长臂生物素原位标记检测合成肽对微孔板的吸附性

应用长臂生物素对包被于微孔板上丙型肝炎病毒合成肽抗原作原位标记，经亲和素－生物素－辣根过氧化物酶复合物结合放大和底物显色，以检测合成肽对微孔板的吸附性。发现吸附指数高低与使用长臂生物素的浓度有关，与肽的∑－氨基数目和肽段长度无关。初步应用表明，此法探讨合成肽吸附微孔板的适宜条件和影响因素简单可行，且有一定的应用价值。     

地高辛标记的RNA分子探针检测血清HCV

利用构建的ｐＧＰ１４４质粒，进行ＨＣＶ地高辛ＲＮＡ分子探针的标记，以该探针对ＨＣＶ临床血清样品及已知ＨＣＶ滴度的阳性血清１０倍逐级稀释样品的ＰＣＲ基因扩增产物进行ＤｏｔＢｌｏｔ分子杂交检测。     

HCV不同编码区抗体检测意义的临床研究

目的：研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）不同编码区抗体检测的临床意义。方法：采用ＨＣＶ核心区合成肽ＣＰ１０、ＣＰ９及非结构区基因重组抗原５－１－１,Ｃ１００检测了１５８例丙型肝炎病人相应抗体抗－ＣＰ１０、抗－ＣＰ９,抗－５－１－１及抗－Ｃ１００。同时检测ＨＣＶ ＲＮＡ、ＡＬＴ。另选３５例健康体检者作对照。结果 四种抗体于输血后４．５￣８周均可检出,于病后４￣８周依次达９２．６％、８８．９％、５９．３％及２     

HEVⅣ型ORF2编码蛋白N-端合成肽的抗原性检测

目的　检测戊型肝炎病毒 (HEV)Ⅳ型开放阅读框架 2 (ORF2 )编码蛋白N 端表位的抗原性 ,寻找良好的抗原肽 ,以便用于HEV抗体测。方法　根据HEVORF2编码蛋白N 端中含有的抗原表位 ,从HEV中国株蛋白的氨基酸序列中选取 2 5～ 38位序列氨基酸 ,用固相化学合成法合成抗原肽 ,并用ELISA检测抗原性。结果　HEVⅣORF2编码蛋白N 端氨基酸顺序为2 5～ 38的抗原肽与急性期戊型肝炎病人血清有较高的反应性 ,与Genelab诊断试剂盒的符合率达 93.8%。结论　为提高HEV抗体的检出率 ,在包被抗原中应含有HEVⅣ型ORF2编码蛋白N 端的抗原肽     

丙型肝炎病原学不同检测方法的临床应用价值对比分析

目的探讨抗体、抗原及核酸检测在丙型肝炎诊断中的应用价值。方法收集2012年1月到2013年12月珠海市香洲区人民医院筛查抗-HCV抗体阳性标本48份。用3种抗体试剂、2种抗原试剂及HCV-RNA复核检测结果。结果复核阳性丽珠37份,科华36份,新创36份,莱博21份,康润18份,HCV-RNA 28份。3种抗体试剂复核均阴性的10份标本中检出HCV-RNA阳性1份,莱博抗原阳性3份,康润抗原阳性1份。3种抗体灵敏度均为96.4%,阳性预测值为72.9%~75.0%;2种抗原试剂灵敏度分别为40.0%和83.3%,阳性预测值分别为57.0%和83.3%。结论丙型肝炎病毒抗体检测具有较高的诊断灵敏度,但诊断特异性较低,对抗-HCV抗体阳性标本采用抗体加抗原模式进行复核对丙型肝炎诊断具有重要的价值,对有疑问的标本再用HCV-RNA进行确证,可预防误诊、漏诊。     

在安全输血中应用丙型肝炎病毒核心抗原检测技术的初步探索

本研究探讨用丙型肝炎病毒（HCV）核心抗原酶联免疫吸附技术（HCV-cAg ELISA）筛查献血员感染HCV的可行性.对我医院2003年1月-2005年12月间的8 677份献血者血清标本进行抗-HCV初检和复检.将仅初检阳性的15份血清标本和仅复检阳性的14份血清标本,分别再做HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR检测.结果表明：经HCV-cAg ELISA检测,29份仅初检（15份）和仅复检（14份）抗-HCV阳性血清标本中只有5份结果为阳性,阳性率为17.24%.经HCV RT-PCR检测,29份仅初检和仅复检抗-HCV阳性血清标本中同样也只有5份阳性结果,阳性率也为17.24%.结论：HCV-cAgELISA检测技术的敏感性与HCVRT-PCR技术类似,但成本明显降低,有可能作为HCV感染的辅助确证试验,或作为抗-HCV检测技术的更新换代技术用于安全输血中献血者血液的筛查.     

