MMP-12异常表达对放射性肺损伤大鼠肺内成纤维细胞转化的影响

目的 观察放射性肺损伤过程中基质金属蛋白酶12(MMP-12)过表达对肺成纤维细胞转化的作用.方法 32只雄性Wistar大鼠,体重250～280g,随机分为正常对照组(n=8)和照射组(n=24).照射组用20Gy60Co γ射线进行全胸照射,分别于照射后1、2、4周行肺组织取材,每时间点8只.应用明胶酶谱法检测MMP-12酶活性变化,组织特殊染色法观察肺泡壁弹力纤维降解情况,透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞与肺间质细胞间的"信号交流"(cross talking)现象,ELISA法检测肺组织中TGF-β1含量,免疫组化检测肺组织a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)表达情况.结果 MMP-12酶活性在照射后1周开始增高,至照射后4周时有所下降;肺泡壁基底膜弹力纤维照射后1周开始出现降解断裂,4周时最为严重;肺组织TGF-β1含量和a-SMA免疫组化阳性信号在1～4周内随照后时间延长而逐渐升高.电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞与肺间质细胞间出现"信号交流"现象.结论 照射后肺组织MMP-12酶活性增高,可能通过降解基底膜弹力纤维促进成纤维细胞转化,启动肺纤维化的发生.     

巨噬细胞金属弹力蛋白酶表达在放射性肺损伤形成中的变化特点及意义

目的 观察放射性肺损伤过程中基质金属蛋白酶12(MMP-12,又称巨噬细胞金属弹力蛋白酶)表达的动态变化,探讨MMP-12在放射性肺损伤早期肺组织重建中的作用.方法 雄性Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组(不接受照射),照射后1、2、4周组,每组6只.采用60Co γ射线(20Gy)对大鼠进行全肺照射,按照实验分组分别于照射后1、2、4周行肺组织取材.实时荧光定量FCR法检测MMP-12基因表达;Western blotting分析蛋白的表达变化;酶谱分析检测其酶活性;免疫组化观察MMP-12的组织分布;组织特殊染色法观察弹力纤维降解情况.结果 MMP-12 mRNA表达在照射后1周升高,2周下降,4周达高峰;蛋白表达于2周时明显升高,4周略微下降.MMP-12主要表达在肺泡间隔的巨噬细胞和被激活的成纤维细胞中.随着照射后时间的延长,肺组织损伤程度逐渐加重,肺泡壁与间隔增厚,肺泡结构遭到破坏,部分肺泡腔塌陷消失,肺泡基底膜内弹力纤维多发性断裂,呈不规则节段性线条散在分布.结论 60Co γ射线可以刺激MMP-12基因和蛋白的表达,说明MMP-12可能在放射性肺损伤早期起着十分重要的作用,推测可能通过降解弹力纤维,破坏基底膜正常结构,从而启动肺组织重建.     

小型猪右胸单次大剂量γ射线照射后的肺损伤研究

目的 探讨巴马小型猪经右胸15 Gy的单次照射后肺泡Ⅱ型上皮细胞中细胞因子及蛋白的变化和可能的作用。方法 将40只雄性巴马小型猪按随机数字表法分为健康对照组(不予照射)和照射组(⁶⁰Co γ射线进行右胸15 Gy单次照射)。照射后4、8、12、24周,从两组中分别取5只采集右侧肺组织,行HE染色观察肺组织病理变化;免疫组织化学染色观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA蛋白)表达;免疫印迹检测肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)、转化生长因子β1(TGF-β1)、波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达;免疫荧光双染观察α-SMA和SP-A的共表达。结果 照射后的4、8、12和24周,照射组中α-SMA、TGF-β1和Vimentin的蛋白表达较健康对照组明显升高(α-SMA:t=2.46~3.26,P<0.05;TGF-β1:t=2.96~3.52,P<0.05;Vimentin:t=3.24~5.05,P<0.05);而SP-A和E-cadherin的蛋白表达低于健康对照组(SP-A:t=3.62~4.65,P<0.05;E-cadherin:t=2.53~4.15,P<0.05)。照射后8周,照射组可见肺泡Ⅱ型上皮细胞的α-SMA和SP-A蛋白共染,而健康对照组中未见。结论 E-cadherin、TGF-β1和SP-A可以作为放射性肺损伤发生的预测指标,而肺泡Ⅱ型上皮细胞可通过向间质细胞转化参与放射性肺损伤的发生发展。     

