胃癌细胞三磷酸腺苷酶、5′—核苷酸酶和胞嘧啶单核苷酸酶活性定位的电镜细胞化学研究

应用电镜酶细胞化学方法对12例胃癌细胞三磷酸腺苷酶(Mg~(2+)—ATPase,Ca~(2+)—ATPase),5~1—核苷酸酶(5NPase)及胞嘧啶单核苷酸酶(CMPase)进行了超微结构水平的定位观察。结果表明:胃管状腺癌细胞腔缘微绒毛丰富,Mg~(2+)—ATPase、Ca~(2+)—ATPase及5NPase定位于微绒毛表面,反应明显,提示其功能代谢具有极性分布特点。粘液腺癌细胞出、入胞现象活跃,Mg~(2+)—ATPase、Ca~(2+)—ATPase及CMPase反应明显,认为与其粘液的大量分泌,营养物质的摄取与加工以及逃避免疫细胞的杀伤机制有关。低分化腺癌上述酶大都无反应或反应微弱。作者认为胃癌细胞的酶活性及其分布与其分化程度及功能状况有关。     

5'-核苷酸酶的研究进展

胞外-5'-核苷酸酶(CD73)是通过糖基-磷脂酰肌醇(GPI)锚定于细胞膜外表面的一种糖蛋白,其分布广,功能多,不仅参与嘌呤核苷酸的补救合成途径,生成腺苷与腺苷受体相互作用,还作为一种重要的免疫信号分子,参与跨膜信号转导及细胞黏附.近年来,CD73的基因表达、调控及其功能,尤其是CD73、腺苷、腺苷受体、效应物的代谢途径及其与疾病的关系等越来越引起人们的关注.     

小鼠胸腺哺育细胞的表皮角蛋白免疫细胞化学定位

<正> 近年来,胸腺基质与淋巴细胞的直接接触,对T淋巴细胞分化机制的研究引起重视。1980年Wekerle等首先从小鼠胸腺经胰蛋白酶反复消化后的悬液中,分离出一种体积较大并具有Ia抗原的细胞,胞质中既有张力丝,又有数量不等的淋巴细胞,故属淋巴上皮细胞复合体,又称为胸腺哺育细胞(TNC),对此我们在以往的研究中也加以证实。本文用人表皮角蛋白抗体,采用间接免疫荧光法和PAP法染色,对小鼠TNC作免疫细胞化学定位观察,拟进一步验证TNC具有上皮细胞的特征。     

大白鼠甲状腺细胞膜系统3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶活性的电镜细胞化学定位

本研究用酶电镜细胞化学法观察了大白鼠甲状腺细胞3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶活性的定位。结果证明,3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶的活性定位于甲状腺滤泡细胞的顶部细胞膜和微绒毛,在内质网则存在于膜的外表面,在甲状腺滤泡细胞核也位于核膜的外表面。在甲状腺滤泡上皮细胞之间的微血管内皮细胞膜上也观察到了大量3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶的阳性反应颗粒。     

前列腺良性增生的5′-核苷酸酶和硫胺素焦磷酸酶定位及其活性的观察

用光镜和电镜研究了人类前列腺增生的上皮细胞内5′-核苷酸酶(5′-Nase)和硫胺素焦磷酸酶(TPPase)的活性。5′-Nase活性定位分布在上皮细胞的溶酶体、高尔基大泡、小泡、分泌泡以及游离面的质膜,腺腔内分泌物质也呈阳性反应。经克念菌素治疗后,酶活性无明显改变;然而用乙烯雌酚治疗后,酶活性稍弱;睾丸切除后的则完全呈阴性反应。TPPase活性定位在高尔基扁平囊泡的凹面,除睾丸切除后的酶反应完全阴性外,其他各种治疗,对酶活性没有明显改变。     

瘦素对小鼠胸腺细胞凋亡的保护机制

目的 观察瘦素对小鼠胸腺细胞凋亡的保护机制,探讨磷酸肌醇3位羟基激酶/AKT(P13-K/AKT)和胞桨型磷脂酶XZ(cPLA2)信号转导通路是否参与瘦素保护机制.方法 以IPS诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型,采用Annexin V-FTTC/PI双染色法流式细胞仪检测PI3-K/AKT特异性抑制剂LY294002 和 cPLA2 抑制剂AACOCF3对细胞凋亡的影响,以RT-PCR检测cPLA2 mRNA和caspase3 mRNA的表达,用cPLA2活性试剂盒检测cPLA2的活性.结果 瘦素可以保护LPS诱导的小鼠胸腺细胞凋亡,使胸腺细胞存活率由58%上升到65%,LY294002(10 μmol/L)和AACOCF3(10 μmol/L)可以明显抑制瘦素的保护作用,使胸腺细胞的存活率分别降至60%(P＜0.05)和62%(P＜0.05).RT-PCR表明加入瘦素后cPLA2 mRNA和caspase3 mRNA的表达下降.cPLA2活性试剂盒表明leptin可抑制cPLA2的活性.结论 瘦素抑制LPS诱导的胸腺细胞凋亡同时依赖IP3K/AKT和cPLA2途径.     

