三氧化二砷联合TNP-470对裸鼠人肝癌移植瘤的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合烟曲霉的提取物烟曲霉醇（TNP-470）对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响及其作用机制。方法：人肝癌转移模型（HCC）-LCI—D20原位移植瘤裸鼠32只，随机分4组（每组8只）给药：As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水（Ns）对照组，给药21天后，对裸鼠移植瘤大小、肿瘤微血管密度（MVD）、免疫组化、透射电镜结果进行观察。结果：As2O3组、TNP-470组及联合组的平均瘤重及平均瘤体积均低于对照组（P〈0．05）；计算两药相互作用系数（CDI）值：瘤重CDI（0．95）〈1，体积CDI（0．89）〈1，两药有协同抑制移植瘤生长的作用。As2O3组抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达；TNP-470组抑制移植瘤EGFR的表达，对移植瘤VEGF的表达无影响；联合组明显抑制移植瘤EGFR的表达，抑制移植瘤VEGF的表达作用等同As2O3组。裸鼠原位移植瘤的光镜、电镜下观察结果有意义；各用药组裸鼠原位移植瘤的MVD值均低于对照组（P〈0．05）。结论：As2O3联合TNP-470协同抑制裸鼠人肝癌移植瘤的血管新生，能有效抑制移植瘤生长。     

NK4基因转染对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响

目的:构建稳定表达NK4的LM3肝癌细胞系,建立裸鼠肝癌模型,观察肿瘤生长情况,并探讨NK4抑制肿瘤可能的机制。方法:构建携带NK4基因的慢病毒载体pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP,转染LM3细胞构建稳定表达NK4的细胞系,分组建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型。测量肿瘤瘤体的体积,重量,采用免疫组化等方法观察肿瘤微血管密度,瘤体中MMP-9的表达。结果:接种肝癌细胞28天后,NK4组裸鼠移植瘤体积为(1.28±0.25)cm3,明显小于对照组与空载体组(2.15±0.58)cm3和(2.06±0.51)cm3(P<0.01)。NK4组瘤重为(1.17±0.78)g,显著低于对照组和空载体组(3.69±1.92)g和(3.52±1.68)g(P<0.01)。NK4转染组的肿瘤血管密度为(10.25±3.85),显著低于对照组和空载体组(2 6.5 6±7.6 2)和(24.37±8.34)。NK4组瘤体中MMP-9表达明显减少。结论:转染NK4基因可以显著抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长,其作用机制可能是通过抑制肿瘤内新生血管的形成和肿瘤细胞的侵袭。     

人源细胞因子诱导的杀伤细胞联合化疗药物对裸鼠肝癌移植瘤的抑制作用

目的 比较单独应用细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞、化疗药物和CIK细胞联合化疗药物对肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用,为临床上联合应用CIK细胞和化疗药物治疗肿瘤提供实验依据。方法 应用成分血分离机采集5例健康自愿者外周血单个核细胞(PBMC),经含IFN-γ、IL-2以及抗CD3单抗的细胞因子鸡尾酒诱导成CIK细胞,以流式细胞仪检测细胞表型。裸鼠肩胛部皮下接种BEL-7402肝癌细胞,第5天起相同部位分别给予生理盐水(对照组)、不同剂量的CIK细胞(CIK-1组和CIK-2组)、丝裂霉素-C(单纯化疗组)和CIK细胞联合丝裂霉素-C(联合治疗组),观察它们对肝癌生长的抑制作用。结果多因子诱导培养后,CD3、CD3^ CD8^ 、CD3^ CD56^ 和CD25^ 效应细胞亚群的比例明显升高,分别由最初的64.0％、28.0％、7.8％和9.1％,上升至94.7％、67.7％、61.3％和84.0％,其中CD3^ 、CD3^ CD8^ 细胞的比例在培养期间内可维持较高水平,CD25^ 和CD3^ CD56^ 细胞的比例分别于培养后的第7天和第13天达最高值,而后开始下降。在90d的观察期内,对照组、化疗组、CIK-1组、CIK-2组和联合治疗组的裸鼠成瘤牢分别为100％、70.0％、80.0％、70.0％和66.7％,生存率分别为10.0％、60.0％、40.0％、50.0％和75.0％,而且联合治疗组肿瘤生长缓慢,肿瘤组织坏死明显。结论 CIK细胞联合化疗药物对裸鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用大于单独应用CIK细胞或化疗药物。     

