褪黑素对豚鼠老年性聋的拮抗作用

目的:观察褪黑素对豚鼠老年性聋的拮抗作用.方法:80只豚鼠随机分为4组:正常对照组(A组),老年性聋模型组(B组),褪黑素治疗的老年性聋模型组(C组0.3 mg/(kg·d和D组1.0 mg/(kg·d).以腹腔注射D-半乳糖制作老年性聋模型,4周后测量各组ABR、耳蜗组织谷胱甘搿-过氧化物酶(GSH-Px)含量,耳蜗铺片观察毛细胞变化情况.结果:与A组比较,B、C组ABR阈值、Ⅰ波潜伏期、Ⅲ波潜伏期及Ⅰ、Ⅲ波间期均升高,GSH-Px含量降低(P＜0.05或0.01).D组上述各指标与A组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).耳蜗铺片结果,B组耳蜗基底膜各周外毛细胞排列紊乱,大小不一,胞内颗粒染色变浅,可见细胞点状缺失;A、D组外毛细胞排列整齐,无缺失;C组介于B、D组之间.结论:褪黑素对老年性聋豚鼠听力及耳蜗毛细胞有保护作用,且与剂量有关.     

应用顺铂建立C57小鼠感音神经性聋模型的实验研究

目的探讨顺铂诱发C57小鼠感音神经性聋模型的制备方法。方法将C57BL／6J小鼠随机分成4组,A组：耳蜗圆窗龛生理盐水给药5μL;B组：耳蜗圆窗龛顺铂给药5μL（1mg／mL）;C组：经鼓膜中耳腔顺铂给药10μL／d×5d（1mg／mL）;D组：腹腔注射顺铂6mg／（kg·d）×5d。用全频程脑干听觉诱发电位（ABR）检测4个组动物的听觉反应阈为指标,以动物各频率听觉反应阈上升≥10dB定为听力减退,并通过异硫氰酸荧光素（FITC）标记的鬼笔环肽染色观察用药后毛细胞的形态学变化。结果A、C、D组ABR反应阈用药前后无明显变化（P〉0．05）;B组小鼠顺铂用药后48h全频程ABR反应阈均升高（P〈0．05）,且毛细胞出现损伤、脱落,其损伤从顶回到底回有逐渐加重的趋势,外毛细胞较内毛细胞损伤严重。结论圆窗龛给药途径是建立顺铂诱发C57小鼠耳聋模型的有效途径。     

脑活素对豚鼠庆大霉素耳毒性保护作用的研究

目的：旨在观察脑活性能否拮抗庆大霉素素蜗毒性。方法：取听力正常豚鼠50只，随机分为脑活素组10只[肌注脑活素360mg/(kg.d),10ds]；大庆霉素组15只[肌注庆大霉素120mg/(kg.d)10d]；庆大霉素＋脑活素组15只（肌注等量庆大霉素＋脑活素10d)；生理盐水组10只（肌注等量生理盐水10d)。用药前及用药10d并饲养一周测试听性脑干反应（ABR），第17d处死，行左耳耳蜗铺片、右耳石蜡包埋切片，并在光镜下观察内耳病理形态变化，对损失毛细胞进行计数。结果：庆大霉素＋脑活素组ABR阈值明显低于庆大霉素组，耳蜗各回毛细胞平均失率明显低于庆大霉素组。结论：脑活素对庆大霉素所致毒性有明显保护作用。     

川芎嗪对顺铂耳毒性保护作用的实验研究

目的探讨活血化瘀中药川芎嗪是否对顺铂的耳毒性具有保护作用。方法将听力正常的30只豚鼠随机分为3组,每组10只。对照组：生理盐水3 ml/（kg.d）腹腔注射6天;顺铂组：顺铂3 mg/（kg.d）腹腔注射6天;顺铂加川芎嗪组：先腹腔注射川芎嗪140 mg/（kg.d）3天,从第4天起腹腔注射川芎嗪140 mg/（kg.d）后再注射顺铂3 mg/（kg.d）6天。给药前后通过听觉脑干诱发电位（ABR）检测豚鼠听功能的变化;然后在麻醉状态下断头取耳蜗,半数标本切片后用DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测耳蜗内细胞凋亡情况;半数标本进行耳蜗基底膜铺片观察毛细胞形态及酶学变化。结果顺铂组用药后ABR阈值升高,毛细胞受损,琥珀酸脱氢酶（SDH）活性减弱,有部分毛细胞凋亡,与对照组及川芎嗪组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。顺铂加川芎嗪组用药后ABR阈值升高,毛细胞受损较轻,凋亡细胞较少,与顺铂组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论川芎嗪能降低顺铂的耳毒性。     

