肿瘤相关成纤维细胞外泌体调控PI3K/AKT/mTOR信号通路影响肺癌细胞的生长和转移

目的探究肿瘤相关成纤维细胞外泌体对肺癌细胞生长和转移的影响及机制。方法取肺癌患者的癌组织和癌旁组织分离肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts,CAFs)和成纤维细胞(Normal Fibroblasts,NFs),免疫荧光和Western blot鉴定CAFs和NFs中α-SMA、FSP-1、FAP、Vimentin表达,差速离心法提取CAFs和NFs细胞外泌体,利用透射电镜和Western blot鉴定外泌体,将外泌体与肺癌细胞A549共孵育后检测细胞增殖、迁移、侵袭、细胞凋亡水平,Western blot检测PI3K/AKT/mTOR信号通路激活水平。结果α-SMA、FSP-1、FAP、Vimentin高表达于CAFs;透射电镜和Western blot鉴定外泌体符合其特征;与PBS组相比,与CAFs外泌体共孵育组A549细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加(P<0.001),细胞凋亡水平显著降低(P<0.001),PI3K、AKT、mTOR磷酸化水平显著增加,而与NFs外泌体共孵育后细胞增殖、迁移、侵袭以及凋亡水平无显著变化,PI3K、AKT、mTOR磷酸化水平无显著变化。结论肿瘤相关成纤维细胞外泌体能够通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路,而促进肺癌细胞的生长和转移。     

肿瘤相关成纤维细胞对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究

[目的]观察肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)对胃癌HGC-27细胞侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。[方法]取胃癌患者癌组织及癌旁正常胃黏膜组织分别分离培养CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),建立胃癌HGC-27细胞与CAFs或NFs共培养体系,CCK-8比色法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变,免疫印迹法检测细胞上皮间质转化(EMT)标志物[E-钙粘素(E-cadherin)蛋白、波形蛋白(Vimentin)和纤维连接蛋白(Fibronectin)蛋白]、MMP-9、STAT3、p-STAT3蛋白表达的改变。[结果]胃癌HGC-27细胞与CAFs共培养后其增殖和侵袭能力均较HGC-27细胞单独培养组或与NFs共培养组显著增强,且E-cadherin蛋白表达明显下调,同时Vimentin、Fibronectin蛋白的表达明显上调,MMP-9蛋白表达上调;STAT3总量未发生变化,p-STAT3表达上调。[结论]CAFs可促进胃癌细胞的侵袭能力,其机制可能是通过激活STAT3通路进而促进细胞EMT。     

上皮间质转化相关因子在胃癌转移中的表达变化

目的比较SGC7901细胞、循环肿瘤细胞(CTC)和原位移植胃癌组织中上皮间质转化(EMT)相关因子上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达差异。方法采用SGC7901胃癌细胞株构建裸鼠原位胃癌模型,于第8周收集CTC,处死裸鼠。计数CTC数量,观察原位移植胃癌在体内的转移情况,采用RT-qPCR检测SGC7901细胞,CTC和原位移植胃癌中EMT相关因子E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达差异。最后免疫组化检测原位胃癌中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达水平。结果成功采用SGC790细胞构建了裸鼠原位胃癌模型,于第8周收集裸鼠CTC。所有裸鼠均可在外周血中采集到CTC。原位移植胃癌在裸鼠体内发生多处转移。RT-qPCR结果表明,E-cadherin在原位胃癌中表达水平最高,与CTC和原SGC7901细胞中比较差别有统计学差异,P0.05。N-cadherin、Vimentin在CTC和SGC7901细胞中表达明显高于SGC7901细胞中,差别有统计学差异,P0.05。在原位胃癌中,免疫组化结果表明N-cadherin、Vimentin表达为弱阳性,E-cadherin表达为强阳性。结论胃癌细胞在体内转移过程中伴随着细胞EMT过程,可阻断EMT相关的众多因子或探索新的调节因子,不仅有助于更好地阐明EMT与肿瘤的关系,而且为肿瘤发生发展机制的研究和治疗提供新的思路和方法。     

