葛根素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与迁移的影响

目的 探讨葛根素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与迁移的影响。方法 体外培养人肝癌细胞HepG2,将其分为对照组(DMSO)、10、20、40μmol/L葛根素组。各组细胞以不同浓度药物处理48h后,MTT实验与平板克隆实验检测HepG2细胞增殖能力变化;流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡情况;Transwell实验检测HepG2细胞迁移能力变化;Western blot方法检测葛根素对HepG2细胞TGF-β1、Smad3、基质金属蛋白酶2/9(matrix metalloproteinase2/9, MMP2/9)的影响。结果 与对照组比较,不同浓度葛根素均能抑制HepG2细胞增殖与迁移能力,并诱导凋亡（P<0.05）。Western blot结果显示,葛根素能够降低HepG2细胞中TGF-β1、Smad3与MMP2/9的表达（P<0.05）。结论 葛根素抑制HepG2细胞增殖与迁移能力,并诱导凋亡。     

青蒿琥酯通过调控PI3K/Akt信号通路抑制肝癌细胞增殖促进凋亡

目的 探讨青蒿琥酯对人肝癌细胞系HepG2的增殖和凋亡的影响及可能机制.方法 体外培养人肝癌细胞系HepG2,分别用浓度为12.5、25、50、100mg/L青蒿琥酯作用不同时间后,采用CCK-8实验检测细胞增殖情况;随后选择最佳浓度的青蒿琥酯作用HepG2细胞24h后,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt的水平.结果 不同浓度的青蒿琥酯处理细胞24h后,青蒿琥酯均能显著抑制肝癌细胞HepG2的增殖,且该作用呈现剂量依赖性.流式细胞仪检测发现青蒿琥酯能显著促进肝癌细胞HepG2的凋亡,同时Western blot也进一步证实,青蒿琥酯处理后HepG2细胞中的抑凋亡蛋白Bcl-2显著下调,促凋亡蛋白Bax表达显著上调;同时发现青蒿琥酯能够降低p-PI3K和p-Akt的水平,但未磷酸化的PI3K和未磷酸化的Akt含量变化无显著性差异.结论 青蒿琥酯可以抑制肝癌细胞HepG2的增殖,促进细胞凋亡,该作用与调控PI3K和Akt的磷酸化水平密切相关.     

rBTI蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移及ROS产生的影响

目的:研究重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)对HepG2细胞增殖、凋亡、迁移及胞内活性氧(ROS)的影响。方法:以不同浓度的rBTI蛋白(1.25 10μmol/L)作用肝癌HepG2细胞,通过MTT比色法检测rBTI蛋白对HepG2细胞增殖抑制作用;DAPI荧光染色法观察凋亡细胞的发生及形态学变化,流式细胞术(FCM)检测细胞内活性氧变化、划痕擦伤实验检测rBTI蛋白对HepG2细胞迁移的影响。结果:rBTI蛋白对HepG2细胞的生长具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖效应,但对正常细胞HL-7702影响很小;DAPI染色发现细胞产生凋亡小体;细胞内活性氧水平检测结果表明rBTI可以诱导HepG2细胞内ROS水平显著升高;划痕擦伤实验显示rBTI在一定浓度范围内可以抑制HepG2细胞迁移。结论:rBTI蛋白能够诱导HepG2细胞发生凋亡并抑制细胞增殖和迁移。     

miR-212-5p在肝癌组织中的表达及对HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨miR-212-5p在肝癌组织中的表达及对HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法应用qRT-PCR法检测96例肝癌组织及癌旁组织中miR-212-5p表达水平,同时设HepG2细胞组、miR-212-5pmimics组与miR-212-5pinhibitor组。培养72h后,采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭与迁移水平;qRT-PCR法检测细胞miR-212-5p表达水平。结果 肝癌组织中miR-212-5p表达水平升高,肿瘤最大径≥2cm、TNM分期越高、浸润深度越深、病理级别越低、有淋巴结转移、有复发的肝癌患者miR-212-5p高表达率更高（P<0.05）。miR-212-5p模拟物能增强HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力,抑制HepG2细胞凋亡（P<0.05）;miR-212-5p抑制剂能抑制HepG2细胞活力、增殖、侵袭及迁移能力,促进HepG2细胞凋亡（P<0.05）。结论 miR-212-5p在肝癌组织中高表达,miR-212-5p可促进HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力,抑制...     

