal human bronchial epithelial,NHBE)组织的差异蛋白质表达谱.方法:运用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术从HLS...     

联合应用激光捕获显微切割与基因芯片技术筛选肝细胞癌差异表达基因

目的 联合应用激光捕获显微切割与基因芯片技术构建纯化肝细胞癌(HCC)组织和正常肝组织基因表达谱,筛选HCC发病相关基因.方法 4例HCC标本先行激光捕获显微切割,分别获取纯化肝癌细胞和正常肝细胞各4对样本.提取微量RNA,经线性扩增后再与全基因组基因芯片杂交,筛选差异表达基因.结果 4对样本间纯化肝癌细胞与正常肝细胞共同差异表达的基因有1361条,上调基因607条,下调基因754条.前10位显著上调和下调的差异表达基因(共20条)中,5条为HCC已知差异表达基因(信号比值为23.2529、27.372 9、0.014 8、0.019 7、0.019 8);11条表达变化与其他肿瘤研究报道一致(信号比值为32.694 9、28.480 9、23.703 0、21.342 3、19.109 3、17.291 9、0.009 8、0.012 5、0.015 8、0.016 1、0.016 5);4条为在HCC和(或)其他肿瘤中均无报道过的差异表达基因(信号比值为24.676 1、22.072 2、0.009 7、0.019 1).结论 联合应用激光捕获显微切割与基因芯片技术,可准确、高效地筛选出HCC差异表达基因.     

激光捕获显微切割技术联合短串联重复序列多态性分析在葡萄胎受精类型鉴别中的应用研究

目的探讨激光捕获显微切割技术（LCM）联合短串联重复序列（STR）多态性分析用于葡萄胎受精类型鉴别的可行性。方法首先通过LCM获得葡萄胎病病理组织的滋养细胞,再用16个位点（D8S1179,D21S11,D2S1338,CSF1PO,TH01,TPOX,D3S1358,D13S317,D16S319,D19S433,FGA,D18S51,D5S818,VWA,D7S820,Am）复合微卫星序列-PCR方法对61例病理学诊断为葡萄胎标本进行分析,明确其受精类型。结果用LCM技术从61例标本中获得滋养细胞后,成功提取DNA46例,浓度范围为：6.2-114.5（ngμ/l）。经STR多态性分析确定空卵单精子受精完全性葡萄胎13例,空卵双精子受精完全性葡萄胎13例,部分性葡萄胎20例。结论 LCM联合多重STR多态性分析能够确定葡萄胎的受精类型。     

应用激光捕获显微切割技术分离肝癌石蜡组织标本中细菌及螺杆菌基因的检测

目的　对肝癌石蜡组织标本病理切片中发现的细菌进行分离鉴定。方法　38例肝癌石蜡组织标本经聚合酶链反应(PCR)扩增螺杆菌16S rRNA,阳性标本病理切片后行石炭酸碱性品红染色观察幽门螺杆菌(H.pylori),应用激光捕获显微切割技术(LCM)分离光镜下观察到的细菌,分离的细菌经PCR扩增螺杆菌16S rRNA,PCR产物进行测序及同源比较,阳性者再扩增H.pylori的特异基因[相对分子质量(Mr)为26×103 蛋白,H.pylori种特异抗原]和相关功能基因(cagA,vacA)。结果15例肝癌石蜡组织标本中检测到螺杆菌16S rRNA,选取观察到细菌数量较多的6例用于LCM分离。分离的6例细菌样本均扩增出螺杆菌16S rRNA,经测序与H.pylori有99%~100%的同源性。4例Mr为26×103 蛋白基因阳性,1例扩增出cagA基因,未扩增出vacA基因。结论　肝癌石蜡组织中经PCR检测到的H.pylori就是病理观察到的细菌。     

显微切割技术及其在分子病理学中的应用

显微切割技术是在显微状态或显微镜直视下直接或通过显微操作系统简单、快速地从含有不同成分的组织中特异的分离出预研究的均质细胞来进行后续分析 ,由于其可以大大削弱组织中异质细胞的混淆作用 ,已被广泛应用在分子病理学等多方面研究领域     

在石蜡切片中进行微切割-PCR-银染的方法

目的：探索在石蜡切片中应用微切割－ＰＣＲ－银染技术,检测大肠癌的微卫星不稳定性和杂合性缺失。方法：用微切割技术在２８例石蜡切片中提取淋巴细胞和间质细胞、癌旁粘膜腺管、不典型地生腺管、腺瘤腺管和腺癌细胞,每例至少包含３种类型细胞,经蛋白酶Ｋ消化后,直接用于ＰＣＲ扩增,产物进行８％变异聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染。共进行了ＴＧＦ－βＲⅡ（Ａ）１０、ｈＭＳＨ２（Ａ）２６－Ｂａｔ２６,ｈＭＳＨ３（Ａ）８,ｈＭＳＨ６（Ｃ）８４个微卫星位点的检测。结果：ｈＭＳＨ３（Ａ）８和ｈＭＳＨ６（Ｃ）８位点在２８例标本全部扩增出目的片段,ＴＧＦ－βＲⅡ（Ａ）１０和ｈＭＳＨ２（Ａ）２６位点则分别有２３例、２２例扩增出目的片段,且ｈＭＳＨ２（Ａ）２６位点有５例癌细胞呈阳性,其中１例同时有腺癌细胞阳性。结论：微切割－ＰＣＲ－银染技术应用于石蜡切     

微波技术在快速石蜡切片中的应用

目前在手术快速病理诊断中多采用冰冻切片及快速石蜡切片等方法,由于冰冻切片需要昂贵的冰冻切片机,在基层很难推广,而快速石蜡切片则由于耗时较长,往往耽搁了诊断时间。为了进一步改进快速石蜡切片方法,提高制片速度,本文应用微波技术于快速石蜡切片中,旨在探讨其应用价值。1 材料与方法     

激光显微切割-单细胞PCR技术在霍奇金淋巴瘤IgH基因检测中应用

Küppers等建立并应用"分子组织学技术"进行霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma,HL)单个RS细胞Ig基因重排的研究,为阐明HL的性质作出重要贡献.但初期显微切割技术所存在的缺陷,一定程度上限制了分子组织学研究的开展.近年来激光捕获显微切割(Laser capture microdissection,LCM)技术的建立,推进了肿瘤基因组学研究的重要发展.本实验致力于建立一套优化的LCM-单细胞PCR技术应用于HL单细胞基因检测.     

石蜡切片免疫荧光染色在肾脏病理诊断中的应用

我们应用石蜡切片免疫荧光染色法,对肾活检组织进行免疫荧光染色,取得了较好的效果,现报道如下。1材料与方法1.1材料选用中南大学湘雅二医院肾脏病研究所肾活检标本35例,其中狼疮性肾炎(LN)10例,乙肝相关性肾炎(HBVGN)5例,IgA肾病(IgAGN)10例,膜性肾病(MN)5例,肾小球轻微病变(G     

自带放大镜包埋机在超薄标本切片制备中的应用

传统组织HE切片的制备中,包埋组织的最小厚度在mm级大小,对于μm级厚度的组织则难以制片.本实验在包埋机及放大镜的辅助下,完成对微米级组织切片的制作.