衣霉素诱导胃癌细胞内质网应激介导上皮间质转化的发生

目的 观察衣霉素诱导的内质网应激介导胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化(EMT)的发生.方法 以浓度为10 μg/ml的衣霉素(TM)处理胃癌SGC-7901细胞0、6、12、24 h,RT-PCR、Western blotting法检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)表达;取GRP78高表达时间点,以10 μg/ml TM处理SGC-7901细胞,RT-PCR、Western blotting法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)及N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达;镜下观察细胞形态学变化.细胞划痕试验观察TM诱导SGC-7901细胞的侵袭能力.结果 10 μg/ml的TM处理胃癌SGC-7901细胞12h后,细胞形态逐渐类似于长梭形并生出伪足.E-cadherin mRNA及蛋白表达下降(P＜0.05),GRP78、N-cad-herin mRNA及蛋白表达同时升高(P＜0.05).胃癌SGC-7901细胞侵袭、转移能力增强.结论 TM诱导的内质网应激(ERS)可介导胃癌SGC-7901细胞发生EMT.     

胃癌患者术后血清中TGFBI与复发转移的关系及其机制

目的探讨术后血清细胞外基质蛋白转化生长因子β诱导(TGFBI)对胃癌复发转移的影响及其作用机制。方法利用shRNA结合慢病毒技术稳定敲低胃癌细胞SGC-7901中TGFBI的表达,并通过Western blot对其在细胞内及培养上清中的表达进行验证;MTT法检测TGFBI下调对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响,Transwell法检测其对细胞侵袭与迁移的影响;通过检测E-cadherin、Snail和ZEB1等转录因子的表达,探究TGFBI是否通过上皮间质转化促进胃癌的转移复发。结果胃癌患者血清样本中TGFBI表达水平显著高于正常样本,RNA干扰后TGFBI在胃癌细胞SGC-7901内及其培养上清中的表达水平均发生显著下降;TGFBI下调后胃癌细胞SGC-7901的增殖、侵袭与迁移能力均受到显著抑制,同时上皮间质转化标志物E-cadherin的表达发生上调,而Snail和ZEB1的表达发生下调。结论胃癌细胞SGC-7901中TGFBI表达下调时可能通过抑制上皮间质转化,抑制胃癌细胞增殖、侵袭与迁移,最终抑制胃癌的转移复发。     

肿瘤相关成纤维细胞对大肠癌LoVo细胞增殖和侵袭能力的影响

目的观察肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)对大肠癌LoVo细胞增殖和侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法从6例大肠癌患者癌组织及癌旁正常结肠黏膜组织分别分离培养CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),并鉴定CAFs,建立大肠癌LoVo细胞与CAFs或NFs共培养体系,CCK-8比色法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变,免疫印迹法(Western blotting)检测细胞COX-2、MMP-9蛋白表达的改变,ELISA法检测细胞上清液中前列腺素E_2(PGE_2)的含量。结果成功分离CAFs,CAFs中成纤维细胞活化蛋白(fibroblast-activated protein,FAP)与平滑肌激动蛋白-α(α-smooth-muscle actin,α-SMA)表达较NFs细胞的表达量显著增加;LoVo细胞与CAFs共培养后其增殖和侵袭能力均较LoVo细胞单独培养或与NFs共培养组显著增强,且COX-2和MMP-9蛋白表达明显升高,细胞上清液中PGE_2含量显著增加。结论 CAFs可促进大肠癌细胞的增殖、提高其侵袭能力,其机制可能是通过上调大肠癌细胞COX-2表达和PGE_2含量。但CAFs如何调控大肠癌细胞COX-2/PGE_2表达有待进一步探讨。     

塞来昔布干预对人胃癌细胞E-钙黏蛋白和基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨COX-2与E-cadherin、MMP-2之间的相互关系及其参与胃癌细胞侵袭迁移的可能机制。方法应用塞来昔布(celecoxib)对体外培养的人胃癌细胞SGC7901进行干预,采用实时荧光定量反转录PCR检测COX-2、E-cadherin、MMP-2 mRNA的表达;运用免疫荧光标记法结合激光共聚焦荧光显微镜分析E-cadherin的蛋白表达量;应用Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力的变化。结果塞来昔布明显抑制体外培养的人胃癌细胞SGC-7901中COX-2 mRNA的表达,E-cadherin mRNA的表达随着COX-2的表达下降而呈浓度与时间依赖性升高,MMP-2 mRNA的表达随着COX-2的表达下降而呈浓度与时间依赖性降低。塞来昔布30μmol/L干预人胃癌细胞SGC7901 24、36、48 h后,激光共聚焦荧光显微镜检测E-cadherin的蛋白表达量明显升高。塞来昔布干预组细胞穿过Transwell小室的细胞数明显少于对照组。结论 COX-2特异性抑制剂塞来昔布通过抑制COX-2的表达,上调E-cadherin的表达,下调MMP-2的表达,抑制体外培养的胃癌细胞SGC7901的侵袭迁移能力。     

