卵巢癌相关成纤维细胞的培养及其对癌细胞侵袭力的影响

目的 探讨卵巢癌相关成纤维细胞(CAFs)对卵巢癌细胞株CAOV3侵袭力的影响.方法用组织块贴壁培养法获得原代卵巢CAFs和卵巢正常成纤维细胞(NFs);通过倒置相差显微镜观察细胞形态和多种蛋白的免疫组化染色,对卵巢CAFs进行鉴定,观察CAFs对CAOV3侵袭力的影响.结果获得纯化的卵巢CAFs,其波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白染色呈阳性,角蛋白呈阴性;CAFs可显著提高CAOV3的侵袭能力(P<0.01).结论与NFs相比,CAFs在形态结构、蛋白表达等方面均有显著差异,卵巢CAFs可增强CAOV3侵袭作用.     

miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及机制

目的探讨miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及作用机制。方法通过RT-PCR检测miR-215在高转移胃癌细胞株NCIN87,BGC-823,RF-48及低转移细胞株HGC-27及MKN-28中的表达;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-215抑制剂对胃癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测miR-215抑制剂对胃癌细胞活化白细胞黏附分子(ALCAM),基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏附素(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin)表达量的影响。结果 RT-PCR结果证实miR-215在高转移胃癌细胞株中的表达高于低转移胃癌细胞中的表达,且miR-215在BGC-823细胞中的表达最高,因此选用BGC-823作为后续实验细胞株。miR-215抑制剂转染BGC-823细胞48 h后,发现下调miR-215表达能显著抑制BGC-823细胞迁移及侵袭能力,并能下调ALCAM,MMP-2,MMP-9及Vimentin表达,上调E-cadherin表达。结论miR-215低表达能显著抑制胃癌细胞BGC-823侵袭及转移能力,与下调MMPs及抑制EMT生成有关。     

沉默ANK2基因表达对胃癌细胞增殖、周期以及转移能力的影响

目的探究沉默细胞膜锚蛋白(ANK2)基因表达对人胃癌细胞SGC-7901增殖、侵袭、细胞周期的影响及作用机制。方法实验分为对照组、无义组、siRNA-ANK2组,胃癌细胞SGC-7901转染siRNA-ANK2或siRNA无义序列,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中ANK2蛋白的水平。CCK-8法检测细胞的活性,流式细胞术检测细胞周期变化,Transwell法检测细胞的侵袭力。结果 SGC-7901细胞转染siRNA-ANK2后,与对照组相比,siRNA-ANK2组ANK2蛋白表达量显著降低(P0.05),细胞活性明显降低(P0.05);siRNA-ANK2组细胞周期G0/G1期较对照组显著升高,S期降低(P0.05),侵袭数目明显降低(P0.05)。结论沉默ANK2基因抑制胃癌细胞SGC-7901增殖和转移,阻碍细胞周期G1向S期转换。     

结缔组织生长因子及其抗体对人胃成纤维细胞生物学功能的影响

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)及其抗体对人胃成纤维细胞增殖、移行、合成细胞外基质(ECM)的影响.方法 (1)应用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的CTGF(5、20、50、100 ng/ml)及其抗体(0.1、0.5、1 μg/ml)对人胃成纤维细胞增殖的影响.(2)应用羟脯氨酸法检测不同浓度的CTGF及其抗体对人胃成纤维细胞分泌胶原蛋白的影响.(3)应用Transwell小室法检测不同浓度的CTGF及其抗体对人胃成纤维细胞迁移能力的影响.结果 5 ～ 10 ng/ml CTGF可剂量依赖性地促进入胃成纤维细胞增殖;20～ 100 ng/ml CTGF可剂量依赖性地促进人胃成纤维细胞分泌胶原蛋白;20～ 100 ng/ml CTGF可剂量依赖性地促进人胃成纤维细胞迁移.另一方面,0.1～1μg/ml CTGF抗体可剂量依赖性地抑制人胃成纤维细胞增殖;0.5、1 μg/ml CTGF抗体可剂量依赖性地抑制人胃成纤维细胞分泌胶原蛋白;0.5、1 μg/ml ETGF抗体可剂量依赖性地抑制人胃成纤维细胞迁移.以上各实验组与相应对照组比较均有显著性差异(P＜0.05).结论 一定浓度范围内的CTGF能剂量依赖性地促进人胃成纤维细胞增殖、分泌胶原蛋白及迁移,这表明CTGF参与了胃硬癌间质纤维化进程,在间质纤维化进程的各环节发挥重要作用.而一定浓度范围内的CTGF抗体可剂量依赖性地抑制这些效应,这为胃硬癌的临床治疗提供了新的思路.     

