抗旋毛虫副肌球蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的利用杂交瘤技术制备分泌抗重组旋毛虫副肌球蛋白N端抗原（rTsP3）的单克隆抗体（McAb）并进行鉴定。方法以rTsP3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,筛选分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株,制备腹水并进行纯化,采用间接ELISA法测定培养细胞上清液及腹水中的McAb滴度、相对亲和力及抗体亚类,Western blot法鉴定抗体对抗原识别的特异性。结果获得了2株稳定分泌抗旋毛虫rTsP3的McAb杂交瘤细胞株,分泌的McAb分别为IgG2b亚类κ型和IgG1亚类κ型,亲和力常数分别为8.98×108mol/L和9.7×10^8mol/L,Western blot显示2株单抗均能识别旋毛虫成虫匀浆蛋白、rTsP3及重组副肌球蛋白（rTsPmy）。结论成功制备了抗旋毛虫rTsP3单克隆抗体,该单抗能识别旋毛虫副肌球蛋白抗原。     

抗旋毛虫成虫单克隆抗体的制备和保护性免疫的初步研究

目的：获得抗旋毛虫成虫的单克隆抗体（单抗）并初步研究其保护性免疫作用，方法：利用杂交瘤技术，用旋毛虫抗原免疫的Balb/c小鼠脾细胞与小鼠骨瘤细胞SP2／0进行细胞融合。用免疫双扩散鉴定单抗亚类，免疫印迹鉴定单抗的特异性。小鼠尾静脉接种单抗进行被动免疫保护实验。结果：建立了1株稳定分泌抗旋毛虫成虫单抗的细胞株，杂交瘤细胞培养上清液效价为1：6400，诱生腹水ELISA效价达1：204800，经鉴定单克隆抗体类型为IgM,可以识别旋毛虫成虫，肌幼虫及新生幼虫，相对分子质量约为40000蛋白，并且不与猪蛔虫，血吸虫，包虫，囊虫抗原发生交叉反应。单抗被动免疫后的减虫率为55．63％，结论：获得1株具种特异性，保护性的单克隆抗体，为筛选能诱导保护性免疫功能的旋毛虫抗原分子提供了有力的工具。     

抗旋毛虫肌幼虫ES抗原单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备分泌抗旋毛虫肌幼虫排泄分泌(ES)抗原单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,并对其及分泌的McAb进行鉴定。方法用旋毛虫肌幼虫ES抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌特异性、高滴度McAb的杂交瘤细胞株,制备腹水,进行纯化。ELISA间接法、夹心法和竞争法分别测定McAb滴度、相对亲和力和相加效应,琼脂双扩散试验鉴定免疫球蛋白类型,检测McAb与其他寄生虫抗原的交叉反应。电镜观察杂交瘤细胞超微结构,计数染色体数目及观察杂交瘤细胞分泌McAb的稳定性。结果筛选出2株(B2C12和E11F11)分泌抗旋毛虫肌幼虫ES抗原McAb杂交瘤细胞株。电镜显示,杂交瘤细胞具有肿瘤细胞和浆细胞的特征,胞浆内可见大量分泌颗粒;杂交瘤细胞染色体数目平均为98.6条,均能稳定分泌McAb(属IgM)。B2C12株培养上清液和腹水McAb滴度分别为1∶1280和1∶2.048×104,E11F11株为1∶640和1∶1.024×104,其中前者的相对亲和力较后者稍高。2株McAb识别ES抗原不同的抗原决定簇;且不与其他寄生虫抗原发生交叉反应。结论获得2株抗旋毛虫肌幼虫ES抗原杂交瘤细胞株,均能稳定分泌高滴度、特异性的IgM类McAb,并识别不同的抗原决定簇,为研制旋毛虫病诊断试剂盒和制备基因工程抗体奠定了基础。     

抗人T淋巴细胞单克隆抗体的制备及鉴定

作者利用杂交瘤技术,经2次融合、5次克隆化,制备出3株分泌抗人淋巴细胞的单克隆抗体,命名为SMU_1,SMU_2,SMU_3。经初步鉴定,SMU_1和SMU_3可识别T淋巴细胞膜抗原CD_3;SMU_2为非系限性单抗,不仅能识别T淋巴细胞,而且可与粒—单核细胞反应。3株单抗在用于白血病免疫分型的研究中具有识别细胞及鉴定型别的价值。     

不同免疫接种方法在单克隆抗体制备中的应用及比较

在制备抗泡球蚴原头节可溶性抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞时,我们采用常规的小鼠腹腔免疫接种—脾淋巴细胞法(以下称腹腔免疫法)和后肢跖部局部免疫接种—淋巴结淋巴细胞法(以下称后肢跖部法),进行了4次杂交瘤细胞融合。经ELISA筛选和有限稀释克隆,最后获得了16株可以稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。现将这两种免疫接种方法的结果及所获得的单克隆抗体的特性分析报告如下。1　材料和方法1.1　泡球蚴可溶性抗原　手术摘取在沙鼠腹腔人工接种培养1年以上的泡球蚴包囊,在事先盛有生理盐水的培养皿中,粗铁纱网破碎过滤,沉淀用生理…     