辛伐他汀对肝癌细胞生物学特性与脂质代谢的影响

目的 探讨辛伐他汀对肝癌细胞系HepG2细胞生物学特性与脂质代谢的影响.方法 体外培养肝癌细胞系HepG2,分别给予不同浓度辛伐他汀(0、5、10、20及40μM),CCK-8方法检测各组肝癌细胞系HepG2细胞活力;细胞克隆实验观察各组细胞群落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;细胞划痕与Transwell实验观察细胞侵袭与迁移能力;Real-time PCR检测脂质代谢相关基因SREBP1、SREBP2、FASN、SQLE、HMGCS1 及HMGCR表达;Western blot检测SREBP1、SREBP2、FASN、SQLE、HMGCS1 及HMGCR蛋白表达.结果 不同浓度辛伐他汀均抑制了HepG2细胞活力;抑制了HepG2细胞群落形成,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭与迁移;辛伐他汀还下调SREBP1、SREBP2、FASN、SQLE、HMGCS1及HMGCR基因与蛋白表达(P＜0.05).结论 辛伐他汀能够抑制肝癌细胞系HepG2增殖,促进凋亡,并抑制细胞迁移与侵袭,其作用机制可能与抑制脂质代谢相关基因与蛋白表达有关.     

应用VPA调节组蛋白乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase的影响

目的:探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)调节染色体组蛋白低乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达及活性的影响,同时通过检测VPA与Caspase3、Caspase8、Caspase9特异性抑制剂协同作用后细胞凋亡的变化加以验证.方法:应用0.75~4.0 mmol/L VPA干预肝癌细胞HepG2、胃癌细胞BGC-823、乳腺癌细胞MCF-7 48小时后,流式细胞术分析细胞凋亡的变化;分光光度法检测Caspase3、Caspase8、Caspase9活性;流式细胞仪间接免疫荧光法定量分析Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达.结果:0.75~4.0 mmol/L VPA干预48小时后,FCM分析可见HepG2、BGC-823、MCF-7细胞凋亡率显著增加,与对照组比较差异有显著意义(P<0.001)并且呈剂量依赖趋势;HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达均被明显上调、活性升高,与对照组相比有显著差异(P<0.001);Caspase8活性及蛋白表达在HepG2、MCF-7细胞未见明显改变,BGC-823细胞仅轻度增加.VPA与Caspase3、9相应特异性抑制剂共同作用后,Caspase3、Caspase9活性被抑制,细胞凋亡率较VPA单独干预组显著降低(P<0.005);VPA与Caspase8特异性抑制剂共同作用组细胞凋亡率与VPA单独作用组比较无明显变化(P>0.05).结论:应用VPA干预组蛋白乙酰化修饰对HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达及活性可起明显的调控作用;对Caspase8的调控作用则随肿瘤细胞来源及表型的不同而有所差异,但总体趋势不明显.     