C2基因对人胃癌细胞生长特性的影响

目的 探索新克隆的编码人蛋白翻译起始因子的全长基因（C2基因）对人胃癌细胞生长特性的影响。方法 将已构建的C2真核表达载全扩增纯化并转染人胃癌细胞系SGC7901细胞,获得稳定转染细胞系,用流式细胞仪和免疫组化检测其C2蛋白表达状况,应用细胞计数法和四唑蓝比色试验绘制转化细胞的生长曲线。结果 C2基因转化的细胞高水平稳定表达C2蛋白,C2基因转化细胞生长速度减慢,其对数生长期为11d,较对照空载体转染细胞的（7d）明显延长。结论C2基因转染可引起胃癌细胞生长速度减慢,可能是一种潜在的蛋白翻译水平的抑癌因素。     

胃腺癌组织中碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达

背景碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种强有力的血管生成因子,与肿瘤发生关系密切。目前有关bFGF与胃癌关系的研究不多。目的研究胃腺癌组织中bFGFmRNA的表达,探讨bFGF在胃腺癌发生、发展中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)检测20例胃腺癌组织和相应癌旁组织(距肿瘤边缘5cm以上)中bFGFmRNA的表达,以恒定表达的GAPDH作为内参照。计算bFGFmRNA与GAPDHmRNA表达积分光密度值的比值(b/G),以反映组织中bFGFmRNA的相对表达量。结果胃腺癌组织的b/G比值显著高于癌旁组织(1.3173±0.1578对0.9427±0.1402,P<0.01);其中低分化腺癌的b/G比值显著高于高中分化腺癌(1.4232±0.1225对1.2013±0.1340,P<0.05),有淋巴结转移者的b/G比值显著高于无淋巴结转移者(1.4075±0.1375对1.1962±0.1286,P<0.05)。结论bFGF与胃腺癌的恶性程度和转移密切相关,对其发生、发展具有重要影响。     

胃力康颗粒对实验性胃溃疡大鼠胃组织碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

[目的]观察胃力康颗粒对实验性胃溃疡大鼠胃组织碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响,探讨胃力康颗粒的疗效机制.[方法]大鼠随机分成正常组、模型组、法莫替丁对照组和胃力康治疗组,以Okabe改良法复制实验性胃溃疡大鼠模型,采用RT-PCR检测各组大鼠胃组织bFGF mRNA表达水平.[结果]胃力康治疗组bFGF mRNA表达水平较模型组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]胃力康颗粒能上调bFGF mRNA的表达,从而促进溃疡愈合.     

多巴脱羧酶小干扰RNA体外对胃癌细胞侵袭转移能力的影响

目的: 探讨多巴脱羧酶(DDC)在胃癌侵袭转移过程中的作用.方法:体外合成多巴脱羧酶的小干扰RNA(siRNA-DDC), 转染人胃癌细胞系BGC823, 逆转录酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)方法检测DDC基因和蛋白表达的变化, 体外侵袭实验检测转染后细胞侵袭能力的变化.结果: RT-PCR和Western blot显示siRNA-DDC转染胃癌细胞系BGC823之后, 其DDC的基因和蛋白表达明显受到抑制(0.27±0.09 vs 0.89±0.14;0.39±0.12 vs 1.26±0.19, 均P<0.05);而未转染组和阴性对照组间并无明显差异. 体外侵袭实验显示转染后胃癌细胞数明显低于未转染组和阴性对照组(6.48±3.62 vs 23.72±3.24, 22.38±3.84, 均P<0.05). 提示抑制DDC基因表达能显著降低胃癌细胞的侵袭能力.结论:siRNA-DDC能明显抑制胃癌细胞BGC823的DDC表达, 从而抑制胃癌细胞的侵袭转移能力.     