雾化吸入γ-干扰素对放射性肺损伤重建的拮抗作用

目的 观察超声雾化吸入γ-干扰素(IFN-γ)对大鼠放射性肺损伤早期组织重建的拮抗作用,并初步探讨其作用机制。方法 将动物分为照射对照组和照射+IFN-γ拮抗组。于照前3d每日雾化吸入IFN-γ,分别于照后10、20和30d肺组织取材,制备石蜡切片,进行苏木素伊红(HE)、天狼猩红和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色;Western blot检测Ⅳ型胶原合成变化;ELISA检测MMP-2、-9和TIMP-1含量变化。结果 照射＋IFN-γ组与照射对照组比较,肺泡隔增宽程度明显减轻,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成和α-SMA表达明显减少;照射后Ⅳ型胶原表达呈上升趋势,但IFN-γ吸入组较对照组为低;吸入IFN-γ10d可降低MMP-2和TIMP-1表达,而MMP-9表达升高;吸入30d 三者表达均下降。结论 IFN-γ对辐射引起的肺损伤具有明显的治疗作用,其可能的作用机制是IFN-γ降低TIMP-1表达,解除对MMP-9的抑制,进而降解Ⅳ型胶原,拮抗辐射引起的肺损伤后重建。     

吡啡尼酮对抗放射所致肺成纤维细胞转化的作用研究

目的 探讨放射性肺损伤过程中吡啡尼酮对抗肺成纤维细胞(Fb)向肌成纤维细胞(MFb)转化的作用。方法 将Wistar大鼠随机分为正常对照组、单纯照射组和照射+给药组,照射前2 d开始灌胃给予吡啡尼酮,用20 Gy⁶⁰Co γ射线进行全胸照射,于照射后2周应用图像分析测定肺组织放射性炎性反应范围的面密度;计算肺组织湿/干重比;免疫组化检测肺组织成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。应用免疫细胞化学和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分别检测人肺成纤维细胞(HLF)表达TGF-β₁和细胞异常增生的程度。结果 和单纯照射组相比,照射+给药组大鼠肺组织炎性病变区面密度、湿/干重比和α-SMA含量较照射组分别减少14.0%、3.82%和 52.8%。吡啡尼酮可抑制照射促进HLF表达TGF-β₁和细胞增生的作用,且此种抑制作用和给药剂量呈明显的依赖关系。 结论 吡啡尼酮对放射性肺损伤早期的间质性肺炎具有明显的对抗作用,并且可显著抑制肺Fb异常增生、TGF-β₁表达和向肌成纤维细胞方向转化,有利于放射性肺纤维化的有效防治。     

痰热清注射液对大鼠急性放射性肺损伤的防治

目的 观察痰热清对大鼠急性放射性肺损伤的防治作用。方法60只雌性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、痰热清中药治疗组(中药组)和地塞米松联合头孢氨苄西药治疗组(西药组),每组动物均为15只。用6 MV X射线直线加速器对大鼠双肺进行单次照射25 Gy。分别于照射后2、4和6周3个时间点,每组各随机取5只大鼠活体观察和取材。取动脉血检测细胞因子;测定肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞计数;取右中肺组织,以测定羟脯氨酸含量;取右上肺组织切片,行HE染色,光镜观察病理改变。结果模型组大鼠肺组织于照射后2周出现放射性肺炎改变,第6周时肺泡间隔增厚明显,肺泡腔纤维素渗出。除空白组外,中药组大鼠肺组织放射性肺炎反应最轻,BALF中性粒细胞数相对较低,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和肺组织羟脯氨酸含量均较模型组低。结论痰热清可抑制致炎因子和致纤维化因子的表达,减轻急性放射性肺损伤的炎性反应,延缓放射性肺纤维化的进展,对急性放射性肺损伤具有防治作用。     

