鞘内注射DNMT1-siRNA对CCI大鼠行为学和脊髓SOCS1、p-ERK、p-CREB表达的影响

目的探讨DNMT1在大鼠神经病理性痛中的作用及可能机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠32只,体重200~250g,随机分为四组:假手术组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)、CCI+DNMT1-siRNA组(CDS组)和CCI+control-siRNA组(CCS组),每组8只。CDS组在术后7、8、9d连续鞘内注射DNMT1-siRNA(2μg/10μl),CCS组注射等体积的对照序列siRNA(control-siRNA)。分别在术前1d,术后3、5、7、9、12和14d测定大鼠的机械缩足阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL),术后14d测完行为学后处死大鼠,取L_4~L_6脊髓腰膨大节段,采用Western blot技术检测脊髓SOCS1、p-ERK、p-CREB的表达水平。结果术后3、5、7、9、12和14dCCI组和CCS组大鼠的MWT明显低于,TWL明显短于S组(P0.05);术后9、12、14dCDS组大鼠MWT明显高于,TWL明显长于CCS组(P0.05);术后14dCCI组和CCS组SOCS1表达明显低于S组和CDS组,pERK、p-CREB表达明显高于S组和CDS组(P0.05)。结论鞘内注射DNMT1-siRNA明显抑制大鼠神经病理性痛,其机制可能与促进脊髓SOCS1的表达,抑制p-ERK、p-CREB的表达有关。     

沉默髓系细胞触发受体1基因对神经病理性痛大鼠的影响

目的探讨髓系细胞触发受体1(triggering receptor expressed on myeloid cells 1,TREM1)在大鼠神经病理性痛中的作用及可能机制。方法成年雄性SD大鼠,体重220~300 g,取鞘内置管成功大鼠48只,随机分为四组(n=12):对照组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)、TREM1sh RNA组(RNAi组)和阴性慢病毒组(Virus组)。采用慢性坐骨神经压榨性损伤法(CCI)制备神经病理性痛模型。RNAi组于造模前1周鞘内注射p GLVU6/RFP/Puro-sh RNA 30μl(1×109IU/ml);Virus组、CCI组和S组分别鞘内注射等量阴性慢病毒和生理盐水。于造模前1 d和造模后1、3、7、14d测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。于造模后14 d痛阈测定结束后,处死大鼠,取L4-5节段脊髓组织,采用Western blot法测定脊髓TREM1、TLR4、My D88、IκBα和p-NF-κB p65蛋白含量,RT-PCR法测定脊髓IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量。结果与S组比较,CCI组和Virus组TREM1蛋白含量明显增加(P0.05);与CCI组比较,RNAi组TREM1蛋白含量明显降低(P0.05)。与S组比较,CCI组、RNAi组和Virus组造模后各时点MWT和TWL明显降低(P0.05);脊髓TLR4、My D88和p-NF-κB p65蛋白含量明显增加,IκBα蛋白含量明显降低(P0.05);IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量明显升高(P0.05)。与CCI组比较,RNAi组大鼠造模后各时点MWT和TWL明显升高(P0.05);脊髓TLR4、My D88和p-NF-κB p65蛋白含量明显降低,IκBα蛋白含量明显增加(P0.05);IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量明显降低(P0.05)。结论干扰TREM1基因可以缓解大鼠神经病理性痛,其机制可能与抑制TLR4/My D88/NF-κB通路有关。     

鞘内注射GABA转运体-1抑制剂NO-711对CCI大鼠脊髓背角pERK表达的影响

目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)转运体-1(GAT-1)抑制剂NO-711对坐骨神经慢性松结扎(OCI)大鼠机械和热痛阈及脊髓背角神经元磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)表达的影响,探讨NO-711在脊髓水平抗痛敏的机制.方法 雄性SD大鼠126只,随机均分为六组(n=21):CCI+NO-711 50μg组(N50组)、CCI+NO-711 100 μg组(N100组)、CCI+NO-711 200 μg组(N200组)、CCI+生理盐水组(CN组)、CCI组、假手术组(S组).CCI组和S组在术前、术后1、3、5、7、14、21 d测定大鼠机械缩腿阈值(MWT)和热缩腿潜伏期(TWL);其余各组大鼠在手术前5 d先进行鞘内置管,CCI手术后5 d鞘内注射不同剂量的NO-711或生理盐水,测定给药前、给药后30 min、1、2、4、8 h大鼠MWT、TWL及脊髓背角pERK表达的变化.结果 CCI组MWT和TWL术后3 d后各时点较术前2 d均降低和缩短、且相应时点均低于和短于S组(P＜0.01);与给药前比较,CN组大鼠各时点MWT和TWL,差异无统计学意义,而NO-711各剂量组大鼠给药后MWT和TWL均呈剂量依赖性增加;与CCI组和NS组比较,NO-711对脊髓背角pERK表达呈剂量依赖性抑制.结论 鞘内注射NO-711能明显抑制CCI大鼠机械痛敏和热痛敏及脊髓背角pERK表达,提示pERK介导NO-711在脊髓水平具有抗痛敏效应.     

