川芎嗪预处理对海马神经元c-fos、c-jun蛋白表达的影响

目的探讨川芎嗪预处理对缺氧/复氧大鼠海马神经元JNK信号转导通路相关蛋白c-fos、c-jun表达含量的影响。方法胎鼠海马神经细胞培养7天后,随机分为6组(n=6):N组(未缺氧组)、C组(TMP 0μg/m L)、S组(JNK抑制剂SP600125 10μmol/L)、L组(TMP 60μg/m L)、M组(TMP 200μg/m L)、H组(TMP 800μg/m L),孵育1 h后制备缺氧/复氧模型。处理后测定海马神经元细胞的凋亡率以及c-fos、c-jun蛋白表达量,统计分析其与川芎嗪预处理的关系。结果 1川芎嗪预处理可降低海马神经细胞的凋亡率(P<0.01)。2川芎嗪预处理可降低c-fos、c-jun蛋白的表达(P<0.01)。结论川芎嗪可能通过抑制JNK通路相关蛋白c-fos、c-jun的表达对缺氧/复氧大鼠海马的神经元起到保护作用。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷在Caco-2细胞模型的吸收机制研究

目的研究花色苷矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-G)在Caco-2细胞模型的吸收机制。方法建立Caco-2单层细胞模型,观察Cy-3-G的转运情况。加入不同浓度的维拉帕米(P-gp抑制剂)、MK571(MRP2抑制剂)、根皮苷(SGLT1抑制剂)及根皮素(GLUT2抑制剂),观察P-gp、MRP2、SGLT1及GLUT2等转运蛋白在Cy-3-G肠道吸收中的作用。结果 Cy-3-G在Caco-2细胞模型的吸收率随着时间延长逐渐升高,2 h时吸收率在0.76%~2.41%之间,但随着花色苷浓度的升高而降低。维拉帕米和MK571对Cy-3-G在Caco-2细胞模型的吸收无影响(P>0.05),根皮苷和根皮素可显著抑制Cy-3-G的吸收(P<0.05)。结论 P-gp和MRP2对Cy-3-G在肠道的吸收无影响,SGLT1和GLUT2均参与了Cy-3-G在小肠的吸收。[营养学报,2013,35(2):191-194,198]     

EGCG通过PI3-K/Akt信号通路抗神经细胞缺氧/复氧损伤

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对神经细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的影响及其作用机制。方法原代培养神经细胞,实验分4组:对照组、A/R组、EGCG预处理组(EGCG+A/R组)、EGCG+LY294002+A/R组。检测细胞存活率与乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞仪检测细胞凋亡和[Ca~(2+)]i;Western blot法检测总-Akt和磷酸化-Akt(p-Akt)蛋白表达。结果与对照组相比,A/R组中细胞存活率降低;LDH、[Ca~(2+)]i与细胞凋亡增加。与A/R组相比,EGCG预处理显著降低LDH、[Ca~(2+)]i与细胞凋亡,提高细胞存活率,表明EGCG可对抗神经细胞A/R损伤。进一步结果显示EGCG预处理后,显著增加神经细胞中p-Akt蛋白表达。然而,PI3K-Akt信号转导通路阻断剂LY294002显著抑制EGCG介导的神经保护作用与p-Akt蛋白上调。结论 EGCG对A/R介导的神经细胞损伤具有保护作用,其保护作用与PI3K-Akt信号转导通路有关。     

