共刺激后淋巴细胞产生Th1/Th2细胞因子的变化及免疫抑制剂的影响

目的 探讨CD28、CD40通路共刺激后淋巴细胞产生Th1(IL-2、IFN-γ、IL-12)及Th2细胞因子(IL-4、IL-10)的变化及免疫抑制剂环孢素(CsA)、雷帕霉素(RPM)及霉酚酸(MPA)对共刺激通路激活后淋巴细胞产生Th1及Th2细胞因子的影响.方法采用单克隆抗体(mAb)与淋巴细胞表面CD3、CD28及CD40L分子结合产生相应刺激信号,单刺激及共刺激组分为:a组,CD3 mAb单刺激;b组,CD3 mAb加CD28 mAb共刺激;c组,CD3 mAb加CD28 mAb加CD40 L mAb共刺激;d组,CD3 mAb加CD28 mAb加CTLA4 mAb共刺激.各mAb的终浓度均为100 ng/ml.干预组分别将终浓度为300 ng/ml的CsA、RPM、MPA加入上述4组.ELISA法测定上述细胞培养上清中的细胞因子值.结果 a、b、c 3组IFN-γ分别为(248.91±11.20)、(555.08±24.42)、(548.19±33.06)ng/ml,IL-2分别为(29.48±8.61)、(1100.82±99.29)、(842.23±29.31)ng/ml,IL-4分别为(32.29±6.76)、(116.02±15.03)、(147.28±18.07)ng/ml,IL-10分别为(147.01±10.47)、(291.79±12.47)、(302.52±35.18)ng/ml.b、c组与a组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);b、c组IL-2、IL-12、IL-4比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).d组IFN-γ、IL-2及IL-10分别为(497.42±29.03)、(739.77±18.58)及(120.33±13.21)ng/ml,与b组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).CsA、RPM及MPA对共刺激后Th1/Th2细胞因子的产生均有抑制作用,CsA对4种细胞因子产生的抑制作用强于RPM和MPA,其中对IL-2及IL-4的抑制作用更为明显.CsA与CTLA4 mAb有协同作用.共刺激后IL-12产生升高,MPA可抑制单刺激和共刺激后IL-12的产生,CsA和RPM对IL-12的产生无明显抑制作用.结论 CD28、CD40共刺激通路在淋巴细胞活化中起关键作用.CsA、RPM、MPA及CTLA4 mAb对共刺激后Th1/Th2细胞因子的产生均有抑制作用,CsA的抑制作用更为明显.CD40 L mAb使Th1细胞因子及IL-12水平下降,又促进Th2细胞因子(以IL-4为主)产生,该作用可能是抗CD40 L抗体诱导移植物存活期延长的机制之一.     

CD40在大鼠腹膜间皮细胞的表达及其功能研究

目的 研究腹膜间皮细胞CD40的表达。调节因素及其活化后与细胞间黏附分子1（ICAM-1）分泌的相关性。方法 分离，培养大鼠腹膜间皮细胞，用IFN-γ，TNF-α，IL-1刺激24h，通过逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）及流式细胞仪（FACS）检测分析间皮细胞CD40表达。通过CD40单克隆抗体（CD40mAb)活化间皮细胞CD40，用FACS检测分析间皮细胞ICAM-1的表达。结果 间皮细胞结构性表达低水平的CD40。IFN-γ，IL-1可显著增加间皮细胞表面CD40mRNA及其蛋白的表达。而以IFN-γ增幅最大，TNF-α对间皮细胞CD40mRNA及其蛋白的表达无显著增加作用。用IFN-γ增加间皮细胞CD40表达的同时，加入CD40mAb活化CD40受体可显著增强间皮细胞ICAM-1的表达。结论 腹膜间皮细胞功能性表达CD40，其与腹腔中阳性CD40配体（CD40L^ )细胞相互作用。可能在腹腔局部防御中发挥重要作用，其结果对于限制炎症的发生和发展具有积极意义。     