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。     

葛花解酲方对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨葛花解酲方含药血清对肝癌细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其可能的作用机制。方法 以稳定高表达、高侵袭的HepG2肝癌细胞为体外研究模型,用不同浓度的葛花解酲方含药血清进行干预。CCK8法检测含药血清对HepG2细胞增殖的抑制作用,Transwell法观察含药血清对HepG2细胞的迁移和侵袭能力的影响,Western印迹法检测HepG2细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平。结果 CCK8法检测结果显示含药血清可显著抑制HepG2细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。不同浓度的含药血清可显著抑制HepG2细胞的迁移和侵袭,显著下调肝癌细胞中N-cadherin的表达,显著上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 葛花解酲方含药血清能抑制肝癌细胞的侵袭、迁移,其作用机制可能与抑制上皮间质转化有关。     

核转录因子CDX2抑制胃癌细胞迁移、侵袭与逆转上皮-间质转化有关

背景:尾型同源盒转录因子2(CDX2)是一种肠上皮细胞特异性核转录因子,正常胃黏膜组织不表达CDX2,而肠化生、异型增生和胃癌组织中存在CDX2异位表达。近年研究发现CDX2在胃癌中起抑癌基因作用。上皮-间质转化(EMT)与恶性肿瘤的侵袭、转移密切相关。目的:探讨CDX2对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响与EMT的关系。方法:分别将CDX2过表达质粒和干扰质粒转染入低表达和高表达CDX2的人胃癌细胞株MKN-45和AGS中,以划痕试验检测各组细胞迁移能力,Transwell小室细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测EMT标记物表达。结果:过表达CDX2能显著抑制MKN-45细胞的迁移、侵袭能力,并上调上皮标记物E-cadherin表达,下调间质标记物vimentin表达(P0.05);而沉默CDX2表达能显著增强AGS细胞的迁移、侵袭能力,下调E-cadherin表达,上调vimentin表达(P0.05)。结论:CDX2表达水平改变可影响胃癌细胞的迁移、侵袭能力,并参与EMT的调控,其对胃癌细胞迁移、侵袭的抑制作用可能与逆转EMT有关,具体分子机制有待深入研究。     

Kruppel样因子8通过转化生长因子-β1介导的上皮间质转化促进胃癌细胞的侵袭转移

目的探讨在人胃癌细胞中Kruppel样因子(KLF)8是否参与了转化生长因子(TGF)-β1介导的上皮间质转化(EMT)作用促进胃癌细胞侵袭转移。方法 TGF-β1处理胃癌细胞SGC7901和MKN45后,采用Western印迹和实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测细胞中KLF8、上皮标志蛋白——钙黏附蛋白E(E-cadherin)和间质标志蛋白——波形蛋白(Vimentin)表达水平;采用小干扰RNA(siRNA)技术降低胃癌细胞MKN45中KLF8的表达水平,细胞侵袭试验和划痕试验检测细胞的体外侵袭和迁移能力,并且采用高内涵细胞分析试验检测细胞的运动速度。结果在胃癌细胞株中,TGF-β1刺激后,能够下调E-cadherin和上调Vimentin的表达,进而促进细胞发生EMT;进一步研究发现,在胃癌细胞MKN45中,TGF-β1能够增加KLF8 mRNA和蛋白表达水平(P0.05);Western印迹和qRT-PCR实验发现,siRNA干扰KLF8表达后,能够阻断TGF-β1诱导的EMT,进而部分逆转了E-cadherin的降低和Vimentin的升高;同时,抑制KLF8后,能够降低TGF-β1促进的细胞侵袭、迁移和运动能力。结论在胃癌细胞中,KLF8参与了TGF-β1诱导EMT过程,并且有可能成为胃癌治疗中的新治疗靶标。     

