薄层色谱扫描法快速检测乌头碱中毒

目的:建立乌头碱中毒的薄层色谱快速检验方法.方法:样品加乙醚,(NH4)2SO4后调pH到10,分出有机层加盐酸,弃去乙醚层,水层加二氯甲烷和氨水提取,挥干后20μ1乙醇定容,lOμl点于HPGF254板上,环己烷:乙酸乙酯:二乙胺(8:1:1)饱和上行展开5～7 cm,薄层色谱扫描定性和定量检测.结果:乌头碱线性范围为1～32μg/ml,新乌头碱与次乌头碱均为4～28μg/ml,最小检出浓度0.1μg/ml.结论:本法快速、简便,定性定量准确,可用于乌头碱中毒的快速诊断和乌头碱中毒致死的法医学鉴定.     

薄层色谱法检测药酒中乌头碱

目的 检测药酒中乌头碱。方法 用薄层色谱法检测药酒中的乌头碱。结果 2003年10月，我们从一起饮用药酒中毒的样品中成功检出乌头碱。其浓度为15mg/L。结论 本方法能快速、准确地检测出乌头碱，能满足卫生监督的需要。     

乌头碱对大鼠卵巢颗粒细胞毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞的毒性。[方法]对25～29日龄雌性SD大鼠皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG),无菌制备卵巢颗粒细胞悬液,采用透射电镜观察管嵴状线粒体进行细胞鉴定。试验设4个乌头碱浓度组(0、5×101、5×102、5×103、5×104μg·L-1)和1个溶剂对照组(二甲亚砜)。选用MTT法(四唑盐比色法)测定乌头碱对大鼠卵巢颗粒细胞活力的影响,用雌二醇和孕酮的放免分析药盒测定乌头碱对颗粒细胞激素分泌功能的影响,用丙二醛和超氧化物歧化酶试剂盒测定乌头碱对大鼠颗粒细胞的氧化损伤作用。[结果]与溶剂对照组相比,乌头碱作用24h后,高浓度和次高浓度组(5×103、5×104μg·L-1)可明显抑制大鼠颗粒细胞的增殖,差异有统计学意义(P﹤0.01);高剂量组(5×104μg·L-1)丙二醛含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]在本实验室条件下,乌头碱浓度高于5×103μg·L-1时,对雌性大鼠卵巢颗粒细胞有毒性作用,主要表现为抑制颗粒细胞的增殖及对细胞的氧化损伤作用。     

食物中毒样品中的乌头碱的SPE—UFLC／MS／MS快速测定法

目的建立SPE．UFLC／MS／MS快速测定食物中毒事件中乌头碱、次乌头碱、中乌头碱的方法。方法各种食物样品及呕吐物经0．1mol／LHCl提取,SPE固相萃取小柱净化,经AgilentSBC182．1mm×50mm,1．8μm分离,在正离子模式下用串联质谱仪定性定量分析。结果食物样品及呕吐物中乌头碱、次乌头碱、中乌头碱的方法检出限为1—3μg／L,2个水平的加标回收率为79．8％～112．5％,相对标准偏差均小于9．4％。结论该方法测定各种食物样品及呕吐物中的乌头碱、次乌头碱、中乌头碱快速,准确,可靠,灵敏度高。     

不同采收期的附子中3种乌头碱的含量比较

目的:考察不同采收时间的附子中新乌头碱、次乌头碱和乌头碱的含量。方法:采用高效液相色谱法进行测定,色谱柱为Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相A:乙腈—四氢呋喃(25:15),流动相B:0.1 mol/L醋酸铵溶液,检测波长:λ=235 nm,流速:1 ml/min,柱温:25℃。结果:不同采收时期附子中3种乌头碱的含量发生了明显变化,随着时间(7~9月份)的推移,新乌头碱的含量呈下降趋势,次乌头碱、乌头碱的含量呈上升趋势。结论:方法简单、易行,可为附子的进一步研究提供科学依据。     