趋化因子RANTES对人外周血单个核细胞的免疫活化作用

目的　探讨趋化因子RANTES刺激对人外周血单个核细胞 (PMNC)的免疫活化作用及其内在机制。方法　分离人外周血 ,应用不同终浓度的人重组RANTES(rhRANTES)以及抗CD3单克隆抗体 (抗CD3mAb)进行体外刺激 ,并对增殖反应显著者给予吡咯啉烷二甲基硫脲 (PDTC)或CTLA4Ig进行干预。采用3 H 胸腺嘧啶核苷掺入法检测PMNC增殖程度 ,流式细胞仪检测淋巴细胞表型的变化。结果　rhRANTES终浓度为 10 0ng/ml和 5 0 0 0ng/ml时 ,诱导PMNC增殖反应出现两次峰值 ;rhRANTES(10 0ng/ml)刺激产生的增殖反应显著高于抗CD3mAb(5 0ng/ml)的刺激 (P <0 .0 5 ) ,但两者无拮抗或协同作用 ;PDTC和CTLA4Ig对rhRANTES(10 0ng/ml)诱导的增殖反应均能产生抑制作用 ,并呈现剂量依赖性 ;rhRANTES刺激后 ,淋巴细胞CD2 5表达率显著增加 (P <0 .0 5 ) ,而人RANTES的受体CCR5表达率显著降低 (P <0 .0 5 ) ,CD2 8表达率及CD4 /CD8比值无明显改变(P >0 .0 5 )。结论　RANTES趋化信号具有不依赖于CD3信号的独特的诱导PMNC免疫活化的功能。     

胰腺癌患者手术前后CD4-CD8-T细胞比例与IL-4,IFN-γ含量的关系

目的研究胰腺癌患者手术前后外周血CD4-CD8-T细胞比例与IL-4、IFN-γ含量变化及其相互关系。方法分别应用流式细胞仪及ELISA法检测胰腺癌患者手术前后外周血中CD4-CD8-T细胞比例与IL-4、IFN-γ含量。结果20例胰腺癌患者术前CD4-CD8-T细胞占CD3 T细胞的比例为(4.13%±1.81%),术后CD4-CD8-T细胞占CD3 T细胞的比例为(6.11%±1.40%),两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。胰腺癌患者术前外周血中IL-4含量为(90.29±24.99)pg/ml,术后外周血中IL-4含量为(71.43±8.39)pg/ml,两组之间差异有统计学意义(P<0.01);术前外周血中IFN-γ含量为(15.79±5.90)pg/ml,术后外周血中IFN-γ含量为(20.08±6.60)pg/ml,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论胰腺癌患者手术前后CD4-CD8-T细胞比例变化可能影响IL-4、IFN-γ含量的变化,胰腺癌患者手术前后测定CD4-CD8-T细胞比例、IL-4、IFN-γ含量对判断机体的免疫水平具有一定的参考价值。     

黄芪多糖对分泌白细胞介素12树突细胞亚群的免疫调控效应与机制

目的 观察黄芪多糖(APS)对分泌IL-12树突细胞(DC)亚群CD11chighCD45RBlowDC功能的影响.方法磁珠分选技术获得BALB/c小鼠脾脏CD11chighCD45RBlowDC和CD4+T淋巴细胞.在CD11 chighCD45RBlowDC中加入不同浓度APS(50、100、200μg/mL)处理,以不加APS的细胞作为对照,应用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-12水平,流式细胞仪检测细胞表面分子CD40、CD80、CD86、I-A/E及Toll样受体4(TLR4)的表达.将CD4+T淋巴细胞分为正常对照组(未行任何处理)、未刺激组(加入未经APS处理的CD11chighCD45RBlowDC与CD4+T淋巴细胞混合培养)、高浓度APS刺激组(加入经200μg/mL APS处理后的CD11chighCD45RBlowDC与CD4+T淋巴细胞混合培养)、高浓度APS刺激+抗体1组(加入经200μg/mL APS处理后的CD11chighCD45RBlowDC、IL-12抗体与CD4+T淋巴细胞混合培养)和高浓度APS刺激+抗体2组(加入经200 μg/mL APS处理后的CD11chighCD45RBlowDC、IL-12同型对照抗体与CD4+T淋巴细胞混合培养).采用噻唑蓝法测定CD4+T淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞培养液中IL-4和γ干扰素水平.对数据行多组间单因素方差分析.结果与未加APS刺激相比,3种浓度APS均显著增强CD11chighCD45RBlowDC表面分子CD40、CD80、I-A/E及TLR4表达及IL-12分泌,其中IL-12分泌呈APS浓度依赖性;CD86表达无明显变化.高浓度APS刺激组CD4+T淋巴细胞增殖能力高于未刺激组(F=13.438,P＜0.05);高浓度APS刺激组细胞γ干扰素水平为(2784±137)pg/mL,高于未刺激组[(1952±101)pg/mL,F=12.177,P＜0.05];高浓度APS刺激组细胞IL-4水平为(172±20)pg/mL,明显低于未刺激组[(193±19)pg/mL,F=11.963,P＜0.05].高浓度APS刺激+抗体1组前述3项指标表达水平较未刺激组明显改善,高浓度APS刺激+抗体2组前述3项指标表达水平与高浓度APS刺激组接近.结论 APS能够通过促进CD11chighCD45RBlowDC中IL-12的表达,诱导CD4+T淋巴细胞向Th1型反应分化,通过激活CD11chighCD45RBlowDC增强免疫活性.

