积雪草甙对成纤维细胞DNA合成与胶原蛋白合成的影响

采用放射性同位素标记法研究积雪草甙对体外培养的小鼠成纤维细胞DNA合成和胶原蛋白合成的影响。结果表明,积雪草甙在一定剂量范围内能促进小鼠成纤维细胞DNA合成和胶原蛋白合成,并呈剂量依赖关系。     

ERK5对人肺成纤维细胞自噬、凋亡和增殖的调控

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶-5(ERK5)对人肺成纤维细胞系(HLFs)自噬、凋亡和增殖的调控及对成纤维细胞表型转化的影响.方法 转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLFs建立肺纤维化细胞模型,过表达ERK5基因(ERK5)后通过Western blot检测自噬、凋亡、增殖相关因子和表型转化标志因子α-SMA的...     

肥大细胞对肺成纤维细胞生长及胶原合成的影响

目的:通过肥大细胞与肺成纤维细胞接触和非接触共体培养观察,了解肥大细胞对肺成纤维细胞生长及胶原合成的影响。方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞和腹腔肥大细胞,实验分为三组:对照组,正常大鼠肺成纤维细胞培养;接触共育组,肥大细胞与肺成纤维细胞接触共体培养;非接触共育组,肥大细胞与肺成纤维细胞非接触共体培养。每组设3复孔,并作细胞爬片,共培养5 d,每日镜下计数肺成纤维细胞数量,建立生长曲线,5 d后用MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率,通过ELISA法检测培养液中Ⅰ型胶原蛋白含量。结果:①细胞计数显示:接触共育组各时段成纤维细胞的数目均较非接触共育组和对照组明显增多。接触共育组中成纤维细胞增殖数与非接触共育组和对照组比较,有明显差异(P<0.05);非接触共育组和对照组比较,差异不明显(P>0.05)。②MTT结果:接触共育组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组和非接触共育组(P<0.05),提示接触共育组肺成纤维细胞增殖明显高于对照组和非接触共育组,非接触共育组比对照组也高,但差异不明显(P>0.05)。③ELISA法检测结果提示,在肥大细胞与肺成纤维细胞接触共育培养组,培养液中Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于非接触共育组和对照组(P<0.05),提示接触共育组肺成纤维细胞合成Ⅰ型胶原蛋白明显增加,非接触共育组比对照组也高,但差异不明显(P>0.05)。结论:肥大细胞影响肺成纤维细胞的增殖及胶原合成;肥大细胞可能通过紧密接触来促进肺成纤维细胞的增殖及胶原合成。     

泛素-蛋白酶体抑制剂对大鼠肺成纤维细胞凋亡和增殖的影响

目的:探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠肺成纤维细胞凋亡和增殖的影响,并初步探索其机制.方法:18只SD大鼠随机分成模型组(n=9)与对照组(n=9),模型组气管内一次性注入博莱霉素(5 mg/kg),对照组气管内注入等量无菌生理盐水,分别于7,28,45 d每组处死动物3只,提取成纤维细胞进行培养并用相同浓度的...     

SAHA对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞胶原蛋白表达的影响

目的探讨辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对转化生长因子-β1(TGF-β1)所诱导的人胚肺成纤维细胞（HELF）胶原表达的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞系HELF,并分为空白对照组、SAHA组、TGF-β组以及SAHA＋TGF-β组。其中空白对照组加入等体积PBS;SAHA组加入5 μmol/L SAHA;TGF-β组加入终浓度为5 ng/mL TGF-β1孵育24 h;SAHA＋TGF-β组在TGF-β组基础上分别加入0.5、2.0、和5.0 mol/L SAHA,共同孵育24 h。处理结束后,获取培养上清,比色法测量羟脯氨酸(HYP)的含量,并用逆转录－聚合酶链反应（RT-PCR）检测HELF细胞中Ⅰ、Ⅲ型前胶原的mRNA表达水平。结果对照组脯氨酸表达极低,TGF-β1处理后,羟脯氨酸含量达12.684±1.485 μg/mL。当分别用0.5、2.0、和5.0 mol/L SAHA处理后,HYP含量随着SAHA浓度的增加而减少（P<0.05）;SAHA孵育24 h后,能够明显抑制TGF-β1刺激后的细胞表达Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白mRNA,并且具有明显的剂量依赖性（P<0.05）。结论SAHA能减少TGF-β1诱导的HELF羟脯氨酸含量及Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白表达,这可能是其抗纤维化的重要机制。     