接种白血病细胞后小鼠胸腺哺育细胞和免疫器官组织学及组织化学的变化

按种P_(388)白血病患鼠腹水后第3d,小鼠胸腺哺育细胞内的淋巴细胞,酸性磷酸酶和β-葡萄糖苷酸酶阳性率显著增加,而α-醋酸萘酯酶阳性率则下降。胸腺内胸腺细胞上述3种酶细胞化学反应阳性率均显著增加,但胸腺组织结构未见异常。淋巴结和脾脏亦未见异常变化。接种后第9d,患鼠胸腺、淋巴结和脾脏均见白血病细胞浸润、出血和细胞变性等病变,正常结构被破坏,其中淋巴细胞3种酶细胞化学反应的阳性率均显著增加。此时很难从胸腺分离出胸腺哺育细胞。本文结果提示,胸腺和胸腺哺育细胞与这种白血病的发生有密切关系。     

一种小鼠胸腺基质细胞和活化胸腺细胞共表达分子的研究

目的：研究抗小鼠胸腺基质细胞（ＭＴＳＣ）Ｐｆ１８－３单抗识别分子的表达特性。方法：采用流式细胞（ＦＡＣＳ）和激光扫描共焦显微镜（ＣＬＳＭ）分析ＴＳＣ单抗Ｐｆ１８－３染色特征。结果 ：ＦＡＣＳ分析发现Ｐｆ１８－３单抗识别分子可表达于胸腺、胎肝和骨髓等不同来源的基质细胞系和腹腔巨噬细胞表面。新鲜分离的胸腺细胞Ｐｆ１８－３识别分子表达阴性，但ＣｏｎＡ活化可诱导并上调其表达，随活化时间延长表达增高，且主要     

小鼠胸腺树突状细胞的形态学观察

目的 观察小鼠胸腺树突状细胞（ＴＤＣ）的形态。方法 密度梯度离心结合小鼠ＣＤ５单抗淘洗法（ｐａｎｎｉｎｇ），分离出小鼠ＴＤＣ并行光镜及电镜观察。结果 台盼蓝排斥试验示９０％以上细胞存活，光镜下发现初分离的ＴＤＣ常和周围的胸腺细胞形成紧密的细胞簇。Ｓ－１００蛋白染色见ＴＤＣ胞体和突起内有棕黄色反应产物，ＡＮＡＥ反应呈阴性或核附近有数个小颗粒反应。ＡＴＰ酶反应阴性。电镜见细胞表面有许多树状突起，核形不     

小鼠胸腺树突状细胞的分离和纯化方法的改进

目的　探讨一种简便易行的小鼠胸腺树突状细胞（ＴＤＣ）的分离纯化方法。　方法　密度梯度离心结合小鼠ＣＤ５ 单克隆抗体（ｍ Ａｂ）淘洗法（ｐａｎｎｉｎｇ）。　结果　细胞浓度在１．５×１０７ ／ｍ ｌ时进行Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心可使分离纯度高、细胞丢失少；依次使用两种分离液分离的效果优于同一种分离液的反复使用；小鼠ＣＤ５单抗浓度为２５ｍ ｇ／Ｌ时，淘洗纯化效果较好，ＴＤＣ纯度达７５％ ～９０％ 。　结论　密度梯度离心与ＣＤ５单抗淘洗纯化的方法切实可行。     