Abstract：

Objective To investigate immunomodulatory effect of Astragalus polysaccharides (APS) on IL-12-secreting dendritic cell (DC) subset CD11chigh CD45RBlow DC. Methods Spleen CD11chighCD45RBlow DC and CD4 +T lymphocytes in BALB/c mice were purified by magnetic beads sorting,and were treated with 0 (as control), 50, 100, 200 μg/mL APS. Immunofluorescence staining and flow cytometry were used to determine expressions of CD11chighCD45RBlow DC surface molecules, including CD40,CD80, CD86, I-A/E, and Toll-like receptor (TLR) 4. IL-12 level in CD11chighCD45RBlow DC culture supernatant was determined by ELISA. The CD4+ T lymphocytes were divided into: normal control group,non-stimulation group ( CD4 + T lymphocytes cocultured with APS-unstimulated CD11 chigh CD45RBlow DC ) ,high-dose APS stimulation group (CD4+T lymphocytes cocultured with 200 μg/mL APS-stimulated CD11ch'ghCD45RBlow DC) , high-dose APS stimulation + antibody 1 group ( CD4 + T lymphocytes cocultured with 200 μg/mL APS-stimulated CD11chighCD45RBlow DC and IL-12 antibody), high-dose APS stimulation +antibody 2 group (CD4 +T lymphocytes cocultured with 200 μg/mL APS-stimulated CD11chigh CD45RBlow DC and IL-12 antibody isotype). Proliferation ability of CD4 + T lymphocytes was determined with MTT method.IL-4 level as well as IFN-γ level in CD4 + T lymphocyte culture supernatant was determined by flow cytometry. Data were processed with one-way analysis of variance. Results Compared with those in control, the expressions of CD 11 chigh CD45 RBlow DC surface molecules ( except for CD86 ) on CD 11 chigh CD45RBlow DC surface, as well as IL-12-secreting level with dose-dependence were increased in cells stimulated with 50,100, 200 μg/mL APS. Proliferation ability of CD4 +T lymphocytes in high-dose APS stimulation group was higher as compared with that in non-stimulation group ( F = 13. 438, P ＜0.05). IFN-γlevel in high-dose APS stimulation group [(2784 ± 137 ) pg/mL] was higher than that in non-stimulation group [(1952 ±101 ) pg/mL, F = 12. 177, P ＜0.05]. IL-4 level in high-dose APS stimulation group was (172 t 20) pg/mL,which was lower than that in non-stimulation group [( 193 ± 19) pg/mL, F = 11.963, P ＜0.05]. Proliferation ability of CD4+ T lymphocytes, IFN-γ level, and IL-4 level in high-dose APS stimulation + antibody 1 group were all ameliorated when compared with those in non-stimulation group; while levels of the 3 indexes in high-dose APS stimulation + antibody 2 group were similar to those in high-dose APS stimulation group.Conclusions APS can activate IL-12-producing CD11 chighCD45RBlowDC, and further induce the activation of immune function of T lymphocyte with shifting of Th2 to Th1 in vitro. APS can enhance the immune response via promoting the phenotypic and functional maturation of CD11 chighCD45RBlow DC.     

