三七提取物对MNNG转化后GES-1细胞的促凋亡作用

目的:应用流式细胞测定法研究灌服三七提取物后的犬血清对胃癌前细胞的促凋亡作用.方法:采用被N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitroso-guanidine, MNNG)进一步转化后的永生化人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞(以下简称MC细胞)作为胃癌前病变细胞的体外研究模型;以三七水提物给彼格犬一次性灌胃,取给药前的血清、给药后2 h和6 h的血清作为实验药物血清.以流式细胞测定法分别检测2 h和6 h两个采血时间点上不同浓度的药物血清对MC细胞作用72 h后的促凋亡作用.结果:这两个时间点的含药血清能明显促进MC细胞的凋亡,与同样条件下用空白血清培养的MC细胞相比其凋亡率显著增加(P<0.05).在两个时间点的药物血清作用下的MC细胞,其G0/G1期细胞比例明显下降(P<0.05),而G2/M期细胞比例显著增加(P<0.05),但S期细胞比例并没有一致性的变化.结论:两个时间点的药物血清对MC细胞都有显著的促凋亡作用,且能显著降低G0/G1期的MC细胞比例及显著增加G2/M期的MC细胞比例,这可能是其抑制MC细胞增殖及促凋亡的原因之一.     

三七提取物含药血清对MNNG转化后GES-1细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的:研究三七提取物犬药物血清作用于胃癌前细胞后,其凋亡相关基因蛋白表达的变化.方法:采用被N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N-nitroso-guanidine,MNNG)转化后的永生化人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞(简称MC细胞)作为胃癌前病变细胞的体外研究模型,用三七提取物一次性灌胃彼格犬,取给药后2 h的血清作为实验药物血清.以免疫组织化学法检测药物血清对MC细胞作用72 h后bcl-2、Bax和p21WAF13种凋亡相关基因蛋白表达情况,并与正常培养的MC细胞相比较.结果:药物血清作用后的MC细胞中Bax和p21WAF1的表达较正常培养的MC细胞升高(P<0.01);Bc1-2表达较正常培养的MC细胞降低(P<0.01).结论:三七提取物入血后可能是通过影响bc1-2、Bax和p21WAF1等对于凋亡具有调控作用的基因表达来实现对胃癌前细胞的抑制增殖及促凋亡作用的.     

三七提取物含药血清对MNNG转化后GES-1细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响（英文）

目的：研究三七提取物犬药物血清作用于胃癌前细胞后,其凋亡相关基因蛋白表达的变化。方法：采用被N-甲基-N＇-硝基-N-亚硝基胍（N-methyl-N＇-nitroso-guanidine,MNNG）转化后的永生化人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞（简称MC细胞）作为胃癌前病变细胞的体外研究模型,用三七提取物一次性灌胃彼格犬,取给药后2 h的血清作为实验药物血清。以免疫组织化学法检测药物血清对MC细胞作用72h后bcl-2、Bax和p21^WAF1 3种凋亡相关基因蛋白表达情况,并与正常培养的MC细胞相比较。结果：药物血清作用后的MC细胞中Bax和p21^WAF1的表达较正常培养的MC细胞升高（P〈0.01）;Bcl-2表达较正常培养的MC细胞降低（P〈0.01）。结论：三七提取物入血后可能是通过影响bcl-2、Bax和p21^WAF1等对于凋亡具有调控作用的基因表达来实现对胃癌前细胞的抑制增殖及促凋亡作用的。     

