绵羊牦牛棘球蚴囊液及囊壁抗原的SDS—PAGE分析

本文应用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对绵羊、耗牛棘球蚴囊液及绵羊棘球蚴囊壁可溶性粗抗原的蛋白组分进行了分析。使用10％凝胶,采用垂直板型电泳、考马斯亮兰R—250染色进行SDS-PAGE的结果表明,绵羊及耗牛棘球蚴囊液分别含有16及11种蛋白组分,分子量范围分别为270～16.5KD及280～17KD;主带均为8条。绵羊棘球蚴囊壁可溶性粗抗原共显示17条蛋白带,分子量范围245～17KD,主带8条。本项研究为进一步分析分离特异性抗原奠定了基础。     

绵羊细粒棘球蚴囊液抗原诱发小鼠免疫反应及保护性免疫的研究

本文用绵羊细粒棘球蚴囊液抗原制剂,给小鼠3次腹腔注射诱发初次免疫,然后腹腔移植泡球蚴组织作攻击感染,观察保护性免疫。实验提示,注射免疫原制剂后1月能诱发小鼠免疫反应,间接血凝试验(IHA)可测出血清抗体;攻击感染后23周,IHA阳性率达94.4％,而未诱发初次免疫的对照鼠IHA阳性率为90.0％,表明无论是初次免疫或攻击感染,均能诱发小鼠产生抗体,二者无显著差别(P>0.05);但IHA血清滴度1:256百分率分别为94.1％和55.5％,有显著差别(P<0.01),表明攻击感染有强化初次免疫的作用。攻击感染后23周,对比免疫鼠和对照鼠的腹腔泡球蚴湿重均值和病理分级率均无显著差别(P>0.05),提示本文小鼠初次免疫未显保护性免疫之效。     

细粒棘球蚴囊液抗原纯化方法的比较评价

对于绵羊肝脏细粒棘球蚴囊液用常规粗制法,通过抗绵羊全血清抗体免疫吸附柱的亲和层析法,Oriol氏纯化法,Burstein氏纯化法,以及将纯化抗原再经酚提取法制备的六种抗原,以SDS-PAGE,免疫电泳,ELISA,IHA等方法进行了抗原得率、纯度、组份、免疫活性和特异性等方面的比较。结果表明:亲和层析抗原得率最高(l6.25％～22.64％),Oriol氏法纯化抗原最低(3.35％)。与囊液粗抗原相比,纯化抗原中Burstein抗原组份最多。经酚提取的纯化抗原组份最少。各种抗原组份数目显然相差明显,但在免疫电泳中均出现弧5沉淀线。酚提取法不能达到将抗原5和抗原B分离的目的。在ELISA和IHA中,Burstein法纯化抗原的活性最高。作者分析了亲和层析抗原活性低于Burstein和Oriol两种抗原的原因可能是亲和层析抗原缺少68kDa和36.5kDa两种宿主组份。因而认为这两个组份可能同时具有寄生虫抗原的性质。在ELISA试验中,各种纯化抗原均与囊虫病人血清产生部分交叉反应,但比粗抗原低。在IHA试验中,纯化抗原均不与囊虫病人血清产生交叉反应。作者推荐由于Burstein法纯化抗原得率高,提纯程序较简单,抗原活性高而且在IHA中没有与囊虫病人血清的交叉反应,因而可作为常规诊断抗原使用。     

新疆绵羊源和骆驼源细粒棘球蚴超微结构的初步比较观察

用透射电镜对新疆乌鲁木齐绵羊源和骆驼源细粒棘球蚴囊壁及原头节标本的超微结构进行观察，发现二者之间在囊壁角质层和原头节生发层结构上有明显区别。绵羊源囊壁角质层高电子密度颗粒多，密度大，形成显著的板层状结构；原头节生发层远端胞浆厚，含有多量囊泡。     

棘球蚴囊液外溢引起过敏性休克病例报告

本院 1980～ 2 0 0 0年共收治棘球蚴病 5 4 9例 ,其中细粒棘球蚴病 5 4 4例 ,泡球蚴病 5例。因棘球蚴囊液外溢引起过敏性休克 2 4例 ,其中男 16例 ,女 8例 ,年龄 4 6～ 73岁。2 4例均来自宁夏与内蒙古自治区交界牧区 ,均有与羊及犬密切接触史。均经皮内试验 (ＩＤ ,ｃａｓｏｎｉｔｅｓｔ) ,其阳性率达10 0 % ,术前有皮肤荨麻疹过敏反应者 2 0例 ,占 83% ,嗜酸性粒细胞 >30 %和 >2 5 %者分别为 15例和 2 3例 ,分别占6 2 5 %和 91%。　　在 2 4例中 ,因外伤棘球蚴囊液破入胸腔者、腹腔者及肝内者分别为 4、 5和 2例 ;自发性破入腹腔者 5例 ;…     

细粒棘球蚴囊液蛋白组分分析

目的 利用鸟枪法分析细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)囊液蛋白(hydatid cyst fluid protein,HCFP)组分,寻找其中具有潜在调控免疫失调性疾病功能的活性组分.方法 无菌收集细粒棘球蚴病患者肝囊肿中的细粒棘球蚴囊液,采用鸟枪法进行液相色谱-串联质谱鉴定,采用MaxQua...     