肿瘤相关成纤维细胞对大肠癌LoVo细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响

目的观察肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)对大肠癌LoVo细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响,并探讨其可能的作用机制。方法取大肠癌患者癌组织及癌旁正常结肠黏膜组织分别分离培养CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),建立大肠癌LoVo细胞与CAFs或NFs共培养体系,奥沙利铂处理后CCK-8比色法检测LoVo细胞存活率,PI/Annexin V双染法检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blotting)检测共培养体系中大肠癌细胞COX-2、上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、Vimentin、Fibronectin)表达的改变,ELISA法检测共培养体系中细胞上清液中前列腺素E_2(PGE_2)含量。结果 CAFs可提高奥沙利铂处理后LoVo细胞存活率,并降低细胞凋亡率;LoVo细胞与CAFs共培养后,细胞COX-2蛋白表达上调,细胞上清液中PGE_2含量显著增加,且细胞EMT标志物蛋白E-cadherin表达降低,Vimentin、Fibronectin蛋白表达上调。结论 CAFs可降低大肠癌LoVo细胞对奥沙利铂的敏感性,其机制可能是通过上调大肠癌细胞COX-2表达和PGE_2合成,继而诱导EMT。     

胃泌素对胃癌细胞EMT和Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达的影响

目的探讨高表达胃泌素(gastrin)对胃癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响及可能机制。方法用gastrin过表达质粒pcDNA3-gastrin及空载体pcDNA3.1转染胃癌细胞SGC-7901、MKN45,48 h后收集细胞蛋白,Western印迹检测鉴定gastrin表达,检测EMT相关标志物E-钙黏蛋白(cadherin)、N-cadherin、Snail及wnt/β-连环蛋白(catenin)信号通路相关基因wnt3α、β-catenin、c-myc的蛋白表达变化。结果在SGC-7901、MKN45细胞中成功过表达gastrin。与pcDNA3.1空载体转染组相比,pcDNA3.1-gastrin转染SGC-7901、MKN45细胞中上皮标志蛋白E-cadherin表达下调,间质标志蛋白N-cadherin、Snail表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);同时Wnt/β-catenin通路蛋白相关蛋白wnt3α、β-catenin及其下游基因c-myc的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达gastrin能够激活Wnt/β-catenin信号通路和促进胃癌细胞SGC-7901和MKN45发生EMT。     

二氢青蒿素体外抑制胃癌细胞的黏附、迁移和侵袭

目的 探讨二氢青蒿素(DHA)对人胃癌SGC7901细胞体外黏附、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法 1.25、2.5、5、10、20 μmoL/LDHA作用体外培养的人胃癌SGC7901细胞24 h后,MTT法检测细胞活力;1.25、2.5、5 μmol/L DHA作用人胃癌SGC7901细胞24 h后,细胞黏附分析检测细胞黏附率;细胞划痕实验观察其对细胞迁移能力的影响;Transwell小室侵袭实验观察其对细胞侵袭能力的影响;RT-PCR和Western印迹分别检测ICAM-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,1.25、2.5、5μmoL/L DHA对SGC7901细胞增殖没有影响,但显著抑制SGC7901细胞黏附、迁移和侵袭能力,且抑制作用具有剂量依赖性.RT-PCR和Western印迹结果显示,与对照组相比,5 μmol/L DHA作用人胃癌SGC7901细胞24 h,细胞内ICAM-1、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05),TIMP-2 mRNA和蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论 DHA可体外抑制胃癌SGC7901细胞的黏附、迁移和侵袭能力,其机制可能与上调TIMP-2的表达,下调ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表达有关.     