抗人胰腺癌单克隆抗体的制备及其特性的研究

本实验采用常规细菌融合方法，在PEG作用下，成功地制备了五株能稳定分泌抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤。以间接型ELISA方法和ABC技术进行抗体检测，有限稀释法进行克隆。用羟基磷灰石法纯化单克隆抗体（MAb)，所得MAbB6的免疫球蛋白类型为IgG1,它在培养上清及小鼠腹水中的效价分别为1：16和1：2600。MAbB6具有较好的特异性，其所针对的抗原可能为一种胰腺癌细胞胸膜抗原，是一种肿瘤相关性抗原，羟基磷灰石方法是一种比较理想的单克隆抗体提纯方法。     

抗人丙二醛修饰低密度脂蛋白单克隆抗体的制备和免疫学性质

本文报道两株抗丙二醛修饰的低密度脂蛋白单克隆抗体（ＨＭＬ、ＨＭＬ２），两者均有较高的抗体效价，抗体类型为ＩｇＧ２ａ。单抗相加实验表明，ＨＭＬ１和ＨＭＬ２识别同一抗原位点。竞争性ＢＡ－ＥＬＩＳＡ实验显示：ＨＭＬ１能够识别丙二醛修饰的低密度脂蛋白、丙二醛清蛋白、丙二醛聚赖氨酸。但与天然低密度脂蛋白无交叉反应。推测ＨＭＬ１抗原位点与低密度脂蛋白在修饰过程中丙二醛和载脂蛋白Ｂ上的赖氨酸残基形成的共价结合物     

抗猪隐孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定

目的筛选特异性强、亲和力高的抗猪隐孢子虫(Cryptosporidiumsuis)单克隆抗体(McAb),并探讨其生物学活性。方法将纯化的猪隐孢子虫卵囊冻融和超声波处理后免疫BALB/c小鼠,取阳性免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;经间接ELISA法筛选,有限稀释法进行克隆;用间接ELISA叠加试验、间接免疫荧光试验鉴定McAbs的免疫反应活性。结果获得3株能稳定分泌抗猪隐孢子虫McAbs的杂交瘤细胞株,命名为1E1C5、1E11A5、2B7A1,分别属于Ig M、IgG3和IgG2a类;其细胞培养上清效价分别为1∶3200、1∶1600和1∶3200,小鼠腹水效价分别为1∶1.6×105、1∶1.6×105和1∶0.8×105;ELISA叠加试验表明3株单抗可识别两个不同抗原位点,1E1C5有较高的亲和力;免疫荧光试验结果显示3株单抗均能与猪隐孢子虫卵囊壁反应,但与艾美耳球虫、人隐孢子虫(C.hominis)有微弱的交叉反应。结论获得了3株可识别猪隐孢子虫卵囊壁的McAbs,为进一步开展猪隐孢子虫快速诊断研究奠定了基础。     

抗蓝氏贾第鞭毛虫单克隆抗体的制备和特性研究

用体外培养的四川株蓝氏贾第鞭毛虫滋养体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以免疫脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，共获得３个分泌抗蓝氏贾第鞭毛虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这些ＭｃＡｂ经鉴定均属ＩｇＧ１亚类。选取活性最强的１Ｅ２株ＭｃＡｂ对不同贾第虫株进行抗原定位的测定，由ＩＦＡ显示，该ＭｃＡｂ与四川株和山东株滋养体的后１／３表面呈现荧光反应，但与澳大利亚株滋养体表面不显荧光，表明国内株与国外澳大利亚株滋养体表膜     

抗人神经肽Y单克隆抗体的制备及鉴定

目的：建立抗人神经肽Y（NPY）的单克隆抗体细胞株。方法：用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,用ELISA法筛选出阳性克隆,经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株,并对得到的单抗进行亚类、效价、纯度、亲和常数以及结合位点的测定和分析。结果：获得了3株稳定分泌抗hNPY单抗杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定分别为IgG3、IgG2b、IgG1,腹水效价为1：20万～1：200万,纯化抗体效价为0．05μg／ml-0．0005μg／ml,4A8抗体纯度达到95％以上,抗体亲和常数分别为5．27×10^6L／mol、3．39×10^6L／mol、1．05×10^7L／mol,不同单抗配对经时间分辨免疫荧光法检测结果提示3株单抗是针对不同抗原决定簇。结论：成功制备了3株抗hNPY单抗,为研究NPY及其抗体在脂肪移植及肥胖治疗中的机制和应用奠定基础。     