丙型肝炎核心抗原检测的临床意义

目的应用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)和抗体(HCV-Ab),了解丙型肝炎病毒核心抗原检测的意义。方法采用HCV-cAg试剂盒及HCV-Ab试剂盒,对200例来自手术前筛查的血清样本和36例丙型肝炎或疑似丙型肝炎患者的血清样本进行HCV-cAg和HCV-Ab检测,阳性者用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HCV-RNA证实。结果 200例术前筛查样本HCV-Ab均为阴性,HCV-cAg阳性3例,其中HCV-RNA阳性1例;36例丙型肝炎或疑似丙型肝炎患者HCV-Ab全部阳性,其中检出HCV-cAg阳性21例,HCV-RNA阳性24例。HCV-cAg与HCV-RNA符合率为87.5%(21/24)。结论 HCV-cAg检出时间早于HCV-Ab,对临床样本同时进行丙型肝炎病毒核心抗原和抗体的ELISA检测,能够明显提高丙型肝炎诊断符合率。     

3种方法检测丙型肝炎患者的早期诊断价值

目的探讨采用丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)、丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)、HCV-RNA 3种方法联合检测丙型肝炎患者的早期诊断价值。方法收集该院西宁地区203例HCV-Ab阳性患者及5例HCV-Ab阴性HCV-cAg阳性的患者,使用荧光定量PCR法进行HCV-RNA检测,化学发光法检测HCV-Ab,ELISA法检测HCV-cAg。结果 203例HCV-Ab阳性患者中HCV-cAg阳性例数为67例、HCV-RNA1×103 U/L 143例;72例HCV-Ag阳性患者中HCV-RNA阳性例数69例,符合率达95.83%,其中5例HCV-Ab阴性HCV-cAg阳性患者中,HCV-RNA阳性3例,符合率达60.00%。结论 HCV-cAg、HCV-Ab和HCV-RNA 3种方法联合检测可用于丙型肝炎患者的早期诊断,同时可有效缩短HCV窗口期,降低HCV感染的漏检率。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床应用价值

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原（HCV—cAg）酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法的临床应用价值。方法对20例HCV抗体（HCV—Ab）阳性标本和200例HCV—Ab阴性标本进行HCV—cAg测定,同时采用核酸扩增进行HCV—RNA对照测定。结果20例HCV—Ab检测阳性的标本中HCV—cAg阳性8例,200例HCV—Ab检测阴性的标本中HCV．cAg阳性3例;以HCV—RNA聚合酶链反应（PCR）检测为对照,HCV—cAg检测试剂盒的敏感性为88．3％,特异性为99．5％。结论HCV—cAgELISA检测方法敏感性和特异性较好,HCV—Ab和HCV—cAg联合检测可起到互补作用,提高阳性检出率,有利于早期诊断。     

HCV-Ab、HCV-cAg和HCV-RNA联合检测的临床价值

目的评价丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)、丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)以及HCV-RNA联合检测在HCV诊断中的应用价值。方法采用ELISA法对2 023例输血和手术前住院患者的血液标本进行HCV-Ab和HCV-cAg的测定,并对阳性标本采用RT-PCR法进行HCV-RNA的测定。结果 2 023例筛查标本中HCV-Ab(+)55例,其中HCV-cAg(+)30例,HCV-RNA(+)40例;1 968例HCV-Ab(-)的样本中检出HCV-cAg(+)9例,其中HCV-RNA(+)7例,HCV-cAg与HCVRNA符合率为83.0%(39/47)。结论 HCV-Ab检测结合HCV-cAg或者HCV-RNA检测可以有效缩短HCV的窗口期,降低漏检率。对于条件受限的基层医院HCV-cAg可以作为HCV-Ab常规检测的补充指标,提高检出率。     

丙型肝炎病毒NS5a区血清型特异性多肽的选择及应用

目的:从HCV非结构5a区(NS5a)选出基因型特异性多肽,并应用酶免疫法(EIA)进行HCV血清分型。方法:根据HCV NS5a高免疫源区(2182～2343)的氨基酸序列,设计并合成305个特异性多肽,应用已知基因1～6型的抗-HCV阳性血清,通过EIA法检测每个多肽的抗原性,并用基因型特异性多肽进行血清分型,同时将其与序列分析法基因分型结果进行比较。结果:不同基因型间NS5a区氨基酸的同源性较低,相同基因型不同区段氨基酸的同源性也很低。对305个特异性多肽抗原性检测结果表明,主要线性抗原区位于氨基酸残基R3、R7和R9区。18个来自保守区的多肽可与不同基因型抗-HCV阳性血清反应;12个多肽具基因型特异性。血清基因分型结果与基因分型的结果高度一致。结论:HCV NS5a高免疫源区存在主要的线性抗原;来自高度保守区的多肽抗原无基因型特异性,可用于HCV抗体检测;基因型特异性多肽可用于HCV基因分型,特别适用于HCV RNA阴性患者。     