放射性肺损伤早期肺组织重建机制的探讨

目的 探讨Ⅳ型胶原和MMP-9在放射性肺损伤早期肺组织重建中的作用。方法 用噻唑蓝(MTT)检测1～10 Gy ⁶⁰Co γ 射线照射对人肺成纤维细胞(Fb)增殖的影响;用酶联免疫吸附法测定经5和7 Gy照射后Fb中Ⅳ型胶原和MMP-9的变化;从经25 Gy照射后大鼠肺泡灌洗液中分离巨噬细胞,制备条件培养液(CMAM)并刺激肺Fb,用MTT检测对细胞增殖的影响;同时用ELISA测定对Fb合成Ⅳ型胶原和MMP-9的影响;于照射后不同时间取大鼠肺组织进行Ⅳ型胶原和MMP-9免疫组化染色。结果 1～7 Gy照射能促进肺Fb增生;5和7 Gy照射能促进Fb合成MMP-9,但不能促进Ⅳ型胶原合成;CMAM不但能促进Fb增生和MMP-9合成,也能合成和释放Ⅳ型胶原;受照后1周大鼠肺组织出现Ⅳ型胶原沉积。结论 照射能直接刺激肺Fb增生,但不能产生Ⅳ型胶原;Ⅳ型胶原的合成与照射后肺内巨噬细胞和Fb的相互作用有关,并可导致肺损伤重建的发生。     

益气活血中药对大鼠TGF-β1、TNF-α的影响

目的 探讨益气活血中药对小剂量重复照射下不同时相大鼠血清、肺组织中转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的表达,探讨其对放射性肺损伤的防治作用及作用机制。方法 66只Wistar雌性大鼠随机表法分为照射加中药组(A组)30只、单纯照射组(B组)30只、健康对照组(C组)6只。6MV直线加速器对前2组大鼠右肺进行分次照射(5 Gy/次,1次/周,累积剂量最高为30 Gy),每组各6只大鼠于照射后第4、6、8、12及26周处死,C组于第4周末处死,取血清标本进行酶联免疫吸附法(ELISA)检测,取肺组织标本进行免疫组织化学检测,观察各组大鼠不同时相血清、肺组织中TGF-β₁、TNF-α蛋白表达的动态变化。结果 B组大鼠血清、肺组织中TGF-β₁、TNF-α于照射第4周增高,第12周达高峰,第26周略下降;A组各时相大鼠血清、肺组织中TGF-β₁、TNF-α蛋白表达趋势与B组相同,但低于B组。结论 益气活血中药具有抑制TGF-β₁ 、TNF-α合成分泌的作用及减轻放射性肺损伤的作用,其机制与抑制TGF-β₁、TNF-α表达有关。     

肿节风对小型猪放射性肺损伤的防护作用研究

目的 探讨肿节风对⁶⁰Co γ射线照射后的小型猪放射性肺损伤的影响及其机制。方法 将60只小型猪随机数字表法分为3组,每组20只,空白对照组,不加任何处理;单纯照射组,⁶⁰Co γ 射线照射15 Gy;肿节风干预组,于15 Gy照射前服用肿节风配方颗粒（0.3 g/kg）。于照后4、8、12和24周,观察小型猪的呼吸频率和体重,取右肺组织行HE、Masson染色检查,用免疫组织化学法检测肺组织TGF-β₁和TNF-α的表达,并检测其羟脯氨酸（HP）含量的变化。结果 照后4、8、12和24周,单纯照射组的呼吸频率、肺系数、羟脯氨酸含量随时间的延长呈递增趋势,均明显高于其他两组（F=21.035、46.014、32.610,P<0.05）。照后4和8周,肿节风干预组与空白对照组的呼吸频率、肺系数、羟脯氨酸相近（F=0.055、2.456、5.581,P>0.05）,而至12和24周,肿节风干预组各项指标明显低于单纯照射组（F=91.897、93.149、83.487,P<0.05）。肺组织病理学观察显示,在照后4和8周,肿节风干预组肺组织无明显炎症反应及纤维化表现,在12和24周纤维化程度明显低于单纯照射组。肿节风干预组在第4和第8周肺组织中的TGF-β₁和TNF-α为阴性,在12和24周为低表达,均明显弱于单纯照射组。结论 肿节风配方颗粒对小型猪放射性肺损伤具有一定保护作用,其机制可能是肿节风对TNF-α和HP的表达抑制有关。     

