剪切应力作用下血小板活化反应对血栓形成的影响

目的：通过剪切应力对血小板细胞骨架和细胞内游离钙离子浓度([Ca^2+]i)及血栓形成的影响，探讨物理作用下血小板活化机制。方法：利用锥板式血小板聚集仪、SDS-PAGE方法及Fura-2／AM法观察剪切应力对血小板聚集、细胞支架和胞浆内[Ca^2+]i变化。结果：剪切前肌动蛋白纤维含量为(40．16&;#177;15．03)％，细胞内[Ca^2+]i浓度为(29．88&;#177;8．89)nmol／L，低剪切与高剪切作用1min后肌动蛋白纤维含量分别达(47．42&;#177;18．00)％与(48．62&;#177;18．04)％，而细胞内[Ca^2+]i浓度升高达(57．32&;#177;18．32)nmol／L及(128．28&;#177;56．28)nmol／L，与剪切前相比差异均有显著性意义(P&;lt;0．05或0．01)，此外，钙调蛋白抑制剂阻碍血小板肌动蛋白纤维的形成及血小板聚集。结论：剪切应力作用下血小板发生了肌动蛋白纤维含量及细胞内游离钙水平的增高，并与剪切诱导的血小板聚集存在着平行关系，物理作用对体内血栓形成的机制有助于对血栓形成和一级康复干预的进一步认识。     

蜂胶对慢性阻塞性肺疾病患者肺泡巨噬细胞胞浆游离钙浓度及其生成细胞因子的影响

目的:观察蜂胶对慢性阻塞性肺疾病患者(chronicobstructivepulmonarydisease,COPD)肺泡肺泡巨噬细胞(alveolarmacrophage,AM)游离钙浓度及其生成的白细胞介素8(IL-8)、一氧化氮的影响。方法:采用支气管肺泡灌洗、细胞培养和荧光指示剂方法,测定AM内钙浓度其生成的IL-8和NO。结果:COPD组患者AM内钙浓度犤(68.26±7.24)nmol/L犦,IL-8犤(29.11±9.78)ng/L犦,一氧化氮犤(27.61±8.64)μg/L犦均高于对照组犤(60.61±6.26)nmol/L,(15.42±6.78)ng/L,(13.99±7.40)μg/L犦(t=11.38～36.42,P<0.01)。脂多糖刺激以后,胞内游离钙浓度、IL-8和一氧化氮均较刺激前增高(t=12.65～32.58,P<0.01)。先加蜂胶孵育AM再加入脂多糖,胞浆内游离钙浓度、IL-8和一氧化氮较仅加脂多糖时减少(t=14.72～25.02,P<0.01)。结论:蜂胶可抑制脂多糖引起的犤Ca2+犦i增加,对脂多糖刺激的IL-8和一氧化氮升高也有抑制作用;可调节AM激活,抑制IL-8、一氧化氮分泌。     

银杏叶提取物对培养的海马神经元内谷氨酸诱导钙信号的影响

目的检测银杏叶提取物(ginkgobilobaextract,GBE)对谷氨酸升高培养的海马神经元内游离钙离子浓度(犤Ca2+犦i)的影响和特征。方法实验设计分3组(n=26),向细胞吹药各20s:①组1×10-5mol/L谷氨酸,②组同时1×10-5mol/L谷氨酸。25μg/mlGBE,③组即在②组回到基线后给1×10-5mol/L谷氨酸。结果①组犤Ca2+犦i明显升高,②组犤Ca2+犦i的变化明显变小,其峰值明显下降,且Phase1上升速度减慢,Phase2的时间也有所缩短,二相之间的平台期相对延长,③组出现与①组中相似的钙震荡表现,但Phase1和Phase2的时间均缩短,犤Ca2+犦i的变化稍低。结论GBE通过影响NMDA受体的活动。快速抑制谷氨酸诱导大鼠海马神经元内游离钙浓度升高。     

钙在嗜铬细胞瘤细胞缺氧性脑损伤中的作用研究

目的观察缺氧后大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞内游离钙的浓度(犤Ca2+犦i)、环磷酸腺苷(cAMP)、钙调蛋白(CaM)和钙调蛋白激酶II(Ca2+/CaM-PKII)的变化。方法采用放免技术,从细胞水平进一步观察缺氧对PC12细胞的毒性、细胞内犤Ca2+犦i变化,cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII的变化。结果缺氧组PC12细胞cAMP、CaM含量在缺氧后24h明显高于正常对照组;Ca2+/CaM-PKII活性明显低于正常对照组。结论犤Ca2+犦i、cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII在缺氧PC12细胞损伤机制中起了重要的作用。     