RANTES在CD4+Tm细胞介导小鼠心脏移植急性排斥反应中的表达及意义

目的 探讨趋化因子RANTES在CD4+记忆性T淋巴细胞(Tm细胞)介导的小鼠心脏移植急性排斥反应中表达的变化及意义.方法 以Balb/c小鼠为供鼠,C57BL/6小鼠为受鼠,进行皮肤移植,提取并纯化受鼠脾脏中的CD4+ Tm细胞.分为两组进行实验:实验组,C57BL/6小鼠输注1×106个CD4+ Tm细胞,第2天以Balb/c小鼠为供鼠,进行颈部异位心脏移植;对照组,C57BL/6小鼠未输注CD4 Tm细胞,直接进行心脏移植.观察两组移植心脏存活时间和组织病理学改变,检测移植物中RANTES基因的相对表达量及RANTES在受鼠血清中的浓度.结果 皮肤移植受鼠脾脏中CD4+ Tm细胞达到26.83％.对照组受鼠存活时间为(7.67±0.21)d,实验组为(5.17±0.17) d(P＜0.01).对照组移植心脏急性排斥反应的评级为(2.67±0.14)级,实验组为(3.92±0.08)级(P＜0.01).实验组移植心脏中RANTES基因的相对表达量为对照组的(2.6±0.21)倍(P＜0.01).实验组血清中RANTES浓度为(223.6±16.79) pg/ml,对照组为(120.7±9.47) pg/ml(P＜0.01).结论 接受CD4+ Tm细胞输注的心脏移植受鼠,其体内RANTES的表达量明显增加,加速了急性排斥反应的发生.     

他克莫司体外诱导狼疮性肾炎患者耐受性树突状细胞形成

目的:观察他克莫司(tacrolimus)处理前后狼疮性肾炎(LN)患者外周血树突状细胞(dendriticcells,DCs)表面标志及功能的改变。方法:分离LN患者外周血单个核细胞,用GM-CSF、IL-4等细胞因子诱导DCs成熟,他克莫司组在加入上述细胞因子前先加入他克莫司(5μg/ml)培养。培养第9d收集DCs细胞,流式细胞仪检测CD80、CD86和HLA-DR的表达。MTT法检测DCs刺激淋巴细胞增殖能力,ELISA法检测混合淋巴细胞反应培养上清IL-10和IFN-γ水平。结果:他克莫司处理后的DCs表达CD80、CD86和HLA-DR百分数较对照组均明显降低(52.70±1.77vs78.36±4.80,63.50±14.06vs83.91±9.81,70.41±12.51vs90.51±8.63),P均<0.01;他克莫司处理后的DCs与T细胞混合培养,其刺激T细胞增殖相应的OD值明显降低(DC∶TC=1∶10时,0.294±0.094vs0.582±0.123;DC∶TC=1∶50时,0.325±0.099vs0.458±0.080),P均<0.01。其混合培养的上清液中IL-10水平较无他克莫司处理的DCs与T细胞的混合培养上清液明显降低[(195.0±36.9)pg/mlvs(423.6±93.2)pg/ml,P<0.01],而IFN-γ两者间无统计学意义[(88.2±11.6)pg/mlvs(86.9±12.7)pg/ml,P>0.05]。结论:他克莫司在体外可抑制LN患者外周血DCs的成熟,且他克莫司处理后的DCs能明显抑制T细胞增殖及T细胞向Th2细胞转化。     

中性粒细胞胞外诱捕网对单核细胞分泌炎症介质的影响

目的:探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对单核细胞分泌炎症介质的影响。方法:采用健康人中性粒细胞体外诱导NETs形成,用该NETs刺激单核细胞,LEGENDplex人炎症因子试剂盒检测培养上清多种炎症介质的变化。结果:单核细胞与NETs共培养12 h后,NETs组与对照组相比,IL-1β诱生量分别为(97.60±60.11)pg/ml、1.17 pg/ml,IFN-α诱生量分别为(208.90±77.38)pg/ml、1.17 pg/ml,TNF-α诱生量分别为(218.88±86.27)pg/ml、0.17 pg/ml,MCP-1诱生量分别为(1 063.25±740.01)pg/ml、(157.16±3.86)pg/ml,IL-6诱生量分别为(67.76±15.51)pg/ml、(2.76±0.47)pg/ml,差异均具有统计学意义(P0.05),IL-10、IL-12表达水平差异无统计学意义。结论:NETs能显著促进单核细胞分泌IL-1β、IFN-α、TNF-α、MCP-1、IL-6。     

