人参皂苷Rg_1对大鼠脑片AD模型磷酸化Tau蛋白及NMDA受体亚单位NR1,NR2B表达的影响

目的:观察人参皂苷Rg1对大鼠脑片AD模型磷酸化Tau蛋白(Phosphory protein Tau,P-Tau)及N-甲基-D-门冬氨酸受体亚单位1(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 1,NR1)、亚单位2B(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B,NR2B)的表达影响。方法:将5周龄雄性Wistar大鼠脑片(含皮层和海马)随机分为5组:空白对照组、模型组和低、中、高剂量人参皂苷Rg1组,每组10张脑片,脑片放置盛有人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)的6孔板中培养,温度(32.0±0.5)℃,整个过程ACSF中持续通入混合氧气(95%O2+5%CO2)。人参皂苷Rg1各组ACSF中首先加入人参皂苷Rg1(60,120,240μmol.L-1)作用2 h,然后模型组和人参皂苷Rg1各组ACSF中分别加入冈田酸(okadaic acid,OA)1μmol.L-1作用3 h,空白对照组不加任何处理因素。采用免疫组织化学、图像分析技术等方法,检测皮层和海马P-Tau,NR1,NR2B表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠脑片P-Tau的表达增加(P0.05或P0.01),NR1,NR2B的表达降低(P0.01);人参皂苷Rg1各组与模型组比较,大鼠脑片P-Tau的表达降低(P0.01或P0.05),NR1,NR2B的表达增加(P0.01或P0.05),其中以高剂量人参皂苷Rg1组效果最佳。结论:人参皂苷Rg1可以降低大鼠脑片AD模型P-Tau表达水平,并能上调学习记忆相关蛋白NR1,NR2B的表达,以此途径发挥抗痴呆作用。     

人参皂苷Rg1对AD模型大鼠脑片P-Tau, caspase-3表达的影响

目的:研究人参皂苷Rg_1对AD模型大鼠脑片磷酸化Tau蛋白(Phosphory protein Tau,P-Tau)、半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)表达的调控作用.方法:将5周龄的雄性Wistar大鼠脑片(含海马及皮层)随机分为5组:空白对照组,模型组,人参皂苷Rg,低、中、高(60,120,240 μmol·L~(-1))3个浓度组,每组10张脑片.脑片放置人工脑脊液中培养.人参皂苷Rg_1预防性加入人参皂苷Rg_1各组2 h后,模型组和人参皂苷Rg_1各组分别加入用冈田酸(okadaic acid,OA)3 h,诱导大鼠脑片Tau蛋白过度磷酸化制备AD模型,运用免疫组织化学、图像分析技术等方法,观察人参皂苷Rg_1预防性干预对各组大鼠脑片P-Tau,caspase-3表达的影响.结果:模型组P-Tau,caspase-3的表达水平明显高于空白对照组(P<0.01);人参皂苷Rg_1低、中、高浓度组与模型组比较,P-Tau,caspase-3的表达水平明显降低(P<0.01或P<0.05);P-Tau,caspase-3的表达随着人参皂苷Rg_1浓度增加而降低.结论:人参皂苷Rg_1可以降低P-Tau水平,从而减缓神经纤维缠结的形成;还可通过抑制凋亡效应蛋白caspase-3的表达,从而抑制神经元凋亡,保护神经细胞,发挥抗痴呆的作用.     

四慧合剂对疲劳模型大鼠学习记忆及海马NMDA受体亚基NR2A、NR2B及EphB2受体表达的影响

目的 研究疲劳模型大鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸 (N-methyl D-aspartate, NMDA)受体NR2A 、NR2B亚基及EphB2受体表达的变化,并观察四逆散、生慧汤、四慧合剂对其影响。     

电针对吗啡戒断大鼠杏仁核内N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位NR2B蛋白及基因表达的影响