γ-氨基丁酸转运体-1在大鼠神经病理性痛形成中的作用

目的 探讨大鼠腰段脊髓γ-氨基丁酸(GABA)转运体-1(GAT-1)在神经病理性痛形成中的作用.方法 SD大鼠112只,随机分为2组(n=56):假手术组(s组)和慢性坐骨神经结扎损伤组(CCI组).结扎大鼠左侧坐骨神经建立CCI模型.于CCI前、CCI后1、3、5、7、10、14 d随机取8只大鼠,测定机械刺激缩足反应阈值(MWT)和热刺激缩足反应潜伏期(TWL).于CCI前、CCI后l、3、7、14d随机取6只大鼠,取腰段脊髓,采用免疫组织化学法检测大鼠脊髓背角GAT-1蛋白的表达.结果 与CCI前比较,2组CCI后各时点MWT和TWL均降低(P＜0.05);与S组比较,CCI组CCI后各时点MWT和TWL均降低,CCI后1、3 d GAT-1表达升高(P＜0.05或0.01).结论 大鼠神经病理性痛的形成与GAT-1表达增多有关.     

细胞程序性坏死抑制剂Nec?1可减轻神经病理性痛大鼠的痛觉过敏

目的观察RIP1和RIP3在坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury, CCI)痛大鼠脊髓水平的表达变化,探讨程序性坏死特异性抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)在神经病理性痛中的保护作用。方法雄性8周龄SD大鼠60只,随机分为三组:假手术组(Sham组)、坐骨神经CCI组(CCI组)、坐骨神经CCI+Nec-1组(CN组),每组20只。在术前1周、术后1、3、5、7、10和14 d分别测定大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold, MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency, TWL)。每组取10只大鼠于术后7 d处死,采用Western blot法检测脊髓中RIP1、RIP3蛋白含量,采用透射电镜观察脊髓组织超微结构的变化。结果与Sham组比较,术后1、3、5、7、10和14 d CCI组MWT明显降低(P0.05),术后3、5、7、10和14 d TWL明显缩短(P0.05),术后7 d脊髓RIP1和RIP3蛋白含量明显升高(P0.05),脊髓中可见多处细胞核膜崩解,线粒体肿胀、嵴断裂,神经髓鞘出现明显的分离。与CCI组比较,术后7、10和14 d CN组MWT明显升高(P0.05)、TWL明显延长(P0.05),术后7 d脊髓RIP1和RIP3蛋白含量明显降低(P0.05),脊髓细胞核膜完整,线粒体稍有肿胀、嵴清晰,神经髓鞘分离不明显。结论 RIP1和RIP3介导的信号通路参与大鼠神经病理性痛的发生,给予Nec-1治疗可以减轻神经病理性痛大鼠的痛觉过敏症状。     

神经病理性疼痛大鼠FcγRⅠ mRNA表达量的变化

目的研究大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)发生后不同时期FcγRⅠmRNA表达量的变化。方法雄性Wistar大鼠72只随机分为三组:空白对照组(C组,n=8),假手术组(S组,n=32),CCI模型组(NP组,n=32)。C组不进行任何处理,S组只分离暴露坐骨神经后不结扎,NP组建立CCI模型。观察并记录术前和术后3、7、14和21d三组大鼠术侧后爪机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和右后爪热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。RT-PCR检测术后3、7、14、21d时S组和NP组RTPCR脊髓、背根神经节的FcγRⅠmRNA表达。结果与术前比较,术后3、7、14和21dNP组MWT明显减少、TWL明显缩短(P0.05)。与NP组比较,术后3、7、14和21dC组、S组MWT明显增加、TWL明显延长(P0.05),术后3d的C组、术后3、7、14和21dS组脊髓和背根神经节的FcγRⅠmRNA表达明显减少(P0.05或P0.01)。结论坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠脊髓海马和背根神经节FcγRⅠmRNA表达上调,可能与神经病理性疼痛的发生有关。     

