人体囊虫病发病过程中IgE和IgG介导的免疫反应

本文对３５例混合型囊虫病患者的血清进行了多项有关ＩｇＥ和ＩｇＧ介导的免疫反应指标的检测。实验结果显示，患者的总ＩｇＥ水平（２．４０±１．４０ｍｇ／Ｌ）、特异性ＩｇＥ的阳性率（８８．５７％）、组织胺含量（５．３０±２．４０μｇ／ｍｌ）、间接非特异性肥大细胞脱颗粒的阳性率（８８．５７％）、间接特异性肥大细胞脱颗粒的阳性率（４２．８５％）、总ＩｇＧ水平（１８．２３±６．４５ｇ／Ｌ）和特异性ＩｇＧ的阳性率（９１．４３％）均非常显著地高于正常对照组相应指标的检测结果；而患者血清中Ｃ３水平（１３４２．５０±４６７．９０ｍｇ／Ｌ）却明显低于献血员的测定值。上述结果说明，囊虫的可溶性抗原能够强有力地诱导Ｂ淋巴细胞产生ＩｇＥ和ＩｇＧ，从而诱发这两种抗体介导的免疫反应。     

弓形虫病诊断方法的对比研究

应用５种不同方法测定了６例弓形虫病人不同病期的血清标本。用ＩＨＡＴ和ＩＦＡＴ测定弓形虫总免疫球蛋白，ＥＨＡＴ在发病后第３周的２份血清标本中有１份已呈阳性，１４－１７周达高峰。滴度升高非常明显；ＩＦＡＴ第３周的标本都呈阳性；１７－２４周达高峰。用ＩｇＧ－ＥＬＩＳＡ和ＩｇＭ－ＥＬＩＳＡ，ＩｇＭ－ＩＦＡＴ分别测定抗弓形虫特异性抗体ＩｇＧ和ＩｇＭ＜ＩｇＧ－ＥＬＩＳ从第６周呈阳性，随病情延长，滴度明显升高，     

弓形虫病诊断方法的对比研究

应用５种不同方法测定了６例弓形虫病人不同病期的血清标木。用ＩＨＡＴ和ＩＦＡＴ测定抗弓形虫总免疫球蛋白，ＩＨＡＴ在发病后第３周的２份血清标本中有１份已呈阳性，１４～１７周达高峰。滴度升高非常明显；ＩＦＡＴ第３周的标本都呈阳性，１７～２４周达高峰。用ＩｇＧ－ＥＬＩＳＡ和ＩｇＭ－ＥＬＩＳＡ，ＩｇＭ－ＩＦＡＴ分别测定抗弓形虫特异性抗体ＩｇＧ和ＩｇＭ，ＩｇＧ－ＥＬＩＳＡ从第６周呈阳性，随病情延长，滴度明显升高；ＩｇＭ－ＥＬＩＳＡ两份第３周的标本都呈阳性，至少第１７周仍保持较高水平，其中１人第２４周的标本仍呈阳性；但ＩｇＭ－ＩＦＡＴ仅２例（２／６）呈阳性且滴度不很高，在较短时间内就转阴。结果表明：病人的抗体类型相似；ＩｇＧ－ＥＬＩＳＡ，ＩｇＭ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦＡＴ敏感特异，ＩＨＡＴ简便、快速；高滴度特异性ＩｇＧ易掩盖ＩｇＭ－ＩＦＡＴ；ＩｇＭ－ＥＬＩＳＡ可为早期诊断提供依据。     