地西他滨联合丙戊酸钠促进肝癌细胞凋亡的ERK 通路研究

目的:本研究对地西他滨联合丙戊酸钠促进肝癌细胞凋亡的相关机制进行研究,为临床治疗和新药研发提供参考。方法:肝癌细胞HepG2经地西他滨联合丙戊酸钠孵育后,MTT法检测二者对HepG2细胞的抑制率,Real-time PCR及免疫印迹法检测细胞凋亡蛋白Caspase3/9、Bax及Bcl2和ERK信号通路关键蛋白的表达情况。结果:地西他滨联合丙戊酸钠能够有效抑制肝癌细胞的增殖,且二者联用的抑制率明显高于单独应用(P0.05),同时与对照组相比,细胞凋亡蛋白Caspase3、Caspase9及Bax表达明显增强(P0.05),Bcl2表达明显降低(P0.05),且ERK信号通路关键蛋白Ras、Raf及MEK和ERK1/2的表达明显升高,与对照组细胞有显著的统计学差异性(P0.05)。结论:地西他滨联合丙戊酸钠主要通过激活MEK/ERK信号转导通路抑制肝癌细胞HepG2的增殖过程。     

AR-A014418对γδT细胞增殖、凋亡及杀伤功能的影响

目的:观察糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)选择性抑制剂AR-A014418对体外扩增的γδT细胞的细胞活性包括增殖、凋亡和杀伤功能的影响。方法:采用人淋巴细胞分离液分离健康人外周血中单个核细胞,在γδT细胞完全培养基中培养获得γδT细胞。用不同浓度的AR-A014418诱导培养γδT细胞72 h后,用流式细胞术检测各诱导处理组γδT细胞的增殖、凋亡和杀伤能力;用Western blot检测γδT细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达情况。结果:AR-A014418浓度在0. 3～10μmol/L时能促进γδT细胞的增殖并抑制其凋亡。同时促凋亡蛋白Cleaved caspase-3和Bax表达逐渐减弱,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达逐渐增强。尤其是在3μmol/L时,γδT细胞增殖活性最强,而且体外杀伤人肝癌HepG2细胞和人胃癌SGC-7901细胞活性也显著提高。结论:GSK-3β抑制剂AR-A014418在3μmol/L浓度时,可以抑制体外扩增γδT细胞的凋亡,并能增强其体外增殖和杀伤肿瘤活性,提示AR-A014418具有一定的免疫调节功能,为今后用于体外扩增γδT细胞提供实验依据。     

COMMD7基因活化PI3K/AKT信号通路促进HepG2细胞增殖转移的分子机制研究

目的探索肝癌相关基因COMMD7促进HepG2细胞增殖转移的分子机制。方法设计针对COMMD7基因的特异性siR NA(small interference RNA)转染人类肝癌细胞株HepG2,作为干扰组(Si-HepG 2);并设置PTEN抑制剂处理组(Si+BpVHepG2);空白对照组(HepG2);空载体对照组(N-HepG2)。qRT-PCR检测转染后各组COMMD7、PTEN基因mR NA的表达变化;Western blot检测各组COMMD7、PTEN、p-AKT和AKT蛋白的表达变化;MSP法检测PTEN基因甲基化水平;CCK8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞在转染前后转移及侵袭能力的改变。结果 siRNA-COMMD7转染HepG2细胞后,qR T-PCR检测结果显示,与空白对照组及空载体对照组相比较干扰组COMMD7基因的表达量降低89.9%,PTEN基因的表达量升高2.841倍,差异均有统计学意义(P0.05);Western blot检测结果显示,siRNA干扰组COMMD7表达明显降低,PTEN表达升高;下游p-AKT表达受到显著抑制;PTEN抑制剂处理组PTEN表达受到显著抑制,下游p-AKT的表达明显增强;MSP法检测结果显示,干扰组与空白对照组及空载体对照组比较,PTEN发生明显的去甲基化,表明抑制COMMD7表达可诱导PTEN去甲基化。CKK8实验结果显示,干扰组细胞较空白对照组、空载体对照组和PTEN抑制剂处理组增殖速度明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);Transwell实验实验结果显示,干扰组穿膜细胞数(17.4±2.7),较空载体对照组(36.2±3.2)、空白对照组(41.6±4.5)及PTEN抑制剂处理组(47.6±1.8)明显减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 siR NA干扰下调COMMD7基因的表达,可诱导HepG2细胞内抑癌基因PTEN的去甲基化,增加PTEN蛋白的表达而抑制PI3K/AKT信号通路,以降低HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