腹水草对人胃上皮细胞GES-1的保护作用及其对PKA、CREB、AQP1的调控研究

[目的]研究腹水草(Veronicastrum axillare,V.axillare)含药血清对乙醇损伤的人胃上皮细胞(gastric epithelial cells-1,GES-1)的保护作用及其对环腺苷酸依赖性激酶(protein kinase A,PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)、水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)表达水平的调控作用。[方法]20只雄性SD大鼠随机分为5组(n=4),连续灌胃给药14d,制备正常组(生理盐水20 m L·kg-1)、雷尼替丁组(0.027g·kg-1)以及V.axillare低、中、高剂量组(0.7、1.4、2.8 g·kg-1)含药血清。MTT法检测体外培养的GES-1细胞的活性,研究V.axillare含药血清及PKA抑制剂H-89(25μmol·m L-1)预处理对5%乙醇诱导GES-1细胞活力的影响。荧光定量RT-PCR检测PKA、CREB及AQP1 m RNA的表达水平,Western blot检测AQP1蛋白表达水平。[结果]模型组和H-89组GES-1细胞活性低于正常组,差异有统计学意义(P0.01);乙醇造模处理显著上调PKA、CREB及下调AQP1的表达水平,差异有统计学意义(P0.01);H-89处理显著抑制PKA和CREB m RNA表达水平(P0.01);加入各剂量V.axillare含药血清不能显著改善H-89对PKA、CREB和AQP1 m RNA表达水平的抑制作用。V.axillare中、高剂量含药血清细胞活性高于模型组,PKA、CREB m RNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P0.01),而V.axillare中、低剂量含药血清AQP1表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P0.01)。[结论]V.axillare含药血清显著减轻乙醇对GES-1细胞的损伤,对GES-1细胞具有保护作用,其保护机制与下调PKA、CREB及上调AQP1的表达有关。     

复方中药紫龙金抑制肾癌ketr-3细胞增殖的血清药理学研究

目的观察复方中药紫龙金含药血清对人肾癌ketr-3细胞生长增殖的抑制作用。方法运用血清药理学方法,选择不同浓度的含紫龙金大鼠血清与ketr-3细胞共同孵育,于不同时间用生物倒置显微镜观察细胞形态变化,W ST-8比色法检测紫龙金含药血清对人肾癌ketr-3细胞的增殖抑制率。结果紫龙金含药血清作用ketr-3细胞48 h后,细胞呈现典型的凋亡形态学改变,可见部分细胞变圆,体积变小,有凋亡小体产生;且抑制作用呈现时间和剂量依赖关系,与对照组比较,各浓度含药血清（5%、10%、20%）作用24 h后细胞增殖抑制率无明显差异（P〉0.05）,作用48 h后细胞增殖抑制率分别为4.9%（P〉0.05）、22.6%（P〈0.01）、28.7%（P〈0.01）。结论紫龙金含药血清可有效抑制人肾癌ketr-3细胞体外增殖。     

Shh、Gli-1在经低浓度MNNG转化的GES-1细胞中的表达及意义

目的研究经低浓度MNNG转化的GES-1细胞（MC细胞）中Shh、Gli-1mRNA及蛋白的表达,以探讨Shh信号通路与胃癌前病变的关系。方法低浓度MNNG（N-甲基-N＇-硝基-N-亚硝基胍）诱导GES-1（人永生化胃黏膜上皮细胞）转化为MC细胞,对照组为GES-1细胞。用RT-PCR检测ShhmRNA与Gli-1mRNA的表达,免疫细胞化学法检测Shh与Gli-1蛋白的表达。结果 Shh、Gli-1mRNA及蛋白在GES-1细胞中无表达,在MC细胞中表达阳性。结论 Shh信号通路可能参与了胃癌前病变过程。     

Ki67抗原在Hp感染GES-1细胞中表达及半夏泻心汤对其表达的影响

目的观察幽门螺杆菌感染GES-1细胞后Ki67抗原量的变化,探讨半夏泻心汤对Ki67抗原表达的影响。方法实验分正常组、模型组和半夏泻心汤组,以1∶50的细胞∶细菌比例感染GES-1细胞,用半夏泻心汤含药血清培养48 h。MTT法检测细胞增殖。免疫组化检测Ki67抗原。结果与正常对照组比较,模型组的MTT A值和Ki67抗原阳性细胞率均显著降低(P0.05);与模型组比较,半夏泻心汤组MTT A值和Ki67抗原阳性细胞率显著提高(P0.05)。结论Hp可抑制GES-1细胞增殖,半夏泻心汤能降低细菌的抑制作用。     