p27mt对裸鼠肝癌移植瘤侵袭性生长的影响

目的 研究外源性突变型p27基因(p27mt)对裸鼠皮下肝癌移植瘤侵袭性生长的影响。方法 应用细胞移植法把人原发性肝癌细胞株SMMC-7721种于BALB／c裸鼠皮下,构建人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,将PBS液(100μl)、腺病毒介导的突变型p27(Ad-p27mt, 5.0×109 pfu, 100μl)及Lac Z(Ad Lac Z, 5.0×109 pfu, 100μl)分别注射到瘤体后,每隔3天测量肿瘤体积,计算肿瘤生长抑制率。于处理后21天取材行冰冻切片,免疫组织荧光化学法观察各组移植瘤的P27蛋白、CD44v6及Ⅷ因子的表达,数码成像后,用Image-Pro Plus软件计算荧光亮度和细胞总数,测量积分吸光度（integrated optical density,IOD）,计算平均吸光度（Average optical density,AOD）,以平均吸光度来反映细胞因子表达水平。结果 与Ad-Lac-Z、空白对照组比较,Ad-p27组移植瘤P27mt蛋白表达明显增高（P<0.01),并且过表达的P27mt蛋白明显减小了移植瘤体积,抑制了肿瘤的生长速度;血管大体观发现Ad-p27组血管不仅细而且分支少,Ⅷ因子免疫组织荧光化学观察发现瘤体内血管密度明显降低;同时Ad-p27组也明显降低了肿瘤细胞CD44v6 （P<0.05)。结论 Ad-p27mt能在裸鼠SMMC-7721肝癌皮下移植瘤过表达P27mt蛋白,不仅通过抑制血管的生成而抑制肿瘤的生长,而且通过降低肿瘤细胞CD44v6的表达而显著抑制移植瘤的侵袭性。     

TNP-470 对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的作用

目的：了解TNP－470对二乙基亚硝胺（DENA）诱发大鼠肝癌的阻断和抑制作用，副作用及时间依赖性。方法：Wistar大鼠于DENA诱癌第11周（TNPa组）、14周（TNPb组）起隔日腹腔注射TNP－470（20mg/kg)，并设对照组，每只动物给药10次。于诱癌满16周时处死，观察比较各组大鼠肝脏3mm厚切片上的≥3mm和≥5mm的结节数和所见最大肝结节的大小及肝结节内微血管密度。记录和比较给药前、结束时和结束后20天大鼠的体重。结果：TNPa组肝≥3mm和≥5mm结节数及平均最大肿块体积均显著少／小于对照组（P值均＜0．05）。TNPb组除≥5mm结节数显著少于对照组（P＜0．02）外，≥3mm结节数及平均最大肿块体积均略少小于对照组。TNPa组肝结节内血管密度显著低于TNPb组和对照组（P值分别＜0．05和＜0．005）；TNPb3组亦显著低于对照组（P＜0．02）。动物在给TNP－470前后体重下降显著（P＜0．01）；给药结束后20天体重回升，接近给药前水平。结论 通过抑制血管生成，TNP－470明显减轻DENA诱发的大鼠肝硬化、肝癌和延缓其发展，但有时间依赖性。TNP－470有体重减轻的副作用。     

TNP-470对小鼠肝癌生长抑制作用的研究

目的:研究血管形成抑制剂TNP-470对小鼠种植性肝癌生长抑制及其作用机制。方法:小鼠H22肝癌细胞先在KM小鼠皮下成实体瘤,再原位接种于KM小鼠肝脏。原位种植肝癌模型小鼠20只,分为两组,对照组:隔日皮下注射溶剂(3%酒精),共7次;TNP-470组:隔日皮下注射TNP-470(30mg/kg),共7次。用药两周后处死小鼠,检测原位肿瘤的长径及其垂直径(a,b),肿瘤体积按公式V=0.5×ab2计算;治疗前后小鼠体重;肿瘤组织送检ki-67、凋亡、微血管密度;另取肿瘤组织送检电镜。结果:TNP-470治疗组肿瘤生长较对照组有抑制(P<0.05),两组治疗后体重变化无明显差异;相比于对照组,TNP-470对增殖指数无明显影响(P>0.05),凋亡指数增加,微血管密度明显减少(P<0.05);电镜显示:TNP-470组可见凋亡的内皮细胞及肿瘤细胞。结论:TNP-470对小鼠原位种植瘤有生长抑制作用,TNP-470作用的靶点主要是血管内皮细胞,机制可能是通过诱导内皮细胞的凋亡     

三氧化二砷抗裸鼠人结肠癌移植瘤作用及其机制的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)抗人结肠腺癌裸鼠移植瘤作用、作用机制以及药物毒性.方法:建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,随机分为4组,即生理盐水组、5-氟脲嘧啶(5-FU)组、低剂量As2O3组和高剂量As2O3组,比较各组的抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,并对标本分别行光镜和电镜观察、原位末端标记(TUNEL)、免疫组化和血常规检测.结果:As2O3能够明显抑制结肠癌裸鼠移植瘤的增长,并能诱导癌细胞凋亡,调控相关基因表达;未见As2O3引起明显肝、肾和造血系统损害.结论:As2O3对人结肠腺癌细胞裸鼠移植瘤具有显著的抗癌作用,此作用可能与诱导癌细胞凋亡密切相关,且受到多种有关基因的调控;但是对裸鼠的肝、肾和造血系统无明显的毒性.     

