p16、 cyclin D1在结直肠癌中的表达及其临床意义

p１６和cyclinD１是调控G１→S检查点（checkpoint）的两个重要基因。研究表明,p１６基因失表达与cyclinD１过表达与多种肿瘤的发生发展有关。本文应用免疫组化方法检测６７例结直肠癌中p１６、cyclinD１的表达,旨在探讨它们在结直肠癌发生发展中的作用以及两者之间的相互关系。１．材料与方法：６７例结直肠癌、４０例癌旁组织和４０例正常组织（病理学检查证实未见癌组织浸润）取自我院附属医院外科１９９８年７月至１９９９年９月间手术切除的标本。其中男性３９例,女性２８例,年龄２７～８１岁。６７例结直肠癌中,左半结肠癌１８…     

细胞周期蛋白D1和p16与病理性瘢痕关系的研究进展

增生性瘢痕（hypertrophic scar，HS）和瘢痕疙瘩是最常见的病理性瘢痕，多由创伤引起，形成机制目前尚不十分清楚。多数学者认为，成纤维细胞（Fb）异常增殖是瘢痕增生和持续存在的主要原因，其生长特性及增殖活性与细胞周期关系密切。调控细胞周期最主要的一对正、负调节因子——细胞周期蛋白（cyclin）D1和p16成为人们研究的热点。     

瘢痕成纤维细胞凋亡及p5 3基因的表达

目的探讨瘢痕成纤维细胞凋亡及p53基因表达及其意义.方法取正常皮肤和增生性瘢痕各8例、瘢痕疙瘩9例行成纤维细胞培养,应用流式细胞仪检测成纤维细胞凋亡,用p53cDNA探针对抽提的DNA点迹印迹杂交观察p53基因表达情况.结果 3组成纤维细胞凋亡细胞分别为(10.8±1.2)%,(10.6±1.8)%,(5.5±0.8)%,瘢痕疙瘩较正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞凋亡少,差异具有显著性意义(P＜0.05),且p53基因有明显的表达.结论瘢痕疙瘩成纤维细胞是具有肿瘤性质的一类细胞.     

野生型p16基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及代谢影响的实验研究

目的　探讨野生型 p16基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞 (keloidfibroblasts,KFb)生长增殖及DNA合成代谢的影响。　方法　构建含p16cDNA片段的真核表达载体 pcDNA3 p16 ,采用脂质体介导的基因转染法 ,将其导入体外培养的KFb中 ,并用G4 18筛选阳性克隆。随后对已转染及未转染的KFb进行免疫细胞化学染色 ,观察p16蛋白的表达 ,并通过绘制细胞生长曲线及采用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷 (3 H TdR)掺入法 ,比较转染前后细胞在生长增殖及DNA合成代谢方面的变化。结果　经酶切鉴定证实 ,pcDNA3 p16构建成功。已转染的KFb经G4 18筛选 ,出现阳性克隆 ,并有 p16蛋白表达 ;与正常KFb比较 ,其生长增殖速度明显减缓 ,DNA合成代谢能力明显减弱 (P <0 .0 5 )。　结论　p16基因对KFb的生长增殖及DNA合成代谢有明显的抑制作用。     

瘢痕成纤维细胞的钙网蛋白表达研究

目的 观察钙网蛋白（ＣＲＴ）在瘢痕及下沉皮肤成纤维细胞内的表达情况。方法 采用免疫细胞化学染色和原位ＥＩＳＡ技术对体外培养的瘢痕及正常皮肤成纤维细胞进行ＣＲ贮位及表达水平研究。结果 瘢痕和正常皮肤成纤维细胞在处于增殖生长状态时,胞浆及核内均秀不同程度的ＣＲＴ表达,其中瘢痕成纤维细胞表达ＣＲＴ水平（Ａ：１．９７±０．１５,ＥＬＩＳＡ４９２ｎｍ）明显高于正常皮肤成纤维细胞水平（Ａ：１．４３±０．１２）     

瘢痕成纤维细胞的钙网蛋白表达研究

目的观察钙网蛋白(CRT)在瘢痕及正常皮肤成纤维细胞内的表达情况。方法采用免疫细胞化学染色和原位 ELISA 技术对体外培养的瘢痕及正常皮肤成纤维细胞进行 CRT 分布定位及表达水平研究。结果瘢痕和正常皮肤成纤维细胞在处于增殖生长状态时,胞浆及核内均有不同程度的 CRT 表达,其中瘢痕成纤维细胞表达 CRT 水平(A:1.97±0.15,ELISA492nm)明显高于正常皮肤成纤维细胞水平(A:1.43±0.12),差异有非常显著意义(P<0.01);而在已融合的瘢痕和正常皮肤成纤维细胞内则均无 CRT 表达。结论瘢痕成纤维细胞内 CRT 的丰富表达对促进细胞迁移、信号传递及钙存储等方面均有着积极作用。     