郁金含药血清对HSC-T6细胞增殖抑制作用的影响

目的:观察郁金含药血清对肝星状细胞-T6(hepatic stellate cell-T6,HSC-T6)细胞增殖抑制的研究。方法:25只SD大鼠随机分5组:郁金含药血清高剂量组、中剂量组、低剂量组(16.2 g·kg-1、8.1 g·kg-1、4.0 g·kg-1),秋水仙碱组(5g·kg-1)以及空白组(给予等体积生理盐水),连续灌胃给药4 d后,于第4天一次性给药1 h后,乙醚麻醉腹主动脉取血制备含药血清;将HSC-T6细胞分为6组,郁金含药血清高剂量组、中剂量组、低剂量组,空白组、秋水仙碱组、阴性对照组(加入等体积的PBS代替大鼠血清),分别取用体积分数5%、10%、20%的含药血清,同时作用于各组HSC-T6细胞24 h、48 h、72 h后,采用四氮噻唑蓝法在酶标仪(490 nm波长)上检测各组OD值,分别计算其增殖率和抑制率。结果:与阴性对照组比较,除作用24 h、体积分数5%组外,大鼠血清可以明显加速HSC-T6细胞的增殖速度,其增殖率与大鼠血清含量呈正相关。与空白组比较,除作用24 h、体积分数5%含药血清各剂量组、低剂量20%组以及秋水仙碱20%组没有明显抑制作用外,其余各郁金剂量组均有增殖抑制作用,其中体积分数10%组的抑制效果明显高于体积分数20%组(P0.05)。作用48 h后,各干预含药血清的3个浓度组均有明显抑制作用,其中郁金体积分数10%组的抑制效果明显高于其他体积分数组(P0.05);作用72 h后,除秋水仙碱组外,各郁金剂量组均有明显抑制作用,其中含药血清体积分数10%组的抑制效果明显高于其他体积分数组(P0.01)。结论:大鼠郁金含药血清可以明显加速HSC-T6细胞的增殖;郁金含药血清在体外可以有效抑制HSC-T6细胞的增殖,但抑制率与含药血清体积分数、作用时间呈非线性关系,抑制率最为显著的是含药血清体积分数10%,作用时间48 h。     

赤芍水提物药物血清促HSC-T6细胞凋亡作用的实验研究

目的 应用流式细胞法,研究灌服赤芍水提物后的犬血清对乙醛造模后的肝星状细胞的促凋亡作用.方法 采用乙醛造模后的肝星状细胞株(HSC-T6)作为体外研究模型;以赤芍水提物给彼格犬1次性灌胃,取给药前的血清、给药后2,3 h血清作为实验药物血清.以流式细胞法检测以上采血时间点上2%浓度的血清对乙醛造模后的HSC-T6作用72 h后的促凋亡作用.结果 2,3 h两个时间点的含药血清能明显促进HSC-T6细胞的凋亡,和同样条件下用空白血清培养的HSC-T6细胞相比其凋亡比例(apoptosis,APOP)显著性增加(P＜0.05).在药物血清的作用下两个时间点组的HSC-T6细胞在G0/G1期细胞比例明显上升(P＜0.05);而S期细胞显著减少(P＜0.05);但G2/M期并没有一致性的变化.结论 两个时间点的药物血清对HSC-T6细胞都有显著的促凋亡作用,且能显著增加HSC-T6细胞在G0/G1期的比例及显著降低S期的比例,这可能是其抑制HSC-T6细胞增殖及促凋亡的原因之一.     