体外冲击波碎石术致肾细胞内钙水平与氧自由基的变化

目的:观察体外冲击波碎石术(E SW L)对肾细胞内游离钙(犤C a2犦i)水平和肾组织氧自由基的影响及+钙通道阻滞剂的干预作用,探讨肾损伤机制。方法:30只家兔制成单肾模型,随机等分为对照组、E SW L组和E SW L+维拉帕米预处理组。E SW L后24h获取肾脏,采用Fura-2/A M荧光指示剂测定肾细胞内犤C a2+犦i浓度变化,同时测定肾组织超氧化物歧化酶(SO D)活性和脂质过氧化终产物丙二醛M D A。结果:ESW L后肾细胞内犤C a2+犦i增高,肾组()织SO D活性降低、M D A生成增加(P<0.01);维拉帕米预处理能抑制细胞内犤C a2犦i和M D A增加(P<0.01,P<+0.05),提高SO D活性P<0.01)。结论:E SW L所致肾细胞内C a2+犦i超载和肾组织氧自由基侵袭,可能在E SW L肾(犤损害病理过程中起重要作用。     

氯离子通道阻断剂对肺血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究氯离子通道阻断剂在肺血管内皮细胞氧化损伤中的作用。方法:以肉联厂检疫合格的健康小牛为研究对象,过氧化氢(H2O2)诱导体外培养的牛肺动脉内皮细胞损伤,观察Cl-通道阻断剂对受损细胞细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、三磷酸腺苷(ATP)含量、细胞内钙离子浓度犤Ca2+犦i和DNA降解程度的影响。结果:Cl-通道阻断剂可使受损细胞的细胞活力得到提高,NPPB组和NFA组分别恢复到0.449±0.015和0.535±0.023;LDH释放量下降,分别为(12.4±0.4)%,(6.4±0.6)%。ATP含量分别回升为18.22nmol/mg蛋白质和21.96nmol/mg蛋白质,犤Ca2+犦i下降和DNA降解程度减轻。结论:Cl-通道参与了氧化剂对肺血管内皮细胞损伤的病理过程,Cl-通道阻断剂对肺血管内皮细胞的损伤具有保护作用。     

党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠皮质神经细胞凋亡的作用

目的:以原代培养的胚胎大鼠大脑皮质神经细胞进行缺氧缺糖再给氧处理,观察党参总皂苷对神经细胞凋亡的抑制作用。方法:胚胎大鼠大脑皮质神经细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earle's液进行缺氧缺糖处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死、凋亡细胞百分率,APO-BRDU法流式细胞术检测凋亡细胞百分率,Fluo-3法流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,评价药效。结果:细胞存活率:与模型组犤(19.69±5.80)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组39.21±12.21)%,0.052mg/L组犤(犦犤(37.91±4.67)%犦能显著提高细胞存活率(P<0.001);细胞坏死率:与模型组犤(44.99±12.81)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(15.66±4.67)%犦,0.052mg/L组犤(23.98±4.04)%犦和0.0052mg/L组犤(20.50±5.19)%犦能显著降低细胞坏死率P<0.001);原位双染法细胞凋亡(率:与模型组犤(17.44±4.82)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(10.58±2.04)%犦,0.052mg/L组犤(11.61±2.35)%犦能显著降低细胞凋亡率(P<0.05);流式细胞术检测细胞凋亡率:与模型组犤(8.55±3.84)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(3.85±1.92)%犦,0.0052mg/L组犤(3.45±2.22)%犦能显著降低细胞凋亡率P<0.05);(细胞内Ca2+平均荧光值,与模型组(47.     

脑创伤后神经元细胞内游离钙的变化及其影响因素

目的研究液压冲击伤时体外培养的单个大鼠神经细胞内游离钙 ([Ca2+ ]i)的变化,探讨尼莫地平 D-2氨基戊酸 (D-2-amino-5-phosphonovaleric acid,D-AP-5)和亚低温对创伤后细胞内 [Ca2+ ]i的影响及其机制. 方法 以 Fluo-3/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用激光共聚焦显微镜测定液压冲击伤时体外培养的单个大鼠神经细胞内游离钙 ([Ca2+ ]i)的变化. 结果 液压冲击伤后脑皮质细胞内游离 Ca2+迅速升高, 24 h达高峰,随后逐渐下降, 48 h仍维持较高水平 [(411.29± 52.46),(396.53± 51.32) nmol/L],尼莫地平, D-AP-5于各时相关均降低细胞内 [Ca2+ ]i,其中 Nimodipine 10 h内应用最佳 [6 h( 98.65± 15.65) nmol/L], D-AP-5于 1～ 10 h应用较好而亚低温 30 min内显著降低细胞内 [Ca2+ ]i(t=13.74, P< 0.001),最佳时机在伤后 15 min内,伤后 1 h以上无效. 结论 创伤后神经元细胞内钙超载,尼莫地平、 D-AP-5和亚低温均降低细胞内 [Ca2+ ]i,但各自最佳时间窗不同,揭示对创伤后神经细胞 Ca2+超载应注意综合治疗,并选定各自作用最佳时间窗.     