目的:观察电针对吗啡戒断大鼠空间学习记忆的影响,通过对杏仁核脑区N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位NR 2B表达的检测,探讨电针改善大鼠吗啡戒断后学习记忆能力的分子生物学机制。方法:雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、针刺组以及电针组,每组10只。以每日20,30,40,50,50mg/kg剂量,连续5d背部皮下注射盐酸吗啡,建立吗啡依赖大鼠模型,末次注射后3h给予纳洛酮快速戒断。两个治疗组选取"足三里""肾俞"穴分别施以手针和电针,每次15min,每日1次,连续治疗6d。应用Morris水迷宫测试戒断大鼠空间学习能力,应用蛋白印记(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测戒断大鼠杏仁核NR 2B蛋白与基因的表达水平。结果:模型组大鼠的逃避潜伏期较空白组明显延长(P0.01),针刺及电针组则较模型组显著缩短(P0.01),电针组较针刺组缩短更明显(P0.05);模型组大鼠的杏仁核NR 2B蛋白表达较空白组显著降低(P0.01),针刺组、电针组则较模型组表达升高(P0.01),电针组高于针刺组(P0.01);模型组NR 2BmRNA表达较空白组显著降低(P0.01),电针组较模型组表达升高(P0.05)。结论:吗啡戒断后大鼠空间学习能力受损,针刺及电针可以恢复大鼠学习能力且电针组疗效优于针刺组,推测可能与其对杏仁核NR 2B表达的调节有关。     

邓铁涛教授健脑1方对血管性痴呆大鼠海马NMDAR-CaMKⅡ通路的影响

目的:探讨邓铁涛教授健脑1方对血管性痴呆大鼠的海马NMDAR-CaMKⅡ通路的影响。方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎建立VD动物模型,将60只SD雄性大鼠随机分为假手术组、VD模型组、高剂量组、低剂量组及尼莫地平组,给药30天后采用免疫组化方法测定大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ表达水平。结果:模型组大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ的表达水平与假手术组相比明显降低(P<0.01)。与模型组相比较,高剂量组大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ表达水平均显著提高(P<0.05),尼莫地平组大鼠海马CAl区CaMKⅡ表达水平也明显提高(P<0.05)。结论:NMDAR-CaMKⅡ通路在VD的发生机制中发挥了重要作用。健脑1方可能通过上调VD大鼠海马NR2B及CaMKⅡ的表达,从而改善大鼠学习和记忆功能,起到治疗血管性痴呆的作用。     

知母皂苷对AD模型大鼠学习记忆能力及磷酸化Tau蛋白和胆碱乙酰基转移酶表达的影响

目的:研究知母皂苷(SAa B)对Aβ1-42诱导的大鼠学习记忆障碍的改善作用及机制。方法:选用SD大鼠48只随机分为4组:正常对照组,Aβ1-42组,SAa B(1、2.5 mg/ml)+Aβ1-42组,每组12只,侧脑室注射给药后第2 d进行Morris水迷宫实验,第7d快速取海马CA1区,Western Blot法观察磷酸化tau(P-tau)、磷酸化GSK-3β、磷酸化Akt蛋白及胆碱乙酰基转移酶(Ch AT)蛋白表达水平。结果:脑室内注射Aβ1-42大鼠出现明显的空间学习记忆障碍,表现为逃避潜伏期和游泳路程较正常对照组明显延长,在原平台象限游泳时间占总时间的百分比明显降低,同时伴有海马P-tau表达明显增加,p-GSK-3β、p-Akt、Ch AT表达明显降低。侧脑室内注射SAa B后,与Aβ1-42组相比,SAa B(1、2.5 mg/ml)+Aβ1-42组大鼠逃避潜伏期和游泳路程明显缩短,原平台象限游泳时间占总游泳时间百分比升高;海马P-tau表达明显降低,p-GSK-3β、p-Akt、Ch AT表达明显增加。结论:侧脑室内注射知母皂苷可通过降低Ptau表达水平,提高Ch AT活性,从而减少神经元纤维缠结的形成,并可能通过调节胆碱能功能的途径发挥抗痴呆的作用。     