电针对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X3受体表达的影响

目的 探讨电针对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X3受体表达的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠60只,体重180 g～220 g,采用随机数字表法分为6组,每组10只:假手术组(Sham组)仅分离坐骨神经,不结扎;神经病理性疼痛组(CCI组)采用坐骨神经慢性压迫性损伤法制备神经病理性疼痛模型;2 Hz穴位电针组(LEA组)于坐骨神经结扎(chronic constrictive injury,CCI)后第4天开始电针治疗,刺激大鼠术侧足三里-阳陵泉穴,频率2 Hz连续波,强度≤1.5 mA,每天1次,30 min/次,连续6d;15 Hz穴位电针组(HEA组)电针频率为15 Hz,余同LEA组;2 Hz非穴位电针组(NA-LEA组)电针刺激大鼠术侧足三里-阳陵泉旁5mm非穴位点,余同LEA组;15 Hz非穴位电针组(NA-HEA组)电针刺激大鼠术侧足三里-阳陵泉旁5mm非穴位点,余同HEA组.各组术前1 d(T0)和术后3、5、7、9 d(T1-4)测定大鼠后肢机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);于术后第10天处死大鼠,取右侧L4-6脊髓节段,Western-blot和反转录酶-聚合酶链锁反应法分别检测大鼠脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达.结果 与Sham组比较,其余各组MWT和TWL降低(P＜0.05),脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达升高(P＜0.05);与CCI组比较,LEA组和HEA组T2-4时MWT和TWL升高(P＜0.05),脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达降低(P＜0.05);与LEA组比较,T4时HEA组MWT和TWL升高,脊髓P2X3受体蛋白和mRNA表达增多(P＜0.05).结论 电针足三里-阳陵穴可明显增加神经病理性疼痛大鼠的机械痛和热痛阈值,其机制可能与降低脊髓背角P2X3受体表达有关.     

高压氧后处理对大鼠神经病理性痛及脊髓小胶质细胞活化的影响

目的 探讨高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)后处理对大鼠神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)镇痛效果及脊髓小胶质细胞活化的影响. 方法 雄性SD大鼠24只,采用随机数字表法将大鼠分成4组(每组6只):假手术组(S组)、坐骨神经慢性压迫组(C组)、HBO后处理2.0组(H2.0组)与HBO后处理2.5组(H2.5组).采用坐骨神经慢性压迫损伤法建立NP模型,H2.0和H2.5组于术后1d开始给予相应压力的HBO后处理,1次/d连续7次,每天出HBO舱后1h测定各组大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL),术后7d测定MWT和TWL后处死,用免疫组化法测定大鼠脊髓小胶质细胞的活化情况. 结果 与S组比较,C组MWT降低及TWL缩短,脊髓内小胶质细胞数量与活化率上升为(156±9)个和44.9％(P＜0.05);与C组比较,H2.0组和H2.5组MWT升高及TWL延长,H2.0组和小胶质细胞数量与活化率分别为(64±7)个和5.7％(P＜0.05),H2.5组小胶质细胞数量与活化率分别为(62±5)个和6.1％(P＜0.05);H2.0组与H2.5组小胶质细胞数量与活化率差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 HBO后处理可减轻大鼠NP,其机制与抑制脊髓内小胶质细胞活化有关.     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对大鼠神经病理性痛的影响

目的 评价丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对大鼠神经病理性痛的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠108只,体重180 ～ 220 g,6～8周龄,采用随机数字表法,将其分为3组(n=36):假手术组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)和丹参酮ⅡA磺酸钠注射液组(SSI组).CCI组和SSI组采用坐骨神经慢性压迫损伤法制备大鼠神经病理性痛模型.SSI组于术毕即刻开始至处死前1d,腹腔注射丹参酮ⅡA磺酸钠注射液25 mg/kg,1次/d,S组和CCI组腹腔注射等容量(5 ml/kg)生理盐水.于术前1d、术后3、7、14 d时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);于术后3、7、14 d时测定痛阈后处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用免疫组化法测定脊髓背角Bcl-2和caspase-3的表达;采用分光光度法测定脊髓MDA含量及SOD活性.结果 与S组比较,CCI组和SSI组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角Bcl-2和caspase-3表达上调,脊髓MDA含量升高,SOD活性降低(P＜0.05);与CCI组比较,SSI组MWT升高,TWL延长,脊髓背角Bcl-2表达上调,caspase-3表达下调,脊髓MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA磺酸钠注射液可减轻大鼠神经病理性痛,其机制与抑制脊髓组织氧化应激反应,减少脊髓背角神经元凋亡有关.     

