土荆芥种子总黄酮提取物通过诱导细胞凋亡、自噬和周期阻滞抑制人肝癌SMCC-7721细胞增殖

目的探究土荆芥种子总黄酮提取物对肝癌细胞增殖的抑制作用及机制。方法采用AO/EB染色法观察细胞的凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;电镜观察细胞的亚显微结构;利用高通量测序技术分析细胞转录组的变化,Western blotting检测自噬和凋亡相关蛋白;线粒体膜电位探针试剂盒检测线粒体膜电位的的变化;活性氧(ROS)测定试剂盒检测活性氧的水平。结果土荆芥种子总黄酮提取物以剂量依赖性方式抑制SMCC-7721细胞的增殖(t=44.014,P0.05),并使细胞周期停滞在G2期(t=77.071,P0.01)。电子显微镜观察到细胞核膜皱缩,出现核碎裂,核内染色质聚集,线粒体肿胀、嵴断裂,细胞内出现许多自噬体和自噬溶酶体。转录组测序后,进行DEG富集分析,显示细胞凋亡相关基因Caspases-3、Caspases-4表达水平上调,Caspases-9的表达水平下调,细胞周期蛋白P21、CDK、Cyclin明显上调(P0.01);GO分析主要富集在自噬反应生物学过程;KEGG分析主要富集在自噬、凋亡、细胞衰老和铁死亡信号通路。Western blotting结果表明SMMC-7721细胞中随着土荆芥种子总黄酮浓度的上升凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9和Bad蛋白的表达均上调,Bcl-2蛋白表达下调均具有统计学差异(t=7.624,P0.01;t=32.071,P0.01;t=9.383,P0.01;t=11.832,P0.01);自噬相关蛋白AMPK、Beclin-1蛋白的表达上调,LC3-I向LC3-II的转化量也逐渐增加,而mTOR蛋白的表达下调(t=9.280,P0.01;t=4.577,P0.05;t=17.007,P0.01;t=7.96,P0.01)。细胞内线粒体膜电位降低(t=20.585,P0.05)。ROS含量上升(F=14.925,P0.01)。结论土荆芥种子总黄酮提取物通过诱导细胞凋亡、自噬和周期阻滞抑制人肝癌SMCC-7721细胞增殖。     

石蒜碱通过Mek/Erk信号通路诱导自噬抑制肝癌细胞增殖

目的 探讨石蒜碱对肝癌细胞增殖及自噬的影响,并分析其机制。方法 采用CCK-8法分析石蒜碱对肝癌细胞增殖的抑制作用,MDC 染色法检测石蒜碱对HepG-2细胞自噬的影响,Western blot检测石蒜碱对HepG-2细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3 II、Mek/Erk信号通路关键因子Mek、Erk蛋白的影响,运用自噬抑制剂（3-MA）研究自噬对细胞增殖的影响。数据通过用SPSS 19.0进行统计分析。结果 CCK-8结果提示石蒜碱对肝癌HepG-2细胞的增长具有抑制作用（F=87.362,P<0.001）;MDC 染色法显示石蒜碱促进自噬小泡的形成。Western blot结果显示石蒜碱上调Beclin-1、LC3 II水平抑制自噬,下调Mek、Erk2磷酸化水平（p-Mek、p-Erk2）抑制HepG-2细胞增殖,差异均有统计学意义（F=25.571, P<0.001;F=315.002,P<0.001;F=35.481,P<0.001;F=150.103,P<0.001）;与100μmol/L石蒜碱组相比,3-MA+石蒜碱组LC3II蛋白水平明显下调,p-Mek、p-Erk2蛋白水平明显上调（t=5.988,P=0.004;t=2.883,P=0.045;t=4.157,P=0.014）。结论 一定浓度的石蒜碱能抑制肝癌HepG-2细胞增殖,可能与调控Mek/Erk信号通路诱发自噬有关。     