活动性狼疮肾炎患者外周血单个核细胞钙调神经磷酸酶活性的检测及白细胞介素-4表达变化

目的：检测活动性狼疮肾炎（LN）患者外周血单个核细胞（PBMC）白细胞介素-4（IL-4）表达及其与钙调神经磷酸酶（Calcineurin，CaN）活性的关系。方法：体外培养活动性LN患者PBMC，应用发色底物法检测胞浆CaN活性，逆转录PCR检测IL-4mRNA表达。结果：（1）在单纯培养情况下，正常对照组和LN组PBMC均出现一定量CaN活化，活动性LN组显著高于正常对照组[（46．08±5．58）mmol／mg．pr vs（8．81±3．61）mmol／mg．pr，P〈0．01]；在PMA＋Ionomyci刺激下，各组CaN活性均升高，活动性LN组CaN活性明显高于正常对照组[（69．34±12．59）mmol／mg．pr vs（37．12±11．57）mmol／mg．pr，P〈0．01]；（2）LN患者PBMC在单纯培养和PMA＋Ionomycin刺激时IL-4蛋白和mRNA表达均显著高于相应的对照组（P〈0．05）；（3）在单纯培养和PMA＋Ionomycin刺激时，FK506对LNPBMC表达IL-4蛋白和mRNA均有显著抑制作用（P〈0．01）。结论：LN患者PBMC存在CaN过度活化；LN患者PBMC高效表达IL-4与其CaN过度活化密切相关，通过阻断CaN活性可调控IL-4表达。     

输注间充质干细胞治疗小鼠原发性免疫性血小板减少症的疗效观察及机制研究

目的 探讨输注间充质干细胞(MSC)对小鼠原发性免疫性血小板减少症(ITP)的治疗效果及其机制.方法 采用腹腔注射大鼠抗小鼠CD41抗体的方法诱导建立雌性BALB/c小鼠ITP模型,取建模成功小鼠20只作为实验组,经尾静脉注射雄性BALB/c小鼠的MSC 2×107/个;另取20只建模成功小鼠作为对照组,不注射MSC.注射MSC 14 d后,取两组小鼠外周血,测定血小板数,应用流式细胞术检测外周血髓系树突细胞(mDC,Lin-HLA-DR+ CD11c+细胞)绝对数及其表面共刺激分子CD80和CD86的表达水平,用酶联免疫吸附试验测定TH1细胞因子γ干扰素(INF-γ)、白细胞介素2(IL-2)及TH2细胞因子IL-4、IL-10的水平.结果 注射MSC 14 d后,实验组小鼠血小板数量为(623±78.9)×109/L,明显高于对照组的(288±87.8)×109/L(P＞0.05).实验组mDC绝对数量为(16.24±9.97)/ml,明显低于对照组的(29.32±13.21)/ml (P＜0.05);实验组mDC表面的CD80和CD86的表达分别为(2.31±1.26)％和(46.25±20.21)％,明显低于对照组的(6.27±3.31)％和(62.21±16.41)％(P＜0.05).实验组外周血INF-γ和IL-2水平分别为(3.1±1.7)和(3.2±2.1)pg/ml,明显低于对照组的(10.3±4.8)和(16.3±5.7)pg/ml(P＜0.05);IL4和IL-10水平分别为(88.6±15.2)和(38.3±11.8)pg/ml,明显高于对照组的(32.7±5.7)和(22.1±3.4) pg/ml(P＜0.05).结论 MSC可以有效治疗小鼠ITP,其机制与MSC抑制小鼠DC活化导致TH1细胞的极化有关.     

腹主动脉瘤与CD40的关系

目的 探讨腹主动脉瘤(AAA)发病与患者血清CD40及其配体(CD40L)浓度的相关性.方法 对30例诊断明确的腹主动脉瘤患者(病例组)与26例健康人群(正常组)进行对照研究,酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法测定标本中CD40和CD40L水平,应用统计学独立样本t检验分析CD40/CD40L与腹主动脉瘤的关系.结果 病例组血清CD40浓度为(96.20±26.26) ng/L,高于正常组的(76.22±6.39) ng/L,两者差异有统计学意义(P＜0.05).病例组血清CD40L浓度为(746.20±215.46) ng/L,明显高于正常组的(503.07±75.32) ng/L,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AAA患者血清CD40和CD40L浓度明显高于健康人群,提示CD40/CD40L可能参与了AAA的发病.     