核因子-κB在重组人促红细胞生成素预防神经病理性疼痛中的作用

目的 探讨脊髓核因子(NF)-κB在重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)预防神经病理性疼痛中的作用机制.方法 选用SD雄性大鼠30只,制作L5脊神经切断神经病理性模型,随机分为三组:假手术组(C组)、生理盐水组(S组)和rhEPO组(E组),S组和E组分别从术前1d开始腹腔注射生理盐水和rhEPO 5 kU/kg,连续7d.采用von Frey和Hargreaves法测定大鼠术前、术后3d和7d机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);采用EMSA法检测术后7d脊髓NF-κB表达水平.结果 与C组相比,术后3、7dS组和E组大鼠术侧MWT和TWL明显下降(P＜0.01),且S组明显低于E组(P＜0.01).与C组相比,术后7dS组和E组腰段脊髓NF-κB的活性明显增高(P＜0.01),且S组明显高于E组(P＜0.01).结论 rhE-PO能减轻神经病理性疼痛的发生,其效应可能与其减少脊髓NF-κB的活性有关.     

不同压力高压氧治疗对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨不同压力高压氧治疗(HBO)对大鼠神经病理性痛的影响.方法 成年雄性SD大鼠24只,采用随机数字表法,将其分为4组(n=6):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、2.O标准大气压高压氧治疗组(HBO2.0组)、2.5标准大气压高压氧治疗组(HBO2.5组).将HBO2.0组和HBO2.5组大鼠置于高压氧舱,以10 kPa/min的速率向舱内匀速加压直至目标压力并保持60 min.然后以10 kPa/min的速率匀速减压至正常大气压.从术后1d开始高压氧治疗,连续5d,1次/d.S组和NP组单纯放入氧舱100 min而不接受治疗.于出高压氧舱后即刻(T0)、1 h(T1)和2 h(T2)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足反应潜伏期(TWL).结果 与S组比较,NP组MWT降低,TWL缩短(P＜0.05).与NP组比较,HBO2.0组和HBO2.5组高压氧治疗期间T1时MWT升高,TWL延长(P＜0.05),T2时MWT和TWL差异无统计学意义(P＞0.05).HBO2.0组和HBO2.5组间各时点MWT和TWL比较差异无统计学意义(P＜0.05).结论 不同压力高压氧治疗均可减轻大鼠神经病理性痛,但压力改变不影响镇痛效果.     

重组人促红细胞生成素对L5脊神经切断大鼠痛阈及脊髓TNF-α和IL-1β表达的影响

目的 观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对L5脊神经切断大鼠机械和热痛阈及脊髓TNF-α和IL-1β表达的影响.方法 SD雄性大鼠50只随机分为五组:脊神经损伤rhEPO1 000、3 000、5 000 U/kg组(R1、R2、R3组)和生理盐水组(N组)及假手术组(C组),每组10只.术前1 d给药,连续7 d.测定术前当天及术后3、7、14 d大鼠的机械性缩足反射阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)及术后14 d各组大鼠L5脊髓肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的水平.结果 L5脊神经损伤术后大鼠术侧MWT降低、TWL缩短、脊髓TNF-α和IL-1β的表达增高(P<0.01).与N组比较,R1组术后各时间点的MWT和TWL无明显改变;R2和R3组MWT增高、TWL延长(P<0.05);脊髓TNF-α、IL-1β水平降低(P<0.01).结论 腹腔注射rhEPO 3 000或5 000U/kg能缓解L5脊神经切断大鼠的机械和热痛敏,抑制脊髓TNF-α和IL-1β的表达.     