三氧化二砷抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤生长及促凋亡作用

背景与目的:胆囊癌由于缺乏特异性的临床表现确诊时多属晚期,手术切除率较低,且常规化疗药物对胆囊癌的疗效较差,因此需寻找治疗胆囊癌新的有效药物。三氧化二砷(As2O3)在治疗急性早幼粒细胞白血病中取得了突破性成果,近年来它在实体瘤的研究中颇受关注。本研究旨在观察As2O3对人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的抑制及促凋亡作用。方法:20只皮下接种移植瘤大小相似的BALB/c裸鼠,随机分为生理盐水(NS)组(n=10)和As2O3组(n=10)。尾静脉注射NS0.2ml/只(NS组)或As2O310mg/kg(As2O3组),每日1次,连续7d。21d时处死所有裸鼠,测量肿瘤的重量和体积,同时用原位末端标记法检测凋亡细胞并计数。结果:NS组瘤重(1.0±0.4)g、体积(1.5±0.6)mm3;As2O3组瘤重(0.53±0.27)g、体积(0.8±0.4)mm3,瘤重和体积明显下降;NS组凋亡细胞计数为22±4,As2O3组升高至58±10(P<0.01)。结论:As2O3能明显抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的生长并促进肿瘤细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导人鼻咽低分化鳞癌裸鼠移植瘤细胞分化的研究

背景与目的:既往研究发现三氧化二砷(As2O3)可诱导白血病细胞的分化,但对实体瘤细胞的诱导分化作用报道甚少。本实验拟探讨As2O3对人鼻咽低分化鳞癌可移植瘤在BALB/C裸鼠体内生长的影响,重点观察其诱导鼻咽癌细胞分化的作用。方法:以人鼻咽低分化鳞癌鼠移植癌细胞株CSNE-1为研究对象,观察腹腔注射As2O3(5mg·kg-1·d-1连续10天后,每周给药3次,连续3周)对人鼻咽癌移植瘤在BALB/C裸鼠体内生长情况的影响。用光学显微镜和电子显微镜观察移植瘤细胞形态变化,用免疫组化法检测瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:腹腔注射As2O3后,人鼻咽癌BALB/C裸鼠移植瘤生长被抑制,抑瘤率为75.4%。同时,瘤组织中癌细胞密度减少,细胞皱缩,胞浆红染,瘤组织分化渐成熟,出现角化细胞和角化珠;间质结缔组织增多。透射电镜下肿瘤细胞出现成熟分化及明显角质化,细胞表面微小突起增多,细胞间桥粒增多并以桥粒互相连接,细胞核浆比例减少,胞浆中出现大量张力原纤维并围绕核周。癌细胞PCNA在阴性对照组呈高表达,PI(PCNA阳性细胞指数)为(95.2±5.0)%,而As2O3组癌细胞PCNA表达明显减少,PI为(53.6±7.0)%(P<0.001)。结论:As2O3抑制人鼻咽低分化鳞癌BALB/C裸鼠移植瘤的生长,这种抑制作用可能与其诱导癌细胞向成熟方向分化有关     

丙谷胺对人结肠癌细胞株裸鼠移植瘤的作用

目的：探讨胃泌素受体拮抗剂丙谷胺（ＰＧＬ）对人结肠癌裸鼠移植瘤的作用。方法：建立人结肠癌ＳＷ４８０细胞株裸鼠移植瘤模型，观察在ＰＧＬ、５肽胃泌素（ＰＧ）作用下移植瘤的体积和重量，用放免法测ＣＡＭＰ、流工细胞术测ＤＮＡ、蛋白持和细胞周期、结果：移植瘤的体积和重量，瘤细胞的ＣＡＭＰ、ＮＤＡ和蛋白质含量、Ｓ和Ｇ２Ｍ期细胞数及增殖指数ＰＧ组均显著高于对照组，ＰＧＬ组与对照组比无显著差异；ＰＧ＋ＰＧＬ组均显     