实验性糖尿病对大鼠胸腺皮质上皮细胞的影响

目的　探讨糖尿病对大鼠胸腺皮质上皮细胞影响的形态学变化 ,了解其引起胸腺细胞凋亡及胸腺萎缩的可能机制。　方法　采用四氧嘧啶型糖尿病动物模型 ,电镜下观察了糖尿病大鼠胸腺皮质上皮细胞的超微结构变化。　结果　 2型上皮细胞发生 4种变化 :1 内分泌功能紊乱样变 ,以大量变性的空泡与囊泡为特征 ;2 退化样变 ,以大量的变性分泌泡、髓样小体和粗大张力细丝束为特征 ;3 吞噬细胞样变 ,以大量的溶酶体样致密颗粒及吞噬的凋亡细胞与小体为特征 ;4 细胞凋亡样变 ,以细胞凋亡的早期形态学变化为特征。 3型上皮细胞发生两种变化 :1 退化样变 ,伴有大量分泌肽类激素样的致密颗粒群。 2 增生样变 ,在其胞体周伴有大量的胶原原纤维。此外 ,在胸腺皮质中还发现大量的胸腺细胞凋亡及胸腺细胞数量减少。　结论　糖尿病可导致大鼠胸腺皮质上皮细胞发生多样性的超微结构变化 ,可能是影响胸腺细胞发育 ,并导致其凋亡及胸腺萎缩的主要机制之一。     

新生乳鼠胸腺的超微结构研究

本文研究新生乳鼠胸腺形态学特点,结果表明:1.胸腺小叶尚未完好形成,皮、髓质分界不甚清晰;2.髓质常可见由上皮细胞构成的囊性结构;3.内皮质有少数淋巴细胞胞浆含有糖原颗粒;4.胸腺小体少而小。本文描述了胸腺淋巴细胞、上皮性网状细胞、巨噬细胞、指突细胞等细胞成分和血胸屏障等结构的超微结构特征。     

神经营养素在小鼠脾的定位研究

为了解神经营养素与免疫系统的关系，用免疫组织化学方法对神经营养素包括神经生长因子（ＮＧＦ）、脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经营养素３（ＮＴ－３）进行小鼠脾的定位研究。结果表明：３种神经营养素的免疫反应均存在于脾内，但分布特点各不相同。ＮＧＦ主要分布于白髓动脉周围淋巴鞘（ＰＡＬＳ）外层、边缘区（ＭＺ）和红髓（ＲＰ）的巨噬细胞样和淋巴细胞样细胞；ＢＤＮＦ除具有与ＮＧＦ相似的分布特点外，还见于脾淋巴小结生发中心的淋巴细胞样细胞；ＮＴ－３则存在于白、红髓的网状细胞样细胞。这一结果提示，脾的免疫和非免疫细胞均可能产生神经营养素，并提示不同类型的神经营养素对免疫系统有不同的作用。     

小鼠小脑皮质发育中的神经元凋亡

目的探讨小鼠小脑皮质发育中神经元凋亡的规律和机制。方法用激活型Caspase-3多抗免疫组织化学标记及Hoechst 33258染色液染色,检测从出生至成年小鼠小脑皮质中神经元的凋亡,用Western blotting方法对小脑组织中Caspase-3和Caspase-8的活化片段进行半定量测定。结果外颗粒层、普肯耶细胞层和内颗粒层凋亡细胞密度最高分别在出生后第8d(P8)、P5及P9,P20各层凋亡细胞密度都很低。Caspase-3活化片段的表达量在P5较高,P5以后逐渐降低,至P14消失;Caspase-8活化片段的表达量从P0到P10都较高,P10以后逐渐降低,至P30消失。结论P0至P14是小脑皮质神经元凋亡的重要时期,通过启动Caspase-8的活化进而激活效应性Caspase-3的细胞凋亡途径存在于小脑皮质的塑型成熟过程。     

兔肺,肾皮质钙离子的超微结构定位和能谱分析

本文用改良的焦锑酸盐法对兔肺和肾皮质钙离子(Ca~(2+))进行超微结构定位观察,在肺泡Ⅰ、Ⅱ型细胞、毛细血管内皮细胞和肾小管细胞胞质中均显示数量不等的Ca~(2+)沉淀产物,对这些Ca~(2+)沉淀产物用能谱仪进行X射线微区元素分析,表明含有钙的Kα峰和锑的Lα峰。用EGTA处理后,绝大多数Ca~(2+)的沉淀产物溶解。以上结果证实,用改良的焦锑酸盐法可在超微结构上原位显示Ca~(2+)。     

小鼠胃腺壁细胞超微结构的研究——应用氯离子定位和多糖染色技术

本文运用氯离子(Cl~-)定位和多糖染色技术,对小鼠胃腺壁细胞超微结构进行了研究。结果发现,Cl~-只定位于壁细胞的内小管和细胞间隙中,小管泡系呈阴性反应;六胺银多糖染色则呈不一致性反应,分别为强阳性、弱阳性或阴性,其阳性反应区只集中于靠近游离面的小管泡系及游离面上。实验结果说明,盐酸分泌过程中还伴随着由小管泡系参与的多糖分泌,而且多糖分泌呈周期性,各壁细胞的这种周期是不同步的。