基于细胞自噬研究补肾活血方抑制帕金森病模型小鼠α-突触核蛋白集聚的作用

目的探讨补肾活血方抑制1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)模型小鼠脑黑质内α-突触核蛋白(α-syn)集聚的作用机制。方法将36只雄性C57/BL小鼠随机分为空白组、模型组及中药组,每组12只。采取腹腔注射MPTP法制备亚急性PD小鼠模型。中药组在造模成功后予补肾活血方连续灌胃14天,空白组和模型组每天仅灌胃等量的生理盐水。免疫组化法检测各组小鼠脑黑质内酪氨酸羟化酶(TH)、α-syn阳性表达,并用Western Blot法检测各组小鼠脑黑质内Lamp2a、Hsc70、α-syn表达。结果与空白组比较,模型组小鼠表现出明显的PD症候群特征,且行为学评分明显升高(P0.01);与模型组比较,中药组小鼠PD症状减轻,行为学评分明显降低(P0.01)。模型组TH和α-syn阳性表达明显低于空白组(P0.01);中药组TH和α-syn阳性表达明显高于模型组(P0.01)。与空白组比较,模型组Lamp2a、Hsc70、α-syn表达水平明显升高(P0.01),TH表达水平明显降低(P0.01)。与模型组比较,中药组Lamp2a、Hsc70、TH表达水平明显升高(P0.01),α-syn表达水平明显降低(P0.01)。结论补肾活血方可能通过上调Lamp2a、Hsc70水平,进而增强分子伴侣介导的自噬来抑制PD小鼠脑黑质内α-syn的集聚,从而抑制多巴胺能神经元的凋亡。     

活血解毒方对HSG细胞凋亡及自噬表达的影响

目的 观察活血解毒方对HSG细胞凋亡及自噬表达的影响。方法 活血解毒方中药冻干粉干预IFN-γ+TRAIL联合诱导的HSG细胞凋亡,以白芍总苷(total glucosides of paeony, TGP)作为阳性对照组,实时荧光定量(quantitative real-time fluorescence, PCR)及蛋白印迹法(Western blotting)检测细胞凋亡内源性途径中及自噬相关蛋白与m RNA的表达、激光共聚焦检测自噬情况。结果 与空白组比较,模型组Bax、LC3B蛋白相对表达量明显升高(P <0.01),而Bcl-2蛋白相对表达量明显降低(P <0.01);与模型组比较,两治疗组Bax、LC3B蛋白相对表达量明显降低(P <0.01),Bcl-2蛋白相对表达量明显升高(P <0.01);与TGP组比较,中药组LC3B蛋白相对表达量降低(P <0.05);与空白组比较,模型组Bax mRNA相对表达量明显升高(P <0.01),Bcl-2m RNA相对表达量明显降低(P <0.01);与模型组比较,两治疗组Bax mRNA...     

温阳活血方对急性冠脉综合征患者临床症状、血管内皮细胞及炎症因子的影响

目的 观察温阳活血方对急性冠脉综合征(ACS)患者的临床症状、炎症反应及血管内皮细胞功能的影响.方法 将80例ACS患者随机分为治疗组和对照组各40例,对照组给予常规西药治疗,治疗组在西药治疗基础上加用温阳活血方,观察两组患者治疗前后中医证候、心绞痛疗效、血清内皮素(ET)、肿瘤坏死因子a(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、血栓素B_2(TXB_2)、6-酮-前列腺素F(6-keto-PGF)等指标变化.结果 治疗组及对照组中医证候总有效率分别为82.5%与62.5%,心绞痛总有效率分别为80%、65%,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);治疗组治疗后血清IL-6、TNF-α、TXB_2、ET等均明显降低,6-keto-PGF显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 温阳活血方具有改善ACS患者临床症状、调节血管内皮细胞功能、降低炎症反应的作用.     