过氧化物酶体增殖物激活受体α基因在全氟辛酸致大鼠肝BRL-3A细胞氧化损伤中的作用

目的通过抑制和激活基因表达的方式,研究过氧化物酶体增殖物激活受体α基因(PPARα)在全氟辛酸(PFOA)致大鼠肝BRL-3A细胞氧化损伤中的作用。方法体外培养大鼠肝BRL-3A细胞,分为空白对照组(NC)、PFOA实验对照组、PPARα抑制剂组(GW6471)、PPARα激动剂组(WY14643)、PPARα抑制剂预处理PFOA组(GW6471+PFOA)、PPARα激动剂预处理PFOA组(WY14643+PFOA)。荧光免疫细胞化学检测法检测基因抑制和激动表达情况;自由基指示剂H2DCFDA检测活性氧(ROS)含量;q PCR检测PPARα及其下游基因Cyp4a1的表达;Western blot检测PPARα蛋白表达水平。结果通过抑制剂和激动剂成功抑制和激动了PPARα在大鼠肝BRL-3A细胞中的表达。GW6471+PFOA组与空白对照组、PFOA实验对照组比较,细胞内ROS含量显著升高(P0.05);WY14643+PFOA组与空白对照组、PFOA实验对照组相比,ROS含量明显下降(P0.05)。PPARα及其下游基因Cyp4a1在GW6471+PFOA组中的表达比PPARα抑制剂组高,但相较PFOA实验对照组明显降低(P0.05)。WY14643+PFOA组相关基因的表达虽然低于PPARα激动剂组,但显著高于PFOA实验对照组(P0.05)。GW6471+PFOA组中PPARα蛋白的表达水平较抑制剂组有所上调,但与空白对照组相比差异无统计学意义。WY14643+PFOA组中PPARα蛋白的表达水平与激动剂组比差异无统计学意义,但却显著高于PFOA实验对照组(P0.05)。结论 PFOA的暴露可以激活PPARα的表达,减轻细胞内ROS的累积,PPARα在PFOA导致的大鼠肝脏细胞氧化损伤中起到了一定的保护作用。     

姜黄素抑制Caco-2细胞胆固醇吸收的作用及机制研究

目的探讨姜黄素对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响以及可能机制。方法建立Caco-2细胞单层模型,分别用25、50、100μmol/L姜黄素或胆固醇吸收转运蛋白尼曼-匹克C1型类似蛋白1(NPC1L1)的抑制剂依折麦布孵育细胞24h或2h后,再用[14C]-胆固醇微胶溶液孵育细胞2h。用液闪计数仪检测细胞胆固醇吸收量,荧光定量PCR和Western blot检测NPC1L1的基因和蛋白表达量。结果 Caco-2细胞[14C]-胆固醇吸收可被依折麦布呈浓度依赖性地抑制,表明本研究建立的单层Caco-2细胞模型的胆固醇吸收是由NPC1L1所介导的。姜黄素能有效的下调NPC1L1的基因及蛋白表达水平,降低Caco-2细胞胆固醇吸收,100μmol/L姜黄素可引起40%胆固醇吸收下降。结论姜黄素能够降低Caco-2细胞胆固醇吸收,这可能与其抑制NPC1L1表达有关。     

碱性鞘磷脂酶对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响及机制研究

目的探讨碱性鞘磷脂酶(Alk-SMase)对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响以及可能机制。方法建立Caco-2细胞单层模型,用100 units/L Alk-SMase孵育细胞24 h后,再用[14C]-胆固醇微胶溶液孵育细胞2 h。用液闪计数仪(LSC)检测细胞胆固醇吸收量,薄层层析法分离膜磷脂、LSC检测细胞膜[14C]-鞘磷脂含量。结果 [14C]-胆固醇在Caco-2细胞中的吸收呈时间依赖性增加。Alk-SMase能够明显降低Caco-2细胞胆固醇吸收,并减少Caco-2细胞膜鞘磷脂含量,100 mu/ml Alk-SMase能够引起80%[14C]-标记的膜鞘磷脂水解。结论 Alk-SMase能够抑制Caco-2细胞胆固醇吸收,这可能与其水解膜鞘磷脂有关。     