BBI608对肝癌细胞HepG2的抑制作用及其机理研究

目的研究STAT3抑制剂BBI608对肝癌细胞的抑制作用及其机理。方法以不同浓度的BBI608作用于对数生长期的肝癌细胞HepG2,应用CCK8法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,Western blot方法检测p-STAT3及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果 BBI608作用于HepG2细胞活细胞数显著减少,呈浓度和时间依赖性,在BBI60830μM作用于肝癌细胞12 h,凋亡率显著升高。BBI608呈剂量依赖性地降低肝癌细胞中p-STAT3及凋亡相关蛋白Bcl-2的表达和上调Bax蛋白的表达。结论 BBI608抑制肝癌细胞的增殖发挥抗肝癌作用与抑制STAT3的磷酸化,下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达相关。     

重楼皂苷Ⅰ抗肝癌细胞作用的初步研究

目的:本文旨在研究重楼皂苷Ⅰ对肝癌细胞株Huh7和HepG2的抑制作用并探讨其是否具有抑制肝癌干细胞的功效.方法:不同剂量的重楼皂苷Ⅰ处理肝癌细胞后,MTT方法检测细胞存活情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞迁移能力;磁珠分选出CD133+-Huh7和CD133--HepG2细胞后,成球实验...     

下调HIF-2α基因对低氧诱导的肝癌细胞体外生物学行为的影响

目的:探讨下调缺氧诱导因子2α(Hypoxia-inducible factor 2α,HIF-2α)基因对人肝癌细胞株HepG2 低氧状态下增殖、凋亡、细胞周期分布和迁移侵袭力的影响。方法:选取氯化钴(CoCl2 )诱导的人肝癌细胞株HepG2 作为研究对象,构建HIF-2αsiRNA 特异性载体,转染低氧环境下的HepG2 细胞,Real-time PCR 和Western blot 方法分别检测转染前后细胞中HIF-2αmRNA 和蛋白表达,MTT 方法检测转染前后HepG2 细胞增殖,流式细胞术检测转染前后HepG2 细胞凋亡和细胞周期分布,Transwell 试验检测转染前后HepG2 细胞侵袭迁移能力。结果:低氧诱导下,肝癌HepG2 细胞HIF-2α表达显著增多;特异性转染HIF-2αsiRNA 于低氧环境下的HepG2 细胞后,HIF-2αmRNA 和蛋白表达水平均受到明显抑制、细胞增殖能力降低,凋亡率升高,分布于G0/ G1 期细胞比率升高,合成期(S)及合成后期(G2/ M)细胞比率降低,细胞体外侵袭迁移能力受到明显抑制(P<0.05)。结论:低氧环境下肝癌HepG2 细胞表达HIF-2α增多,特异性siRNA 可通过下调低氧环境下HepG2 细胞中HIF-2α基因表达,抑制HepG2 细胞增殖、侵袭迁移,改变细胞周期分布并诱导其凋亡。     

Experimental Study on the Inhibitory Effect of Sodium Cantharidinate on Human Hepatoma HepG2 Cells

Backgroud

Cantharidin, and its derivatives can not only inhibit the proliferation of tumor cells, but can also induce tumor cell apoptosis. It shows cantharidin exhibits a wide range of reactivity in anticancer. The objective of this paper was to study the inhibitory effect of sodium cantharidinate on human hepatoma HepG2 cells.

Materials and Methods

MTT assay was used to detect the proliferation of HepG2 cells, and immunohisto-chemical method was used to detect the change in VEGF, protein level, and to determine the inhibitory effect of sodium cantharidinate on human hepatoma HepG2 cells.

Results

As results, sodium cantharidinate significantly inhibited the growth of HepG2 cells in a time-and dose-dependent manner.

Conclusion

We conclude that sodium cantharidinate has an inhibitory effect on human hepatoma HepG2 cells.     