细粒棘球蚴囊液对HepG2细胞增殖的影响

目的 探讨细粒棘球蚴囊液(HCF)对宿主肝细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路及细胞周期的影响.方法 四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度HCF对HepG2细胞的增殖作用.流式细胞仪检测细胞周期.Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(cyclin) D1、cyclin A、cyclin B1、cyclin E的表达水平.对数据采用重复测量方差分析.结果 在48、72h和96h,15％、30％和60％ HCF组与无胎牛血清比较,能明显促进HepG2细胞的增殖(P值均＜ 0.05).Western blot检测结果显示:15％HCF组p-ERK在48h高表达(F=1.916,P＜ 0.01),cyclin D1在24h高表达(F=3.901,P＜0.01),15％、30％HCF组PCNA分别在48h、72h高表达(F=91.140,P＜0.01),cyclin A分别在48h、72h高表达(F=18.587,P＜0.01),cyclin B1分别在48h、72h高表达(F=2.064,P＜0.01),30％ HCF组cyclin E在96h高表达(F=1.068,P＜0.01).结论 HCF对体外培养的HepG2细胞无毒害作用,对其增殖有一定促进作用.     

棘球蚴囊液,头节和囊壁抗原的二维电泳初步研究

本文采用二维电泳和银染色法对棘球蚴囊液、头节和囊壁抗原进行了初步研究。结果表明:三者分别显示多肽斑点111、116和123个,其中特异斑点74、67和60个,共有斑点37、49和63个。在共有斑点中,三者共有斑点7个;两者共有斑点在囊液和头节为8个,囊液和囊壁22个,头节和囊壁34个。本文对多肽斑点和抗原的关系作了讨论。本结果可望对抗原的纯化提供参考。     

细粒棘球蚴囊液对HepG2肝癌细胞系细胞周期的影响

目的探讨细粒棘球蚴(Eg)囊液(HCF)在感染急性期对宿主肝细胞MAPK信号通路及细胞周期的影响。方法常规方法培养HepG2细胞,以HCF为刺激物,于不同时间点用Western blot检测p-ERK、增殖细胞核抗原PC-NA、细胞周期蛋白cyclin-D1、A、B1和E的表达水平,并与无FCS组比较。结果 Western blot检测显示,15%、30%HCF组p-ERK分别在换液培养3h和30min高表达(P<0.05),PCNA分别在3h和12h高表达(P<0.05),cyclin-D1在3h高表达(P<0.05),cyclin-A分别在3h和12h高表达(P<0.05),15%HCF组cyclin-E在3h高表达(P<0.05),15%、30%HCF组cyclin-B1在各时间点表达量微弱(P<0.05)。结论 HCF对体外培养的HepG2细胞无毒害,且对其增殖有一定的促进作用。     

绵羊感染细粒棘球蚴疾病模型的制备及评价

建立绵羊感染细粒棘球蚴 (Echinococcusgranulosus,E.g)疾病模型 ,应用于包虫病的防治研究。将羊源 E.g原头节经腹腔及颈内静脉接种 2 4只绵羊 ,依据感染率、囊肿体积与分布等指标 ,建立绵羊感染 E.g疾病模型。结果显示感染率为 91.6 % ,囊肿平均体积 (13.92± 2 .5 3) cm3。多数囊肿分布于腹腔或附着于腹壁、肠系膜、大网膜等 ,部分侵入肝脏和肺脏。本模型制备方法简单 ,感染率高 ,对包虫病的防治研究具有重要的实用价值。     