急性脑缺血大鼠海马CA1区细胞凋亡与Caspase-3及Caspase-10蛋白表达的相关性

目的探讨急性脑缺血大鼠海马CA1区细胞凋亡与Caspase-3及Caspase-10蛋白表达的关系。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注模型。应用原位末端标记法检测细胞凋亡,免疫组化法及Western-blotting蛋白印记技术分别检测Caspase-3及Caspase-10蛋白表达。结果①脑缺血大鼠海马CA1区3h出现凋亡阳性细胞,48 h达到高峰,72 h凋亡阳性细胞的数量开始下降。②脑缺血大鼠海马CA1区3 h可见Caspase-3及Caspase-10蛋白阳性细胞,48 h表达达高峰,72 h表达开始减少。③脑缺血大鼠海马CA1区Caspase-3及Caspase-10蛋白表达的变化与细胞凋亡数呈正相关(r=0.976,P﹤0.01;r=0.986,P﹤0.01)。结论脑缺血大鼠海马CA1区存在细胞凋亡,且与Cas-pase-3及Caspase-10蛋白表达的变化一致,Caspase-3及Caspase-10蛋白可促进细胞凋亡发生。     

白藜芦醇通过TFEB调节细胞自噬的机制研究

目的研究白藜芦醇对HeLa细胞自噬的影响,探讨白藜芦醇通过转录因子TFEB调节自噬的可能机制。方法用0、12.5、25、50、100μmol/L白藜芦醇处理HeLa细胞后,CCK-8法检测细胞活性;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和TFEB总蛋白水平以及TFEB在核提取液中的水平;荧光显微镜观察GFP-LC3融合蛋白在细胞内分布;荧光定量PCR检测TFEB及其靶基因mRNA水平。结果白藜芦醇处理24 h后HeLa细胞活性降低,激活型Caspase-3蛋白水平增加。白藜芦醇处理增加细胞LC3-Ⅱ蛋白水平,在12h达到高峰,且呈剂量依赖性变化,同时GFP-LC3荧光在细胞内呈点状聚集。白藜芦醇处理增加总细胞和核提取液中TFEB蛋白水平,并增加TFEB自身mRNA及其靶基因mRNA水平。结论白藜芦醇可能通过TFEB在转录水平调节细胞自噬。[营养学报,2019,41(4):374-378]     

曲古抑菌素A阻断Stat3信号通路诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的本实验研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对前列腺癌细胞DU145的抑制作用及其对信号传导与转录激活因子3(Stat3)信号通路的影响。方法采用不同浓度的TSA处理DU145不同时间后,四氮甲基唑蓝比色法测定TSA对细胞活力的抑制效应;流式细胞仪分析细胞周期的改变;蛋白印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase)家族的Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、二磷酸腺苷核糖多聚酶(PARP)及Stat3信号蛋白活性(phospho-Stat3)的变化。结果 TSA时间和剂量依赖性地抑制DU145细胞的增殖,TSA处理细胞24 h和48 h后,细胞生存率分别是85.7%和68.7%;细胞经TSA处理后,细胞形态和细胞周期均发生明显的变化,细胞周期被阻断在G0/G1期,其细胞百分比从55.6%增加到68.5%;Western blot检测结果显示,TSA作用DU145细胞后,Stat3信号蛋白的磷酸化水平下降,同时IL-6对Stat3的刺激诱导作用也被TSA所阻断;Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、PARP等凋亡蛋白被TSA诱导活化,并发生显著剪切。结论 TSA能够通过抑制Stat3信号通路的活性来诱导DU145细胞凋亡。     