血友病A患者血制品治疗后HBV和HCV感染指标分析

目的对血友病A患者替代治疗后血液传播乙型、丙型肝炎病毒(HBV、HCV)的感染指标进行检测。方法对经本院确诊的35例血友病A患者采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗-HCV、HBV六项指标。结果 35例血友病A患者的抗-HCV阳性率为88.6%,输血次数和输注血液制品为主的种类与患者抗-HCV阳性率有相关性(P<0.01)。HBV六项指标检查,其中5例患者抗-HBe阳性(占14.3%),明显低于抗-HCV阳性率。结论血友病A患者替代治疗输血次数越多,感染风险越大,而较少输注以冷沉淀为主的血液制品的患者,其感染风险相对较小,且目前HCV感染率明显高于HBV感染率。     

丙型肝炎病毒NS3区优势表位基因的克隆和高效表达研究

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的Ｃ３３ｃ基因编码蛋白是ＨＣＶ抗体检测中所需的重要抗原。应用打点杂交法得到了来源于３例病人的８个Ｃ３３ｃ的克隆，并从中挑选出能在大肠杆菌中高效表达的克隆─—ｐＫＨ２６。该重组质粒中的插入片段与ＨＣＶ－Ｊ的核苷酸同源性为９２．６％，所编码氨基酸的同源性为９５．９％，属于中国主要的ＨＣＶ流行株，它可通过温度变化这种简单、方便、经济的方式进行诱导表达，得到以天然蛋白形式存在的具有良好免疫学活性的表达产物，表达蛋白产量可占整个细菌蛋白的１５％以上。由于不含有融合蛋白，用于抗－Ｃ３３ｃ的检测特异性高，是建立诊断ＨＣＶ感染方法的良好原材料。     

An inadequate dose of ribavirin is related to virological relapse by chronic hepatitis C patients treated with pegylated interferon alpha-2b and ribavirin

The aim of this large-scale analysis was to assess the effect of 48-week pegylated interferon (PEG-IFN) α-2b and ribavirin (RBV) therapy on virological relapse by patients infected with hepatitis C virus (HCV) genotype 1. The relationship between virological relapse and the dose of PEG-IFNα-2b and RBV was investigated in 619 patients who had once cleared HCV RNA during PEG-IFNα-2b and RBV treatment for 48 weeks. The overall virological relapse rate was 34.1% (211 of 619). The relapse rate was 59.5% (22 of 37) for patients who received <6 mg/kg/day of RBV, even if a sufficient dose of PEG-IFNα-2b (≥1.5 μg/kg/day) was received. In contrast, the relapse rate was 28.1% (16 of 57) for patients who received ≥12 mg/kg/day of RBV, irrespective of the PEG-IFNα-2b dose. The relapse rates were significantly increased with the reduction of the RBV dose for both PEG-IFNα-2b doses of ≥1.2 and <1.2 μg/kg/week (P < 0.0001 and P = 0.0006, respectively). Moreover, the relapse rate was 41.2% (35 of 85) for patients with an early virological response (EVR) who received <6 mg/kg/day of RBV. The relapse rates were significantly increased with the reduction of the RBV dose in both those patients with an EVR and those with a late virological response (P = 0.0006 and P = 0.0088, respectively). To summarize, for HCV genotype 1 patients treated with PEG-IFNα-2b and RBV, the virological relapse of HCV was RBV dose-dependent, irrespective of the dose of PEG-IFNα or the effect of early viral kinetics.     

蛋白芯片检测丙型肝炎病毒分片段抗体

目的用蛋白芯片的方法检测丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体。方法利用生物芯片技术和化学发光技术将高度纯化的抗原HCV Core、NS3、NS4、NS5以特定微阵列固定在固相载体上,用化学发光免疫法检测抗HCV Core、抗HCV NS3、抗HCV NS4和抗HCV NS5。结果174份血清中HCV抗体阳性87份,HCV抗体阴性87份,其中献血员33份,非丙型肝炎的其他肝病患者39份,非肝病者15份。87例雅培公司的AxSYM(微粒子发光)检测抗HCV阳性患者中,蛋白芯片检出阳性85份,阳性率为97.70%;在174份标本中,蛋白芯片检出阳性标本88份,其中抗HCV阳性87份,阳性率98.86%;抗HCV NS3检出49份,阳性率为55.68%;抗HCV NS4检出68份,阳性率为77.27%;抗HCV NS5检出37份,阳性率为42.05%;抗HCV Core检出69份,阳性率为78.41%。结论蛋白芯片显示较高的敏感性和特异性,具有临床实用价值。     