温阳活血方防治急性冠脉综合征临床研究

目的研究温阳活血法对急性冠脉综合征患者临床症状、炎症反应、纤溶系统及血管内皮细胞功能等相关指标的影响。方法将急性冠脉综合征患者80例随机分为治疗组和对照组（各40例）,2组均给予西药常规扩冠、降脂、抗血小板聚集等治疗,治疗组加用温阳活血方,观察患者治疗前后中医证候、心绞痛疗效及血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素（6-K-PGF）、组织纤溶酶原激活物（tPA）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）等指标变化。结果治疗组与对照组心绞痛总有效率分别为80%、65%（P〈0.05）;治疗组及对照组中医证候总有效率分别为82.5%、62.5%（P〈0.05）;治疗组治疗后6-K-PGF、tPA等显著升高（P〈0.05,P〈0.05）;IL-6、IL-2、PAI、TXB2等均显著降低（P〈0.05或P〈0.01）。结论对急性冠脉综合征患者应用温阳活血方治疗可明显改善临床症状、调节纤溶系统及血管内皮细胞功能、降低炎症反应。     

基于自噬理论探讨补气活血方促进缺血性脑损伤血管新生

已有研究表明,在缺血性脑损伤过程中,内质网应激导致错误折叠的蛋白质堆积,自噬通过清除这些蛋白质或细胞器,转化为一定能量,有利于细胞存活,并且一定范围内的自噬有利于血管新生。课题组的先前研究表明益气活血治疗能促进缺血性脑损伤血管新生。文章通过探讨自噬与气虚血瘀证关系,为进一步研究补气活血法治疗缺血性脑损伤促进血管新生的机理打下基础。     

温阳活血方干预冠脉慢血流的临床疗效研究

目的 观察温阳活血方干预对冠脉慢血流患者的临床疗效.方法 60 例冠脉造影诊断为冠脉慢血流患者,中医辨证阳虚血瘀证.随机分为对照组（30 例,常规治疗）和治疗组（30 例,常规治疗加温阳活血方治疗）.治疗1 个月,观察患者的生化指标,中医证候、心绞痛改善情况.结果 治疗组和对照组治疗前后-氧化氮（NO）、内皮素（ET）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）和P-选择素均有统计学意义（P 〈0.01）;与对照组治疗后比较,治疗组NO 差异有统计学意义（P 〈0.01）.两组治疗前后中医证候总积分差异有统计学意义（P 〈0.01）;与对照组比较,治疗组中医证候总积分有统计学意义（P 〈0.01）.治疗组总有效率96.7%,对照组为86.9%（P 〈0.01）.治疗组和对照组治疗前后心绞痛发作次数、持续时间和硝酸甘油用量均有显著性下降（P 〈0.05）.结论 温阳活血方可提高冠脉慢血流患者的临床疗效,推测是通过改善患者的血管内皮功能而发挥作用的.     

温阳活血方治疗冠心病心衰的预后研究

目的 观察温阳活血方对冠心病心衰患者临床预后的影响.方法 100例确诊的冠心病心衰患者（中医辨证阳虚血瘀证）,随机分为两组各50例,对照组予标准抗心衰治疗,治疗组在此基础上给予温阳活血方,每日1剂,疗程1年;观察患者死亡,因心衰恶化再入院,脑钠肽（BNP）和左心室射血分数（LVEF）.结果 对照组死亡6例,因心衰再入院15例,治疗组死亡0例,因心衰再人院4例,两组间比较均有明显差异（P＜0.05）.对照组治疗前后BNP和LVEF均有显著性改变（P＜0.05）,治疗组治疗前后BNP和LVEF均有非常显著性改变（P＜ 0.01）.两组间比较,治疗前治疗组LVEF较对照组有非常显著性降低（P＜0.01）,治疗后两组间LVEF无显著差异.结论 在常规西药的基础上加上温阳活血方长期治疗可显著降低患者的死亡率和再入院率,改善患者的心功能,降低BNP.     

