miR-182-5p调控FHIT对喉鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-182-5p调控脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)对喉鳞癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法选取喉鳞癌组织和癌旁正常组织标本各39例,将anti-miR-NC、anti-miR-182-5p、miR-NC、miR-182-5p载体质粒分别转染至FD-LSC-1喉鳞癌细胞中,分别记为anti-miR-NC组、anti-miR-182-5p组、miR-NC组、miR-182-5p组;将anti-miR-182-5p质粒分别与si-NC、si-FHIT载体质粒共转染至FD-LSC-1细胞中,分别记为anti-miR-182-5p+si-NC组、anti-miR-182-5p+si-FHIT组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测喉癌组织、癌旁组织中的FHIT及miR-182-5p表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)法检测FHIT、细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测miR-182-5p和FHIT的靶向关系。结果与癌旁组织相比,喉鳞癌组织中miR-182-5p表达水平显著升高,FHIT表达水平显著降低。抑制miR-182-5p表达可降低细胞活性和迁移、侵袭数量,提高细胞凋亡率,降低CyclinD1、Bcl-2、MMP-2表达水平,提高p21、Bax、E-cadherin表达水平。miR-182-5p可靶向调控FHIT,抑制FHIT能逆转抑制miR-182-5p对喉鳞癌细胞FD-LSC-1增殖、迁移、侵袭的抑制和凋亡促进作用。结论抑制miR-182-5p表达可抑制喉鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与FHIT表达相关。     

外泌体miRNAs在鼻咽癌放射抵抗中的作用

目的　探讨外泌体microRNA在鼻咽癌放疗抵抗中的作用。方法　利用射线照射获得放疗抵抗性鼻咽癌CNE2细胞（R-CNE2）,比较R-CNE2和CNE2细胞外泌体 中miRNA23-a和miRNA21表达水平。将R-CNE2细胞外泌体与CNE2细胞共培养,检测其对CNE2放疗抵抗的影响。结果　R-CNE2细胞外泌体产量为（11.97±1.8）μg/106细胞,高于CNE2细胞[（2.45±0.87）μg/106细胞,t =4.25,P =0.000]。R-CNE2细胞外泌体中miRNA23-a和miRNA21表达水平高于CNE2细胞外泌体（t miRNA23-a=3.47,P =0.000;t miRNA21=4.38,P =0.007）。抑制外泌体miRNA23-a后,CNE2细胞经射线照射后活力为56.75%±10.43%;而 抑制miRNA21后,CNE2细胞经射线照射后活力为24.25%±5.67%,明显低于外泌体+射线处理组（F =3.54,P =0.000）。miRNA-21模拟物组细胞活力为60.5%±5.92%大于单纯射线处理组（17%±2.55%,F =4.24,P =0.000）;而miRNA23 - a 模拟物组与单纯射线组无明显差异（26.25%±11.32%,F =2.28,P =0.27）。结论　外泌体miRNA21可能在CNE2细胞放疗抵抗中起主要作用。     

喉鳞癌铁死亡的验证及M2巨噬细胞源性外泌体的调控研究

目的:验证喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）铁死亡的变化以及探讨M2巨噬细胞来源的外泌体对喉癌铁死亡的调控作用。方法:收集哈尔滨医科大学附属第二医院耳鼻咽喉头颈外科2018年9月至2021年4月诊治的32例喉鳞癌和邻近非癌组织标本,其中男性26例,女性6例,年龄43~79岁。通过免疫组化和反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测组...     

喉癌患者CEA、Cyfra21-1、SCC检测与临床病理指标关系分析

目的 了解喉癌患者CEA(血清癌胚抗原)、Cyfra21-1(细胞角蛋白质片段21-1)、SCC(鳞状细胞癌抗原)检测水平,分析与临床病理指标的关系。方法 将本院行手术治疗的53例喉癌患者作为探究主体,全部患者术前均检测血清CEA、Cyfra21-1、SCC,进一步评价各指标与患者原发灶(T分期)、年龄、复发转移、淋巴结转移(N分期)等临床指标间的关系,研究日期为2021年4月-2022年3月。结果 CEA、Cyfra21-1、SCC与喉癌原发病灶无相关性;CEA与术后复发转移无相关性,与淋巴结转移存在相关性;Cyfra21-1、SCC与术后复发转移、淋巴结转移存在正相关,P<0.05;CEA、Cyfra21-1、SCC与患者原发灶、年龄、淋巴结转移无关系,P>0.05;CEA、Cyfra21-1、SCC与患者术后转移或者复发存在关系,P<0.05。结论 CEA、SCC、Cyfra21-1均为喉癌患者术后复发的危险预知因子,加强以上指标检测,可明确机体术后复发风险。     

微小RNA-548c-3p通过靶向调控PCNA基因表达对喉癌细胞增殖及凋亡影响的研究[论著]