染锰大鼠生殖激素水平与生精细胞凋亡基因表达

目的 探讨染锰大鼠血清生殖激素水平与生精细胞凋亡基因Caspase-3表达关系.方法 雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和15,30 mg/kg氯化锰组,分别染锰4,6周,乙醚麻醉,眼眶取血,分离双侧睾丸,称重,采用免疫组织化学方法检测生精细胞caspase-3表达,放射免疫法检测血清睾酮(testosterone,T)、卵泡刺激素(follicle stimulating,FSH)、黄体生成素(luteinizine hormone,LH)水平.结果 30 mg/kg氯化锰组染锰4,6周,血清中T、FSH、LH含量分别为(2.78±0.74)和(2.76±0.81)nmoL/L,(0.44±0.03)和(0.57±0.03),(0.19±0.02)和(0.19±0.03)U/L;Caspase-3表达水平分别为(65.49±11.34)和(82.65±5.26);染锰组大鼠生精细胞Caspase-3表达与血清T含量呈负相关(r=-0.799,P<0.01),与血清中FSH、LH水平呈正相关(r=0.735,r=0.737,P<0.01).结论 染锰大鼠血清T水平降低,FSH和LH水平上升是生精细胞caspase-3表达上调的主要原因.     

自噬在氯化镉诱导小鼠初级精母细胞凋亡中的作用

目的 探究自噬在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)凋亡中的作用及其潜在作用机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒GC-2 spd细胞24 h。Hoechst33342染色法和单丹磺酰戊二胺法分别检测凋亡小体和自噬体;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡情况;在不含/含CdCl₂(10μmol/L)的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(60μmol/L)、凋亡抑制剂胱天蛋白酶家族抑制剂(50 nmol/L)、自噬激动剂雷帕霉素(50 nmol/L)和溶酶体抑制剂氯喹(10μmol/L)处理GC-2 spd细胞24 h, Western blot检测细胞内自噬相关蛋白LC3、P62以及促凋亡蛋白cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,自噬体聚集且凋亡细胞增多。Western blot结果显示,5和10μmol/L CdCl_2<...     

miR-138-5p在锰致SH-SY5Y细胞自噬中的作用

[目的]探讨miR-138-5p在氯化锰(MnCl_2)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬中的作用及其机制。[方法]以生理盐水处理组作为对照,0.125、0.25、0.5、1 mmol/L MnCl_2染毒SH-SY5Y细胞6 h后,利用MTT法检测细胞活力;0.25和0.5 mmol/L MnCl_2处理细胞6 h后,采用Western blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1的表达;MnCl_2染毒6 h后,使用反转录PCR和Western blot检测miR-138-5p和组蛋白脱乙酰酶SIRT1 mRNA以及蛋白表达的变化;使用miRNA模拟物转染细胞实现miR-138-5p过表达,然后0.25 mmol/L MnCl_2染毒6 h,检测SIRT1 mRNA和蛋白的表达以及自噬相关蛋白LC3和Beclin1的变化。[结果]MnCl_2可剂量依赖性地降低SH-SY5Y细胞活力(趋势χ~2=12.42,P0.05)。与对照组相比,0.25、0.5 mmol/L MnCl_2染毒后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值和Beclin1表达水平明显增加(P0.05);miR-138-5p表达下调,SIRT1 mRNA及蛋白表达上调(均P0.05)。miR-138-5p过表达后,相比未过表达的MnCl_2染毒组,SIRT1 mRNA及蛋白表达均出现下调,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值及Beclin1蛋白表达也相应下调(P0.05)。[结论]miR-138-5p过表达可通过调节SIRT1的表达抑制锰诱导的SH-SY5Y细胞自噬。     