两种中药复方对脑缺血再灌注大鼠脑组织Glu含量及NMDA受体亚单位NR1表达的影响

目的:比较益气活血汤、镇肝熄风汤和星蒌承气汤3种中药复方对急性脑缺血再灌注大鼠缺血脑组织Glu含量与NR1表达的影响。方法:采用线栓法阻断大鼠左侧大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、镇肝熄风汤和星蒌承气汤组。采用高效液相色谱法和免疫组化SABC染色法,分别检测Glu的含量和NR1表达。结果:脑缺血2h再灌注各时间点与假手术组比较,模型组Glu含量和NR1表达均显著升高和增加(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,各治疗组各时间点Glu含量和NR1表达显著降低和减少(P<0.01);治疗组组间比较,48h无显著差异,6h星蒌承气汤组在减少NR1表达方面最优(P<0.05);结论:两种中药复方可以通过降低Glu含量和减少NR1表达,减轻兴奋性氨基酸毒性,抗脑缺血再灌注损伤。     

灵芝多糖对实验性衰老大鼠海马内NR2B表达的影响

目的:观察灵芝多糖对试验性衰老大鼠海马内离子型谷氨酸受体-N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDA受体)2B亚单位(NR2B)表达的影响。方法:健康SD大鼠,雌雄各半,颈背部皮下注射(sc)D-半乳糖(D-gal)制成亚急性衰老模型,用不同浓度的灵芝多糖溶液灌胃(ig)治疗10d,Morris水迷宫试验检测动物学习记忆能力,采用免疫组织化学染色法,WesternBlotting技术检测各组大鼠海马CA1,CA3区NR2B表达的变化。结果:与模型组相比,灵芝多糖125,100 mg.kg-1能显著降低大鼠水迷宫试验的平均潜伏期,升高跨越平台次数及在Ⅳ象限内的游泳时间占整个游泳时间的百分率,亦能显著升高大鼠海马内CA1,CA3区NR2B的表达(P均0.01)。结论:灵芝多糖能提高试验性衰老大鼠的学习记忆能力;升高此大鼠海马内降低的NR2B表达,可能是其增强大鼠学习记忆的机制之一。     

脑尔康对AD模型小鼠脑内NMDA受体亚单位NR2B表达的影响

目的:观察复方中药脑尔康对慢性铝中毒AD(Alzheimer's disease)模型小鼠学习记忆及脑内NMDA受体亚单位NR2B蛋白表达的影响.方法:采用跳台法检测AD模型小鼠学习记忆成绩,用免疫组织化学方法观察脑尔康对AD模型小鼠脑皮层及海马结构区域NMDA受体亚单位NR2B蛋白表达的影响.结果:模型组与空白组比较,学习记忆成绩明显下降(P＜0.01);各用药组分别与模型组比较,学习记忆成绩明显提高(P＜0.01);中药组比脑复康组改善效果更好;模型组与空白组比较,皮层和海马内NR2B的表达明显减少(P＜0.01),各用药组小鼠脑内NR2B的表达均不同程度增加(P＜0.05或P＜0.01);中药组与脑复康组比较,NR2B的表达增加更明显(P＜0.01).结论:脑尔康可能通过对 NMDA受体亚单位NR2B蛋白表达的保护作用而发挥抗痴呆作用.     