大剂量头孢唑啉耳毒性的实验研究

目的观察大剂量头孢唑啉在铁缺乏条件下对新西兰大白兔耳蜗毛细胞的影响。方法60只健康新西兰大白兔，随机分成A、B、C、D组，每组15只。A、B两组喂标准饲料4周，C、D两组喂缺铁饲料4周，后两组制成铁缺乏动物模型。B、D两组经耳静脉注射头孢唑啉（0．5g／kg，2次／d，共14天），A、C两组经耳静脉注射等体积生理盐水做对照，停药后第15天处死作耳蜗扫描电镜及激光共聚焦显微镜观察。结果缺铁头孢唑啉组（D组）停药后第15天，有9个耳蜗标本（60％）存在不同程度内、外毛细胞静纤毛散乱、扭曲、缺失，以中区、顶区损害较重。结论大剂量头孢唑啉在铁缺乏条件下可造成新西兰大白兔耳蜗内、外毛细胞静纤毛不同程度损伤。     

腺伴随病毒携带神经营养因子-3对庆大霉素致聋豚鼠耳蜗的保护作用

目的 探讨采用腺伴随病毒(AAV)携带神经营养因子-3(NT-3)对庆大霉素(GM)致聋豚鼠的局部基因治疗及其对耳蜗功能及形态的保护作用.方法 选用18只杂色健康豚鼠,用GM按80 mg/kg·d连续肌肉注射4 d后随机分为3组:AAV-NT-3治疗组(A组)7只,AAV对照组(B组)7只,GM对照组(C组)4只.A、B组动物在埋植微量渗透泵后继续肌肉注射GM 10 d,C组动物继续注射GM 10 d.AAV-NT-3及空白AAV载体滴度均为1.1×1010pfu/ml.对A、B两组注射GM前及术后10 d、C组注射GM后14 d进行听性脑干反应测听(ABR)及畸变产物耳声发射(DPOAE)测定.而后将动物麻醉处死取听泡,行基底膜铺片和毛细胞计数,计算外毛细胞损失率.结果 实验组与对照组相比听功能(ABR及DPOAE)及耳蜗毛细胞生存率均有显著性差异(P＜0.05).结论 腺伴随病毒介导NT-3转基因治疗可用于保护受氨基甙类药物损害的豚鼠听功能和耳蜗毛细胞;在行局部耳蜗转基因治疗中应严格遵循无菌原则.     

D-甲硫氨酸对庆大霉素耳毒性保护作用的研究

目的：探讨D－甲硫氨酸对庆大霉素耳毒性的保护作用。方法：30只豚鼠分为生理盐水对照组、庆大霉素组及D－甲硫氨酸加庆大霉素联合用药组。采用听觉脑干诱发电位（ABR）及耳蜗铺片技术，观察研究耳毒性及D－甲硫氨酸的保护作用。结果：联合用药组动物各频率阈移均比单独使用庆大霉素组显著降低,且耳蜗组织学检查显示其毛细胞缺失明显轻于庆大霉素组。结论：使用庆大霉素的同时联合应用D－甲硫氨酸可有效减少庆大霉素的耳毒性。     