抑制自噬基因Beclin 1的表达对耐药卵巢癌细胞A2780/DDP顺铂敏感性的影响及相关机制研究

[目的]观察抑制自噬基因Beclin1的表达对卵巢癌耐药细胞A2780/DDP顺铂敏感性的影响并探讨其中机制。[方法]利用脂质体将自噬基因Beclin1RNA干扰质粒pSUPER-Beclin1和对照质粒pSUPER-non分别转染耐药卵巢癌细胞A2780/DDP,筛选稳定表达株,检测顺铂作用下各组细胞(pSUPER-Beclin1组、pSUPER-non组和未转染组)生长抑制率、半数抑制浓度(IC50)、自噬和凋亡率的变化。[结果]A2780/DDP细胞转染干扰质粒pSUPER-Be-clin1后,细胞内Beclin1蛋白的表达明显下降;比较3组细胞顺铂48hIC50,pSUPER-Beclin1转染组最低(P﹤0.01);对3组细胞自噬与凋亡水平的检测显示,抑制Beclin1蛋白表达,在顺铂作用下,细胞自噬水平明显下降,而凋亡细胞比例明显升高,凋亡蛋白Caspase-3的表达亦明显上调,实验组与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]抑制耐药细胞A2780/DDP自噬基因Beclin1的表达,可通过抑制自噬,增强凋亡提高耐药细胞对顺铂的敏感性。     

UVB诱导A375细胞自噬与凋亡调控机制探讨

目的探究中波紫外线(UVB)对人表皮黑色素瘤细胞株A375细胞自噬与凋亡的诱导效应。方法 (1)取对数生长期A375细胞,分别予剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射,于照射后3、6、9、12 h收集细胞,用单丹磺酰戊二胺染色法观察细胞自噬,用吖啶橙/溴乙锭染色法观察细胞凋亡。(2)予相应剂量的UVB照射10.0、15.0 m J/cm~2组A375细胞,于照射后18、24、36、48 h收集细胞,以CCK-8法检测细胞存活率。(3)予剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射A375细胞,于照射后3、6、9、12 h收集细胞;予剂量为2.5、5.0、7.5、10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射A375细胞,于照射后9 h收集细胞;用免疫印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相互作用蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ的表达。上述3个实验均另设不予UVB照射(予假照射)的对照组。结果 (1)剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射诱导的A375细胞自噬和细胞凋亡均表现为随着照射后时间的延长而增强,但在15.0 m J/cm~2UVB照射后12 h,细胞自噬已观察到降低。(2)10.0、15.0 m J/cm~2组细胞活力均随照射后时间的推移而增加(P0.05);在照射后18~48 h,10.0和15.0 m J/cm~2组细胞活力均低于对照组(P0.05);在照射后24~48 h,15.0 m J/cm~2组细胞活力均低于10.0 m J/cm~2组(P0.05)。(3)10.0 m J/cm~2组细胞Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白相对表达水平在照射后0~12 h内均随照射时间的增加而增加(P0.05),而15.0 m J/cm~2组细胞仅在照射后0~9 h内观察到上述改变,在12 h时间点上述2个自噬相关蛋白明显下降(P0.05);10.0和15.0 m J/cm~2组细胞Bcl-2蛋白相对表达水平在照射后3~12 h内均随照射时间的增加而下降(P0.05),Bax蛋白相对表达水平均在照射后0~12 h内随照射时间的增加而增加(P0.05)。0.0~10.0 m J/cm~2组细胞Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白相对表达水平,0.0~15.0 m J/cm~2组细胞Bax蛋白相对表达水平,均随照射剂量的增加而增加(P0.05);5.0~15.0 m J/cm~2组Bcl-2蛋白相对表达水平随照射剂量的增加而下降(P0.05)。结论剂量为10.0和15.0 m J/cm~2UVB照射均可诱导A375细胞发生自噬和凋亡;10.0 m J/cm~2UVB照射诱导的细胞自噬可部分抵抗UVB对凋亡的诱导而使细胞活力增强,15.0 m J/cm~2UVB诱导的自噬不足以发挥上述作用,且以诱导凋亡为主导效应。     