间充质干细胞对延缓大鼠放射性肺纤维化进展的作用研究

目的 评价人脂肪来源间充质干细胞对大鼠放射性肺纤维化进展的抑制作用。方法 选用雄性SD大鼠,共48只。采用随机数字表法从中选出36只大鼠,给予右侧全肺15 Gy X射线照射。造模结束后2 h,随机数字表法将受照大鼠分为3组:PBS对照组、成纤维细胞治疗组和干细胞治疗组,每组12只,剩余12只未受照大鼠作为健康对照组。于照射后第24周分别对受照右肺进行影像学及病理学检测。后者包括HE染色,Masson染色,免疫组织化学染色(α-SMA及TGF-β1)。分别获取受照大鼠的外周血及支气管-肺泡灌洗液样本,采用ELISA法检测样本中的肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量。采用实时荧光定量PCR法对受照肺组织内Ⅰ型胶原-α1(Collagen Ⅰ-α1)及 Ⅲ型胶原-α1(Collagen Ⅲ-α1)基因的表达量进行检测。结果 影像学检查结果显示,受照肺在造模后第24周出现高密度影,病变以右下叶最为明显。PBS对照组及成纤维细胞治疗组的大鼠右肺下叶受损程度较干细胞治疗组重。病理结果提示,PBS对照组及成纤维细胞治疗组的大鼠右肺下叶结构被破坏,表现为肺泡塌陷及肺泡间隔增宽。两组大鼠右肺下叶细胞外基质沉积明显;组织内Collagen Ⅰ-α1及Collagen Ⅲ-α1的表达量较干细胞治疗组提高(F=4.39、7.73, P<0.05)。PBS对照组及成纤维细胞治疗组的大鼠右肺下叶α-SMA及TGF-β1的表达明显。ELISA结果提示,干细胞治疗组的大鼠血清中及支气管-肺泡灌洗液中HGF的浓度显著高于其余两组(F=14.97、41.13, P<0.05);TGF-β1的浓度低于其余两组(F=172.49、62.82,P<0.05)。结论 人脂肪来源间充质干细胞能够抑制放射性肺纤维化的进展,对受照肺组织具有一定的保护作用。     