乌头类中药对CHL细胞的DNA损伤作用

[目的]观察乌头类中药盐附子和乌头碱对CHL细胞(中国仓鼠肺成纤维细胞)的DNA损伤作用。[方法]采用单细胞凝胶电泳法检测盐附子、乌头碱对CHL细胞DNA即刻损伤的影响。在加和不加S9时,盐附子均设5个剂量组(终浓度分别为5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药∕ml)、乌头碱设4个剂量组(终浓度分别为100、50、25、5μg/ml),试验同时设PBS阴性对照组和阳性对照组,阳性对照在不加S9时为0.1 mmol/ml重铬酸钾,加S9时为80μg/ml环磷酰胺。[结果]在加和不加S9时,盐附子各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照比较差异无统计学意义(P﹥0.05),乌头碱100μg/ml和50μg/ml组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照之间差异有统计学意义(P﹤0.05),乌头碱各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长存在剂量反应关系。[结论]在本试验条件下,加与不加S9时,乌头碱浓度为100μg/ml和50μg/ml时对CHL细胞有DNA损伤作用;盐附子5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药/ml时未观察到对CHL细胞有DNA损伤作用。     

乌头碱对大鼠睾丸支持细胞的毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠睾丸支持细胞的毒性。[方法]无菌制备18～20日龄SD大鼠的睾丸支持细胞,通过Tris-Hcl低渗处理进行细胞纯化,采用HE染色、瑞氏-吉姆萨染色进行细胞鉴定。然后用MTT法(四唑盐比色法)检测浓度为0、5×101、5×102、5×103、5×104 ng/ml的乌头碱对大鼠睾丸支持细胞活力的影响,并用乳酸试剂盒检测乌头碱对支持细胞乳酸分泌功能的影响。[结果]MTT结果显示:乌头碱作用24h后,各剂量组对大鼠睾丸支持细胞的增殖均有促进作用;作用48 h后,低剂量乌头碱(5×101、5×102ng/m)对大鼠睾丸支持细胞的增殖有促进作用;高剂量乌头碱(5×103、5×104 ng/ml)抑制支持细胞的增殖。乳酸测定结果显示:乌头碱作用24 h后,各剂量组乳酸分泌量均增加,乌头碱剂量为5×104 ng/ml时,乳酸分泌量增加率降低。[结论]低剂量乌头碱可促进大鼠睾丸支持细胞的增殖及乳酸分泌量的增加,高剂量乌头碱可抑制大鼠睾丸支持细胞的增殖,降低其对乳酸分泌的刺激作用。     

一起误饮乌头碱药酒引起的中毒事件调查

目的调查一起误服外用药酒引起的中毒事件的原因,为提出有针对性的防控措施提供参考。方法收集病例临床资料、现场流行病学调查资料等。采集剩余食物样本和病例胃内容物、呕吐物、血液样本共12份进行实验室检测。结果共4人发生中毒,其中1人死亡。死者胃内容物检出较高浓度乌头碱(64 000μg/kg);其余3人呕吐物中均检出乌头碱(含量为10～27μg/kg),血液中均检出乌头碱(含量为0.7～1.3μg/L);2份残留食物中检出微量乌头碱(0.18～0.22μg/kg)。结论这是一起因误饮乌头碱药酒造成的中毒事件。为避免此类事件再次发生,应加强乌头类食品、药品安全知识的宣教及监管工作。     

血液灌流治疗急性草乌中毒的实验研究

目的 探讨血液灌流对兔急性草乌中毒的治疗效果.方法 16只实验兔随机分成血液灌流组和对照组,每组8只,建立兔急性草乌中毒模型,血液灌流组用活性炭血液灌流2 h.分别观察两组动物临床表现;液相-质谱联用仪检测血液灌流前、后血中草乌毒性成分浓度.结果 血液灌流组心律失常2只,死亡2只;对照组心律失常7只,死亡7只,血液灌流组灌流后血浆乌头碱、新乌头碱、次乌头碱浓度分别为(2.02±1.46)、(19.71±16.06)、(2.15±1.53)ng/ml,明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 血液灌流可明显降低草乌中毒兔血中乌头碱、新乌头碱及次乌头碱浓度,减轻中毒动物的临床症状.     

HPLC快速测定草乌中毒患者尿液中的乌头碱、次乌头碱、新乌头碱

目的建立HPLC快速测定乌头类生物碱中毒事件中毒患者尿液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的方法。方法收集乌头碱中毒患者48 h内尿液,经0.1 mol/L HCl酸化,Waters Oasis MCX固相萃取小柱净化,0.5%氨水的甲醇洗脱,氮气吹干,乙腈-10 mmol/L乙酸铵(50∶50,V/V)定容,经Agilent XDB C_8(4.6 mm×250 mm,5.0μm)分离,用紫外检测器,235 nm波长定性定量分析。结果乌头碱中毒患者尿液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的方法检出限为10μg/L,2个水平的平均回收率为76.0%~115.0%,6次平行测定变异系数(CV)为4.1%~8.2%。在草乌中毒患者的尿液中检出新乌头碱,含量为0.28 mg/L~1.60 mg/L,乌头碱和次乌头碱未检出。结论该方法测定乌头类生物碱中毒事件中毒患者尿样的乌头碱、次乌头碱、新乌头碱方便、快速、准确、可靠、实用性强。     