锰对多巴胺能神经细胞SN4741生长及细胞周期分布的影响

目的：研究锰（Manganese,Mn）对多巴胺能神经瘤细胞SN4741生长与细胞周期分布的影响，为进一步探讨锰损伤神经细胞的机制提供参考资料，方法：取对数生长期神经细胞株SN4741，使用含有200、400、600、800μmol/L MnCl2的培养液，分别作用1、2、4、6d后，用噻唑蓝（MTT）比色试验和平板集落形成实验检测细胞的存活和生长，筛选锰的细胞毒性剂量。流式细胞仪检测细胞周期分布。结果：MTT和平板克隆形成实验检测结果显示200－800μmol/L的Mn作用2、4、6d均对SN4741细胞株生长有显著的抑制作用，且呈剂量和时间效应关系。流式细胞仪检测结果表明，锰可将SN4741细胞生长周期阻滞在S期。结论：锰对神经瘤细胞SN4741增殖上有显著的抑制作用，将细胞阻滞在S期，结果为进一步探讨锰的神经细胞毒作用机制提供实验基础。     

Cell killing and radiosensitizing effects of atorvastatin in PC3 prostate cancer cells

Recent studies have indicated that autophagy may be one of the important pathways induced by ionizing radiation. Atorvastatin (statin), an inhibitor of 3-hydroxyl-3-methylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA) reductase, may exhibit anticancer effects as an autophagy inducer. In our study, the cell killing and radiosensitizing effects of statin were analyzed in PC3 cell line. Activation of the autophagy pathway was analyzed using the GFP-LC3 assay and western blot to determine LC3-II expression. The radiosensitivity of PC3 cells was determined using the clonal survival assay, TUNEL assay, and the Annexin V apoptosis assay. The expression profiles of autophagy related genes were analyzed using a pathway specific real-time polymerase chain reaction (PCR) array. Autophagic response was induced in PC3 cells after exposure to statin and/or gamma rays. Inhibition of the autophagic process using small interfering RNAs (siRNA) targeting Atg7 and/or Atg12 significantly reduced radiosensitivity of PC3 cells. Statin also exhibited a significant apoptosis-inducing effect in PC3 cells, which can be partially suppressed by Atg7 siRNA. Cells treated with statin and gamma irradiation showed significantly reduced colony forming efficiency and increased number of Annexin V positive early apoptotic cells. Analysis of autophagy and its regulatory gene profile showed that the expressions of 22 genes out of 86 genes assessed were significantly altered in the cells exposed to combined treatment or statin alone. The data indicate that activation of the autophagy pathway may be responsible for apoptosis inducing effect of statin. Furthermore, combined treatment with radiation and autophagic inducer, such as statin, may be synergistic in inducing cell death of PC3 cells.     

锰对皮层神经元胞浆游离钙离子浓度的影响

目的探讨皮层神经元胞浆游离钙离子浓度在锰(Mn)神经毒性作用中的变化。方法分离新生Wistar乳大鼠的皮层神经细胞进行体外培养,细胞生长至最佳状态时,予以分组处理。实验分染锰组和未处理组,染锰组分别与含低、中、高浓度氯化锰(MnCl_2·4H_2O)的培养液共培养,氯化锰的浓度分别为0．2、0．6、1．0mmol/L。未处理组则为正常培养的皮层神经细胞。各组处理24h后终止培养,钙离子荧光探针Fluo-3/AM标记后上激光扫描共聚焦显微镜检测荧光强度,以表示游离钙离子浓度,并用图像分析技术进行处理。结果氯化锰处理后引起皮层神经元胞浆游离钙离子不同程度的超载,中、高浓度锰组神经元的胞浆游离钙离子浓度明显高于低浓度锰组及未处理组,细胞钙离子荧光像素荧光强度增高且呈剂量依赖性,中、高浓度锰组分别为(131．1±16．7)、(183．2±22．9)；低浓度锰组为(84．6±10．2),差异有统计学意义(P＜0．05)。结论钙离子超载与锰的神经毒性有关,且钙离子超载与锰浓度呈剂量-反应关系。     