顺铂对胃癌细胞Bax和Bcl-2表达的影响

目的通过研究顺铂对人胃癌BGC-823细胞Bax和Bcl-2的影响,探讨顺铂对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法用化疗药物顺铂以不同浓度、不同时间处理对数期生长的人胃癌BGC-823细胞,采用MTT法检测顺铂对BGC-823细胞增殖抑制率的影响,采用免疫印迹和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Bax及Bcl-2蛋白和mRNA的表达。结果顺铂对人胃癌细胞BGC-823生长增殖具有明显抑制作用,其效应成浓度和时间依赖性（P〈0．05）。不同浓度的顺铂处理BGC-823细胞24小时后,Bax蛋白和mRNA水平成浓度依赖性增加（P〈0．05）,而Bcl-2蛋白和mRNA水平成浓度依赖性减少。结论经顺铂处理的人胃癌BGC一823细胞,不论是在转录水平还是在翻译水平均上调了Bax的表达,同时使Bcl-2表达下调,此途径可能为顺铂所诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

槲皮素对人胃癌细胞侵袭和MMP-2表达的影响

目的:观察槲皮素(Quercetin,Que)对人胃癌细胞侵袭的影响,并探讨其可能机制.方法:采用不同浓度的槲皮素处理胃癌BGC-823细胞后,以软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,以Boyden小室模型方法检测癌细胞侵袭能力,采用荧光实时定量PCR检测癌细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metallopeptidase-2,MMP-2)基因mRNA水平,以Western blot方法检测癌细胞MMP-2基因蛋白水平变化.结果:不同浓度的胃癌BGC-823细胞经槲皮素处理后,恶性增殖和侵袭能力均明显下降,且呈剂量依赖性(P<0.005,P<0.005).槲皮素处理组MMP-2基因mRNA和蛋白水平均明显下调,且呈时间和浓度依赖性,即随着作用时间的延长和槲皮素作用浓度的增加,MMP-2的mRNA和蛋白水平逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001).结论:槲皮素可明显抑制胃癌BGC-823细胞侵袭能力,其机制可能与下调MMP-2基因表达有关.     

转染Bcl-2反义核酸对胃癌细胞药物敏感性的影响

以手术根治为主的胃癌综合治疗,五年生存率只有３７－７％,对胃癌的化疗并未取得理想的效果［１］．Ｂｃｌ２基因的异常表达,不仅与胃癌的发生有关,其抗凋亡作用的发挥,势必影响化疗效果［２］;肿瘤细胞对化疗药物存在多药耐药现象,缘于多种机制,Ｂｃｌ２基因的异常表达可能与之有关［３］．我们通过ｐＤＯＲ载体将Ｂｃｌ２反义核酸转染胃癌细胞,观察转导细胞对化疗药物顺铂（ＤＤＰ）、５氟脲嘧啶（５ＦＵ）、长春新碱（ＶＣＲ）的敏感性调变,能否逆转耐药,为胃癌的治疗探索新的途径．１　材料和方法１．１　材料　人…     

Bcl-2反义核酸对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的观察Bcl-2反义核酸对胃癌细胞SGC-7901增殖及细胞周期的影响.方法利用转染Bd-2反义核酸的胃癌细胞antibcl-27901与SGC-7901细胞比较,MTT方法及流式细胞仪观察转导细胞的增殖能力和细胞周期.结果转染Bcl-2反义核酸使胃癌细胞增殖受抑,细胞周期未受影响.结论Bd-2反义核酸对胃癌细胞具有一定的抑瘤效应.     