miR-132-3p靶向调控Gab2抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭分子机制的研究

背景 miR-132-3p在肿瘤中呈低表达,但miR-132-3p在胃癌(gastric cancer,GC)发生过程中的调控机制尚未阐明.Starbase靶基因预测显示Gab2可能是miR-132-3p的靶基因.本研究假设miR-132-3p可能通过调控Gab2表达从而影响GC细胞增殖、迁移及侵袭.目的探讨miR-132-3p对Gab2表达的调控作用及其对GC细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测正常胃黏膜上皮细胞系GES1与人GC细胞系SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p、Gab2的表达水平;以BGC-823细胞为研究对象,利用脂质体转染法分别将miR-132-3p模拟物(miR-132-3p组)、阴性对照(miR-NC组)、miR-132-3p与pcDNA(miR-132-3p+pcDNA组)、miR-132-3p与pc DNA-Gab2(miR-132-3p+pcDNA-Gab2组)转染至BGC-823细胞,通过qRT-PCR、Western blot验证转染效果.甲基噻唑基四唑检测各组细胞存活率; Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭;Starbase预测Gab2为miR-132-3p的靶基因,分别将野生型Gab2基因3’UTR荧光素酶报告基因载体与miR-132-3p靶序列突变型载体及相应的miRNA转染至BGC-823细胞,双荧光素酶报告实验检测荧光素酶活性; Western blot检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、P21、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达量.结果与GES1细胞相比, SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p的表达水平显著降低(P0.05), Gab2的表达水平显著升高(P 0.05);与miR-NC组相比,miR-132-3p组细胞存活率显著降低(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著降低(P 0.05),P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P 0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-132-3p能够靶向调控Gab2基因;与miR-132-3p+pcDNA组相比, miR-132-3p+pcDNA-Gab2组细胞存活率显著升高(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05), P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.05).结论 miR-132-3p能够通过靶向调控Gab2而抑制GC细胞增殖、迁移及侵袭.     

miR-29通过调节抗凋亡蛋白Mcl-1表达参与胃癌细胞多药耐药的发生

目的研究miR-29在胃癌多药耐药细胞株[SGC7901/长春新碱(vincristine,VCR)及SGC7901/阿霉素(adriamycin,ADR)]及其亲本细胞(SGC7901)中的表达差异,探讨其在胃癌多药耐药发生中的作用及可能机制.方法 qRT-PCR检测miR-29在不同胃癌细胞系中的表达差异,通过细胞转染调控miR-29的表达水平,MTT法检测不同化疗药物对转染后胃癌细胞的IC50值变化;流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化;并应用Western blot、双荧光素酶报告基因实验等方法探讨其可能机制.结果 SGC7901/VCR及SGC7901/ADR细胞中miR-29家族(miR-29a/b/c)相对表达量均显著低于其亲本细胞SGC7901(P0.05);MTT实验表明,下调miR-29表达后SGC7901细胞对不同化疗药物的IC50值显著增高(P0.05);而上调miR-29表达后SGC7901/VCR及SGC7901/ADR细胞对不同化疗药物的IC50值则显著降低(P0.05);流式细胞术检测结果显示,miR-29表达变化可显著改变5-氟尿嘧啶诱导胃癌细胞的凋亡水平(P0.05);Western blot、双荧光素酶报告基因实验等证实髓细胞白血病因子-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)是miR-29直接调控靶基因.结论 miR-29表达下调是人胃癌细胞多药耐药发生的机制之一,其可能与负性调控抗凋亡蛋白Mcl-1表达有关.     

MUC2反义脱氧寡核苷酸对胃癌细胞体外黏附侵袭活性的影响

目的 探讨黏蛋白MUC2反义脱氧寡核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞株SGC7901黏附侵袭活性的影响。方法 采用人工合成的MUC2 ASODN经阳离子脂质体包裹后转染入SGC7901细胞中,采用黏附试验、Boyden小室体外侵袭试验观察比较转染前后癌细胞黏附率,穿膜细胞相对百分率及组织蛋白酶D、钙黏蛋白表达的变化。结果 转染SGC7901细胞48h后,癌细胞黏附率在30、60、90、120min各时间段逐渐升高,但低于空白对照组（P均〈0．01）;转染后癌细胞穿膜细胞相对百分率明显下降;转染后SGC7901细胞的E-钙黏蛋白表达明显增高,组织蛋白酶D水平明显降低。结论 人工合成的MUC2 ASODN能有效抑制胃癌细胞株SGC7901黏附侵袭能力。     