锰对PCI2细胞的增殖抑制及其MAPKs活化表达的实验研究

目的 筛选锰对PCI2细胞增殖抑制作用的时间及剂量效应关系，观察在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点，探讨锰作为PD相关危险因子神经毒性作用的分子机制。方法 取对数生长期PCI2细胞株，用200、400、600、800μmol／L MnCl2培养液分别培养1、2、3、4天，噻唑蓝(MTT)比色试验和平板集落形成实验筛选锰的毒性剂量，台盼蓝染色法绘制细胞生长曲线；western-blot法检测p-Erk，p-p38。结果MTT和平板克隆结果显示200-800μmol／L MnCl2作用1、2、3、4天对PC12细胞有抑制作用，且呈剂量和时间依赖趋势，600μmol／L MnC12作用4天对PCI2细胞的抑制率达50％以上。Western-blot结果显示600μmol／LMnCl2作用1-4天，p-Erk2逐渐降低，作用2天时较对照降低了75％(n=3，P＜0．05)，200、400、600μmol／LMnCl2分别作用4天时，p-Erk逐渐降低，400μmol／L MnCl2作用4天较对照降低了78％(n=3，P＜0．01)；600μmol／L MnCl2作用1-4天可见p-p38逐渐升高，作用3天时较对照组增加6．6倍(n=3，P＜0．05)，200、400、600μmol／L MnCl2分别作用4d时，p-p38逐渐升高，当400μmol／L MnCl2作用4天时较对照组升高了4．7倍(n=3，P＜0．05)。结论 锰的神经毒性可能是通过阻抑p-ERK通路上调p-p38引发细胞增殖抑制和诱导细胞凋亡实现的。     

Macranthoside B Induces Apoptosis and Autophagy Via Reactive Oxygen Species Accumulation in Human Ovarian Cancer A2780 Cells

Macranthoside B (MB), a saponin compound in Lonicera macranthoides, can block cell proliferation and induce cell death in several types of cancer cells; however, the precise mechanisms by which MB exerts its anticancer effects remain poorly understood. MB blocked A2780 human ovarian carcinoma cell proliferation both dose- and time-dependently. MB induced apoptosis, with increased poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) and caspase-3/9 cleavage. MB also caused autophagy in A2780 cells, with light chain 3 (LC3)-II elevation. Inhibiting MB-induced autophagy with the autophagy inhibitor 3-methyladenine (3-MA) significantly decreased apoptosis, with a reduction of growth inhibition; inhibiting MB-induced apoptosis with the pan-caspase inhibitor Z-VAD-FMK did not decrease autophagy but elevated LC3-II levels, indicating that MB-induced autophagy is cytotoxic and may be upstream of apoptosis. Furthermore, MB increased intracellular reactive oxygen species (ROS) levels, with activated 5′ adenosine monophosphate-activated protein kinase (AMPK), decreased mammalian target of rapamycin (mTOR) and P70S6 kinase phosphorylation, and increased PARP and caspase-3/9 cleavage, and LC3-II elevation; treatment with the ROS scavenger N-acetyl cysteine and the AMPK inhibitor Compound C diminished this effect. Therefore, the ROS/AMPK/mTOR pathway mediates the effect of MB on induction of apoptosis via autophagy in human ovarian carcinoma cells.     

锰对小鼠骨髓细胞微核率的影响

为研究锰对小鼠骨髓微核率的影响 ,给小鼠腹腔注射二价锰 (Mn2 + ,MnCl2 ) ,剂量分别为 0、2 5、5 0和 10 0mg kgBW ,然后计数胸骨骨髓 10 0 0个嗜多染红细胞中的微核细胞数。结果表明 ,在中、高浓度组 ,小鼠骨髓微核率分别为 1 2 0 %和 1 6 4% ,明显高于阴性对照组 (P <0 0 1)。低浓度组与阴性对照组比无显著性差异 ,但有增高趋势 ,提示Mn2 + 浓度越高 ,对小鼠骨髓嗜多染红细胞毒性作用越强 ,可以认为MnCl2 具有致染色体突变性及潜在的遗传毒性。     