七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响

目的:观察七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响。方法:将10只SD大鼠随机分为中药组和空白组,每组5只。中药组大鼠灌胃给予18 g/kg七叶灵方药液,每日2次,连续给药3 d。空白组大鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。分别制备含药血清和空白血清。采用浓度梯度诱导法构建紫杉醇耐药肺癌细胞株A549/Taxol。①将细胞分为空白组及不同浓度(5%、10%、20%)含药血清组,各组分别给予空白血清和相应浓度含药血清干预。药物干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况,筛选含药血清干预的最佳浓度。②将细胞分为空白组(常规培养基)、含药血清组(筛选的最佳浓度含药血清)、紫杉醇组(2 mg/L紫杉醇)、含药血清+紫杉醇组(最佳浓度含药血清+2 mg/L紫杉醇),各组予以相应干预。干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况。细胞培养48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、剪切型PARP (cleaved PARP)的蛋白表达。结果:①与干预前相比,各浓度含药血清作用24、48 h后,A549/Taxol细胞的增殖抑制率显著升高(P0.05,P0.01),具有浓度/时间依赖性。选取20%含药血清进行后续实验。②细胞培养48 h后,紫杉醇组的细胞增殖抑制率明显高于含药血清组(P0.05),含药血清+紫杉醇组对耐药细胞的生长抑制作用明显强于紫杉醇组(P0.01);与空白组相比,含药血清组、紫杉醇组及含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率均明显升高(P0.01),且含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率高于紫杉醇组(P0.01)。③与空白组相比,紫杉醇组、含药血清组和含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量显著降低(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著上调(P0.01)。与紫杉醇组相比,含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量明显下降(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著增加(P0.05,P0.01)。结论:七叶灵方含药血清可抑制紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol的增殖,诱导细胞凋亡,且与紫杉醇联合应用具有一定的协同效应,其机制可能与调控Bcl-2/Caspase-3/PARP通路有关。     

亮菌多糖对GES-1细胞发生EMT的影响及机制研究

目的 探讨亮菌多糖( ATPS)对人胃黏膜上皮细胞(GES-1)发生上皮 -间质转化(EMT)的影响及相关机制.方法 利用IL-8诱导GES-1细胞建立EMT模型,实验设空白对照组、模型组( IL-8 诱导组)、实验组[ ATPS 低剂量组(IL-8诱导1 h后加入ATPS 30 mg/L)、ATPS中剂量组( IL-8诱导1 h后加入ATPS 60 mg/L)、ATPS高剂量组( IL-8诱导1 h后加入ATPS 120 mg/L)].应用光学显微镜观察GES-1细胞形态学变化,Western blot法检测EMT相关蛋白及PD-CD4蛋白表达水平,MTT法检测不同浓度ATPS对GES-1细胞存活率影响,细胞划痕实验检测各组GES-1细胞侵袭能力变化.结果 光学显微镜观察到IL-8作用24 h后GES-1细胞形态由不规则多边形向梭形转化,细胞排列紊乱,侵袭能力增强,不同剂量亮菌多糖作用后细胞形态可部分恢复,侵袭能力降低. Western blot结果提示:与模型组相比,实验组上皮标记物E-钙黏蛋白增多(P＜0.05),间质标志物N-钙黏蛋白、波形蛋白减少( P ＜0.05),PDCD4 表达增多( P ＜0.05).细胞划痕实验观察到模型组GES-1细胞与空白组相比侵袭扩散能力明显增强,实验组与模型组相比侵袭扩散能力明显减弱.结论 ATPS可通过抑制GES-1 细胞EMT的发生逆转胃癌前病变,其机制可能与促进抑癌基因PDCD4表达有关.     

半夏泻心汤对幽门螺杆菌致人胃黏膜上皮细胞GES-1凋亡的影响

[目的]观察半夏泻心汤对幽门螺杆菌致人胃上皮细胞GES-1调亡的干预作用。[方法]实验分正常组、感染组和半夏泻心汤组,感染组和半夏泻心汤组按50∶1的细菌∶细胞比例感染GES-1细胞,正常组和感染组均以正常鼠血清进行培养,半夏泻心汤组以含药鼠血清进行培养,采用MTT法检测细胞的增殖情况,DAPI染色分析细胞凋亡情况。[结果]与正常组比较,感染组的细胞增殖显著下降（P〈0.05）,细胞凋亡明显提高（P〈0.05）。与感染组相比,10%、15%的含药血清能促进细胞增殖（P〈0.05）,半夏泻心汤组能降低细胞凋亡（P〈0.05）。[结论]半夏泻心汤具有改变幽门螺杆菌对胃黏膜上皮细胞凋亡的作用。     

三七醇提液对恶性肿瘤肝转移的干预作用

目的:观察三七醇提液对恶性肿瘤肝转移的干预作用。方法:建立肿瘤肝转移模型,观察不同剂量三七醇提液对荷瘤肝转移小鼠生存质量、肿瘤生长和肝转移的影响。结果:三七醇提液可以改善荷瘤肝转移小鼠的全身情况,并具有明显的抑瘤和抗肝转移作用,这种作用又以三七醇提液中、低剂量组更为明显。结论:三七醇提液可改善荷瘤鼠全身情况,并具有抑瘤、抗转移的作用。     