弓形虫病IgM免疫吸附凝集试验（ISAGA）的建立

目的∶建立检测弓形虫 Ｉｇ Ｍ 抗体的免疫吸附凝集试验 （ Ｉ Ｓ Ａ Ｇ Ａ） 。方法∶ Ｕ 型微孔板以适宜浓度的羊抗人 Ｉｇ Ｍ 抗体包被， 用１ ％ 牛血清白蛋白封闭， 洗板后加入待测血清， 在３７ ℃孵育后洗涤， 加入弓形虫（ Ｒ Ｈ 株） 速殖子抗原悬液， 置３７ ℃过夜后观察结果。将其与丹麦的 Ｉ Ｓ Ａ Ｇ Ａ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测的结果以及玻片 Ｅ Ｉ Ａ 检测的结果作比较。结果∶本法与丹麦的试验检测丹麦孕妇４４ 份血清， 总符合率为９３２ ％ ；与玻片 Ｅ Ｉ Ａ 检测丹麦和上海孕妇６７ 份血清， 总符合率为９２５ ％ ， 两法的滴度之间明显相关 （γ＝ ０５８９ ， Ｐ＜ ０００１） ， Ｉ Ｓ Ａ Ｇ Ａ 滴度较玻片 Ｅ Ｉ Ａ 高１８ 倍； 用 Ｗ Ｈ Ｏ 国际生物标准化实验室提供的标准的抗弓形虫人血清定量测得其灵敏度为００８ Ｉ Ｕ／ ｍｌ。结论∶ Ｉｇ Ｍ Ｉ Ｓ Ａ Ｇ Ａ 具有敏感性、特异性高， 操作简便等优点， 不仅可作为弓形虫急性感染和慢性感染活动期的一种检测手段， 而且适用于弓形虫感染调查的大规模筛选。     

免疫诊断技术用于姜片虫病流行病学调查的研究──Ⅱ.快速SPA-ELISA用于实验诊断及疗效考核

用姜片虫成虫纯化抗原（ＰＡＡ，１μｇ／ｍｌ）预包被的ＰＳ微量反应板作快速ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ。以本法与常规ＥＬＩＳＡ平行检测姜片虫病人滤纸干滴血４０份，前者的阳性率为９５．０％，后者为９２．５％，二者无显著性差异（Ｐ＞０．１）。以本法检测流行区献血员及非流行区健康检查者血清各４０份，假阳性率分别为１０％（４／４０）和５％（２／４０）；与日本血吸虫病和长膜壳绦虫病患者血清的交叉反应率分别为１２．５％（５／４０）和２５．０％（１／４）；与肺吸虫病和肝吸虫病患者血清之间未出现交叉反应。检测８１例姜片虫病患者治疗前后不同时间血清抗体的变化，提示驱虫后血清特异性抗体下降较快：在治疗后３个月，阳性反应阴转率为８６．６７％（６５／７５）；半年后的阴转率高达９６．００％（７２／７５）。研究结果表明：快速ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ不仅敏感性高、特异性较强，而且具有考核疗效的价值。同常规ＥＬＩＳＡ相比，本法反应快速，整个试验过程仅需１小时左右。     

Dot-IGSS,Dot-IGS和Dot-ELISA检测脑脊液中循环抗原诊断脑囊虫病的比较研究

应用自制的直径２０ｎｍ的胶体金标记ＧＡＲ－ＩｇＧ，以斑点免疫金银染色法（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）、斑点免疫金染色法（Ｄｏｔ－ＩＧＳ）和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ三种方法，同时检测９９例脑囊虫病人脑脊液（ＣＳＦ）中循环抗原（ＣＡｇ），阳性率分别为９４．９５％、９３．９４％和９２．９３％。检测５１份非囊虫病患者和６２例其他脑部疾病患者的ＣＳＦ，三种方法均为阴性。诊断指数分别为１９４．９５％、１９３．９４％和１９２．９３％。检出ＣＡＳ的最小量Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ为２４４ｎｇ／ｍｌ．Ｄｏｔ－ＩＧＳ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ为４８８ｎｇ／ｍｌ。试验表明三种方法诊断脑囊虫病具有敏感性高、特异性强、重复性好和方法简便易行．有希望用于脑囊虫病的临床诊断。     