钙拮抗剂对成纤维细胞胶原基因的影响

目的：研究钙拮抗剂汉防己甲素（Tet)、维拉帕米(Ver)和硝苯啶（Nif)对3T3成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ胶原基因表达的影响,旨在探讨其抗肝纤维化的机理。方法：应用标记Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型前胶原cDNA探针与RNA斑点印迹杂交技术,检测Tet,Ver和Nif与3T3成纤维细胞共育前后Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原mRNA水平的变化。结果：Tet,Ver和Nif与3T3成纤维细胞共育后Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原mRNA水平有不同程度降低。结论：钙拮抗剂可以抑制细胞外基质胶原基因的表达。     

MBD2在老年胃癌中的表达及其对胃癌细胞多药耐药性的作用

目的探讨甲基化CpG结合域蛋白质2(MBD2)在老年胃癌中的表达及其对胃癌细胞多药耐药性的作用。方法采用免疫组化染色法检测70份老年胃癌组织及其相应的癌旁组织标本中的MBD2表达情况,并分析其表达水平与病理参数的关系。Western印迹检测MBD2在胃癌细胞系SCG7901及其耐药细胞系中的表达。使用MBD2的小干扰RNA静默MBD2表达后,通过MTT试验检测化疗药物顺铂、5-氟尿嘧啶对胃癌细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果 MBD2在胃癌组织中阳性表达率为72.86%,明显低于相应的癌旁组织中的92.86%(P<0.01)。MBD2在胃癌组织中表达与TNM分期、远处转移相关;其中MBD2在TNM分期为Ⅰ期和Ⅱ期的患者中阳性表达率明显高于Ⅲ期和Ⅳ期患者(P<0.05)。SGC7901/阿霉素、GC7901/长春新碱中的MBD2/β-actin灰度比值明显低于其亲本细胞SGC7901(P<0.01)。SGC7901细胞和转染无关序列对照寡核苷酸的SGC7901细胞MBD2/β-actin比值之间差异无统计学意义(P>0.05);转染MBD2特异性小干扰RNA的SGC7901细胞中MBD2/β-actin比值明显低于上述两株对照组细胞(P<0.05)。转染MBD2特异性小干扰RNA的胃癌细胞对顺铂和5-氟尿嘧啶的IC50值均明显高于转染无关序列对照寡核苷酸的胃癌细胞(P<0.01)。结论 MBD2在老年胃癌组织中表达明显降低,与临床分期和远处转移有关,可抑制胃癌细胞的多药耐药性,说明MBD2表达失调参与了胃癌的发生、发展。     

肿瘤相关成纤维细胞对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究

[目的]观察肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)对胃癌HGC-27细胞侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。[方法]取胃癌患者癌组织及癌旁正常胃黏膜组织分别分离培养CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),建立胃癌HGC-27细胞与CAFs或NFs共培养体系,CCK-8比色法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变,免疫印迹法检测细胞上皮间质转化(EMT)标志物[E-钙粘素(E-cadherin)蛋白、波形蛋白(Vimentin)和纤维连接蛋白(Fibronectin)蛋白]、MMP-9、STAT3、p-STAT3蛋白表达的改变。[结果]胃癌HGC-27细胞与CAFs共培养后其增殖和侵袭能力均较HGC-27细胞单独培养组或与NFs共培养组显著增强,且E-cadherin蛋白表达明显下调,同时Vimentin、Fibronectin蛋白的表达明显上调,MMP-9蛋白表达上调;STAT3总量未发生变化,p-STAT3表达上调。[结论]CAFs可促进胃癌细胞的侵袭能力,其机制可能是通过激活STAT3通路进而促进细胞EMT。     

SMYD2对心脏成纤维细胞的增殖和胶原合成的影响

目的探讨组蛋白甲基转移酶SMYD2对心脏成纤维细胞(CFs)的增殖和胶原合成的影响。方法体外分离培养CFs,通过转染SMYD2干扰RNA(siRNA),在CFs中降低SMYD2的表达,利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理各组细胞,检测以下指标:(1)噻唑蓝(MTT)法检测CFs增殖;(2)Western Blot和qPCR检测SMYD2、促进转化生长因子β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原等指标的表达。结果 AngⅡ诱导CFs中SMYD2的表达增加(P<0.01)。AngⅡ刺激CFs增殖和胶原合成(P<0.01),SMYD2-siRNA和对照组相比,CFs增殖下降(P<0.05),Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和转化生长因子β1表达降低(P<0.05)。结论降低CFs中SMYD2表达可抑制AngⅡ引起的CFs增殖和胶原合成,提示SMYD2参与心肌纤维化的发生过程。     