CD40在肝硬化门静脉高压症脾脏中的表达与临床意义

Objective To investigate the expression and clinical significance of CD40 in the spleen of cirrhotic portal hypertension. Methods Expression of CD40 was determined with S-P immunohistochemistry in spleen specimens from 50 cases of cirrhotic portal hypertension and 15 healthy individuals. Results The CD40 positive rates in normal spleen and cirrhotic spleen were 86.7% and 36.0%, respectively. There was a significant difference between the 2 groups (P＜0.05). There was a negative correlation between the expression of CD40 and Child grades of liver function and cirrhotic splenic types(P＜0. 05). Conclusion CD40 might reflect the changes of splenic immune function,which might be one of more exact clinical examination indexes of splenic immune function.     

CD40-CD40L在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用研究

目的探讨CD40-CD40L存儿童过敏性紫癜发病机制中的作用。方法研究对象为30例HSP患儿,正常对照组30例,应用流代细胞术检测其外周血单个核细胞中CD40－CD40L的表达情况,并观察实验组治疗前后CD40-CD40L的表达有无差异,结果与对照组比较,CD40L表达明妙增高,且治疗前表达高于治疗后（P〈0．05）,CD40表达增高,但与对照组及治疗前后比较差异均无显著性（P〉0．05）。结论HSP患儿外周血单个核细胞CD40L表达增高,且治疗前离于治疗后,表明其在HSP患儿免疫紊乱发病机制中可能起着重要作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞 CD40及CD40配体分子表达的研究

目的探讨CD40及CD40配体(CD40L)分子在活跃期SLE患者外周血单个核细胞(PBMC)上的表达及在SLE发病中的可能作用机制.方法采用流式细胞仪检测13例初发活跃期及13例复发活跃期SLE患者PBMC表面CD40及CD40L分子的表达.结果初发及复发活跃期SLE患者PBMC表达CD40分子(25.94±10.10)%及(27.34±12.94)%,均较正常对照组(13.99±5.26)%明显升高(P＜0.001);初发活跃期SLE患者PBMC表达CD40L分子(1.74±1.66)%较正常对照组(0.91±0.39)%亦明显升高(P＜0.05).初发与复发活跃期SLE患者之间比较PBMC表达CD40及CD40L分子无显著性差异.结论活跃期SLE患者外周血PBMC存在CD40及CD40L分子的异常表达,提示CD40及CD40L分子在SLF患者T、B细胞之间的信号传导及SLE发病机制中可能起着重要的作用.     

CD40在肝硬化门静脉高压症脾脏中的表达与临床意义

目的 探讨CD40在肝硬化门静脉高压症患者脾脏中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学S-P法测定50例肝硬化门静脉高压症患者和15例正常脾脏中CD40的表达情况.结果 CD40在正常脾脏与巨脾组织中的表达率分别为86.7%和36.0%,存在显著性差异(P＜0.05).CD40表达与肝功能Child分级及巨脾病理分级均呈负相关(P＜0.05).结论 CD40可能为临床评估肝硬化门静脉高压症患者脾脏免疫功能状态的重要指标.

Abstract：

Objective To investigate the expression and clinical significance of CD40 in the spleen of cirrhotic portal hypertension. Methods Expression of CD40 was determined with S-P immunohistochemistry in spleen specimens from 50 cases of cirrhotic portal hypertension and 15 healthy individuals. Results The CD40 positive rates in normal spleen and cirrhotic spleen were 86.7% and 36.0%, respectively. There was a significant difference between the 2 groups (P＜0.05). There was a negative correlation between the expression of CD40 and Child grades of liver function and cirrhotic splenic types(P＜0. 05). Conclusion CD40 might reflect the changes of splenic immune function,which might be one of more exact clinical examination indexes of splenic immune function.     

构建含有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因腺病毒并体外检测

目的 构建载有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因片段的腺病毒载体,并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况.方法 提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc-GFP质粒,测序成功后包装构建Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-GFP,转染293细胞.出毒后大量复制病毒并纯化,测定病毒滴度,体外感染细胞观察病毒复制及分泌目的 蛋白情况并检测目的 蛋白表达量.结果 成功构建了质粒及病毒,体外感染显示该病毒能有效的感染细胞并表达蛋白(荧光显示),检测目的 蛋白表达量随时间点及浓度增加而增加.当病毒浓度增加到一定程度时目的 蛋白表达趋于无明显差异性.结论 构建小鼠融合基因片段并成功转入细胞内,分泌表达目的 蛋白是可行的,为进一步研究该病毒在大鼠体内感染及表达CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其机制的研究奠定了基础.