成虫童虫冰冻切片抗原间接荧光抗体试验和免疫酶染色试验诊断肺吸虫病

以肺吸虫成虫童虫冰冻切片抗原片做间接荧光抗体试验（ＩＦＡＴ）及免疫酶染色试验（ＩＥＳＴ）对比检测９４份肺吸虫感染者和４０例正常健康人血清,两法的阳性率分别为９３．６％、９５．７％和８９．１％、９３．６％,假阳性率均为０。ＩＦＡＴ和ＩＥＳＴ对比检测３４份血吸虫病人血清,３５份华支睾吸虫病人血清和３０份肺结核病人血清。ＩＦＡＴ出现的交叉反应率为１４．７％、５．７％、０和１４．７％、８．６％、０。ＩＥＳＴ出现的交叉反应率为５．９％、０、０和８．８％、５．７％、０。结果表明两法用于肺吸虫病的诊断均有较高的敏感性和特异性,而且抗原定位好,ＩＥＳＴ不需荧光显微镜或荧光设备,较易推广应用     

冠心病患者血清免疫球蛋白E水平的动态观察

采用酶联免疫吸附试验测定１３０例冠心病患者血清免疫球蛋白Ｅ（ＩｇＥ）含量。结果显示：急性心肌梗死（ＡＭＩ）组和不稳定心绞痛（ＵＳＡＰ）组显著高于稳定性心绞痛（ＳＡＰ）组和对照组（Ｐ＜０．００１）；ＡＭＩ组显著高于ＵＳＡＰ组和对照组（Ｐ＜０．０１）；而ＳＡＰ组与对照组无显著差异（Ｐ＞０．０５）。ＡＭＩ组发病后血清ＩｇＥ水平逐渐升高，至发病后第７天达高峰，以后逐渐下降，至２１天时降至初始水平。心肌梗死后无并发症组血清ＩｇＥ水平较有严重并发症组显著升高（Ｐ＜０．００１），但二者的动态波动规律一致。     

血管紧张素转化酶基因的插入/缺失多态性与其血清水平及心肌梗塞的关系

旨在探讨中国人中血管紧张素转化酶（ＡＣＥ）基因的插入／缺失（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ，Ｉ／Ｄ）多态性与血清中ＡＣＥ水平及心肌梗塞的关系。心肌梗塞患者１０３例；正常对照９６例。位于ＡＣＥ基因第１６内含子的Ｉ／Ｄ多态性经ＰＣＲ扩增可分为三种基因型：纯合缺失型（ＤＤ），纯合插入型（Ｉ），杂合子型（ＩＤ）。血清ＡＣＥ水平在ＤＤ、ＤＩ、Ｉ型分别为２８．３±９．９Ｕ／ｍｌ、２４．５±８．４Ｕ／ｍｌ、１９．２±４．８Ｕ／ｍｌ，即ＤＤ＞ＤＩ＞ⅠⅠ。结果显示，心肌梗塞患者的Ｄ等位基因的频率（０．６１）高于正常对照组（０．４８），Ｐ＜０．０１。认为：ＡＣＥ基因的缺失多态性与中国人血清ＡＣＥ水平及心肌梗塞相关。     

安徽石台县肺吸虫感染情况调查

目的 了解石台县肺吸虫流行现状及易感因素，为制订相应防治措施提供依据。 方法 选择石台县仙寓乡作为调查点，采集肺吸虫第二中间宿主溪蟹，采用捣碎沉淀法检测其囊蚴；采用随机整群抽样的方法，采集当地 ６ ～ ７５ 岁调查对象末梢血，利用酶联免疫吸附试验（ ＥＬＩＳＡ） 法检测血清中肺吸虫特异抗体 ＩｇＭ 和 ＩｇＧ；同时进行肺吸虫易感因素的问卷调查，分析其感染的危险因素。 结果 共检测溪蟹 ９８ 只，囊蚴感染率为 １３． ２７％ （１３ ／９８），感染度为 ０． ０６６ 个 ／ｇ，感染指数为 ０． ００８ ９；采集 ３１９ 份当地调查对象末梢血，血清学检测肺吸虫抗体阳性率为 ６． ５８％ （２１ ／３１９）；单因素分析结果表明，食用溪蟹以及喝生水者抗体阳性率增高，差异具有统计学意义（χ２ ＝ ４． ４８７、８． ０５３，Ｐ ＜ ０． ０５）。 结论 石台县为肺吸虫病历史流行区，目前部分人群仍存在感染，食用溪蟹及饮用生水者易感染肺吸虫。 加强肺吸虫病防治知识的宣传教育工作仍是预防和控制当地肺吸虫病的有效措施。     