2型糖尿病小鼠内质网应激对耳蜗毛细胞退行性变的影响

目的：探讨内质网应激（ERS）对1%链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠耳蜗毛细胞退行性变的影响,阐明其作用机制。方法：选取清洁级1月龄雄性昆明小鼠20只,随机分为对照组和模型组,模型组小鼠采用腹腔注射40 mg·kg^-1STZ建立2型糖尿病模型。尾静脉采血测定小鼠空腹血糖,通过听觉脑干反应（ABR）检测小鼠的ABR阈值,耳声发射测试（OAE）实验检测OAE阈值,应用小鼠耳蜗铺片技术计算小鼠耳蜗外毛细胞的缺损率,采用Western blotting法检测小鼠耳蜗毛细胞中GRP78、caspase-12、p-ERK和Nrf2蛋白表达水平。结果：与对照组比较,第2次注射STZ后7和14 d模型组小鼠空腹血糖差异无统计学意义（P>0.05）,21、28和35 d空腹血糖明显升高（P<0.05）,35 d达到最高值。与对照组比较,模型组小鼠在8、12和24 kHz各个频率的ABR阈值明显升高（P<0.05）。与对照组比较,低频刺激下模型组小鼠OAE阈值无明显变化（P>0.05）,在中频和高频刺激下模型组小鼠OAE阈值明显升高（P<0.05）。小鼠耳蜗外毛细胞缺损主要集中在底回端,耳蜗中回和顶回外毛细胞缺损较少;与对照组比较,模型组小鼠耳蜗中的底回外毛细胞缺损率明显升高（P<0.05）,中回和顶回外毛细胞缺损率略有升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,模型组小鼠耳蜗毛细胞中GRP78和caspase-12蛋白表达水平升高（P<0.05）,p-ERK和Nrf2蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：ERS能够引起糖尿病小鼠耳蜗外毛细胞缺损率和ABR脑干听力阈值升高,并降低p-ERK和Nrf2的蛋白表达水平,提示ERS可促进2型糖尿病小鼠耳蜗毛细胞的退行性病变。     

氯胺酮和咪唑安定对全脑缺血大鼠的脑保护作用

目的 探讨氯胺酮和咪唑安定对全脑缺血大鼠的脑保护作用.方法 健康成年SD大鼠40只.随机平均分为假手术组(A组)、缺血组(B组)、氯胺酮组(C组)、咪唑安定组(D组)和氯胺酮复合咪唑安定组(E组),每组8只.以Pulsinelli-Brierley 方法为标准建立四动脉阻断法全脑缺血模型,A组分离椎动脉及颈总动脉后不行全脑缺血,B,C,D,E组行全脑缺血15 min后再灌注,其中C,D,E组于全脑缺血5 miIl时腹腔给药,分别为氯胺酮100 mg/kg,咪唑安定10 mg/lkg,氯胺酮50 mg/kg复合咪唑安定5 mg/kg.再灌注3 d后经心脏灌注固定后取脑制作石蜡切片,分别行HE染色观察海马CA1区神经元存活数目和TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡.结果 A组大鼠海马CA1区神经元大部分存活,少量神经元凋亡;B组神经元很少存活,大量凋亡,与A组差异有显著性;C,D,E组神经元存活数目明显少于A组,多于B组,凋亡数目明显多于A组,少于B组;E组神经元存活数目明显多于C组和D组,凋亡明显少于C组和D组;C组和D组间差异无显著性.结论 氯胺酮与咪唑安定均具有一定的脑保护作用,可明显抑制全脑缺血大鼠海马CA1区的神经元细胞凋亡,二者联用时效果更佳.     

体腔积液薄层液基细胞涂片免疫组化染色方法研究

目的 探讨体腔积液薄层液基细胞涂片最佳免疫组化染色方法.方法 收集有组织学对照的恶性胸水68例,每例选12张石蜡切片,作为A组,将每例胸水用薄层液基细胞术制片36张,随机平均分成B、C、D三组;B组经苏木精-伊红（HE）染色及柠檬酸或EDTA修复退色,做免疫组化双重染色,C组经HE染色,用盐酸方法退色,做免疫组化染色,D组不经HE染色,直接做免疫组化.将结果与A组组织病理诊断比较并进行统计学分析.结果 各组别诊断准确率分别为A组100％（68/68）,B组98％（67/68）,C组92％（62/68）,D组90％（61/68）;A组与B组确诊率差异无统计学意义（P＞0.05）,A、B组确诊率高于C组及D组（P＜0.05）.结论 B组方法优于C组和D组,有利于体腔积液中癌细胞鉴别诊断和分类,为临床治疗提供更加可靠的病理诊断.     