大蒜新素对人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞凋亡的影响

目的 研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)诱导感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)凋亡的动态变化及凋亡调控基因bcl-2和fas mRNA表达的影响。方法 用流式细胞术测定HELF在高、低感染复数(MOI分别为2．5、0．25)HCMV感染后1、12、24、36、48、72、96h凋亡细胞比率；大、中、小剂量大蒜新素(9、6和3μg／mL)处理正常的和感染的HELF细胞(MOI为2．5)后上述各时间点凋亡细胞比率。用原位杂交法检测大剂量大蒜新素处理感染细胞(MIO为0．25)72h后bcl-2和fas mRNA表达强度变化，并与正常细胞和感染细胞对比分析。结果 正常细胞凋亡比率保持恒定低水平(凋亡率平均2．68％)；低、高感染复数感染细胞随时间延长凋亡细胞逐渐增多，凋亡率峰值分别达8．85％(96h)和25．63％(72h)；各剂量大蒜新素处理的正常细胞凋亡率增加，呈剂量依赖性，峰值分别为4．88％、6．47％和8．35％；但各剂量药物处理感染细胞后却使细胞凋亡比率下降，大剂量药物处理72h时效应最为明显，凋亡细胞比率由25．63％降至16．24％。正常细胞高表达bcl-2，低表达fas基因；感染HCMV后，bcl-2表达显著下调，fas表达明显增强；大蒜新素处理感染细胞后使bcl-2表达强度明显高于感染细胞，fas表达水平明显低于感染细胞，但仍未恢复到正常细胞水平。结论HCMV是HELF凋亡的强诱导剂；病毒可通过下调凋亡抑制基因bcl-2和上调凋亡促进基因fas而发挥致凋亡作用。大蒜新素本身可诱导HELF凋亡，但却能明显抑制HCMV诱导的细胞凋亡，其抑制作用可能与药物干扰HCMV影响凋亡调控基因bcl-2和fas表达有关。     

TGFβ1对人胚肺成纤维细胞中 miR-29表达的影响

【目的】探讨转化生长因子β1（TGFβ1）对人胚肺成纤维细胞中微小核糖核酸-29（miR-29）表达的影响。【方法】以未处理组为对照,U6基因做内参,用荧光定量PCR（real-time PCR）法检测 TGFβ1处理的人胚肺成纤维细胞（IMR90）中miR-29a/b/c的表达。【结果】用浓度为1,2,4 ng/mL的TGFβ1处理IMR90细胞时,与对照组比较,其miR-29a/b/c相对表达依次降低（ P ＜0．05）;用浓度为2 ng/mL的TGFβ1分别处理IMR90细胞24 h ,48 h ,96 h ,与未处理组比较,其miR-29a/b/c相对表达逐渐下调（ P ＜0．05）。【结论】在IMR90细胞中,TGFβ1可抑制miR-29的表达,预示 TGFβ1-miR-29通路在肺间质纤维化形成过程中起重要作用。     

IL-17对肺成纤维细胞的增殖、转化和胶原合成作用

目的探讨IL-17对博来霉素诱导肺纤维化形成中的肺成纤维细胞增殖、转化、胶原合成作用。方法用5 mg/kg博来霉素气管内注入的方法诱导肺纤维化形成,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-17/IL-17RmRNA在肺纤维化形成中表达的变化,选择表达IL-17RmRNA最佳时间的肺成纤维细胞进行原代培养、鉴定。使用四氮唑蓝比色法检测不同浓度的IL-17对肺成纤维细胞的增殖。使用RT-PCR和Western Blotting检测肌成纤维细胞标志物α-SMA以及I和III型胶原的表达。结果(1)IL-17/IL-17RmRNA在肺纤维化形成中明显升高,在第14天表达最高。(2)不同浓度IL-17能够促进肺成纤维细胞的增殖,最佳浓度为50 ng/ml。(3)IL-17促进肺成纤维细胞表达α-SMA增加。(4)IL-17促进肺成纤维细胞I和III型胶原合成。结论 IL-17具有促进小鼠肺纤维化形成中肺成纤维细胞增殖、转化和胶原的合成作用,可能在肺纤维化形成中起重要作用。     