华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原的免疫印迹分析

目的 寻找华支睾吸虫成虫抗原中具有特异性诊断价值的抗原组分。方法 应用SDS—PAGE和Westernblot分析华支睾吸虫成虫未脱脂、脱脂的可溶性抗原蛋白组分的血清学反应特征。结果 未脱脂成虫抗原有14条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应，其中分子质量单位为180、170、100、67、41、37、35、32、26ku是主带，180、170、37、35ku条带还可与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应。脱脂成虫抗原有10条蛋白带可与华支睾吸虫病病人血清反应，其中分子质量单位为180、100、67、37、35、24、20ku是主带，此外，180ku带可与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清发生交叉反应，78ku带可以与血吸虫病病人血清发生交叉反应。结论 华支睾吸虫成虫抗原经脱脂处理后可减少与日本血吸虫病和卫氏并殖吸虫病病人血清交叉反应的蛋白组分数量。华支睾吸虫未脱脂和脱脂成虫抗原中主要的特异性抗原组分分别是100、67、41、32、26ku和100、67、37、35、24、20ku，这些组分抗原可用于华支睾吸虫病的免疫诊断。     

日本血吸虫31/32kDa分子抗原快速诊断试剂盒的研制与现场应用

目的基于纯化的日本血吸虫31／32kDa分子抗原,建立一种敏感、特异、简便、快速诊断血吸虫病的试剂盒。方法采用Chappell方法分离纯化Sj31／32kDa抗原并建立快速ELISA,检测急、慢性血吸虫病人,并以肺吸虫病人、肝吸虫病人及正常人血清作为平行对照。结果血吸虫病人457例,阳性检出率为94．3％,67例肺吸虫病人及76例肝吸虫病人血清均未出现明显交叉反应,正常人群假阳性率为1％。结论提示采用纯化的优势诊断抗原分子建立的快速诊断试剂盒有较好的现场应用潜能,且具有简便、快速、无需特殊设备等优点,值得推广应用。     

应用特异单克隆抗体测定猪囊尾蚴病人血清和脑脊液中的循环抗原

我们应用特异的抗猪囊尾蚴抗原的单克隆抗体(CCy1),建立了单克隆抗体抑制性ELISA方法以测定囊尾蚴病患者的循环抗原(CAg)。测定灵敏度为ng水平。83例囊尾蚴病患者血清的CAg阳性率为71.1％。其范围为0.16-128μg/ml。对41例囊尾蚴病患者,同时测定了血清和脑脊液中的CAg。单项或两项阳性的总阳性率为90.2％。114例正常人血清、107例其它寄生虫病患者(包括30例包虫病患者)的血清及10例非寄生虫病患者的脑脊液的CAg量均为零。有23例囊尾蚴病患者治疗半年到1年后,有21例抗原浓度为零。另2例分别为0.64μg/ml和1.6μg/ml。表明测定CAg不仅可以确定活动性囊尾蚴感染,而且可考核疗效。     