姜黄素对神经病理性痛大鼠脊髓背角及背根神经节神经元大麻素受体1和NR2B表达的影响

目的 探讨姜黄素对神经病理性痛大鼠脊髓背角及背根神经节(DRG)神经元大麻素受体1 (CBR1)及含NR2B亚基N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的影响.方法 雄性SD大鼠72只,体重200～230 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=18):假手术组(S组)、慢性压迫性损伤组(CCI组)、姜黄素组(Cur组)和溶媒对照组(SC组).S组仅分离、暴露坐骨神经,其余3组采用慢性压迫性损伤法制备神经病理性痛模型.Cur组术后腹腔注射姜黄素100 mg·kg-1·d-1,连续14 d,SC组给予等容量二甲基亚砜.分别于术前2d、术后1、3、7、10、14 d时测定机械缩足反应阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).分别于术后3、7、14 d时处死6只大鼠,取脊髓背角和DRG,采用免疫组化法检测神经元CBR1和NR2B的表达.结果 与S组比较,其他3组术后MWT降低,TWL缩短,脊髓背角和DRG神经元CBR1和NR2B表达上调(P＜0.05);与CCI组比较,Cur组术后MWT升高,TWL延长,脊髓背角和DRG神经元CBR1表达上调,NR2B表达下调(P＜0.05),SC组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 姜黄素可减轻大鼠神经病理性痛,其机制与脊髓背角及DRG神经元CBR1表达上调、NR2B表达下调有关.     

右美托咪啶对神经病理性痛大鼠脊髓嘌呤受体P2X4mRNA和p38丝裂原活化蛋白激酶mRNA表达的影响

目的 评价右美托咪啶对神经病理性痛大鼠脊髓嘌呤受体P2X4(P2XR)mRNA和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)mRNA表达的影响.方法 雄性SD大鼠72只,体重180～220 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=24):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和右美托咪啶组( DEX组).采用坐骨神经慢性压迫性损伤法建立神经病理性痛模型.DEX组于术后即刻开始每天腹腔注射右美托咪啶50 μg/kg,S组和NP组腹腔注射等容量生理盐水.于术前1d、术后1、3、7和14 d时测定机械痛阈(MWT)和热痛阈(TWL).术后测定痛阈后随机取6只大鼠,断头处死,取损伤侧L4～6脊髓组织,采用RT-PCR法测定P2X4R mRNA和p38 MAPK mRNA表达.结果 与S组比较,NP组和DEX组术后MWT及TWL降低,脊髓P2X4R mRNA和p38 MAPK mRNA表达上调(P＜0.05).与NP组比较,DE组术后MWT及TWL升高,脊髓P2X4R mRNA和p38 MAPK mRNA表达下调(P＜0.05).与术后7d时比较,NP组和DEX组于术后1、3、14 d时MWT和TWL升高,P2X4R mRNA和p38MAPK mRNA表达下调(P＜0.05).结论 右美托咪啶减轻大鼠神经病理性痛的机制与抑制P2X4RmRNA和p38 MAPK mRNA的表达有关.     

坐骨神经结扎大鼠脊髓背根神经节GDNF和NCAM表达的变化

目的 观察坐骨神经结扎大鼠脊髓背根神经节(隙G)胶质细胞源性神经营养因子(GD-NF)和神经细胞黏附分子(NCAM)表达的变化.方法 成年SD大鼠42只,随机均分为疼痛组(CCI组)和对照组(C组).CCI组行左侧坐骨神经结扎术,建立慢性限制性损伤模型;C组行假手术.分别于术前1d和术后1、3、5、7、14、21 d测机械痛阈(MWT)和热痛阈(TWL).采用免疫组织化学染色和适时PCR技术检测DRG中GDNF和NCAM的表达.结果 CCI组术后3、5、7、14 d MWT明显低于、TWL短于C组(P<0.01),而GDNF和NCAM表达明显高于C组(P<0.05或P<0.01).结论 坐骨神经结扎大鼠术后可出现痛阈下降,同时伴有DRG中GDNF和NCAM的表达增高.     

神经病理性痛大鼠背根神经节TRESK mRNA表达的变化

目的 探讨神经病理性痛大鼠背根神经节(DRG) 孔钾离子通道TRESK mRNA表达的变化.方法 雄性SD大鼠32只,体重22、0～250 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组(n=16):假手术组(S组)和神经病理性痛组(NP组).采用坐骨神经分支选择性损伤法制备神经病理性痛模型.S组仅暴露神经,不结扎.于术前1 d和术后1、3、5、7、14 d取8只大鼠,测定左后肢机械缩足反应阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).于术前1 d和术后14 d痛阈测定结束后取L4,5术侧DRG,采用RT-PCR法测定TRESK mRNA的表达.结果 与S组比较,NP组MWT明显降低,DRG TRESK mRNA表达明显下调(P<0.05或0.01),TWL差异无统计学意义(P>0.05).结论 神经病理性痛大鼠DRG TRESK mRNA表达下调,该变化可能与神经病理性痛的形成有关.     