瘢痕成纤维细胞的钙网蛋白表达研究

目的观察钙网蛋白（ＣＲＴ）在瘢痕及正常皮肤成纤维细胞内的表达情况。方法采用免疫细胞化学染色和原位ＥＬＩＳＡ技术对体外培养的瘢痕及正常皮肤成纤维细胞进行ＣＲＴ分布定位及表达水平研究。结果瘢痕和正常皮肤成纤维细胞在处于增殖生长状态时,胞浆及核内均有不同程度的ＣＲＴ表达,其中瘢痕成纤维细胞表达ＣＲＴ水平（Ａ：１．９７±０．１５,ＥＬＩＳＡ４９２ｎｍ）明显高于正常皮肤成纤维细胞水平（Ａ：１．４３±０．１２）,差异有非常显著意义（Ｐ＜０．０１）;而在已融合的瘢痕和正常皮肤成纤维细胞内则均无ＣＲＴ表达。结论瘢痕成纤维细胞内ＣＲＴ的丰富表达对促进细胞迁移、信号传递及钙存储等方面均有着积极作用。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞p16、cyclinD1、CDK4、Rb的表达差异及其意义探讨

目的 探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16、cydinD1、CDK4、Rb等细胞周期调控元件的表达及其与瘢痕发生、发展的关系.方法 分别以正常皮肤和浅表性瘢痕为对照,采用RT-PCR和免疫组化方法,检测培养的成纤维细胞中p16、cyclinD1、CDK4、Rb的mRNA和蛋白表达情况及其之间的相互关系.结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞中p16、cyclinD1、CDK4、Rb的mRNA存在过表达,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);在蛋白表达水平上,p16、cyclinD1、CDK4、Rb阳性表达率分别为15.23%、82.43%、76.34%、45.74%,与其在对照组中的表达差异均有统计学意义(P<0.05).结论 瘢痕疙瘩中p16、cyclinD1、CDK4、Rb存在异常表达.p16与cyclinD1处于失衡状态,导致细胞的持续高增殖,在瘢痕疙瘩的发生、发展中起重要的作用.     

胃癌与细胞周期调控因子p16、细胞周期素D1和Rb关系的研究

本研究旨在应用免疫组织化学方法检测细胞周期调控因子 ｐ16、细胞周期素 (ｃｙｃｌｉｎ)Ｄ1和Ｒｂ的表达水平 ,并探讨其间的相关性及其与胃癌生物学行为的关系。一、材料与方法1.方法 :胃癌及癌旁正常组织来自手术切除标本 ,离体 30ｍｉｎ内取样 2份 ,福马林固定后常规操作 ,4μｍ厚连续切片 4张。 2张置普通玻片上 ,备作苏木精 伊红 (ＨＥ)染色和 ｐ16免疫组织化学 ;另外 2张置涂有防脱片剂ＡＥＰＳ的玻片上 ,煮沸修复抗原后作ｃｙｃｌｉｎＤ1和Ｒｂ免疫组织化学标记。采用ＡＢＣ法 ,选用预实验中已知阳性切片为阳性对照 ,用磷酸盐缓冲液 …     

5-FU对增生性瘢痕中cyclinD_1、cdk4及p53基因表达的影响

目的探讨5-FU对增生性瘢痕组织的成纤维细胞中细胞周期蛋白因子(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk4)及抑癌基因(p53)的mRNA表达的影响,以阐明5-FU对病理性瘢痕的作用机制。方法组织块法培养增生性瘢痕组织及正常皮肤组织的成纤维细胞。用不同浓度的5-FU作用于体外培养的人病理性瘢痕成纤维细胞,检测MTT值;利用半定量RT-PCR分析用药前后cyclinD1、cdk4、p53的mRNA表达的变化。结果5-FU在体外能明显抑制人增生性瘢痕组织中成纤维细胞的增殖及cyclinD1、cdk4的mRNA表达;对p53的mRNA表达无影响。结论5-FU抑制病理性瘢痕成纤维细胞的机制与其抑制cyclinD1、cdk4的表达有关,而与p53表达无关。     