甘肃东乡族丙型肝炎患者的HCV基因分型研究

目的了解甘肃地区东乡族丙型肝炎患者的HCV基因分型特征。方法对HCV患者样本用实时荧光定量PCR进行病毒载量的确定。对病毒载量大于10^3的样本用多重PCR进行HCV的基因分型。结果通过对甘肃地区东乡族丙型肝炎患者的样本进行基因分型,发现该民族丙型肝炎病毒感染主要为1b型（55．1％）为主,2a（20．6％）次之,再次为1c型（13．7％）和2c型（3．4％）,但未检测到3a型。结论东乡族基因分型有其显著特征,C型基因型以1c为主,国内其他地区少有报道,为临床针对不同基因型HCV感染者的治疗提供了依据。     

血清ACCP在HCV感染并发冷球蛋白血症的诊断价值

目的探讨血清抗环瓜氨酸肽抗体(ACCP)在丙型肝炎病毒(HCV)感染并发冷球蛋白血症中的诊断价值。方法收集HCV感染患者20例、HCV感染伴冷球蛋白血症患者5例、混合型冷球蛋白血症(MC)患者5例和健康献血者20例,分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)和比浊法测定其血清ACCP和类风湿因子(RF)水平。结果20例HCV感染患者,血清ACCP试验均为阴性,最大值为10U。其中9例(45%)RF>15U/ml,3例(15%)RF>50 U/ml,最高者RF为526 U/ml。HCV感染伴冷球蛋白血症患者5例中,3例(60%)血清ACCP试验为阳性,均值为47U;混合型冷球蛋白血症患者5例中,4例(80%)RF试验阳性,其中3例(60%)RF>50 U/ml,最大值为540 U/ml;1例(20%)冷球蛋白血症患者ACCP试验呈临界值阳性结果(25U)。20例健康献血者血清ACCP和RF试验均为阴性。结论ACCP检测有助于慢性HCV感染并发冷球蛋白血症患者的早期诊断。     

Detection of hepatitis C virus RNA by in situ hybridization: a critical appraisal

Summary Despite the several papers that have appeared in the literature or have been communicated at scientific meetings, the detection of hepatitis C virus RNA by in situ hybridization seems a difficult goal to achieve. There have been conflicting reports on the type and proportion of hepatitis C virus-infected cells, the intracellular distribution of viral RNA and the topographical association with cell damage. As a consequence, some of the findings should probably be considered as non-specific and all protocols and data critically reviewed before a firm conclusion be made.     

HCV感染者F蛋白抗体阳性检出率的Meta分析

目的采用Meta分析的方法探讨丙型肝炎病毒（HCV）感染者体内抗F蛋白循环抗体的产生。方法检索1968年至2012年11月中国知网、万方数据库、万方医学网、维普、SinoMED、Medline、Pubmed、Splinger—link、Cochrane、Sciencedirect的相关文献,手工检索查全补充,严格根据纳入和排除标准筛选文献,将最终纳人文献采用Revman5．0软件进行数据合并与分析。采用OQAQ量表对结果进行评价。结果HCV感染者与健康人群对照,共纳入14项病例对照研究,合计1348例HCV感染者,F蛋白抗体检出率差异有统计学意义（P〈0．00001）,合并率的优势比〉1,总体比值比（OR）达64．81[95％可信区间（CI）为29．90—140．49];HCV感染者与非HCV感染者对照,共纳入11项对照研究,合计923例HCV感染者,F蛋白抗体检出率差异有统计学意义（P〈0．00001）,HCV感染者F蛋白检出率是非HCV感染者的53．09倍（95％CI为23．56—119．66）;HCV感染者F蛋白抗体检出率与核心蛋白抗体检出率对照,共纳入8项对照研究,合计770例HCV感染者,差异有统计学意义（P〈0．00001）,率差（RD）为-0．42（95％CI为-0．59--0．25）,核心蛋白抗体检出率比F蛋白抗体高42％。结论HCV感染者体内抗F蛋白抗体检出率明显高于健康人和非HCV感染者。F蛋白可诱导HCV感染者产生抗F蛋白特异性循环抗体,是HCV产生的特异蛋白,可为实验室诊断HCV感染和监测干扰素联合治疗HCV效果提供理论依据和数据支持。