SD大鼠放射性肺纤维化模型的建立及评价

目的 建立SD大鼠放射性肺纤维化模型,探寻实验中纤维化蛋白、细胞因子等作为组织纤维化程度评价指标的可行性,为放射性肺纤维化的研究提供基础。 方法 选取体重为180~200 g的SD雄性大鼠37只,完全随机分为对照组（5只）和照射组（32只）。照射组采用X射线行右肺单次照射,照射剂量分别为13 Gy（10只）、15 Gy（10只）和17 Gy（12只）,分别于照后4个月和6个月,采用苏木精-伊红染色和马松三色染色评价大鼠肺组织纤维化程度;采用Western blot检测纤维黏连蛋白1（FN1）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在肺组织中的表达;测定肺组织中羟脯氨酸含量以评价肺组织中胶原蛋白表达水平。酶联免疫吸附测定法测定支气管肺泡灌洗液中转化生长因子β（TGF-β）、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、γ干扰素（IFN-γ）的变化。组间比较采用独立样本 t 检验。 结果 与对照组相比,照射组4~6个月后均出现肺纤维化,纤维化程度随照射剂量的增大和照射时间的增长而增加;照射组大鼠肺组织中FN1、α-SMA的蛋白表达水平较对照组升高,MMP2的蛋白表达水平较对照组降低;6个月照射组羟脯氨酸含量较对照组升高,分别从（514.19 ±282.20）μg/mg 增加至（886.13 ±145.01）、（1188.70 ±273.84）、（1700.70 ±590.95）μg/mg,且差异均有统计学意义（t=2.621、3.609、4.004,均P<0.05）;支气管肺泡灌洗液中TGF-β、白细胞介素6、TNF-α分泌量较对照组上调,差异有统计学意义（t=4.030~12.780,均P<0.05）,IFN-γ较对照组下调,差异有统计学意义（t=2.498~4.303,均P<0.05）。 结论 SD大鼠放射性肺纤维化模型构建成功。大鼠肺组织纤维蛋白含量未能反映肺组织纤维化程度,肺组织羟脯氨酸含量与支气管肺泡灌洗液中细胞因子在重度纤维化时可作为评价指标。     

中子及γ线照射小鼠肠组织中TNF-α的表达及其意义

目的 研究经中子及γ线照射后小鼠肠组织中TNF-α的表达情况及其意义.方法 350只二级雄性BALB/c小鼠,经不同剂量的中子和γ线照射,于照后6、12h及1、2、3、4、5、7、10、14、21、28天分批活杀,采用免疫组化染色等技术观察TNF-α在肠组织中的表达情况.结果 在正常肠黏膜中,TNF-α主要见于肠绒毛间质、黏膜下及淋巴组织中的巨噬细胞浆内; 2.5Gy中子照后2天内,上述阳性部位TNF-α的表达进行性减少;3～7天其在巨噬细胞及隐窝细胞胞质内的表达明显增加,5天达高峰,14天恢复至正常水平.4.0Gy、5.5Gy中子及12Gyγ线照射后4天内,TNF-α的表达进行性减少;5.5Gy γ线照后6～12h,TNF-α的表达增多,照后1天减少,2～5天增加,3天达高峰,10天恢复至正常水平.TNF-α的表达在肠黏膜损伤时减少,于损伤后恢复的早期增多.结论 中子和γ线照后肠内源性TNF-α表达具有不同的变化规律,并参与了肠放射损伤及修复的病理生理过程.     

Matrix-Metallo-Proteinases and their tissue inhibitors in radiation-induced lung injury

Purpose: Remodeling of extracellular matrix (ECM) after lung damage depends on collagen degrading Matrix-Metallo-Proteinases (MMP) and their endogenous inhibitors (Tissue-Inhibitors of Metallo-Proteinases, TIMP). Transforming growth factor (TGF)-β1 has been implicated in the pathogenesis of radiation-induced lung fibrosis upon its effects on fibroblast proliferation and collagen synthesis. Lung cancer patients have often elevated TGF-β1 plasma levels as a result of increased TGF-β1 expression in their tumours. On this background, we investigated the effect of irradiation on the MMP/TIMP system in the lung tissue of normal and transgenic TGF-β1 mice, in which TGF-β1 is overexpressed in the liver resulting in high TGF-β1 plasma levels.

Material and methods: Transgenic (TG) and wild-type (WT) mice underwent thoracic irradiation with 12 Gy or sham-irradiation. For each study group (TG 12 Gy; TG 0 Gy; WT 12 Gy; WT 0 Gy) 8 mice were sacrificed at 4 and 8 weeks after (sham-) irradiation. The TGF-β1, TIMP-1/-2/-3 expression in the lung tissue was quantified by Western blot; the MMP-2 and MMP-9 activity was analysed by zymography. The cellular origin of the MMP and TIMP was localised by immunohistochemistry.

Results: Irradiation had no influence on the TIMP-1/-2/-3, but increased significantly the MMP-2 /-9 expression. In the lung tissue of TG mice the TIMP-1/-2/-3 expression was elevated, the MMP-9 activity was decreased. The immunhistochemical study showed that parenchymal and inflammatory cells express these MMP/TIMP.