消银解毒方颗粒对Jurkat T细胞内JAK1/STAT3信号通路作用机制的研究

目的探讨消银解毒方颗粒对人急性T淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat T)细胞内酪氨酸激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的调控作用。方法以植物血凝素(PHA)和白细胞介素-6(IL-6)共同诱导Jurkat T淋巴细胞建立血热证银屑病T细胞异常活化病理细胞模型,将模型细胞接种于24孔板,制备消银解毒方颗粒、凉血方颗粒(消银解毒方颗粒拆方)、解毒方颗粒(消银解毒方颗粒拆方)、阿维A(阳性对照)、蒸馏水(阴性对照)的药理血清,择取最佳浓度药理血清及JAK/STAT信号通路阻断剂Filgotinb(GLPG0634)作用于模型细胞48 h,同时设空白细胞组。收集各组细胞,采用蛋白质印迹(Western blot)、实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)法检测JAK1、STAT3、糖蛋白(GP)130的蛋白表达与基因转录水平。结果模型组的JAK1、STAT3、GP130的蛋白和mRNA表达较空白组明显增高(P0.01)。与模型组相比,各实验组磷酸化酪氨酸溶酶(p JAK)1/JAK1、磷酸化信号转号和转录激活因子(p STAT)3/STAT3、GP130蛋白表达量均明显降低(P0.01);与模型组相比,各实验组JAK1、STAT3、GP130的mRNA表达量均降低(P0.05或P0.01)。结论消银解毒方颗粒能够通过抑制JAK1/STAT3信号通路的开放进而抑制T细胞异常活化,以发挥其治疗银屑病的作用。     

幽门螺杆菌脂多糖对胃粘膜shh信号通路相关蛋白Gli、Ptch-1表达的影响

目的：观察幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori,Hp）脂多糖刺激下胃粘膜细胞Shh信号通路发生的变化。 方法：应用热酚水法提取Hp脂多糖,动态浊度法检测脂多糖浓度,将人胃粘膜上皮细胞系GES-1进行细胞培养后分成6组,分别以浓度为0 μg/ml、1 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、30 μg/ml、40 μg/ml的Hp脂多糖进行刺激。刺激24 h后,应用MTT法观察各组细胞活性,Western Blot法对各组细胞中Shh信号通路相关蛋白Gli、Ptch-1的表达水平进行检测。 结果：不同浓度Hp脂多糖刺激24h后,MTT法检测结果显示随着Hp脂多糖浓度增加,Hp脂多糖对GES-1细胞增殖抑制越强,分别为25.8%±2.7%,34.2%±3.1%,46.3%±3.4%,60.8%±2.1%,82.9%±2.8%（r=0.985,P<0.001）;Western Blot检测结果显示随着Hp脂多糖浓度增加,Gli、Ptch-1表达逐渐下降,Gli相对表达值分别为1.286±0.180、0.963±0.067、0.850±0.085、0.566±0.058、0.549±0.056、0.377±0.047（r=-0.945,P<0.001）;Ptch-1相对表达值分别为1.688±0.088、1.466±0.061、1.170±0.065、1.042±0.064、0.648±0.057、0.482±0.074（r=-0.985,P<0.001）。 结论：Hp脂多糖能使Shh信号通路中相关蛋白的表达明显降低,提示Hp对胃粘膜Shh信号通路的影响可能是通过脂多糖实现的。     

胃粘膜上皮细胞系GES-1细胞凋亡密度依赖性的研究

目的：探讨细胞密度对GES－1细胞调亡的影响及其机制。方法：细胞凋亡的存在以Giemsa染色证实，bcl－2基因的表达采用细胞原位杂交技术。结果：正常培养情况下GES－1细胞凋亡呈细胞密度依赖性；8mg／L的五肽胃泌素能增强bcl－2基因的表达但不能抑制密度依赖的细胞凋亡。结论：bcl-2基因表达可能与GES-1细胞凋亡的密度依赖性无关。