人参皂苷Rg1对PD模型大鼠纹状体多巴胺含量的影响及其机制探讨

目的：研究人参皂苷Rg1对6-羟基多巴（6-OHDA）制备的去卵巢（OVX）帕金森病（PD）模型大鼠纹状体（Str）多巴胺（DA）含量的影响及其机制探讨。方法：应用6-OHDA制备OVX的PD模型大鼠，腹腔注射Rg1（10mg&#183;kg^-1）或侧脑室同时给予雌激素受体（ER）拮抗剂ICI 182，780（2．4ng&#183;kg^-1），连续用药14d，观察阿朴吗啡诱导的大鼠旋转行为。应用高效液相色谱法（HPLC）检测纹状体（Str）内DA及其代谢产物二羟基苯乙酸（DOPAC）和高香草酸（HVA）含量的变化。结果：人参皂苷Rg1可明显改善PD模型大鼠单侧旋转行为（P〈0．01），此作用可被ICI182,780所阻断。Rg1给药组可显著提高损毁侧Str DA及其代谢产物含量（P〈0．01）。应用ICI182，780可阻断Rg1的神经保护作用，损毁侧StrDA及其代谢产物含量较Rg1给药组明显降低（P〈0．01）。结论：人参皂苷Rg1对6-OHDA所致的去卵巢PD模型大鼠黑质多巴胺能神经元有一定保护作用，此作用与ER途径的激活有关。     

Effect of ginsenoside Rg1 on insulin binding in mice liver and brain membranes

The effect of in vivo administration of ginsenoside Rg₁ from Panax ginseng on insulin binding in liver and brain membranes of mice was studied. Ginsenoside Rg₁ at a dose of 10mg/kg significantly increased [¹²⁵]insulin binding in both tissues. The increase in insulin binding was related to an increase in the number of insulin receptors rather than to a change in the receptor affinity.     

洗心汤颗粒对散发性老年性痴呆模型大鼠脑内Tau蛋白毒性的影响

目的 研究洗心汤颗粒对散发性老年性痴呆(SAD)大鼠模型脑内促Tau蛋白毒性形成的重要位点Thr231、Ser422磷酸化的影响,探讨洗心汤颗粒防治SAD的作用机制.方法 将SD大鼠随机分为假手术组,SAD模型组,多奈哌齐阳性对照组,洗心汤颗粒低、中、高剂量(7.61、15.21、30.42 g/kg)组,每天ig给药1次,连续给药2个月.以免疫组化法及Western blotting法检测大鼠脑组织Tau蛋白重要位点Thr231、Ser422的磷酸化水平.结果 与SAD模型组相比,洗心汤颗粒显著减少SAD模型大鼠海马组织Thr231、Ser422的表达(P＜0.05、0.01);多奈哌齐则无显著作用.结论 洗心汤颗粒抑制Tau蛋白重要位点的过度磷酸化及其Tau蛋白毒性,遏制SAD的病理进展.     

电针对脑缺血再灌注模型大鼠海马NMDA受体2A、2B亚型表达的影响

目的:观察NMDA受体亚单位NR2A和NR2B在缺血再灌注损伤大鼠海马结构中的表达,探讨电针"百会"、"大椎"穴对神经元的保护作用。方法:将雄性SD大鼠15只随机分为假手术组、模型组、电针组,每组各5只。采用改良Longa线栓大脑中动脉法复制局灶性脑缺血再灌注模型;电针组取"百会"及"大椎"两穴,采用连续波刺激30 min,电流强度1～3 mA,频率3Hz。用免疫组织化学方法观察受损侧海马区NMDA受体2A与2B亚型表达的变化。结果:与假手术组比较,模型组NR2A蛋白表达降低(P<0.05);NR2B蛋白表达升高(P<0.05);给予电针治疗后NR2A蛋白表达升高(P<0.05);NR2B蛋白表达降低。结论:电针通过调节脑缺血再灌注受损侧海马组织神经细胞NR2A与NR2B的异常表达,发挥对神经元的保护作用。     

HPLC—ELSD测定丹七片中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量

目的：建立用高效液相色谱配备蒸发光散射检测器（HPLc—ELsD）测定丹七片中人参皂苷Rgl和人参皂苷Rbl含量的方法。方法：采用色谱柱为UltimateTMXB—C18柱（150mm×4．6mm）;流动相为乙腈：水,0-22min,乙腈22—45％;漂移管温度110℃,载气流速3．OL／min;柱温：35℃。结果：人参皂苷Rg1和人参皂苷Rbl的线性范围分别为20一600μg／mL和15—500μg／mL,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1平均回收率分别为100．01％和99．66％结论：HPLc-ELSD测定丹七片中人参皂苷Rgl和人参皂苷Rbl含量,不仅操作简便、准确,而且重现性好。     