IL-17对肺成纤维细胞的增殖、转化和胶原合成作用

目的 探讨IL-17对博来霉素诱导肺纤维化形成中的肺成纤维细胞增殖、转化、胶原合成作用.方法 用5 mg/kg博来霉素气管内注入的方法诱导肺纤维化形成,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL- 17/IL- 17RmRNA在肺纤维化形成中表达的变化,选择表达IL-17RmRNA最佳时间的肺成纤维细胞进行原代培养、鉴定.使用四氮唑蓝比色法检测不同浓度的IL-17对肺成纤维细胞的增殖.使用RT-PCR和Western Blotting检测肌成纤维细胞标志物α-SMA以及Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达.结果 (1)IL-17/IL-17RmRNA在肺纤维化形成中明显升高,在第14天表达最高.(2)不同浓度IL-17能够促进肺成纤维细胞的增殖,最佳浓度为50 ng/ml.(3)IL-17促进肺成纤维细胞表达α-SMA增加.(4)IL-17促进肺成纤维细胞I和III型胶原合成.结论 IL-17具有促进小鼠肺纤维化形成中肺成纤维细胞增殖、转化和胶原的合成作用,可能在肺纤维化形成中起重要作用.     

敏咳清颗粒对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响

目的:通过观察敏咳清颗粒对体外培养的肺成纤维细胞(lung fibroblast,LFB)增殖、凋亡的影响,探讨敏咳清颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制.方法:将常规培养LFB分为空白组、模型组、对照组、敏咳清高浓度组、敏咳清低浓度组、养阴清肺糖浆高浓度组、养阴清肺糖浆低浓组、地塞米松组,加入肝素刺激后分别加入对应的含药血清,采用MTT法检测LFB增殖,TUNEL法检测LFB凋亡.结果:①各组含药血清均可以不同程度地抑制肝素刺激下LIB的增殖,以敏咳清颗粒高剂量组抑制LFB增殖的作用最强,48 h的抑制作用强于24 h,呈剂量依赖性;②各组均出现不同程度细胞凋亡的形态改变,以敏咳清高剂量组诱导LFB凋亡细胞最多.结论:敏咳清颗粒能显著抑制LFB增殖,诱导LFB凋亡.     

谷甾醇-3-O-葡萄糖苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响

目的探索谷甾醇-3-O-葡萄糖苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KF)抑制作用的研究。方法 0(对照组),3.125、6.25、12.5、25、50、100μg/m L的谷甾醇-3-O-葡萄糖苷作用KF细胞48 h后,MTT法检测细胞活力,Ed U染色法检测细胞增殖,流式细胞术分别检测细胞凋亡及细胞周期,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中COL I、COL III含量。结果 3.125、6.25、12.5、25、50、100μg/m L谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的降低KF细胞活力(P0.01),提高细胞增殖抑制率(P0.01),IC50=(27.54±2.18)μg/m L。与对照组比较,12.5、25、50μg/m L谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的降低细胞增殖率(P0.01),提高细胞早期及晚期凋亡率(P0.01),使细胞周期阻滞在G1期(P0.01),同时还能显著的降低细胞中COL I、COL III含量(P0.01)。结论谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的抑制KF细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时还能抑制胶原的合成。     

维拉帕米对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

为探讨维拉帕米防治眼部增殖性疾病的可能性，在体外观察了维拉帕米对人巩膜成纤维细胞增殖指数和胶原合成的影响。结果：维拉帕米２０～４０ｍｇ·Ｌ￣（－１）作用４８ｈ可使细胞ＤＮＡ含量和增殖指数明显下降（Ｐ＜０．００１），ＩＤ＿（５０）＝３８ｍｇ·Ｌ￣（－１）；４０ｍｇ·Ｌ￣（－１）可使胶原合成明显下降，作用２４ｈ组ＩＤ＿（５０）＝４６ｍｇ·Ｌ￣（－１），作用４８ｈＩＤ＿（５０）＝３３ｍｇ·Ｌ￣（－１）。结果提示：维拉帕米可抑制人巩膜成纤维细胞增殖及胶原合成，可能具有防治眼部增殖性疾病的价值。     