整合素a5b1对胃癌细胞黏附、转移及耐药的影响

目的:探讨整合素a5b1 mRNA表达水平对胃癌细胞黏附、迁移、髓外浸润过程的影响.方法:采用Western blot检测法及RT-PCR分别测量HTB-103、CRL-5822、CRL-5971及CRL-5973等不同对数生长期的白细胞株整合素a5b1蛋白表达水平及整合素a5b1 mRNA水平.将不同胃癌细胞株随机分为实验组及对照组,实验组加入整合素a5b1抗体,对照组加入同型IgG,观察两组胃癌细胞与ECV304细胞系的黏附率、细胞迁移率及白细胞穿过人工基质膜的浸润能力.结果:CRL-5822、CRL-5971及CRL-5973细胞整合素a5b1 mRNA相对表达量分别为(0.0821±0.0128)、(0.185±0.0082)、(0.798±0.042)明显高于HTB-103细胞(0.0002±0.0000)(P<0.05).观察组CRL-5822、CRL-5971及CRL-5973细胞株黏附率(52.16%±2.52%、44.22%±2.59%、33.58%±4.06%)、迁移率(45.96%±1.21%、38.86%±1.99%、24.65%±3.28%)及浸润率(29.85%±4.63%、21.31%±3.24%、13.67%±3.48%)、显著低于对照组黏附率(83.89%±7.21%、71.17%±7.38%、60.89%±10.59%)、迁移率(75.41%±9.51%65.78%±14.62%,49.91%±13.47%)及浸润率(42.63%±7.69%,29.92%±5.47%,21.59%±6.72%)(P<0.05),而两组HTB-103细胞黏附率、迁移率及浸润率无统计学差异(P>0.05).结论:黏附因子整合素a5b1可能参与胃癌细胞的形成、聚集、生长及浸润的过程,其表达水平与胃癌病程进展具有密切的关系.     

COPB2表达对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

背景 外被体蛋白复合物β2亚基(coatomer protein complex subunit beta 2,COPB2)可参与调节多种肿瘤细胞的恶性生物学行为,而其在胃癌中表达和临床意义仍不完全明确.目的 探究COPB2对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制.方法 采用免疫组化法观察COPB2在胃癌组织和癌旁...     

COX-2抑制剂对胃癌细胞生长及其15-PGDH表达的影响

背景:15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)是前列腺素生物降解的关键酶,环氧合酶-2(COX-2)是前列腺素合成的重要限速酶,目前两者间的关系尚不明确。目的:观察非选择性和选择性COX-2抑制剂对胃癌细胞生长、凋亡以及15-PGDH、COX-2表达的影响,探讨胃癌中15-PGDH与COX-2的关系。方法:以不同浓度吲哚美辛和塞来昔布干预人胃癌细胞株SGC-7901,MTF法检测细胞生长抑制情况,RT-PCR检测凋亡相关基因survivin、bax、bcl-xL表达,RT-PCR和蛋白质印迹法检测15-PGDH、COX-2表达。结果:吲哚美辛和塞来昔布均能抑制SGC-7901细胞生长,抑制作用呈时间/浓度依赖性。药物干预后,SGC-7901细胞的15-PGDH mRNA和蛋白表达显著升高,COX-2 mRNA和蛋白表达显著降低;同时抗凋亡基因survivin、bcl-xL mRNA表达降低,促凋亡基因bax mRNA表达升高。结论:非选择性和选择性COX-2抑制剂均可诱导胃癌细胞15-PGDH表达,抑制COX-2表达,提示胃癌中15-PGDH低表达与COX-2过表达相关。COX-2抑制剂可能通过促进15-PGDH表达、下调抗凋亡基因表达、上调促凋亡基因表达而抑制胃癌细胞生长。