富氢水抗1型糖尿病小鼠肾脏氧化应激的作用

目的：研究富氢水对糖尿病小鼠肾脏的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法：60只健康ICR雄性小鼠,随机分成空白对照组（A组）、糖尿病组（B组）和糖尿病富氢水干预组（C组）。链脲佐菌素（STZ）150 mg/kg腹腔注射诱发糖尿病,造模成功后,C组每日腹腔注射富氢水5 m L/kg,B组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液,连续8周。尾静脉取血测定小鼠血糖,HE染色观察肾脏组织学变化,免疫组织化学染色观察NADPH氧化酶4（Nox4）和血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白的表达。结果：C组Nox4表达水平明显低于B组,而HO-1表达明显高于B组;B组与C组的空腹血糖均明显高于A组（P〈0.01）,B组与C组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;3组肾脏组织病理HE染色未显示明显病变。结论：富氢水可减轻糖尿病小鼠肾脏组织的氧化应激水平。     

顺铂对豚鼠耳蜗损害作用实验研究

目的观察顺铂对耳廓反射正常的健康豚鼠耳蜗功能的损害作用，以探讨顺铂对豚鼠耳蜗毒性作用及其损伤机制，为防治顺铂耳毒性作用提供理论依据。方法将60只耳廓反射灵敏的健康豚鼠随机分成两组，顺铂组腹腔注射顺铂4mg／（k·d），1次／d，连续注射5d。正常对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水。实验前和实验5d后分别行耳廓反射和听性脑干反应测听。测定麻醉状态下豚鼠听觉脑干诱发电位，比较实验前后两组听觉诱发电位阈值及各波潜伏期、波幅变化。结果顺铂组豚鼠听性脑干反应测试听闽明显提高，各波潜伏期延长，波幅降低，甚至出现波形变异不易辨认，两组比较差异有显著性。结论顺铂可导致豚鼠耳蜗功能损害，表现为豚鼠耳蜗听性脑干反应阂值显著提高，各波潜伏期延长。波幅降低。     

前庭诱发电位监测庆大霉素前庭毒性

目的 利用听学脑干诱发电位（ＡＢＲ）和前庭诱发电位（ＶｓＥＰｓ）监测庆大霉素耳毒性。方法 将４０只杂色豚鼠随机分成４组,每组１０只。４组动物分别为肌肉注射庆大霉素组、肌肉注射生理盐水对照组、连续鼓室内滴注庆大霉素组和鼓室内滴注生理盐水对照组。用药前后连续监测ＡＢＲ及ＶｓＥＰｓ,待其有明显变化时,将动物全麻处死取听泡,火棉胶包埋切片,光镜观察病理变化。结果 肌注组１０只动物在２１ｄ时,ＶｓＥＰｓ消失     

氯胺酮对脓毒症大鼠肺组织HO-1表达的影响

目的探讨氯胺酮对脓毒症大鼠肺组织血红素加氧酶-1表达的影响及其可能的保护机制。方法选择健康雄性Vista大鼠40只,随机分为5组：假手术组（A组）、CLP组（B组）、氯胺酮40mg／kg＋CLP组（C组）、氯胺酮组40n=1g／kg＋锌原卟啉组IX5mg／k时CLP（D组）、锌原卟啉IX5mg／kg＋CLP组（E组）,药品均用生理盐水稀释到1ml,假手术组、CLP组均术前30min腹腔注射1ml生理盐水。各组均在9h腹主动脉放血处死大鼠,检测肺组织中MDA的含量、肺泡灌洗液中（BALF）蛋白含量（TP）,取肺组织行HE染色观察其病理变化,用免疫组化方法测定HO-1的表达。结果与A组相比,各损伤组MDA含量和BALF中总蛋白含量升高,HO-1表达上调（P〈0．01）;与B组相比,C组MDA含量和BALF中总蛋白含量降低,HO-1表达上调（P〈O．05或P〈0．01）;与c组相比,D组MDA含量和BALF中总蛋白含量升高,HO-1表达下调（P〈0．01）;B组、D组、E组之间比较,MDA含量和BALF中总蛋白含量差异无统计学意义。结论氯胺酮能够减轻脓毒症大鼠肺损伤,此作用可能与诱导HO-1表达增强有关。     