姜黄素对人胚肺成纤维细胞的生长抑制及细胞外基质合成的影响

目的:研究姜黄素对体外培养人胚肺成纤维细胞(HEF-5)MRC-5增殖、胶原表达和周期分布的影响。方法:体外培养MRC-5细胞,用姜黄素处理,分为正常对照组和10、20、30、40、50、60μmol/L姜黄素组。于37℃继续培养24 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,用天狼猩红染色法测定细胞内胶原的表达,用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:姜黄素呈剂量和时间依赖性抑制MRC-5细胞的增生(P<0.05),并降低胶原的生成(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示,细胞主要停滞于G1期。结论:姜黄素能抑制MRC-5细胞的增殖和胶原的增加,并使细胞周期停滞在G1期,提示姜黄素可能通过抑制MRC-5细胞的增殖来减少细胞外基质积聚,从而发挥其抗肺纤维化的作用。     

阿伐他汀对幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其意义

目的　探讨阿伐他汀对幼年大鼠心肌成纤维细胞 (CF)增殖和胶原合成的影响。方法　用消化法培养新生SD大鼠的CF ,采用3H 胸腺嘧啶核苷 ( 3H TdR)掺入法测定CF的DNA合成功能 ,四氮唑蓝 (MTT)比色法测定细胞增殖 ,流式细胞分析仪技术检测细胞周期 ,3H 脯氨酸掺入法测定胶原合成 ,分别观察不同浓度阿伐他汀对CF增殖和胶原合成的影响。结果　 ( 1)阿伐他汀以浓度依赖的方式抑制CF的3H TdR掺入率。其中 ,10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4 mol/L组的3H TdR掺入率分别为(cpm/ 5 0 0 0细胞 ) 314± 6 8、2 5 3± 5 2、2 0 1± 5 3和 170± 48,显著低于对照组 ( 378± 6 5 ) (F =16 912 ,P <0 0 0 1)。 ( 2 )随着阿伐他汀浓度的增高 ,CF的MTT比色法A4 90 值呈明显的递减趋势 ,其中 10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4 mol/L组的A4 90 值分别为 0 2 88± 0 0 0 8、0 2 5 2± 0 0 0 7、0 2 2 5± 0 0 0 8和 0 2 16± 0 0 13,与对照组 ( 0 311± 0 0 0 5 )相比 ,差异有非常显著意义 (P均 <0 0 1)。 ( 3)G0 /G1期细胞百分率随阿伐他汀浓度的增高而呈递增趋势 ,S期G2 /M期细胞百分率和增殖指数呈递减趋势 ,其中 10 -7、10 -6、10 -5和10 -4 mol/L组与对照组比较 ,差异有非常显著意义 (P均 <0 0 1)。 ( 4)CF的3H 脯     

氢化可的松对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:研究激素对体外培养的成纤维细胞增殖及分泌功能的影响,初步探讨其治疗瘢痕的作用机制.方法:采用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法,观察氢化可的松对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响.结果:氢化可的松(0.1 g/L)能够抑制体外培养成纤维细胞增殖(MTT值0.523±0.051 vs 0.347±0.036,P<0.05)及分泌胶原的功能[3H-脯氨酸掺入量(248±6) Bq vs (181±6) Bq,P<0.05],并呈剂量依赖性(r=-0.8208).结论:氢化可的松可通过抑制瘢痕成纤维细胞增殖及胶原的合成,从而达到治疗瘢痕的作用.     

雷帕霉素联合多西紫杉醇对肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制剂雷帕霉素(RAPA)联合多西紫杉醇(DOC)对肺癌细胞系A549、SPC-A-1、95D和NCI-H446增殖抑制及凋亡的影响。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度RAPA组、DOC组及DOC联合20.0 nmol.L-1 RAPA组对肺癌细胞系增殖抑制作用;流式细胞仪法检测RAPA组、DOC组及DOC联合20.0 nmol.L-1 RAPA组对肺癌95D细胞凋亡的影响。结果 RAPA能抑制肺癌细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性;单独应用DOC及DOC联合20.0 nmol.L-1 RAPA均可显著抑制肺癌细胞的增殖,且联合应用抑制率显著升高(P<0.05);流式细胞仪检测显示RAPA及DOC均可增加肺癌95D细胞的凋亡率(P<0.05),联合应用明显增加细胞的凋亡率(P<0.05)。结论 mTOR信号通路参与肺癌细胞的增殖与凋亡,mTOR信号通路抑制剂RAPA可增强DOC的抗肿瘤效应。     