目的　探讨微小RNA-548c-3p（miR-548c-3p）对喉癌细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法　用miR-548c-3p mimic、增殖细胞核抗原（PCNA）-siRNA及其阴性对照分别或同时转染喉癌TU686和M4e细胞,用qRT-PCR与Western blot法检测miR-548c-3p和PCNA的表达;MTT法和流式细胞术分别检测转染细胞的增殖和凋亡;双荧光素酶报告基因实验观察miR-548c-3p和PCNA的靶向关系。Western blot法检测PCNA、细胞周期蛋白1（CyclinD1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）的表达。结果　miR-548c-3p的表达量在癌旁组织（0.74±0.10）、喉癌组织（1.94±0.16）,TU686细胞（0.35±0.07）和M4e细胞（0.41±0.03）中均呈低表达,而PCNA mRNA和蛋白均呈高表达,差异有统计学意义（P 均＜0.05）。证实PCNA上存在miR-548c-3p的结合位点。上调miR-548c-3p可抑制细胞增殖及CyclinD1、Bcl-2的表达,并可促进细胞凋亡及Bax的表达,差异有统计学意义（P 均＜0.05）;上调miR-548c-3与抑制PCNA对细胞增殖及凋亡的作用相似。pcDNA-PCNA显著减弱miR-548c-3p mimic对细胞增殖和凋亡的作用。结论　miR-548c-3p通过抑制PCNA表达而降低喉癌细胞增殖能力并诱导细胞凋亡。     

声门上型喉癌患者血清LncRNA PCAT1、miR-210表达与预后的关系

目的探讨血清长链非编码RNA前列腺癌相关转录因子1(LncRNA PCAT1)、微小RNA-210(miR-210)表达与早期声门上型喉癌术后复发的相关性。方法选取2013年12月~2017年12月于本院就诊的早期声门上型喉癌患者120例为观察组,术后随访24个月,复发患者21例为复发组,未复发患者99例为非复发组,另选择同期于本院进行体检的健康者120例为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清LncRNA PCAT1、miR-210水平;采用Logistic回归分析影响早期声门上型喉癌患者术后复发的危险因素;采用ROC曲线分析血清LncRNA PCAT1、miR-210对早期声门上型喉癌患者术后复发的预测价值。结果观察组血清LncRNA PCAT1水平显著高于对照组(P<0.05),血清miR-210水平显著低于对照组(P<0.05);复发组血清LncRNA PCAT1水平显著高于非复发组(P<0.05),血清miR-210水平显著低于非复发组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,T分期为T2期、血清LncRNA PCAT1高表达、miR-210低表达均是影响早期声门上型喉癌患者术后复发的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清LncRNA PCAT1预测早期声门上型喉癌患者术后复发的曲线下面积为0.899,截断值为1.601,敏感度为81.0%,特异性为98.0%。血清miR-210预测早期声门上型喉癌患者术后复发的曲线下面积为0.764,截断值为0.902,敏感度为90.5%,特异性为60.6%。血清LncRNA PCAT1、miR-210联合预测早期声门上型喉癌患者术后复发的曲线下面积为0.925,敏感度为81.0%,特异性为99.0%。结论早期声门上型喉癌患者血清LncRNA PCAT1水平升高,血清miR-210水平降低,均是影响早期声门上型喉癌患者术后复发的独立危险因素,对评估早期声门上型喉癌患者术后复发具有一定价值。     

miR-30-5p通过下调FOXG1表达抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖

目的 探讨miR-30-5p对视网膜母细胞瘤细胞增殖的影响及作用机制。 方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-30-5p在视网膜母细胞瘤细胞系和人视网膜内皮细胞(HRECs)中的表达。利用TargetScan数据库进行生物信息学分析并预测miR-30-5p靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-30-5p与FOXG1的3'UTR结合能力及靶向关系,qRT-PCR和Western blotting分别检测miR-30-5p对FOXG1的mRNA与蛋白表达影响。瞬时转染Y79细胞后,通过CCK8法检测各组Y79细胞的增殖。 结果 与HRECs比较,miR-30-5p在视网膜母细胞瘤细胞中表达降低,FOXG1在视网膜母细胞瘤细胞中表达升高。生物信息学预测结果显示miR-30-5p与FOXG1存在结合位点,qRT-PCR和Western blotting显示miR-30-5p可负调控FOXG1的mRNA和蛋白的表达,双荧光素酶实验结果证实miR-30-5p与FOXG1 3'UTR存在靶向关系。瞬时转染miR-30-5p可升高Y79细胞中miR-30-5p的表达水平,抑制Y79细胞的增殖活力。过表达FOXG1可逆转miR-30-5p上调对Y79细胞增殖的影响。 结论 miR-30-5p通过下调FOXG1表达抑制视网膜母细胞瘤Y79细胞的增殖。     