叔丁基对苯二酚对锰致神经细胞毒性的保护作用

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)对锰致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性的保护作用.方法 以不同终浓度(300、600、900μmol/L)的MnCl2分别处理PC12细胞24、48、72 h,用噻唑蓝(MTT)法检测PC12细胞毒性.MnCl2组予600μmol/L MnCl2处理72 h;tBHQ组予40 μmol/L tBHQ处理细胞84h;tBHQ+MnCl2组予40μmol/L tBHQ预处理12h后,600 μmol/LMnCl2处理72 h,用MTT法检测细胞毒性,MnCl2处理剂量为300 μmol/L时用Annexin V-FITC/PI法流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,300、600、900μmol/LMnCl2处理24、48、72h,细胞增殖相对比值降低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);300、600、900 μmol/L MnCl2处理组各组间相互比较,有剂量一效应关系,差异均有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,600 μmol/L MnCl2组抑制PC12细胞增殖,抑制率为40%,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组及MnCl2组比较,tBHQ组和tBHQ+MnCl2组的细胞出现增殖效应,细胞增殖相对比为1.8,差异均有统计学意义(P＜0.01).300μmol/L MnCl2处理组PC12细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),tBHQ+MnCl2组细胞凋亡率低于300μmol/L MnCl2处理组,差异有统计学意义(P＜0.01),细胞凋亡抑制率61%.结论 锰可抑制PC12细胞增殖作用,可诱导细胞凋亡;tBHQ可减弱锰抑制PC12细胞的增殖作用并可削弱锰致PC12细胞凋亡的作用.     

锰致PC12细胞凋亡作用及与p-Erk关系

目的以鼠嗜铬神经瘤细胞(PC12)为模型,筛选锰对神经细胞增殖抑制作用的时间及剂量,观察锰作用下PC12细胞的细胞形态学、生化指标改变和磷酸化的胞外信号调节激酶(p-Erk)的表达。方法用200、400、600、800μmol/L MnCl2的培养液,分别作用对数生长期PC12细胞1、2、3、4 d后,四甲基偶氮塞唑蓝(MTT)筛选锰的细胞毒性剂量;透射电镜观察细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测MnCl2对PC12细胞基因组DNA的影响。免疫印迹法(western blot)检测p-Erk。结果 MTT显示200～800μmol/L MnCl2作用1、2、3、4 d对PC12有显著的抑制作用,呈剂量和时间依赖趋势,600μmol/L MnCl2作用4 d对PC12的抑制率50%;600μmol/L MnCl2作用4 d电镜可见细胞凋亡,同样条件下细胞DNA碎片化;Western blot显示600μmol/L MnCl2作用1、2、3、4 d可见p-Erk2逐渐降低,其中作用2 d时较对照降低75%(n=3,P<0.05),200、400、600μmol/L MnCl2分别作用4 d时,p-Erk亦逐渐降低,当400μmol/L MnCl2作用4 d时较对照明降低78%(n=3,P<0.01);使用Erk通路MEK1/2特异性阻制剂PD98059实验结果表明:锰可能通过MEK1/2磷酸化下游的Erk,下调p-Erk。结论锰对PC12细胞的毒性作用可能是通过关闭胞外信号调节激酶ErK通路诱导细胞凋亡。     

石蒜碱通过PI3K/AKT信号通路调节自噬抑制HBV诱发肝纤维化

目的 观察石蒜碱抑制乙型肝炎病毒(HBV)诱发肝纤维化的机制.方法 50只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组10只:正常对照组、模型组、石蒜碱低、高剂量组(50、100 mg/kg)、阳性对照组(秋水仙碱0.12 mg/kg).除了正常对照组,其余各组采用HBV诱发建立肝纤维化动物模型,治疗组小鼠腹腔注射给药,正...