细粒棘球蚴所致过敏性休克绵羊的肺部形态学观察

为观察细粒棘球蚴致过敏性休克绵羊肺部形态学的病理学和病理生理学变化，并探讨其发病机制，选用感染细粒棘球蚴的12只绵羊，随机分为两组，I组用细粒棘球蚴粗制囊液抗原10mL攻击发敏，Ⅱ组用生理盐水作为对照组，确定休克的发生，实验观察60min后处死绵羊，灌洗并收集支气管肺泡灌洗液并测定总蛋白(TP)、红细胞(RBC)、中性粒细胞(PMN)、巨噬细胞(AM)含量，测定并计算绵羊肺湿/干重量比值，分别观察绵羊肺部形态结构的变化。结果显示，I组绵羊产生休克，在支气管肺泡灌洗液的测定中，实验组总蛋白含量、红细胞明显升高、中性粒细胞明显升高，巨噬细胞含量无明显变化，肺湿/干重量比值明显升高。肺部形态结构观察，I组均有明显早期肺损伤的病理变化。结论：(1)休克早期形成广泛的弥漫性蛋白通透性肺水肿；(2)肺部形态学改变特点为肺毛细血管淤滞、栓塞形成；(3)肺泡Ⅱ型细胞变性，肺表面活性物质分泌和转化异常是造成肺萎陷的主要原因；(4)炎细胞参与急性肺损伤的产生。     

细粒棘球蚴囊液对外周血淋巴细胞的影响

目的研究细粒棘球蚴囊液对健康人外周血单个核细胞(PBMC)及JurkatT淋巴细胞等的影响。方法PBMC及JurkatT淋巴细胞用含不同浓度(1000、100和10μg/ml)囊液的DMEM培养基培养5d后,台盼蓝染色检测细胞活力。用含植物血凝素(PHA)的DMEM培养基培养PBMC,以MTT法观察PBMC增殖情况,用流式细胞仪检测CD4+、CD8+细胞数量及CD4+/CD8+值,用原位末端标记法和Hoechst33258荧光染色法检测PBMC细胞凋亡。结果各浓度囊液对PBMC和JurkatT淋巴细胞未显示出毒性作用。囊液不影响PHA对PBMC的增殖功能。在1000μg/ml囊液组CD4+、CD8+细胞数量与空白对照组(CD4+72.08±4.10,CD8+29.32±2.62)相比,CD4+(49.32±8.32)显著减少(P<0.05),CD8+数量(32.02±6.57)略增加(P>0.05),CD4+/CD8+比值减少。未见细胞凋亡现象。结论细粒棘球蚴囊液对外周血单个核细胞的生长无抑制作用,但可以使CD4+、CD8+细胞的数量和比例改变,向Th2免疫抑制方向转变。     

采用分子筛层析法分离纯化细粒棘球蚴囊液粗抗原

目的分离纯化细粒棘球蚴囊液抗原,去除其中的非特异性反应蛋白,探索优化囊液抗原制备方法。方法采用超滤法浓缩羊肝细粒棘球蚴囊液制备成粗抗原,并采用免疫印迹实验对囊液抗原进行分析,发现非特异性反应的主要蛋白条带。随后采用Superdex凝胶柱通过分子筛层析法对囊液抗原进行纯化。用44份细粒棘球蚴病患者、17份健康人和10份囊尾蚴患者血清进行酶联免疫实验,评估纯化后囊液抗原的检测能力。结果免疫印迹实验发现,非特异性反应的主要条带的相对分子质量(M_r)约为55 000,纯化后去除了该非特异性反应蛋白。纯化后的囊液抗原ELISA检测灵敏度为93.2%(41/44),特异性为94.1%(16/17),约登指数为0.87,与囊尾蚴病交叉反应性为30%(3/10)。未纯化前的灵敏度为90.9%(40/44),特异性为88.2%(15/17),约登指数0.79,与囊尾蚴病交叉反应性为60%(6/10)。纯化前后ELISA检测的灵敏度存在显著性差异。结论本研究采用分子筛层析法对羊源细粒棘球蚴的囊液抗原进行纯化,去除了引起非特异性反应的主要蛋白(M_r 55 000),为后续进行囊液抗原标准化、提高检测能力提供了依据。     

囊型棘球蚴和泡型棘球蚴不同组织抗原可溶性蛋白SDS—PAGE电泳分析

对囊型棘球蚴和泡型棘球蚴的不同组织及犬泡状带绦虫和豆状带绦虫、猪囊尾蚴，细颈囊尾蚴等四种异源绦虫组织共１４种抗原进行了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析。两种棘球蚴同种组织的主要蛋白质区带的电泳图谱差别不大，不同组织的电泳图谱差别较大。     

囊型棘球蚴病的免疫预防现状

囊型棘球蚴病(CE)是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点之一.细粒棘球绦虫(Eg)95、EgA31、Eg14-3-3、EgM123、EgG1Y162和Egferr是几种常见的疫苗候选分子,Eg疫苗的种类包括灭活疫苗、重组抗原疫苗、病毒载体介导疫苗和细菌载体介导疫苗等.本文对这方面的...