隐性听力下降小鼠耳蜗内毛细胞突触的病理改变

 目的 探讨噪声暴露后出现暂时性阈移的小鼠在听觉反应阈值完全恢复正常后耳蜗内毛细胞突触的病理改变。方法 将小鼠分为正常对照组和实验组,实验组小鼠进行强度98 dB SPL、时长2 h的噪声暴露,建立暂时性阈移模型。将对照组和暂时性阈移模型小鼠进行全基底膜铺片并行免疫荧光染色,共聚焦显微镜拍照成像并观察细胞形态。利用耳蜗长度计算耳蜗所处的频率位置,最后用图形处理软件对突触结构进行三维重建,观察对照组小鼠和实验组小鼠的耳蜗内毛细胞突触前、后结构的空间分布规律及其病理改变特点。结果 对照组小鼠耳蜗内毛细胞的突触复合体有明显的分布特点,每个内毛细胞通过5~30个突触与耳蜗神经纤维形成突触连接,靠近蜗轴侧的突触前结构体积较大,与之相匹配的突触后结构体积较小。靠近柱细胞侧的突触前结构体积偏小,与之相匹配的突触后结构体积偏大。实验组小鼠在高强度噪声暴露后第2天听觉测试结果显示,听性脑干反应(auditory brain-stem response, ABR)和畸变产物耳声发射(distortion product otoacoustic emission, DPOAE)阈值升高30~40 dB,2周后再次测试显示阈值恢复正常,但是ABR的Ⅰ波波幅下降46.1%,且耳蜗内毛细胞的突触复合体结构数量也减少了41.3%。 而内毛细胞和螺旋神经节细胞没有明显丢失。结论 听觉阈值功能测试对判断小鼠耳蜗内毛细胞突触的损害和丢失不敏感;而听觉阈上功能测试对评价小鼠耳蜗内毛细胞突触的损害和丢失相对敏感。     

洛贝林对恩氟烷麻醉小鼠催醒效果的观察

目的 观察洛贝林对恩氟烷麻醉小鼠的催醒效果.方法 将36只小鼠随机分为6组：恩氟烷＋生理盐水组（A组）、恩氟烷＋洛贝林1 mg/kg组（B组）、恩氟烷＋洛贝林3 mg/kg（C组）、恩氟烷＋洛贝林5 mg/kg组（D组）、恩氟烷＋洛贝林10 mg/kg组（E组）、恩氟烷＋洛贝林15 mg/kg组（F组）;观察不同剂量的洛贝林对恩氟烷麻醉小鼠麻醉持续时间的影响.结果 与A组相比,B、C、D组均对小鼠有催醒作用（P〈0.05）,其中D组的催醒效果最明显（P〈0.01）,而E、F组催醒效果不明显（P〉0.05）,B、C、D、E、F组中小鼠麻醉持续时间的差异无统计学意义.结论 合适浓度的洛贝林对恩氟烷麻醉小鼠有催醒作用,未发现洛贝林对小鼠的催醒作用存在剂量依赖性.     

硫代乙酰胺致小鼠肝性脑病模型的建立及评估

目的：探讨应用硫代乙酰胺（TAA）和C57/BL6小鼠制备肝性脑病模型的方法。方法100只小鼠分成4组,对照组（A组）、实验组B、C、D组,每组25只,分别予生理盐水和TAA 100、200、300 mg/（kg·d）腹腔内注射。注射药物后每24小时通过旷场实验、ROTA ROD实验及神经功能学评分检测神经功能,观察肝组织病理变化。结果旷场试验中,与对照组相比,从造模第1天开始,各实验组小鼠均出现运动总路程和总时间明显下降（P 〈0.05）,而各实验组之间无明显差异。 ROTA ROD实验中,与对照组相比,造模第3天实验D组小鼠运动时间明显下降（P =0.036）;第4天,各实验组小鼠均明显下降（P =0.000）,而实验组内无明显差异。造模第4天,实验C、D组小鼠神经功能学评分平均值分别为6.3和5.1分,与对照组比较,差异有统计学意义（P 〈0.05）。造模第4天实验B、C、D 3组小鼠的累积生存率分别为71.4%、71.4%和42.9%。3组实验组小鼠肝组织病理改变均符合急性肝衰竭改变。结论 C57/BL6小鼠采用TAA可成功制备肝性脑病动物模型,200 mg/（kg＆#183;d）TAA腹腔注射,连续4 d,为推荐方法。