肝再生磷酸酶3对SGC7901细胞迁移侵袭及RhoC表达的影响

目的:通过观察肝再生磷酸酶3(phosphatase of regenerating liver 3,PRL-3)对胃癌SGC7901细胞迁移侵袭及RhoC表达的影响,探讨胃癌SGC7901细胞迁移侵袭的机制中PRL-3和RhoC是否位于同一信号通路.方法:体外培养人胃癌SGC7901细胞,经不同浓度PRL-3抗体(1∶600,1∶400,1∶200)作用后,采用细胞划痕实验观察不同时间段(0、12、24、48 h)SGC7901细胞的迁移距离;通过Transwell迁移侵袭实验检测不同浓度PRL-3抗体(1∶600,1∶400,1∶200)作用48 h后SGC7901细胞迁移侵袭的穿膜细胞数,并采用Real-time PCR和ELISA检测SGC7901细胞中RhoC mRNA及蛋白表达量的变化,比较不同浓度PRL-3抗体处理后SGC7901细胞迁移侵袭的细胞数和RhoC mRNA及蛋白的表达量.结果:与对照组比较,随着PRL-3抗体浓度的升高和作用时间的延长,SGC7901细胞的迁移距离逐渐减小,在48 h,经不同浓度PRL-3抗体(1∶600,1∶400,1∶200)处理SGC7901细胞后,其迁移和侵袭的细胞数,RhoCmRNA相对表达量和蛋白表达水平与对照组相比均明显降低(迁移SGC7901细胞数:365.0±5.0,165.3±5.0,90.3±5.5 vs 512.3±4.9;侵袭SGC7901细胞数:321.3±6.1,179.0±6.1,75.7±4.0 vs 545.3±5.0;RhoC mRNA的相对表达量:0.910±0.022,0.742±0.018,0.539±0.015 vs 1.000±0.000;RhoC蛋白表达量:1130.77 g/mL±15.32 g/mL,981.52 g/mL±14.44 g/mL,893.03 g/mL±11.10 g/mL vs 1212.42 g/mL±18.37g/mL)(均P0.01),不同PRL-3抗体浓度组两两比较均有统计学意义(均P0.01).结论:PRL-3在体外能显著促进SGC7901细胞的迁移侵袭,并能增强RhoC基因和蛋白的表达,提示在SGC7901细胞迁移侵袭的机制中PRL-3和RhoC可能位于同一信号通路.     

Garcinone C对鼻咽癌细胞衰老、迁移和侵袭功能的影响及作用机制研究

目的 探讨Garcinone C对鼻咽癌细胞衰老、迁移和侵袭功能的影响及作用机制。方法 Garcinone C处理鼻咽癌细胞HONE1,通过β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞。应用Transwell实验检测Garcinone C干预对鼻咽癌细胞HONE1、HK1迁移、侵袭能力的影响。应用Western blot实验检测鼻咽癌细胞HONE1、HK1上皮间充质转化(EMT)标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP2)蛋白表达水平,以及铁死亡相关蛋白铁蛋白重链1(FTH1)、胱氨酸转运体蛋白xCT的表达水平。结果 经Garcinone C处理后,HONE1细胞衰老率上升(P<0.05),HK1和HONE1细胞迁移和侵袭能力下降(P<0.05)。Garcinone C干预可上调HONE1、HK1细胞E-cadherin和TIMP2蛋白的表达水平(P<0.05),下调N-cadherin和FTH1、xCT蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 Garcinone C可能通过抑制鼻咽癌细胞的迁移、侵袭,并...     

氯化两面针碱对人胃癌细胞增殖、迁移的抑制作用

目的探讨氯化两面针碱(NC)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移的作用及其机制。方法 MTT实验检测NC对SGC-7901细胞的增殖作用;Transwell小室实验检测NC对SGC-7901细胞迁移和侵袭的影响;Western印迹检测NC对人胃癌SGC-7901细胞中Bax,Bcl-2,PCNA,MMP2,MMP1和GAPDH表达的影响。结果 MTT实验表明NC抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并且呈时间、剂量依赖性(P<0.05);此外,NC显著抑制SGC-7901细胞中PCNA表达,呈剂量依赖性(P<0.05);Transwell小室实验表明NC显著抑制SGC7901细胞迁移和侵袭,呈剂量、时间依赖性(P<0.05);Western印迹表明NC上调凋亡蛋白Bax的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,抑制MMP1以及MMP2的表达(均P<0.05)。结论 NC通过诱导细胞凋亡抑制SGC-7901细胞增殖,通过降解MMP1和MMP2从而抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移。