川芎嗪对溶血磷脂酸诱导的心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养的心脏成纤维细胞(CF)增殖的影响,进一步研究中药川芎嗪单体对其的干预作用。方法:用消化法培养新生SD大鼠心脏成纤维细胞,用单四唑(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响及川芎嗪的干预作用。结果:随着LPA浓度的升高,MTT比色法A490值呈上升趋势。CF分泌的胶原随着LPA浓度和作用时间的增加呈递增趋势。20μg/m l的川芎嗪作用48 h即能明显抑制LPA(10-6μmol/L)诱导的细胞增殖作用(P<0.05)。结论:LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成作用,而川芎嗪能对其产生明显的抑制作用,并呈浓度依赖性。     

Leflunomide inhibits the apoptosis of human embryonic lung fibroblasts infected by human cytomegalovirus

Background

The immunomodulatory drug leflunomide (LEF) is frequently used for treating human cytomegalovirus (HCMV), but its antiviral mechanism is still unclear. In this study,we therefore investigated the effects of the active LEF metabolite A771726 on the HCMV lifecycle in human embryonic lung fibroblasts. We clarified the mechanism of LEF antiviral infection, and provide a new way to treat immune dysfunction patients with HCMV infection.

Methods

The experiment was divided into four groups: the control group, the HCMV group, the ganciclovir + HCMV group as well as the LEF + HCMV group. MTT was usedfor assessment of the cell inhibitory rate. Apoptosis was measured by staining with fluorescein isothiocyanate Annexin V and propidium iodide. Statistical significance was determined by paired t-test using SPSS software.

Results

The results of the study showed that cell proliferation was significantly inhibited by HCMV at 24 hours and 48 hours. With increasing HCMV concentration, the value-added inhibition of the cells was significantly decreased compared with the control group, and was statistically significant (P <0.01). Ganciclovir can increase proliferation of cellsinfected with HCMV; compared with the control group it was statistically significant (P <0.05). Meanwhile, with LEF treatment cell proliferation was significantly improved at 24 hours and 48 hours, with statistical significance (P <0.05). The apoptosis rate of human embryonic lung fibroblasts infected with HCMV increased significantly at 24 hours, 48 hours and 72 hours, and as time goes on the apoptosis rate increases statistically significantly (P <0.01) compared with the control group The apoptosis rate of theHCMV infection group decreased by adding LEF,and was statistically significant (P <0.05).

Conclusions

In this studywe show that LEF is an exciting new drug for cytomegalovirus infection. LEF significantly inhibited HCMV infection-induced apoptosis and proliferation, playing an important role in the treatment of patients infected by HCMV. In this study we explored the potential usefulness of LEF for cytomegalovirus infection and found it to be a cost-effective new treatment for cytomegalovirus infection that deserves further study.     

中药马勃对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

［摘 要］ 目的：中药马勃作用于体外培养大鼠皮肤的成纤维细胞,观察大鼠成纤维细胞增殖及胶原合成的能力,探讨马勃有效组分在细胞水平上促皮肤患处愈合的作用机制。方法：运用体外细胞培养技术对新生大鼠乳鼠皮肤的成纤维细胞进行培养,实验分为对照组（不给药组）和马勃有效组分37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L组;实验组于传代培养24 h后加入不同浓度的药物,继续培养24、48、72 h后收集细胞。采用MTT比色法测定细胞增殖,生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法测定细胞胶原含量。结果：与对照组比较,37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L实验组的成纤维细胞增长率和成纤维细胞胶原合成能力均显著性升高（P＜0.01）。在药物作用时间方面,与对照组比较,在24、48和72 h观察细胞增殖率和胶原合成能力均显著增强,72 h最强,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：在不同剂量马勃有效组分作用下,大鼠成纤维细胞活化增殖,胶原合成的能力增强。