抗弓形虫表膜抗原P30单克隆抗体的制备与鉴定

为制备抗弓形虫主要表膜抗原Ｐ３０单克隆抗体并进行鉴定,进而为弓形虫病诊断、抗原的提纯及亚单位疫苗的制备等提供可靠依据。用弓形虫速殖子膜蛋白为免疫原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合,筛选出能够稳定分泌高滴度抗Ｐ３０单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并测定单克隆抗体免疫球蛋白亚类和抗体效价,用ＩＦＡＴ进行单抗识别的抗原定位,并通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ分析鉴定。结果获得了两株抗Ｐ３０抗原的杂交瘤细胞株Ｅ３和Ｇ２,其分泌的抗体与肺孢子虫、隐孢子虫等抗原均不发生交叉反应。２株单抗均属ＩｇＧ１亚类,且识别的抗原定位于速殖子表膜。结果表明,制备的抗Ｐ３０抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和特异性的单克隆抗体。     

抗弓形虫单克隆抗体的制备鉴定及应用

目的制备抗弓形虫全抗原、天然P30、重组P30的单克隆抗体（McAb），为抗原提纯、弓形虫病诊断及亚单位疫苗的研制奠定基础。方法用弓形虫全抗原、天然P30、重组P30分别免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选稳定分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株。用ELISA法测定McAb亚类和效价；通过SDS—PAGE和Western blot进行特异性鉴定;Giemsa染色观察杂交瘤细胞的染色体数目；利用电镜及IFAT观察McAb对弓形虫的杀伤作用及其作用位点。结果筛选出3株（4810、283、1H6）特异性较好的杂交瘤细胞株。Western blot结果显示，283、1H6产生的MeAb与弓形虫全抗原的阳性反应带均在30kDa处，4810反应带主要在22kDa处；283，1H6，4810MeAb的效价（ELISA）分别为：1：102400、1：51200、1：12800；283、1H6为IgM，4810为IgG2b；3株细胞的染色体数均在100条以上。电镜观察到McAb作用后的弓形虫虫体聚集、肿胀，表面出现缺口和空洞，虫体变形破碎、膜变厚。抗弓形虫全抗原及天然P30的McAb能准确识别重组体pET-30a—ROP2、pET-30a-P30的表达蛋白。结论抗弓形虫全抗原、P30抗原的McAb均对弓形虫具有明显的杀伤作用，能准确识别P30抗原，可应用于弓形虫病诊断、抗原鉴定及亚单位疫苗的研制。     

抗人血管内皮细胞膜蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的研制特异性抗人血管内皮细胞膜蛋白的单克隆抗体,为深入研究血管内皮细胞的功能及血管内皮细胞与疾病的关系提供基础。方法以血管内皮细胞株为免疫原直接免疫Balb/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术,通过细胞酶联免疫吸附试验筛选分泌抗人血管内皮细胞膜蛋白的特异性单抗的阳性克隆后,将杂交瘤细胞株腹腔注射Balb/c小鼠诱生腹水。腹水中的单抗用蛋白质G琼脂糖凝胶-4B柱亲和层析纯化后,采用酶联免疫吸附试验、流式细胞术、免疫组织化学染色法及免疫印迹法对其特异性进行鉴定。结果获得了一株可稳定分泌抗人血管内皮细胞膜蛋白单抗的杂交瘤细胞株。特异性单抗NH-2亚型为IgG1,腹水NH-2效价为1×10-6,含量为18.82g/L。NH-2与人血管内皮细胞株和原代培养的人脐静脉内皮细胞均有特异性结合,并可识别细胞裂解液还原条件下相对分子量为40kDa左右的蛋白多肽。NH-2对相应抗原具有高度的细胞特异性及组织特异性,在体内与正常组织的交叉反应少。结论成功制备了抗人血管内皮细胞膜蛋白的单抗,在血管内皮细胞的生物学功能及临床意义研究方面将具有潜在的应用价值。     

抗旋毛虫肌幼虫ES抗原IgY的制备及鉴定

目的制备抗旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(excretory-secretory,ES)抗原的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),测定其效价及用于检测抗原的敏感性。方法 4只24w龄罗曼母鸡用旋毛虫肌幼虫ES抗原经大腿外侧与胸部肌肉免疫4次(首次剂量为500μg/只,加强剂量为250μg/只),每次间隔10d。取免疫前和首次免疫后42d的鸡蛋卵黄,用水稀释法提取IgY,考马斯亮蓝法测定蛋白含量,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blot)及间接荧光抗体试验(IFAT)对IgY进行分析,ELISA检测纯化后IgY的效价及检测抗原的敏感性。结果罗曼鸡经ES抗原免疫后,每枚鸡蛋经提纯后均可得到约70mg抗体,SDS-PAGE表明纯化的IgY有2条主要蛋白带,分子量为67kDa、23kDa,Western blot与IFAT发现提纯的IgY可识别肌幼虫虫体与ES抗原。IgY的抗体效价为1∶107,IgY-夹心ELISA检测旋毛虫抗原的敏感性为1.17ng/mL。结论制备的抗旋毛虫ES抗原的IgY具有较高的效价与敏感性。