灵猫方抑制饥饿诱导HepG2.2.15细胞自噬研究

目的研究灵猫方对饥饿诱导HepG2.2.15细胞自噬的作用。方法选取15只SD大鼠制备灵猫方药物血清,设立厄尔平衡盐缓冲液(Earle’s balanced salt solution,EBSS)组、EBSS+空白血清组、EBSS+5倍药物血清组、EBSS+10倍药物血清组及DMEM组,每组3个样本。培养HepG2.2.15细胞1、2、4及6h,构建pEGFP-N1-LC3B表达载体,转染HepG2.2.15细胞,在荧光显微镜下观察细胞浆中GFP-LC3B分布表达变化,计算点状样GFP-LC3B的细胞数与GFP-LC3B转染HepG2.2.15细胞数比值。透射电镜观察各组HepG2.2.15细胞浆内自噬体。Western Blot检测各组HepG2.2.15细胞LC3BⅡ/Ⅰ比值(microtubule-associ-ated protein 1 light chain 3 betaⅡ/Ⅰ)。结果培养2h时,与EBSS+空白血清组比较,EBSS+5倍药物血清、EBSS+10倍药物血清明显抑制GFP-LC3B由散在分布向点状分布改变(P<0.01),电子透射电镜显示EBSS+5倍药物血清组、EBSS+10倍药物血清组抑制自噬体形成,Western Blot检测显示EBSS+10倍药物血清组LC3BⅡ/Ⅰ比值较EBSS+空白血清组明显下降(P<0.01)。结论灵猫方药物血清抑制饥饿诱导HepG2.2.15的自噬。     

利水活血温阳方对慢性心力衰竭的疗效观察

目的:探讨利水活血温阳方在慢性心力衰竭患者中的疗效。方法:106例慢性心力衰竭患者采用随机数字表法分为利水温阳方组与对照组,每组53例,对照组采用常规治疗方法进行治疗,利水温阳方组在对照组基础上加用利水活血温阳方,对比两组患者的疗效、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)、脑钠肽(BNP)水平。结果:利水温阳方组患者的治疗有效率为92.5%显著高于对照组的71.7%。治疗后两组患者的LVEF均得以显著改善;治疗后利水温阳方组患者的LVEF显著高于对照组;治疗后两组患者的BNP均得以显著降低;利水温阳方组BNP水平显著低于对照组。结论:利水活血温阳方治疗慢性心力衰竭具有较好的疗效,能够提高左室射血分数,改善心功能。     

自拟温阳活血宁心方治疗老年瘀血型顽固性失眠的临床观察

目的:观察自拟温阳活血宁心方对治疗老年瘀血型顽固性失眠的临床疗效。方法:将60例老年瘀血型顽固性失眠患者随机分为治疗组和对照组,治疗组给温阳活血宁心方联合艾司唑仑片治疗,对照组以艾司唑仑片治疗,4周为1个疗程,观察患者临床疗效及匹兹堡睡眠指数变化。结果:治疗组中医证候的评分明显优于对照组(P<0.05)。匹兹堡睡眠指数总有效率治疗组93%,对照组73%,治疗组在治疗后入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、日间功能、睡眠障碍等较对照组均有改善。结论:自拟温阳活血宁心方联合艾司唑仑片对老年瘀血型顽固性失眠疗效较单用艾司唑仑片疗效显著,值得临床推广运用。     

同时分析少腹逐瘀汤拮抗离体子宫收缩活性部位中多类型化学组成

目的建立少腹逐瘀汤拮抗离体子宫收缩的有效部位中有机酸类(香草酸、咖啡酸、阿魏酸)、萜苷类(芍药苷、芍药内酯苷)、黄酮苷类(异鼠李素芸香糖苷、异鼠李素-3-0-新橙皮苷)3种类型7个化合物的含量测定方法,为少腹逐瘀汤及有效部位的复杂效应物质的阐明及质量控制提供依据.方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱Waters SunFire-C18(4.6 mm×250mm,5 μm);流动相乙腈(A)-0.05%磷酸(B)-甲醇(C)梯度洗脱(0 min8875,30 min13825,35 min13825,55 min14815,60 min14815,80 min15805);流速1.0 mL·min-1;测定波长260,230,254,320 nm;柱温30℃.结果3种类型化学成分的7个化合物在分析测定范围内具有良好的线性关系,加样回收率在97.8%～100.2%之间.结论分析测定了少腹逐瘀汤拮抗离体子宫收缩活性部位中7个化合物的含量,方法准确可靠,重复性良好,为方剂中多类型复杂效应物质的分析评价提供了参考.     