性激素受体在瘢痕中的表达及与细胞周期调控蛋白相互关系的研究

目的　了解雄激素受体 (AR)、雌激素受体 (ER)在病理性瘢痕中的表达及其与细胞周期调节蛋白D1(cyclinD1)、p16之间的相互关系 ,以探讨他们在瘢痕形成过程中的作用及机制。方法　采用免疫组化方法 (SP法 )对 30例瘢痕标本进行研究 ,以正常皮肤组织为对照 ,观察上述指标的表达。结果　正常皮肤及普通瘢痕成纤维细胞中所有指标均为阴性 ;增生性瘢痕与瘢痕疙瘩成纤维细胞中cyclinD1、p16、AR与正常皮肤相比差异均有显著性意义 (P <0 0 5 ) ;瘢痕疙瘩成纤维细胞cyclinD1和AR的表达高于增生性瘢痕 ,且有显著性意义 (P <0 0 5 ) ;p16在瘢痕疙瘩成纤维细胞的表达比增生性瘢痕为高 ,但两者之间差异无显著性意义。在病理性瘢痕中cyclinD1和AR的表达具有明显的相关性。结论　AR在病理性瘢痕的发生及发展中起一定的作用 ,它可能是通过与其配体结合后促使与cyclinD1有关的基因表达而发挥作用的。在瘢痕疙瘩里可能存在cyclinD1的促细胞增生作用超过P16细胞抑制 ,所以细胞呈现持续增殖状态 ;而在增生性瘢痕里cyclinD1与p16可能处于相对的平衡状态 ,细胞生长具有一定的自限性。     

p53、p16、Cyclin D1表达与胃癌增殖细胞核抗原的关系

目的 探讨ｐ５３、ｐ１６、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１表达与胃癌细胞增生状况的关系。方法 采用免疫组化ＡＢＣ法检测５８例胃癌中ｐ５３、ｐ１６、ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＰＣＮＡ的表达状况,并对ＰＣＮＡ免疫阳性细胞作半定量分析。结果 ｐ５３、ｐ１６、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１阳性表达率分别为５１．７％（３０／５８）、４８．３％（２８／５８）、５３．４％（３１／５８）;ｐ５３、Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１阳性组织中,单位面积ＰＣＮＡ阳性     

Cyclin D1和p16在肥大乳房腺体组织中的表达及意义

目的：探讨Cyclin D1以及p16蛋白在肥大乳房乳腺组织中的表达及意义。方法：采用免疫组化SP法,检测35例肥大乳房及16例正常体积乳房乳腺组织中cyclinD1及p16蛋白的表达情况及相互联系。结果：35例肥大乳房腺体组织中Cyclin D1蛋白阳性表达率51.4%（18/35）,16例正常体积乳房标本腺体组织中无一例Cyclin D1呈阳性表达（0/16）,两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。肥大乳房组腺体组织中p16蛋白阴性表达率为77.2%（27/35）,正常体积乳房腺体组织中阴性率为31.3%（5/16）,两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。在Cyclin D1阳性表达的18例样本中,p16阴性表达者17例,阳性表达者1例,Cyclin D1阴性表达的17例样本中,p16阴性表达者10例,阳性表达者7例。Pearson相关性分析显示,Cyclin D1与p16的表达呈负相关（P〈0.05）。结论：①Cyclin D1在肥大乳房腺体中呈高表达,p16呈低表达,提示其可能参与了肥大乳房的发生和发展;②Cyclin D1和p16在肥大乳房组织中的表达呈负相关,提示二者存在着一定的调控关系。     

cyclin D1和p27在人皮肤血管瘤中的表达及意义

目的　探讨cyclinD1和p2 7蛋白在血管瘤发生、发展及退化过程中的表达状况及其意义。方法　采用免疫组织化学方法 (S-P法 )检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织中cyclinD1和 p2 7的表达水平 ,并结合第Ⅷ因子相关抗原的免疫组织化学染色证实表达cyclinD1和 p2 7的细胞是血管内皮细胞。利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织cyclinD1和p2 7表达的平均光密度和平均阳性面积率。 结果　增生期血管瘤内皮细胞cyclinD1表达水平高于退化期 ,差异有显著意义 (P <0 .0 5 ) ,退化期血管瘤内皮细胞cyclinD1表达水平与正常皮肤组织相比 ,差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ;而增生期血管瘤内皮细胞p2 7表达水平低于退化期 ,差异有显著意义(P <0 .0 0 5 ) ,退化期血管瘤内皮细胞 p2 7表达水平与正常皮肤组织相比 ,差异有极显著意义 (P <0 .0 0 1)。 结论　cyclinD1和p2 7可能通过介导血管瘤内皮细胞增殖和血管生成而在血管瘤的发生、发展及退化过程中起重要作用。     