乌头类生物碱对ras基因表达影响及其抗肿瘤分子机制研究

[目的]研究乌头类生物碱对细胞增殖周期和ras基因表达的影响,探讨乌头类中药抗肿瘤作用的分子机制。[方法]体外培养大鼠视网膜神经细胞,分别以0.5%的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱作用细胞5min后,流式细胞仪检测。[结果]乌头碱、新乌头碱和次乌头碱作用下,细胞增殖活动被抑制,ras基因表达量显著下降。[结论]ras基因及Ras/Raf/MEK/MAPK信号级联通路可能是乌头类中药抗肿瘤作用的重要靶点。     

乌药炮制工艺的研究

目的比较乌药不同炮制工艺有效成分的含量,确定最佳的炮制工艺。方法采用HPLC测定乌药不同炮制品中乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯及去甲异波尔定的含量,并比较不同炮制品有效成分的含量。结果乌药经炮制后,4种成分的含量均有不同程度的增加,总体而言,其含量的大小顺序为:微波炮制品﹥醋烘炮制品﹥醋炙乌药﹥酒炙乌药﹥盐炙乌药﹥乌药片。结论醋烘法和微波炮制法可作为乌药新的炮制工艺。     

高效液相色谱-质谱联用法同时测定全血中雪上一枝蒿中6种生物碱

  目的  采用高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS/MS）建立一种全血中同时测定雪上一枝蒿中6种生物碱（乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、滇乌头碱、雪上一枝蒿甲素及雪上一枝蒿乙素）的快速、灵敏的检测方法。
  方法  采用Waters C18色谱柱，以甲醇-甲酸（两者体积分数为0.1%）水溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.2 mL/min，乙腈蛋白沉淀法进行样品前处理，采用正离子-多反应离子监测模式对6种化合物进行测定。
  结果  乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、滇乌头碱、雪上一枝蒿甲素及雪上一枝蒿乙素在0.5~100 ng/mL范围内线性关系良好，最低定量限依次为0.50、0.26、0.56、0.03、0.30、0.20 ng/mL，3个浓度的平均加标回收率为98.9%~105.8%，平均提取回收率为82.1%~90.3%，日内和日间精密度均 < 7%。
  结论  此方法基质效应良好，准确度高，灵敏度高，前处理简单，可同时、方便、快速检测雪上一枝蒿中6种生物碱，完成低含量的人体中毒毒物检测。
     

不同烹调方法下马铃薯中部分维生素和矿物质保留因子的变化

目的研究马铃薯在不同烹调方法下各种维生素和矿物质元素的保留因子。方法将马铃薯去皮、洗涤、切割,以炒、烧、焯、炸、蒸等方法进行烹调,分别记录烹调前后的重量,采用相应的国标方法测定烹调前后马铃薯中几种维生素和矿物质元素的含量,并计算相应的保留因子。结果维生素C在烧马铃薯时保留率较高,在炒、焯、炸、蒸时损失较多;硫胺素、核黄素、维生素B6、烟酸在炒、烧、蒸时保留率较高,在焯和炸时有较大的损失;矿物质元素钾、钙、磷等在焯时损失较多,而在其它烹调方式下损失较少。结论马铃薯经烹调后各种维生素和矿物质元素都有不同程度的损失;同一种营养素在不同的烹调方法下保留因子也存在一定的差异。     

Food processing methods influence the glycaemic indices of some commonly eaten West Indian carbohydrate-rich foods

Glycaemic index (GI) values for fourteen commonly eaten carbohydrate-rich foods processed by various methods were determined using ten healthy subjects. The foods studied were round leaf yellow yam (Dioscorea cayenensis), negro and lucea yams (Dioscorea rotundata), white and sweet yams (Dioscorea alata), sweet potato (Solanum tuberosum), Irish potato (Ipomoea batatas), coco yam (Xanthosoma spp.), dasheen (Colocasia esculenta), pumpkin (Cucurbita moschata), breadfruit (Artocarpus altilis), green banana (Musa sapientum), and green and ripe plantain (Musa paradisiaca). The foods were processed by boiling, frying, baking and roasting where applicable. Pure glucose was used as the standard with a GI value of 100. The results revealed marked differences in GI among the different foods studied ranging from 35 (se 3) to 94 (se 8). The area under the glucose response curve and GI value of some of the roasted and baked foods were significantly higher than foods boiled or fried (P<0.05). The results indicate that foods processed by roasting or baking may result in higher GI. Conversely, boiling of foods may contribute to a lower GI diet.     