术中输血对喉癌患者细胞免疫功能的影响

目的 :探讨术中输血对喉癌患者细胞免疫功能的影响。方法 :利用 EPICS- XL 型流式细胞仪对 36例喉癌手术患者于术前及术后 2周进行 T细胞亚群、NK细胞和 CD2 8测定 ,并与正常人及术中输异体血和非输血者进行比较。结果 :136例喉癌患者术前 CD3、CD4、NK细胞、CD2 8下降 ,与对照组比较 ,其差异均有显著性意义 (P<0 .0 1和 0 .0 5 )。 2输异体血组输血后 CD3、CD4、NK细胞、CD2 8下降 ,与治疗前喉癌组比较 ,其差异亦有显著性意义 (均 P <0 .0 5 )。 3非输血组术后 CD3、CD4、CD8、NK细胞、CD2 8与治疗前喉癌组比较 ,其差异均无显著性意义(均 P >0 .0 5 )。结论 :喉癌患者的细胞免疫功能普遍低下 ,术中输异体血会使患者的免疫功能进一步降低 ,使喉癌易于扩散与转移 ,应引起高度重视。     

喉癌围手术期细胞免疫功能改变的意义

目的:了解喉癌患者围手术期细胞免疫的状况及手术相关因素对患者细胞免疫的影响;了解T淋巴细胞水平与喉癌临床特征、病程进展的关系.方法:应用SAP法检测喉癌术前2d及术后12d外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞水平及CD4+/CD8+比率的改变,并联系临床分期、淋巴结转移、复发综合分析.结果:喉癌患者CD3+、CD4+、CD8+细胞水平及CD4+/CD8+比正常对照组明显下降;术后CD3+、CD4+、CD8+有进一步下降的倾向.晚期喉癌患者CD4+细胞水平、CD4+/CD8+比率明显下降(P＜0.05).淋巴结转移者CD4+/CD8+亦下降,CD8+细胞水平却相对升高;复发患者的CD8+细胞水平相对提高.结论:喉癌患者T淋巴细胞免疫功能低下,全麻、手术创伤及术后复合因素是喉癌术后免疫功能进一步低下的原因.CD4+、CD8+细胞水平及CD4+/CD8+比率是表明喉癌患者病期进展、淋巴结转移、复发的免疫学指标.围手术期需行免疫治疗.     

miR-129-5p靶向调节果蝇形态同系物2基因抑制喉鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的　探讨miR-129-5p对喉鳞癌细胞增殖、凋亡的调控机制。方法　运用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time f luorescence quantification polymerase chain reaction，qRT-PCR）法检测人支气管上皮细胞HBE、喉鳞状细胞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p、DIAPH2的表达；将miR-NC组（转染miR-NC）、miR-129-5p组 （转染miR-129-5p mimics）、anti-miR-NC组（转染antimiR-NC）、anti-miR-129-5p组（转染anti-miR-129-5p）、si-NC组（转染si-NC）、si-DIAPH2（果蝇形态同系物2，Drosophila Homologue of Diaphanous2，DIAPH2）组（转染si-DIAPH2）、miR-129-5p+pc DNA组（共转染miR-129-5p和pc DNA）、miR-129-5p+pc DNA-DIAPH2组（共转染miR-129-5p和pc DNA-DIAPH2），用脂质体法转染HN4、TU177细胞；Western blot检测细胞中DIAPH2、细胞周期蛋白依赖激酶1（cyclinD1）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase-3）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（cleaved-caspase-9）的蛋白表达；MTT法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-129-5p与DIAPH2的结合力。结果　与人支气管上皮HBE相比，喉鳞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p 表达均显著降低，DIAPH2表达显著升高（P <0.05）；过表达miR-129-5p、敲减DIAPH2均可显著抑制HN4、TU177细胞增殖、促进凋亡、下调cyclinD1、上调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9；miR-129-5p可抑制野生型DIAPH2细胞的荧光活性，并负向调控DIAPH2的表达；过表达DIAPH2可逆转miR-129-5p对Hep-2细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论　miR-129-5p可抑制喉鳞状细胞癌的增殖，促进凋亡，其机制可能与靶向DIAPH2相关，将可为miR-129-5p靶向治疗喉鳞状细胞癌提供新的依据。     

Management of cancer of the base of tongue

The management of base of tongue cancer has evolved steadily over time. Organ preservation with primary radiation therapy has produced excellent oncologic and functional outcomes. Concomitant chemotherapy has become important in patients with locoregionally advanced disease. Planned neck dissection after organ preservation therapy continues to be an integral step for regional control. This article reports the results of a literature review of base of tongue cancer emphasizing a multidisciplinary approach to obtain optimal results in terms of cure and quality of life.     

耳廓开放性外伤的治疗方法探析

目的 探讨耳廓开放性外伤的治疗方法。方法 23耳耳廓开放性外伤经彻底清创，肝素生理盐水冲洗伤口后，对位缝合。术后用抗生素抗感染、丹参扩张血管、罂粟碱改善微循环。结果 23耳中2耳失访，18耳完全成活，1耳部分成活，2耳完全坏死。结论 耳廓撕裂伤、断伤、带有皮蒂的耳廓离断伤，由于断端双侧血管丰富，经对位缝合后容易成活。但耳廓完全离断伤由于缺乏血供，经对位缝合后不易成活，可采用去皮血管植入包埋法，带肌蒂皮瓣移植法或尝试显微外科技术施行血管吻合，以提高耳廓完全离断伤的成活率。