常氧与缺氧状态下豚鼠心肌细胞内钙离子浓度与葛根素注射液的干预

目的:探讨在常氧、缺氧状态下,豚鼠心肌细胞内游离钙离子浓度与葛根素注射液干预的影响,并与硝苯地平的作用相比较。方法:采用离体豚鼠心脏Langendorff法灌注,I型胶原酶分离心肌细胞,并调整细胞数为2×109L-1。在细胞外钙含量为2mmol/L情况下,采用F-2000型荧光分光光度计进行心肌细胞内钙含量测定,计算细胞内游钙离子浓度。将心肌细胞悬液分为6组,分别为常氧及缺氧条件下的对照组、葛根素注射液组、硝苯地平组。在常氧条件下(氧分压=15.9kPa),观察100s后,随机选择3组分别加入营养液10μL、葛根素注射液10μL(终浓度:0.1mmol/L)、硝苯地平l0μL(终浓度:20mmol/L)观察100,200,300,400,500s。而另外3组在缺氧条件下(氮气:0.1cm3/s)也分别给予同浓度的上述3种药物后,按上述5个时间点进行观察。采用荧光分光光度计动态测量不同条件下各组心肌细胞内游离钙离子浓度的变化。结果:①在静息(0～100s)常氧状态(氧分压=15.9kPa)及控制细胞外细胞内游离钙离子浓度为2mmo1/L(生理情况)时,6组的心肌细胞内游离钙离子浓度无显著差异(P>0.05),故知6组的组间一致性较好,具有可比性。②心肌细胞内游离钙离子浓度:葛根素注射液组和硝苯地平组给药后100,200,300,400,500s均明显低于对照组(P<0.05～0.01)。但葛根素注射液组下降速度较硝苯地平组慢(P<0.05～0.01)。③心肌细胞内游离钙离子浓度:缺氧状态下,葛根素注射液组缺氧后100,200,300,400,500s增加较对照组缓慢(163.7±19.7),(224.2±20.7),(309.7±15.1),(424.7±14.0),(477.5±21.5)nmol/L;(208.8±28.9),(328.5±14.4),(401.8±21.2),(534.3±20.8),(751.4±36.0)nmol/L,P<0.01犦。硝苯地平组在缺氧后100,200,300,400,500s比对照组增加少(P<0.01),且降低速率较葛根素注射液组高犤硝本地平组:(109.4±19.6),(140.8±16.2),(203.1±15.2),(265.4±17.3),(301.7±24.1)nmol/L,P<0.01犦。结论:在常氧条件下葛根素注射液使心肌细胞内游离钙离子浓度明显下降;缺氧条件下,葛根素注射液延缓缺氧所引起的心肌细胞内游离钙离子浓度增加,从而阻止心肌细胞内钙超载,对心肌起到保护作用。葛根素注射液的作用与经典的钙通道阻断剂硝苯地平相似,但与硝苯地平比较,具有相对缓慢的抑制缺氧后心肌细胞内游离钙离子浓度升高的特点。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞内钙的影响

目的:观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞内钙的影响及纳洛酮的保护作用。方法:实验于2003年在军事医学科学院神经生物学研究室进行。取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为3组:①正常对照组:细胞置于36℃,含体积分数为0.9的空气、体积分数为0.1的CO2的培养箱内培养30h。②缺氧组:细胞移至4000cm3的恒温(36℃)密闭容器内,连续充以无氧气体(体积分数为0.9氮气、体积分数为0.1的CO2),在缺氧条件下培养6h后改在常氧下继续培养24h。③纳洛酮组:在缺氧前24h在培养液中加入1μmol/L的纳洛酮,其他处理同缺氧组。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞内钙。结果:3组在缺氧前神经元细胞内钙差别不显著(P>0.05)。培养6h后缺氧组和纳洛酮组神经元细胞内钙明显高于正常对照组(7.94±0.13,6.68±0.33,3.39±0.36,P<0.01),且缺氧组高于纳洛酮组(P<0.01)。缺氧6h及再复氧24h纳洛酮组细胞内钙仍明显低于缺氧组(8.67±0.61,11.59±1.34,P<0.01),但两组均高于正常对照组(3.48±0.28,P<0.01)。结论:缺氧6h复氧24h时神经元细胞内钙显著升高,证实犤Ca2+犦i水平和神经细胞的缺氧损害密切相关,且恢复氧供并不能纠正犤Ca2+犦i异常。应用纳洛酮后,在缺氧条件下和缺氧后复氧期间的犤Ca2+犦i升高幅度较缺氧组明显减小,说明纳洛酮对缺氧的神经元犤Ca2+犦i具有一定的稳定作用,可以减轻神经元犤Ca2+犦i的升高,进而对神经元细胞起到保护作用。