降血压肽Val-Leu-Pro-Val-Pro在Caco-2细胞模型中的吸收机制

目的研究降血压肽Val-Leu-Pro-Val-Pro(VLPVP)在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法用体外培养的Caco-2细胞单层模型,考察时间、pH值、药物浓度、吸收抑制剂及促进剂对VLPVP吸收的影响。用HPLC法检测VLPVP的浓度。结果VLPVP在pH7.4时转运量最大,且与浓度和时间呈正相关。肽转运载体竞争性抑制剂Gly-Pro、arphamenine A和细胞内吞抑制剂氧化苯胂对VLPVP的转运没有显著的抑制作用,而旁路转运促进剂去氧胆酸钠、多药耐药蛋白抑制剂MK-571和能量抑制剂叠氮化钠对VLPVP从AP侧至BL侧的转运有非常显著的促进作用,而叠氮化钠和MK-571对VLPVP从BL侧至AP侧的转运无显著影响。结论VLPVP以旁路转运为主要方式被小肠上皮细胞吸收,并受到多药耐药蛋白MRP2强烈的外排作用。     

放射卫生

052072MAPK信号转导途径参与bFGF抑制辐射诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的作用/谷庆阳…∥中华放射与防护杂志.2003,23(4).244～246研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对辐射诱导的血管内皮细胞凋亡的作用及其信号转导途径。以60Coγ射线照射建立原代分离培养的人脐带静脉内皮细胞凋亡模型,以流式细胞术(Annexin_V_FITC PI标记)评价细胞凋亡率。观察不同浓度的bFGF和MEK的抑制剂U0126对细胞凋亡的影响。结果,bFGF对辐射诱导的脐静脉内皮细胞凋亡有明显的抑制作用,细胞凋亡率可从(35.22±5.5)%降至(11.67±3.8)%,而U0126可部分阻断bF…     

TLR4/NF-κB信号转导途径在视神经损伤中的作用及意义

目的研究大鼠视神经夹挫伤后视神经和视网膜节细胞形态学变化,以及TLR4/NF-κB信号转导途径在视神经中的表达及作用。方法制作大鼠球后视神经夹挫伤动物模型,分别于伤后1 d、7 d、14 d处死,通过HE染色观察视神经组织以及视网膜RGCs的变化,Western bolt方法监测TLR4和NF-κB在视神经表达的动态变化,并观察Myd88抑制肽抑制该信号转导途径后的相应变化。结果视神经损伤后,RGCs数量随着损伤时间的推移,呈进行性减少,给予Myd88抑制剂治疗后能够明显缓解视神经损伤导致的RGCs数量减少(P0.05);TRL4表达伤后第1 d即显著增加,并在14 d后达到高点;NF-κB的表达在损伤后7 d没有明显变化,14 d表达明显增加,而给予Myd88抑制剂治疗后,能够明显减少视神经损伤后TLR4和NF-κB的表达。结论视神经损伤后,TLR4/NF-κB信号途径参与了视网膜节细胞的凋亡过程,抑制该信号转导途径能够有效地缓解损伤后视神经功能障碍。     

PPAR-γ激动剂Troglitazone对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞mPGEs蛋白表达的影响

目的　研究PPAR -γ激动剂Troglitazone对高浓度葡萄糖作用的大鼠肾小球系膜细胞mPGEs蛋白表达水平的影响。方法　用高浓度葡萄糖和不同浓度Troglitazone作用大鼠肾小球系膜细胞 ,ELISA法检测上清液中mPGEs浓度。结果　 5 %葡萄糖可使体外培养的大鼠系膜细胞mPGEs蛋白表达水平明显增高 ( P <0 0 5 ) ;10～ 2 0nmol/L的Troglitazone可明显抑制 5 %葡萄糖诱导的大鼠系膜细胞mPGEs蛋白表达水平的增高 (P <0 0 5 )。结论　高浓度葡萄糖可诱导体外培养的大鼠系膜细胞mPGEs蛋白表达水平明显增高 ,PPAR -γ激动剂Troglitazone可明显抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞mPGEs蛋白表达水平的增高