快速微量Dot—IGSS检测日本血吸虫病人血清中抗体的研究

本文用日本血吸虫可溶性虫卵抗原点于微孔滤膜上,以快速微量斑点免疫金银染色法(Rapid microvolume Dot-IGSS,Rm Dot-IGSS)检测血吸虫病患者血清中相应抗体,并与Dot-IGSS相比较,检测血吸虫病人血清69份,两法阳性率均为100％。检测正常人血清50份,两法阴性率均为100％。检测华支睾吸虫病人血清10份,两法均未出现交叉反应。检测肺吸虫病人血清10份,Rm Dot-IGSS未出现交叉反应,Dot-IGSS有1例出现交叉反应。     

RT-PCR扩增Sj26、Sj32和Sj14-3-3抗原编码基因诊断急性日本血吸虫病的初步研究

目的探讨RT PCR扩增Sj26、Sj32和Sj14 3 3抗原编码基因用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法从急性日本血吸虫病患者血清中提取总RNA,利用RT PCR方法扩增Sj26、Sj32和Sj14 3 3抗原编码基因,用1.2%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定,同时以华支睾吸虫病患者血清、卫氏并殖吸虫病患者血清和正常人血清总RNA作为对照。结果50份急性日本血吸虫病血清均通过RT PCR扩增出了400bp的Sj14 3 3抗原编码基因片段,但未扩增出676bp的Sj26和1 270bp的Sj32抗原编码基因片段;对照组呈阴性反应。RT PCR扩增Sj14 3 3抗原编码基因片段敏感性和特异性均为100%,与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清未见交叉反应。结论RT PCR扩增Sj14 3 3抗原编码基因可用于急性日本血吸虫病的基因诊断。     

Parasite-specific IgE and IgG levels in the serum and pleural effusion of paragonimiasis westermani patients.

In seven patients with paragonimiasis westermani, parasite-specific IgE and IgG levels in sera and pleural effusion were determined by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The sensitivity to adult excretory-secretory (E-S) antigen was compared with the sensitivity to whole worm extract antigen, and the former was more sensitive in both an IgE-ELISA and IgG-ELISA. Both parasite-specific IgE and IgG could be detected by ELISA at levels much higher than those in control subjects using E-S antigen. When specific IgE and IgG levels in sera and pleural effusion of individual patients were compared, the latter had higher values. The difference between levels of specific IgE in pleural effusion and serum did not correlate with that of specific IgG. These results indicate that specific IgE and IgG antibodies form locally, i.e., in the lung, and that pleural effusions from patients with paragonimiasis are more suitable than serum for immunodiagnosis.     

Dot—ELISA在脑囊虫病诊断中的应用

本文报告用Dot-ELISA法检测脑囊虫病患者的血清和脑脊液的抗体。108例确诊为脑囊虫病患者的血清阳性率为81.6～96.1％,14例确诊为脑囊虫病患者脑脊液的阳性率为85.7～100％。54例正常人血清在1:40稀释度以上,均未出现假阳性;与并殖吸虫病患者及华支睾吸虫病患者血清均未出现交叉反应;与包虫病及脑血管疾病患者血清有一定的交叉反应。     