补肾活血汤促进骨质疏松性骨折愈合的主要活性成分及 网络药理机制研究

【目的】 利用网络药理学方法探讨补肾活血汤治疗骨质疏松性骨折的主要活性成分及药理作用机制。【方法】 从中药系 统药理学数据库与分析平台（TCMSP）中收集补肾活血汤的化学成分。通过DisGeNET数据库收集骨质疏松症的疾病靶点。通 过韦恩图筛选出补肾活血汤治疗骨质疏松症的预测作用靶点。通过基因本体论（GO）功能和京都基因与基因组百科全书 （KEGG）通路富集分析获得补肾活血汤治疗骨质疏松性骨折的生物过程和信号通路。采用Cytoscape 3.9.1 软件构建“中药成 分-疾病靶点-通路”网络图,并通过拓扑参数分析,以度值作为考察,获得补肾活血汤治疗骨质疏松性骨折的主要活性成 分。通过在线String 11.5 软件构建蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络,并通过拓扑参数分析补肾活血汤治疗骨质疏松性骨折在蛋 白分子水平上的药理机制。【结果】 共筛选出 1 236个化学成分,其中包含了 72个预测作用靶点,涉及 DNA的转录、翻译甚 至酶与酶之间的结合等生物过程,与糖尿病、动脉粥样硬化、癌症等KEGG信号通路有交集。【结论】 补肾活血汤主要是通过 脱氢二甘醇4、Yangambin、阿托品、花生四烯酸、鞣花酸、豆甾醇、异鼠李素等主要成分调控核转录因子p65、丝裂原活化 蛋白激酶、雌激素受体、肿瘤坏死因子、细胞肿瘤抗原等蛋白分子发挥促进骨质疏松性骨折愈合的作用。     

利水活血温阳方对慢性心力衰竭患者心阳虚证的辨治疗效

目的:分析利水活血温阳方对慢性心力衰竭患者心阳虚证的辨证治疗效果。方法:选取于2015年6月—2016年12月本院收治的60例慢性心力衰竭且辨证为心阳虚症的患者作为本次研究对象,按数字随机表法分为观察组和对照组。两组患者在入组后采取常规治疗,对照组服用氟伐他汀治疗;观察组在此基础上加服利水活血温阳方治疗。比较两组患者治疗后的临床疗效,并检测两组患者治疗前后左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)和左室射血分数(LVEF);检测血浆N末段脑钠肽(NT-pro BNP)、糖化血红蛋白A1c(Hb A1c)水平;对两组治疗后中医证候积分进行比较。结果:两组经治疗后观察组总有效率93.33%明显大于对照组总有效率66.67%,观察组临床疗效明显优于对照组(P0.05)。治疗后观察组左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)明显低于对照组(P0.05);左室射血分数(LVEF)明显高于对照组(P0.05)。两组患者NT-pro BNP、Hb A1C水平经治疗均明显下降,观察组治疗后NT-pro BNP、Hb A1C水平明显低于对照组(P0.05)。观察患者在接受治疗后,中医证候总积分为(0.72±0.06)分明显低于对照组(1.12±0.15)分(P0.05)。结论:利水活血温阳方对于心阳虚证的慢性心力衰竭患者具有良好的辨证治疗效果,能有效改善患者心脏功能和临床症状。     

龙蛭汤含药血清对氧化损伤人脐静脉内皮细胞管型形成的影响

目的:探讨龙蛭汤含药血清对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)管型形成的影响。方法:建立过氧化氢(H2O2)诱导HUVECs氧化损伤模型,采用CCK-8增殖实验、划痕实验和Matrigel实验比较龙蛭汤含药血清(治疗组)和补阳还五汤含药血清(对照组)对氧化损伤的HUVECs的增殖、迁移和管型形成的不同影响。结果:治疗组较对照组细胞具有较高增殖能力、更快迁移速度及迁移距离、形成更多的管形腔及小分支(P0.05)。此外,24 h后治疗组细胞仍能保持完整的管腔结构和形态,而对照组则不能。结论:龙蛭汤含药血清较补阳还五汤含药血清在促进氧化损伤HUVECs管型形成方面具有更优效果。     

温阳益气养阴活血方治疗2型糖尿病肾病的临床疗效

目的:探讨温阳益气养阴活血方治疗2型糖尿病肾病的临床疗效。方法:2型糖尿病肾病患者72例,按随机数字表法分为两组,对照组36例,给予常规西医治疗,观察组36例,在西医治疗基础上联合温阳益气养阴活血方治疗,治疗3个月后,比较两组治疗效果,观察两组中医症候积分变化,并测定临床指标。结果:观察组治疗后肢体麻痛、面肢水肿、神疲乏力、咽干口渴症状积分均低于对照组(P0.05);观察组用药总有效率高于对照组(P0.05);观察组治疗后FBG、24 h蛋白尿、Scr、BUN水平均低于对照组(P0.05);两组无明显不良反应发生。结论:对2型糖尿病肾病患者在西医治疗基础上联合温阳益气养阴活血方治疗的效果加好,能改善2型糖尿病肾病的临床症状,缓解病情进展。     