Conclusion: Our results provide evidence that the overexpression of MMP-2 and MMP-9 is involved in the inflammatory response of radiation-induced lung injury. MMP-2 and MMP-9 are known to degrade collagen IV of basement membranes, therefore affecting the structural integrity of lung tissue. In contrast, in lung tissue of TG mice the TIMP-1/-2/-3 expression was up-regulated and the MMP-9 activity was diminished, thereby decreasing possibly the ECM degradation leading to lung fibrosis.     

兔放射性肺损伤模型的建立及鉴定

目的 建立适合放射性肺损伤(RILI)CT灌注成像研究的兔动物模型。方法 健康新西兰大白兔48只,随机分为对照组(12只,做单肺假性照射)和实验组(36只,高能X射线单侧肺单次照射25 Gy),分别于照射后第1、6、12、24、48和72小时及第1、2、4、8、16和24周被处死,取两肺中带上、中、下野6处标本,分别进行HE染色光镜、电镜和局部肺组织TNF-α和TGF-β₁的检测。结果 实验组所有兔受照射肺均产生了RILI,早期以急性炎性反应为主,晚期以进行性肺纤维化为特征。实验组受照射1 h后局部肺组织TNF-α表达、72 h后TGF-β₁表达与对照组差异均有统计学意义(t=3.04~14.95,P＜0.05)。光镜下,实验组受照射12 h后肺泡壁厚度、6 h后肺间质面积密度、24 h后间质内纤维母细胞和纤维细胞数量与对照组差异均有统计学意义(t=4.44~39.78,P＜0.05),并分别与照射后的时间直线相关(r=0.82、0.87、0.68)。电镜下,实验组各时间点之间胶原纤维相对含量差异有统计学意义(F=100.31,P=0.000),对照组各时间点之间的差异无统计学意义。实验组受照射72 h后肺内胶原纤维相对含量与对照组差异均有统计学意义(t=3.07~45.18,P＜0.05),并与照射后时间直线相关(r=0.99)。结论 25 Gy单肺单次高能X射线照射能制作稳定、可靠的兔RILI模型,较好地模拟了RILI的发生、发展的演变过程。      

肾上腺髓质素对肺动脉高压大鼠血流动力学及细胞因子的影响

目的观察肾上腺髓质素（adrenomedullin,ADM）治疗对慢性低氧性肺动脉高压大鼠血流动力学指标、肺血管重构及细胞因子表达的影响,探讨ADM对慢性低氧性肺动脉高压的作用及其可能机制。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组（n=10）,低氧组（n=10）和治疗组（n=10）。治疗组大鼠通过微量渗透泵皮下持续给予ADM（300ng／h）2周,低氧组大鼠则用同样的方法给予200μl生理盐水注入。低氧2周后,以右心导管法测定大鼠血流动力学指标,放射免疫法检测血清中醛固酮及ADM水平。处死大鼠,检测右心室与左心室加室间隔比值RV／（IJV＋s）。将肺组织切片进行HE染色,图像分析检测肺血管重构。Western印迹检测重塑的肺血管中转化生长因子-β1（TGF-β1）、内皮素-1（ET—1）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达。结果低氧2周后,与对照组大鼠相比,低氧组大鼠肺动脉收缩压（PASP）、肺动脉舒张压（PADP）、平均肺动脉压（mPAP）及血清醛固酮水平显著升高,RV／（LV＋s）显著增加,肺血管管壁厚度与外径的比值（MT％）及管壁面积与血管总面积的比值（MA％）显著增加,重塑的肺血管中TGF-β1、ET-1和TNF-α的表达显著增加;与低氧组大鼠相比,治疗组大鼠PASP、PADP、mPAP、血清醛固酮水平显著降低,RV／（LV＋S）及重塑的肺血管中MT％和MA％显著下降,同时,重塑的肺血管中TGF-β1、ET-1和TNF—α表达显著降低。结论外源性补充ADM可改善低氧性肺动脉高压大鼠的血流动力学指标及肺血管重构,其机制可能和降低醛固酮水平,抑制肺动脉TGF-β1、ET-1和TNF-α的表达有关。     