三氧化二砷-泊洛沙姆４０７缓释剂瘤内注射治疗裸鼠人肝癌移植瘤的实验研究

目的：观察三氧化二砷-泊洛沙姆４０７（Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７）缓释剂对裸鼠皮下人肝癌移植瘤的有效性。方法：以人肝癌ＨｅｐＧ２细胞为来源建立裸鼠皮下移植瘤模型,实验共分３组：Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７缓释剂治疗组、Ａｓ_２Ｏ_３治疗组和生理盐水（ＮＳ）对照组,于造模成功后６～８天行瘤体注射,每４天１次,共４次。比较各组抗癌疗效,观察裸鼠体重、肿瘤体积变化、抑瘤率、肿瘤组织病理及骨髓涂片以及裸鼠的存活情况、生存质量。结果：Ａｓ２Ｏ３ Ｐ４０７缓释剂治疗组肿瘤生长受到显著抑制,肿瘤体积较Ａｓ_２Ｏ_３组小（Ｐ＜０.０５）,瘤重分别为（０.２５７±０.０８０）ｇ和（０.６４１±０.１０９）ｇ,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）;两组与ＮＳ对照组瘤重（１.０９４±０.１４７）ｇ相比,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。治疗后Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７缓释剂组裸鼠体重大于Ａｓ_２Ｏ_３组和ＮＳ对照组,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。各组均未见骨髓抑制现象。结论：Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７缓释剂瘤内注射,使用安全,可维持局部有效药物浓度、延长作用时间,疗效优于Ａｓ_２Ｏ_３注射液。     

As2O3抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤淋巴管生成相关基因表达的研究

目的:探讨As2O3抑制乳腺癌淋巴管生成的机制.方法:24只裸鼠复制成人乳腺浸润性导管癌模型,随机分成4组:阴性对照组(NS)、阳性对照组(5-Fu 30mg/kg),实验组1(As2O3 1.5mg/kg)和实验组2(As2O3 3.0mg/kg),采用免疫组织化学、RT-PCR技术分别检测COX-2、VEGF-C基因、蛋白的表达.结果:阴性对照组COX-2、VEGF-C基因、蛋白呈强阳性表达,实验组1、实验组2的COX-2、VEGF-C阳性表达随着As2O3用量的增加而下降(P＜0.05),与阳性和阴性对照组的表达比较呈明显下降趋势(P＜0.05).各组中COX-2与VEGF-C的基因、蛋白表达水平呈明显相关关系(r=0.725,r=0.915).结论:As2O3可降低乳腺癌裸鼠移植瘤组织中VEGF-C和COX-2的表达,有可能减少肿瘤中淋巴管生成,抑制肿瘤生长及淋巴转移.     

三氧化二砷联合羟基喜树碱抗肝癌作用的实验研究

目的：通过对三氧化二砷（As2O3）与羟基喜树碱（HCPT）联合作用抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长的实验研究,探讨两药合用的效果。方法：一定浓度梯度As2O3和HCPT分别及联合与人肝癌细胞株SMMC-7721孵育后,采用MTT法检测细胞生长变化,并采用两药相互作用系数（CDI）来评价两药相互作用性质。结果：0.5μg/mlAs2O3与0.5μg/mlHCPT联合应用对肝癌细胞的生长抑制作用明显高于各自的单药应用（P〈0.01）,且具有协同效应。结论：As2O3与HCPT联用可以增强互补,减少各自用药剂量,达到减毒增效的目的。     

抑制端粒酶活性对As2O3诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的： 〖HT5"SS〗观察端粒酶反义寡核苷酸、As2O3对肝癌细胞生长的影响,寻找低剂量、低毒、高效、安全的抗肝癌新疗法。〖HT5W〗方法：〖HT5"SS〗 自行设计合成靶向端粒酶模板区的20 nt硫代反义寡核苷酸,观察端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞端粒酶活性的影响及两者协同对肝癌细胞生长的影响,采用HE染色、流式细胞仪及DNA琼脂糖凝胶电泳观察端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞的凋亡诱导作用,以流式细胞术检测肝癌细胞的Fas、FasL、bcl2蛋白的表达。〖HT5W〗结果： 〖HT5"SS〗5 μmol/L的端粒酶反义寡核苷酸作用24h可显著抑制肝癌细胞端粒酶活性（P<0.01）;肝癌细胞端粒酶活性被抑制后对As2O3诱导凋亡的敏感性显著增加,表现为低浓度、短时间即可诱导肝癌细胞凋亡（P<0.01）,端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞的凋亡诱导作用是通过Fas、FasL途径实现的。〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗抑制肝癌细胞端粒酶活性可显著增强其对As2O3诱导凋亡的敏感性,减少砷剂用量,两者协同有潜在的临床应用前景。     