人参皂苷Rg2对麻醉开胸犬血流动力学的影响

目的:观察人参皂苷Rg2(Rg2)对犬血流动力学的影响.方法:采用麻醉开胸犬,测定心脏血流动力学、冠脉循环及肾脏循环.结果:Rg2 0.5,1.0,2.0mg·kg-1静脉注射,可减慢HR、升高DBP、LVSP及-dp/dtmax;降低CO、CI和SI;降低CVR、增加RVR和TPR.结论:Rg2对麻醉开胸犬的血流动力学的影响与SK基本相似,且有保证重要脏器血流供应的优点.     

人参皂苷Rg2的排泄试验研究

目的:研究静脉给予大鼠人参皂苷Rg_2后,其在胆汁、粪便和尿液中的排泄.方法:采用反相高效液相色谱(HPLC)-紫外检测器(UVD)法测定大鼠胆汁、粪便和尿液中的人参皂苷Rg_2;Dikma Diamonsil~(TM) C_(18) 色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇4%磷酸水溶液(65:35)为流动相,检测波长为203 nm.结果:HPLC-UVD测定方法的标准曲线线性关系、样品回收率和日内、日间精密度均符合生物样品分析要求.给大鼠静脉注射人参皂苷Rg_2后,5.5 h内胆汁中原形人参皂苷Rg_2累积排泄量为给予剂量的27.2%,24 h内粪便中原形人参皂苷Rg_2累积排泄量为给予剂量的22.6%;尿液中未检出人参皂苷Rg_2.结论:静脉给予大鼠人参皂苷Rg_2,原形药物主要通过胆汁和粪便途径排出体外.     

HPLC法测定人参须中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1的含量

目的:用HPLC对人参须中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1进行测定。方法:采用依利C18色谱柱,流动相:乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～35min,19%A;35～55min,19%A→29%A;55～70min,29%A;70～100min,29%A→40%A;);流速:1.0ml&#183;min-1;检测波长203nm;柱温:30℃。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1的线性范围分别为0.1433～1.2895μg、0.4056～3.6504μg和0.6132～5.5188μg,相关系数分别为0.9995、0.9998和0.9996,平均加样回收率(n=6)分别为98.65﹪、99.24%和101.01%,RSD分别为1.96﹪、1.45%和1.58%。结论:该法准确,简便,快速,灵敏度高,重现性好。适合于人参及人参须的含量测定。     

人参皂苷Rg1对PD模型大鼠纹状体多巴胺含量的影响及其机制探讨

目的：研究人参皂苷Rg₁对6-羟基多巴(6-OHDA)制备的去卵巢(OVX)帕金森病(PD)模型大鼠纹状体(Str)多巴胺(DA)含量的影响及其机制探讨。方法：应用6-OHDA制备OVX的PD模型大鼠，腹腔注射Rg₁(10 mg·kg^-1)或侧脑室同时给予雌激素受体(ER)拮抗剂ICI 182,780(2.4 ng·kg^-1)，连续用药14 d，观察阿朴吗啡诱导的大鼠旋转行为。应用高效液相色谱法(HPLC)检测纹状体(Str)内DA及其代谢产物二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)含量的变化。结果：人参皂苷Rg₁可明显改善PD模型大鼠单侧旋转行为(P<0.01)，此作用可被ICI 182,780所阻断。Rg₁给药组可显著提高损毁侧Str DA及其代谢产物含量(P<0.01)。应用ICI 182,780可阻断Rg₁的神经保护作用，损毁侧Str DA及其代谢产物含量较Rg₁给药组明显降低(P<0.01)。结论：人参皂苷Rg₁对6-OHDA所致的去卵巢PD模型大鼠黑质多巴胺能神经元有一定保护作用，此作用与ER途径的激活有关。