普伐他汀不同给药时间对大鼠急性心肌梗死后心室重构的影响

目的①观察普伐他汀能否改善急性心肌梗死后的心室重构和心功能;②观察普伐他汀不同给药时间对改善心室重构的区别;③探讨普伐他汀改善心室重构和心功能的机制。方法制作大鼠急性心肌梗死模型并分组。将32只大鼠随机分成4组：A组假手术组、B组心肌梗死对照组、C组普伐他汀早期干预组、D组普伐他汀晚期干预组,每组8只。早期和晚期干预分别选择梗死后即刻和72小时后以普伐他汀（3mg/kg）灌胃,共持续8周,A、B组每日以等量水灌胃,其余喂养饲料相同。BL-420S生理机能实验系统记录ECG、LVSP、LVEDP、±dp/dtmax、HR、SBP、DBP。RT-PCR检测左心室非梗死区TNF-α、MMP-2、MMP-9的mRNA的表达。Western-blot测定左心室非梗死区TNF-α蛋白的表达。结果①血流动力学指标：4组的心率无明显变化;B、C、D组的LVEDP较A组有明显升高（P〈0.01）,SBP、DBP、LVSP、±dp/dtmax显著降低（P〈0.01）;C、D组的LVEDP显著低于B组（P〈0.05）,±dp/dtmax显著高于B组（P〈0.05）;C、D组与B组比较SBP、DBP、LVSP无明显变化。②TNA-αmRNA及蛋白表达：B、C、D组均比A组高（P〈0.01）,C、D组比B组低（P〈0.05）,C组比D组低（P〈0.05）。③MMP-2、MMP-9的mRNA的表达：B、C、D组均比A组高（P〈0.01）,C、D组比B组低（P〈0.05）,C组比D组低（P〈0.05）。结论①普伐他汀可以有效防治心肌梗死后心室重构。②普伐他汀防治心肌梗死后心室重构与用药时间有相关性,尤其是早期干预较晚期干预在防治心肌梗死后心室重构效果更佳。③普伐他汀主要通过减少MMP-2、MMP-9的mRNA的表达并且抑制TNA-αmRNA及蛋白表达达到防治心肌梗死后的心室重构。     

ShRNA介导的Smad4基因沉默对C2C12成肌细胞纤维化的影响

目的:研究慢病毒介导的Smad4-shRNA对TGF-β1诱导的纤维化进程的影响。方法:(1)设计并选择抑制效能最高的Smad4-shRNA,包装生产慢病毒,转染C2C12成肌细胞,并检测转染后细胞的Smad4表达;(2)根据TGF-β1诱导C2C12成肌细胞向成肌纤维细胞分化的模型,以慢病毒介导的Smad4-shRNA转染细胞,将不同处理的细胞分为A、B、C、D四组,分别为C2C12细胞组、TGF-β1诱导组、C2C12细胞转染组和TGF-β1诱导后转染组。通过荧光Realtime-PCR和Westerblot检测各组collagen I和α-SMA表达水平。结果:(1)慢病毒介导Smad4-shRNA1转染C2C12细胞后,其Smad4 mRNA和蛋白表达显著低于未转染组(P<0.05);(2)TGF-β1诱导组α-SMA和Collagen I mRNA及蛋白表达均显著高于C2C12细胞组(P<0.05);(3)TGF-β1诱导后转染组α-SMA与collagen I mRNA及蛋白表达显著低于TGF-β1诱导组(P<0.05),与C2C12细胞组和C2C12细胞转染组相比则无明显差异(P>0.05)。结论:降低Smad4表达能有效抑制成肌细胞及受TGF-β1诱导成肌纤维细胞的纤维化过程,提示Smad4可能成为拮抗骨骼肌纤维化的靶点。