As2O3抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤淋巴管生成相关基因表达的研究

目的：探讨As2O3抑制乳腺癌淋巴管生成的机制。方法：24只裸鼠复制成人乳腺浸润性导管癌模型,随机分成4组：阴性对照组（NS）、阳性对照组（5-FU30mg/kg）,实验组1（As2O31.5mg/kg）和实验组2（As2O33.0mg/kg）,采用免疫组织化学、RT-PCR技术分别检测COX-2、VEGF-C基因、蛋白的表达。结果：阴性对照组COX-2、VEGF-C基因、蛋白呈强阳性表达,实验组1、实验组2的COX-2、VEGF-C阳性表达随着As2O3用量的增加而下降（P〈0.05）,与阳性和阴性对照组的表达比较呈明显下降趋势（P〈0.05）。各组中COX-2与VEGF-C的基因、蛋白表达水平呈明显相关关系（r=0.725,r=0.915）。结论：As2O3可降低乳腺癌裸鼠移植瘤组织中VEGF-C和COX-2的表达,有可能减少肿瘤中淋巴管生成,抑制肿瘤生长及淋巴转移。     

三氧化二砷诱导线粒体通透性转变孔道开放的机制研究

背景与目的:线粒体通透性转变孔道(permeabilitytransitionpore,PTP)是线粒体释放细胞色素c和凋亡诱导因子的主要途径,亚砷酸盐可能通过PTP影响细胞凋亡,为了揭示其诱导PTP开放的机制,本实验研究了Ca2 介导的线粒体Ca2 释放(Ca2 -inducedCa2 releasefrommitochondria,mCICR)在As2O3介导的PTP开放及细胞色素C释放中的作用。方法:提取大鼠肝线粒体。通过紫外分光光度仪检测As2O3作用下线粒体的膨胀,测定线粒体PTP的开放状态;采用双波长双光束紫外分光光度仪检测As2O3作用下测试体系内Ca2 浓度的变化引起的吸光度值的变化,以反映线粒体Ca2 的转运(即mCICR)情况;Westernblot检测线粒体上清液中细胞色素c的含量,反映线粒体释放细胞色素c的情况。结果:10μmol/LAs2O3和低浓度Ca2 不能引起PTP开放和细胞色素c释放,10μmol/LAs2O3和高浓度Ca2 诱导PTP开放和细胞色素c释放;当抑制mCICR时,As2O3和Ca2 对PTP开放和细胞色素c释放的作用完全抑制。结论:As2O3介导的PTP开放和细胞色素c释放依赖于mCICR。     

三氧化二砷联合TNP-470抑制鸡胚尿囊膜血管生成的研究

目的观察和比较三氧化二砷(As2O3)和O-(氯乙酰甲酰)夫马菌素醇(TNP-470)对鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成的抑制作用。方法100只鸡胚(7日龄)随机分为四组As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水(NS)对照组,以甲基纤维素作为载体,加药孵育后观察药物对血管生成的影响。结果与NS对照组比较,As2O3和TNP-470均有显著抑制CAM血管生成作用(P<0·001),且联合组的抑制作用强于单药组(P<0·05)。结论As2O3和TNP-470对CAM血管生成均有明显的抑制作用,两药联合应用有协同增效作用。     

As2O3对人胃癌细胞株SCG-7901裸鼠移植瘤的抗肿瘤机制研究

目的：探讨不同剂量的三氧化二砷（As2O3）对人胃癌细胞株SCG-7901裸鼠皮下移植瘤的抗肿瘤机制。方法：建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为实验组即As2O3低剂量组（1．0mg／kg）、As2O3中剂量组（2．5mg／kg）和As2O3高剂量组（5．0mg／kg）,空白对照生理盐水组及阳性对照5-Fu组（20mg／kg）,分别腹腔连续给药10天,停药后24小时处死裸鼠,称取瘤重,计算抑瘤率,流式细胞仪检测凋亡率及Caspase-3的活性变化。结果：低剂量As2O3组及5-FU组抑瘤率分别为60．6％及78．2％,与生理盐水组比较均有统计学意义（P〈0．05）,低剂量组与5-FU组抑瘤率差异无统计学意义（P〉0．05）;高、中、低剂量As2O3组流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰,凋亡率分别为18．32％、17．86％、21．89％,同时伴有Caspase-3活性的增加,其中低剂量As2O3活性增加最显著。结论：低剂量As2O3在体内可通过活化Caspase-3诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。