Dependence of tocopherol stability on different cooking procedures of food

The influence of the kind of treatment during the preparation of hot meals (roasting, baking, stewing) on the stability of the tocopherols, which were added to the food through the margarines used, were examined in different food matrices. All preparation methods resulted in a loss of tocopherols. They could be divided into a group of only small loss of tocopherols (lower than 20%) and into a second group with nearly 70% loss of tocopherols (roasting of meat, steaming of peas). In the first group losses of tocopherols were directly associated with the fatty acid patterns of the used margarines, especially with the share of polyunsaturated fatty acids. On the other hand, during the roasting of meat nearly 70% of the tocopherols were destroyed by direct oxidation without a prohibitive effect on the lipid oxidation. The extreme high loss of tocopherols during the steaming of peas may be caused by the catalytic effect of the metal surface of the used pot. There were no losses of tocopherols observed when the experiments were repeated under identical conditions in an inert glass pot. Only tocopherol losses during baking may have a nutritional importance because of the great fat amount which are taken in with cookies.     

广东省各种食品中丙烯酰胺HPLC/MS/MS测定结果分析

目的建立食品中丙烯酰胺的高效液相色谱-串联质谱联用（HPLC／MS／MS）测定方法，对广东省各种食品中丙烯酰胺分布状况进行调查，并与美国食品与药品管理局（FDA）推荐的方法进行对比，分析丙烯酰胺产生的条件。方法用水提取食品中丙烯酰胺后，直接用高效液相色谱-串联质谱联用仪测定其含量。随机抽取广东省7个地区589份食品样品，将食物按种类和加工方式等分类后进行测定，对调查结果进行统计学处理。结果不同地区之间食物中丙烯酰胺含量分布差异无统计学意义（P〉0．05），不同类食物及同一类食物不同加工方法生成丙烯酰胺量差异有统计学意义（P〈0．001），油炸淀粉类食物含量最高，可达3775μg／kg，蒸煮类食物基本未检出；同一种食物在不同加工场地相同加工条件下产生丙烯酰胺含量差异无统计学意义（P〉0．10）；食物加工前后丙烯酰胺含量差异有统计学意义（P〈0．001），加工前不含丙烯酰胺，加工后丙烯酰胺不同程度增高，油炸后增加最多。结论建立的该方法与FDA方法在内标后结果一致，不经内标校正结果优于FDA方法。食物种类和加工条件与食物中丙烯酰胺生产量密切相关，淀粉类食物经油炸后产生丙烯酰胺较多。提示食物加工应采用蒸煮等相对健康的加工方式，避免使用油炸烘烤等不健康加工方式。     

In vitro investigation of the bioaccessibility of carotenoids from raw,frozen and boiled red chili peppers (Capsicum annuum)

Background

Carotenoid-rich foods are associated with antioxidant activity and the ability to alleviate chronic diseases.

Purpose

The present study investigated the effect of processing on the content and bioaccessibility of carotenoids from 13 cultivars of red chili pepper (Capsicum annuum).

Methods

Carotenoids in chili peppers were analyzed before an in vitro digestion process. The portion of carotenoid transferred to the micelle fraction (bioaccessibility) was also quantified.

Results

β-Carotene, β-cryptoxanthin, capsanthin and antheraxanthin were the most abundant carotenoids. Zeaxanthin, violaxanthin, neoxanthin and lutein were detected at lower concentrations. In general, freezing and boiling reduced carotenoid contents. Capsanthin and zeaxanthin had the highest bioaccessibility at an average value from 36 to 40 %, followed by antheraxanthin (26 %). Bioaccessibility of β-cryptoxanthin, violaxanthin and β-carotene was lower, averaging 6.1, 4.8 and 4.0 %, respectively. Neoxanthin and lutein were not detected in micelles. Freezing increased the bioaccessibility of capsanthin, zeaxanthin, antheraxanthin, β-cryptoxanthin and violaxanthin; β-cryptoxanthin bioaccessibility increased and capsanthin and zeaxanthin bioaccessibility decreased following boiling.

Conclusions

Differences in the contents and bioaccessibility of carotenoids in 13 C. annuum cultivars and between the processed methods were herein evidenced.