卫氏并殖吸虫TPx基因的克隆、表达和免疫学诊断价值

目的免疫筛选卫氏并殖吸虫成虫c DNA表达文库,克隆并表达卫氏并殖吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx),初步评价其免疫诊断价值。方法用卫氏并殖吸虫病患者的混合血清筛选卫氏并殖吸虫成虫λZAP c DNA表达文库,取阳性噬菌体进行克隆、测序和序列比对分析。将TPx基因全长片段和前端截短片段分别克隆至原核表达质粒pET28a (+)中,构建r Pw TPx (全长型)和r Pw TPx1 (截短型)表达载体。构建的重组蛋白经1 mmol/L的异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。使用蛋白抽提剂、溶菌酶和核酸酶裂解表达细菌,用组氨酸标签亲和纯化柱(Ni-NTA树脂)纯化r Pw TPx和r Pw TPx1, SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况。以r Pw TPx、r Pw TPx1和粗抗原作为检测抗原,间接ELISA法检测36份卫氏并殖吸虫病、 15份华支睾吸虫病、 15份日本血吸虫病、 15份片形吸虫病和15份猪囊尾蚴病的患者血清,以及36份健康人血清,评价该重组蛋白的免疫诊断价值。以健康人血清对照组的平均值加上4个标准差作为阳性判断值。所有数据均采用SAS 9.2软件进行统计学分析。结果克隆的卫氏并殖吸虫TPx基因,经原核表达、纯化,获得其可溶性重组蛋白r Pw TPx和r Pw TPx1,相对分子质量(Mr)分别为25 000和22 000。以r Pw TPx作为检测抗原的ELISA检测结果显示,卫氏并殖吸虫病患者、健康者、华支睾吸虫病患者、日本血吸虫病患者、片形吸虫病患者和猪囊尾蚴病患者血清组的吸光度(A450值)分别为0.150±0.092、 0.036±0.014、 0.043±0.019、 0.047±0.013、 0.060±0.022和0.048±0.021。卫氏并殖吸虫病患者血清阳性率为58.3%(21/36), 36份健康人血清、 15份华支睾吸虫病患者血清、 15份日本血吸虫病患者血清、 15份猪囊尾蚴病患者血清均未检出阳性,15份片形吸虫病患者血清假阳性为2/15。以r Pw TPx1作为检测抗原ELISA检测结果则为0.144±0.092、 0.022±0.009、 0.027±0.015、 0.033±0.022、 0.036±0.015和0.032±0.018。卫氏并殖吸虫病患者血清阳性率为88.9%(32/36),健康人血清未检出阳性,15份华支睾吸虫病患者血清仅1份存在交叉反应,15份日本血吸虫病患者血清假阳性为3份,15份片形吸虫病患者和15份猪囊尾蚴病患者血清假阳性均为2份。重组蛋白r Pw TPx的ELISA检测敏感性为58.3%,特异性为97.9%,总符合率为87.1%;r Pw TPx1则分别为88.9%、 91.7%、 90.9%。r Pw TPx1敏感性高于r Pw TPx (P <0.05)。以成虫粗抗原为检测抗原的ELISA检测结果显示,36份健康者血清A450值为0.012,标准差为0.006。敏感性为100%,特异性为83.3%,总符合率为87.9%,与r Pw TPx-ELISA和r Pw TPx1-ELISA检测的总符合率差异无统计学意义(P> 0.05)。结论筛选并克隆了卫氏并殖吸虫TPx基因,表达并纯化全长型和截短型两种重组TPx抗原,构建的全长型和截短型重组TPx抗原作为人体卫氏并殖吸虫病的免疫诊断抗原具有一定的诊断意义。     

Total IgE detection in paired cerebrospinal fluid and serum samples from patients with neurocysticercosis

Neurocysticercosis (NC), the presence of Taenia solium metacestodes in tissues, is the most frequent and severe parasitic infection of the central nervous system. We investigated the presence of total IgE by an automated chemiluminescence assay in 53 paired cerebrospinal fluid (CSF) and serum samples from patients with NC (P) and in 40 CSF samples from individuals with other neurological disorders as the control group (C). Total IgE concentration ranged from 1.2 to 6.6 IU/ml (mean = 1.4 IU/ml, standard deviation-sd = 1.1 IU/ml) in 28.3% of CSF samples from the P group, a value significantly higher than for the C group ( pound1.0 IU/ml). The serum samples from the P group showed concentrations ranging from 1. 0 to 2330.0 IU/ml (mean = 224.1 IU/ml, sd = 452.1 IU/ml), which were higher than the normal value cited by the manufacturer (<100.0 IU/ml) in 32.1% of the samples. A significant difference was observed in CSF samples from the P and C groups (p = 0.005) and in serum samples from the P group compared to the normal value (p = 0. 005), with sera showing more frequent abnormal results.