姜黄素对大鼠神经病理性痛的影响

目的 探讨姜黄素对大鼠神经病理性痛的影响.方法 健康雄性SD大鼠108只,体重220～250 g,随机分为6组(n=18):对照组(C组)、假手术组(S组)、慢性压迫性损伤组(CCI组)和不同剂量姜黄素组(Cur1组、Cur2组和Cur3组).C组腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续14 d;S组只分离坐骨神经,然后腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续至术后14 d;CCI组术后腹腔注射二甲基亚砜4 ml·kg-1·d-1,持续至术后14 d;Cur1组、Cur2组或Cur3组术后分别腹腔注射姜黄素30、100、300 mg·kg-1·d-1,持续至术后14 d,姜黄素以二甲基亚砜溶解.于术前2 d和术后1、3、5、7、10、14d时测定热缩足反应潜伏期(TWL)和机械缩足反应阚值(MWT).各组于术后3、7、14 d时各处死6只大鼠,免疫组化法测定脊髓背角和背根神经节中磷酸化c-jun氨基末端蛋白激酶(p-JNK)和c-jun的表达.结果 与CCI组比较,Cur1组和Cur2组术后MWT升高,背根神经节和脊髓背角p-JNK和c-jun表达下调,Cur2组术后TWL升高(P<0.05);与Cur1组比较,Cur2组术后TWL升高,背根神经节和脊髓背角p-JNK和c-jun表达均下调(P<0.05),MWT差异无统计学意义(P0.05).结论 姜黄素30、100mg/kg可减轻大鼠神经病理性痛,100 mg/kg效果更明显,其机制可能与抑制脊髓背角和背根神经节p-JNK和c-jun表达上调有关.     

加巴喷丁对神经病理性疼痛大鼠焦虑样行为和杏仁体基底外侧核NR2B表达的影响

目的观察加巴喷丁对神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)诱发的大鼠焦虑样行为和杏仁体基底外侧核(basolateral nucleus of the amygdale,BLA)N-甲基-D-天门冬氨酸(N-Methyl-DAspartate,NMDA)受体2B亚基(NR2B)表达的影响。方法选择30只健康的3月龄雄性Wistar大鼠,体重250~280g,随机均分为假手术组(S组)、神经病理性疼痛模型组(NP组)、加巴喷丁组(G组)。神经病理性疼痛模型采用右侧坐骨神经慢性压迫损伤(chronic constriction injury,CCI)的方法制备。G组于CCI后3d开始腹腔注射加巴喷丁100mg/kg,每天一次。分别于术后3、7、10和14d测右侧后爪机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。术后第14天,通过高架十字迷宫测试神经病理性疼痛对大鼠情绪的影响,计算开放臂进入次数百分比和开放臂停留时间百分比,然后取大鼠BLA组织用RT-PCR、Western blot和免疫荧光方法检测NR2BmRNA和蛋白表达。结果与术前1d比较,术后各时点NP组MWT明显减少、TWL明显缩短(P0.05),而术后3dG组MWT明显减少、TWL明显缩短(P0.05)。与NP组比较,术后7、10和14dG组MWT明显增加、TWL明显延长(P0.05),术后第14天S组和G组的开放臂进入次数百分比和开放臂停留时间百分比明显升高(P0.05),术后第14天BLA区S组和G组NR2BmRNA相对吸光度明显减少、NR2B蛋白表达明显降低(P0.05),而S组和G组平均相对荧光密度值明显下降(P0.05)。结论加巴喷丁具有治疗神经病理性疼痛作用可反转其导致的焦虑样反应并使杏仁体的NR2B表达下调。     