早期阴茎癌中p53、p16、EGFR、cyclinD1的表达

目的研究免疫组化指标p53、p16、EGFR、cyclinDl在早期阴茎癌中的表达及其与肿瘤复发的关系。方法回顾性分析2006年3月至2010年5月实施局部广泛切除术的早期阴茎癌33例。采用EnV确on／HRP两步法检测p53、p16、EGFR和cyclingD1的表达。结果33例中可获得完整病例资料的18例,平均年龄47．7（32-70）岁,平均随访时间21．9（5--45）个月。其中L期1例、T1a期12例、T1b期3例、T2期2例。由于样本量问题四项指标均无统计学意义。结论p53蛋白高表达是早期阴茎癌发生术后复发的可能危险因素,尚需进一步大样本研究证实。     

Evaluation of p21WAF1/CIP1 and cyclin D1 expression in the progression of superficial bladder cancer

Immunoreactivity of p21^WAF1/CIP1 and cyclin D₁ proteins was assessed in a cohort of 207 patients with superficial (pTa-pT₁) bladder cancer followed up for a mean of 4.9 years. The results of the immunostainings were compared with T category, WHO grade, tumor cell proliferation rate (MIB-1 score), the expressions of p53 and bcl-2 as well as survival. Sixty-eight percent and 75% of the tumors were p21^WAF1/CIP1 positive (≥5% of cells positive) and cyclin D₁ positive (≥10% of cells positive), respectively. The p21^WAF1/CIP1 expression was related to cyclin D₁ immunolabelling (P < 0.001) but not to the other variables studied. The expression of cyclin D₁ was inversely associated with T category (P=0.001), WHO grade (P=0.006), MIB-1 score (P=0.014), p53 expression (P=0.001), and bcl-2 (P=0.011) immunoreactivity. In univariate analysis, T category (P=0.0001), WHO grade (P < 0.0001), MIB-1 score (P < 0.0001), bcl-2 (P=0.0092), p53 (P=0.0016) and p21^WAF1/CIP1 (P=0.009) expressions were significant prognostic factors with regard to tumor progression, whereas cyclin D₁ was without any prognostic significance (P=0.1). Out of 123 p21 positive tumors 21 progressed, whereas only 2 out of 58 p21 negative tumors progressed. In multivariate analysis, the MIB-1 score was the only independent predictor of cancer-specific survival (P=0.03), whereas tumor grade (P=0.002) and cyclin D₁ expression (P=0.04) were independent predictors of tumor recurrence. Only the WHO grade (P=0.04) retained its prognostic value indicating the risk of progression. We suggest that in superficial bladder cancer p21^WAF1/CIP1 and cyclin D₁ immunohistochemistry provide no additional prognostic information compared with already established prognostic factors for predicting the risk of progressive disease. Received: 13 September 1999 / 22 March 2000     

Cyclin D1、p27、ki-67在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的探讨Cyclin D1、p27、ki-67在膀胱移行细胞癌（BTCC）中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测72例BTCC和8例正常膀胱黏膜组织中Cyclin D1、p27、ki-67的表达。结果CyclinD1及ki-67在BTCC中的表达明显高于正常对照，而p27的表达低于正常对照，且均与膀胱肿瘤的分级分期相关。结论Cyelin D1、p27、ki-67的表达可能与BTCC的生物学行为有关。     

Alterations of the Cell Cycle Regulators Cyclin D1, Cyclin A, p27, p21, p16, and pRb in Apocrine Metaplasia of the Breast

Abstract:  G1/S transition defects have been a proposed requirement for tumor development. Apocrine metaplasia (APM) in the breast has been held as a sign of benignity. Yet, a number of studies have reported the presence of molecular abnormalities in some forms of APM suggesting a possible oncogenic potential for some of these lesions. We currently investigate the role of some of the cell cycle proteins, previously reported to be de-regulated in breast cancer, in an attempt to assess their significance in APM. Using immunohistochemistry, the expression of cyclin D1, cyclin A, p27, p21, p16, pRb and Ki-67 was examined in 93 cases of APM. The cases were divided into nonpapillary (NAPM) (30 cases) and papillary metaplasia (PAPM) (63 cases). PAPM was further subdivided into simple papillary (SPAPM) (29 cases), complex papillary (28 cases) and highly complex papillary (six cases). For statistical analysis, the last two groups were merged together (CPAPM). The results showed that increased histological complexity was associated with significant increase of proliferative capacity and alterations of the cell cycle control. The median Ki-67 index was 1.5% in SPAPM and 4.8% in the CPAPM. Also, alterations of the cell cycle regulators were significantly higher in the CPAPM than in the SPAPM. NAPM was generally similar to normal breast epithelium. Apocrine cells were negative for p16 while pRb was expressed in all cases. These findings suggest that in complex forms of APM, there is a considerable degree of cellular unrest. This may contribute to increased susceptibility to carcinogenesis.