温阳生精汤治疗少精子症临床及实验研究

本文使用同比随机设计的原理,对温阳生精汤进行了临床及实验研究,结果表明：其对少精子症有非常显著疗效（Ｐ〈０．０１）;动物实验结果表明：温阳生精汤具有明显的促进雄性小鼠副性器官发育的作用（Ｐ〈０．０５）。且可明显增加去势小鼠血浆睾酮含量（Ｐ〈０．０１）。     

通窍活血汤的液相指纹图谱研究

目的:用高效液相色谱法建立通窍活血汤的指纹图谱分析方法。方法:以阿魏酸、芍药苷为对照品,色谱柱:PhenomenexlunaC₁₈柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(含0.1%磷酸)梯度洗脱;柱温:30℃;测定波长分别为230nm、280nm、320nm;流速:1.0mL·min^-1,研究通窍活血汤HPLC指纹图谱。结果:标示出通窍活血汤特征色谱峰并对其色谱峰进行归属。结论:该方法准确、重复性好,为通窍活血汤的指纹图谱质量控制提供了依据。     

温阳益气活血方对初发2型糖尿病患者早期糖尿病肾病的预防作用

目的:观察温阳益气活血方对初发2型糖尿病患者早期糖尿病肾病(DN)的预防作用。方法:将244例患者用随机数字法分为两组各122例,对照组采取基础治疗,控制血糖、血压和血脂。治疗组在对照组的基础上加用温阳益气活血方。治疗前后检测红细胞压积(HCT)、全血比黏度(RBV)、血浆比黏度(RPV)、纤维蛋白原(FIB)及C反应蛋白(CRP)。随访3个月,观察早期糖尿病肾病新发率。结果:治疗过程中治疗组脱落15例,对照组脱落12例,实际有效病例217例。治疗3个月后,两组HCT、RBV、RPV、FIB及CRP较治疗前改善,差异均有显著性意义(P<0.05);治疗组HCT、RBV、RPV、FIB及CRP较对照组下降,差异均有显著性意义(P<0.05)。6个月内,治疗组早期DN的新发病率为6.36%,明显低于对照组(14.95%),差异有显著性意义(P<0.05)。结论:温阳益气活血方对初发2型糖尿病患者早期糖尿病肾病(DN)有一定的预防作用。其机制可能与降低血液黏度,改善血液流变学和血管微循环,同时具有一定的抗炎作用有关。     

补阳还五汤有效部位对局灶性脑缺血再灌注后caspase表达的作用

目的 研究补阳还五汤中4类有效部位抗脑缺血再灌注损伤作用是否是通过抑制脑组织caspase表达而实现的.方法 采用大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血模型,缺血2 h再灌注46 h,分别于缺血前和缺血后12、24、36 h给予由补阳还五汤提取的生物碱、苷、多糖和苷元,以尼莫地平为对照药.以免疫组化法检测caspase-1、caspase-3、caspase-8蛋白表达.结果 脑缺血再灌注后,缺血侧脑组织caspase-1、caspase-3蛋白表达增强,caspase-1主要表达在脉络膜,caspase-3在海马、皮质和髓质均有表达.补阳还五汤中生物碱、苷、多糖和苷元均可抑制caspase-1表达,尼莫地平对caspase-1表达无显著影响.生物碱可抑制海马和髓质区caspase-3表达,苷和苷元可抑制海马、皮质和髓质caspase-3表达,尼莫地平可抑制海马和髓质caspase-3表达,而多糖对其无显著影响.各组caspase-8表达均无显著差异.结论 补阳还五汤中生物碱、苷、多糖和苷元可能通过抑制caspase-1表达,减少炎性细胞因子的产生,从而对抗缺血后炎症反应.生物碱、苷和苷元可能通过抑制caspase-3表达,抑制缺血后神经元凋亡,从而对抗神经元迟发性死亡.生物碱、苷、多糖和苷元可能是补阳还五汤抗缺血性脑损伤的主要物质基础.