白屈菜红碱预先给药对神经病理性疼痛大鼠疼痛行为和脊髓星形胶质细胞活化的影响

目的观察蛋白激酶α(PKCα)抑制剂白屈菜红碱(CHE)预先给药对坐骨神经慢性结扎损伤(CCI)大鼠机械疼痛行为和脊髓星形胶质细胞活化的影响。方法健康雄性SD大鼠128只,250~300 g,采用随机数字表法,随机均分为四组:假手术组(S组)、神经病理性疼痛组(NP组)、生理盐水组(NS组)和CHE组(CH组)。CCI模型建立前给药,CH组用CHE 80 mg/kg灌胃,NS组给予等容量的生理盐水,1次/日,连续4 d,NP组不给予任何药物。灌胃结束后S组分离暴露坐骨神经不结扎,余三组制备CCI模型。观察四组大鼠CCI模型建立前(T0)及建立后1 d(T1)、4 d(T2)、7d(T3)、10 d(T4)、14 d(T5)、21 d(T6)、28 d(T7)疼痛行为学改变,并于各时点行为学观察结束时每组随机取4只大鼠,测定脊髓背角胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达和星形胶质细胞计数。结果与S组比较,T1~T7时NP、NS、CH组机械缩足反应阈值(MWT)明显降低,热缩足反射潜伏期(TWL)明显缩短,脊髓背角GFAP表达及星形胶质细胞计数明显增加(P0.05);与CH组比较,T1~T7时NP组和NS组MWT明显降低,TWL明显缩短(P0.05);T4~T7时脊髓背角GFAP表达及星形胶质细胞计数明显增加(P0.05)。结论白屈菜红碱预先给药可抑制大鼠脊髓星形胶质细胞的活化,从而减轻神经病理性疼痛行为。     

脊髓背角内NDRG2在脊神经结扎神经病理性痛模型大鼠中的作用

目的通过鞘内注射N-myc下游调节基因2(NDRG2)干扰腺病毒(AD-Ndrg2-RNAi),研究脊髓背角内NDRG2在脊神经结扎(SNL)神经病理性痛模型大鼠中的作用。方法雄性SD大鼠42只,体重180~230 g,随机分为假手术组(sham组,n=6)和SNL组(n=36),sham组仅暴露脊神经不结扎,SNL组行L5脊神经结扎术。分别测定术前1 d、术后1、3、7、10、14和21 d大鼠术侧足底机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。SNL组大鼠各相应时点行为学测试后分别处死,取术侧脊髓腰膨大,检测NDRG2蛋白含量和mRNA表达量。另取48只雄性SD大鼠行鞘内置管后随机分为四组(n=12):sham+生理盐水组(CS组)、sham+AD-Ndrg2-RNAi组(CA组)、SNL+生理盐水组(SS组)和SNL+AD-Ndrg2-RNAi组(SA组);CS、SS两组大鼠术后3 d鞘内单次注射生理盐水10μl,CA、SA两组大鼠相同时点鞘内单次注射10μl,滴度为2×109PFU/ml的AD-Ndrg2-RNAi。于SNL术前1 d、术后1、3、7和10 d分别测定大鼠足底MWT和TWL。术后10 d行为学测试后处死大鼠,取术侧脊髓腰膨大,检测NDRG2和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)蛋白含量,采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测NDRG2 mRNA的表达量。结果与sham组比较,SNL组术后1、3、7、10、14、21 d MWT明显降低(P0.01),术后3、7、10、14、21 d TWL明显缩短(P0.01)。与术前1 d比较,SNL组脊髓背角内NDRG2的蛋白含量和mRNA表达量在术后1 d明显降低,术后7、10、14、21 d明显升高(P0.05)。与CS组比较,SS组和SA组术后1、3、7、10 d MWT明显降低,TWL明显缩短(P0.05);与SS组比较,SA组术后7、10 d MWT明显升高,TWL明显延长(P0.05)。与CS组比较,术后10 d CA组脊髓背角内NDRG2的蛋白含量和mRNA表达量均明显降低(P0.05),SS组均明显升高(P0.05);与SS组比较,SA组脊髓背角内NDRG2的蛋白含量和mRNA表达量均明显降低(P0.05)。与CS组比较,术后10 d CA、SS、SA组脊髓背角内GFAP蛋白含量均明显升高(P0.05)。结论 NDRG2蛋白含量升高参与了神经病理性痛的形成,鞘内注射AD-Ndrg2-RNAi明显抑制大鼠脊神经结扎造成的慢性病理性疼痛,提示星形胶质细胞中的NDRG2参与慢性病理性疼痛的发生和发展。