人胚胎干细胞对肝癌HepG2 细胞体外抑制作用的研究

目的:研究体外共培养情况下人胚胎干细胞H9 对肝癌HepG2 细胞的抑制作用。方法:建立人胚胎干细胞(H9) 与肝癌HepG2 细胞共培养体系,显微镜下观察胚胎干细胞对肿瘤细胞生物学行为的影响,流式细胞仪检测H9 细胞对肿瘤细胞的凋亡与周期的影响,Transwell 小室法检测H9 细胞对HepG2 细胞侵袭和迁移的影响,基因芯片分析共培养后HepG2 细胞全基因组的表达谱变化。结果:结果发现共培养过程中,肝癌HepG2 细胞生长受到抑制,随共培养时间延长,细胞数量逐渐减少,出现老化或凋亡迹象;流式细胞术检测发现HepG2 细胞凋亡率显著增加,细胞周期被阻滞于G0/ G1 期;Transwell 实验发现HepG2 细胞侵袭、迁移力均降低;基因芯片结果发现HepG2 细胞全基因组表达谱发生了显著变化,差异基因涉及多条信号通路。结论:人胚胎干细胞H9 体外对人肝癌细胞HepG2 有一定程度的抑制作用。     

黄荆子活性成分木脂素-3对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的实验研究

目的探讨黄荆子活性成分VBE-3对肝癌细胞株HepG2的生长和凋亡的影响,为该药物的应用提供实验依据。方法 MTT法检测VBE-3处理的HepG2细胞增殖情况,流式细胞术检测VBE-3处理的细胞的凋亡情况以及Caspase活性检测试剂盒检测该细胞中caspase-3/7的酶活性变化。结果 VBE-3可显著降低HepG2细胞的增殖并诱导其凋亡,VBE-3处理的HepG2细胞中caspase-3/7活性显著升高。结论 VBE-3具有显著的促进肝癌细胞株HepG2的生长抑制和促进凋亡作用,其机制之一是提高了该细胞中caspase-3/7的酶活性。结果提示VBE-3可能具有广谱抗肿瘤活性。     

基于质粒的蛋白激酶B1特异性小干扰RNA和P53共表达协同抑制肝细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨蛋白激酶B1(Akt1)特异性小干扰RNA(siRNA)和p53共表达质粒对肝细胞癌(HCC)细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响.方法 构建了一种共表达蛋白激酶B1(Akt1)特异性siRNA和野生型p53基因的双表达质粒(pSi-Akt1-P53).将pSi-Akt1-P53共表达质粒转染至肝癌HepG2细胞...     

大麻受体激动剂WIN-55,212-2对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖和凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨。方法:将细胞分成对照组、不同剂量大麻受体激动剂WIN-55,212-2(WIN)处理组。MTT法测定WIN对HepG2细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法检测HepG2细胞凋亡DNA片段,流式细胞术检测分析各组细胞凋亡率变化,Western blot分析各组细胞caspase-3和c-myc的蛋白表达,分光光度法检测caspase-3、8、9的活性。结果:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长和c-myc的蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡,上述效应具有剂量依赖性。而且WIN可能通过诱导细胞caspase-3的蛋白表达和激活caspase-3、8、9活性进而诱导肝癌细胞凋亡。结论:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,并与caspases和c-myc的蛋白表达相关。     

穿心莲内酯对骨肉瘤143B细胞的抑制作用及其机制

目的:探究穿心莲内脂(AG)对人骨肉瘤143B细胞的抑制作用及其潜在的机制。方法:体外培养人骨肉瘤143B细胞,使用不同浓度(0～20μmol/L)的AG处理143B细胞,分别用结晶紫染色、MTT法和集落形成实验来检测AG对143B细胞增殖的影响。划痕愈合实验检测骨肉瘤143B细胞的迁移能力。Transwell小室实验检测骨肉瘤143B细胞的侵袭能力。Hoechst 33258染色实验和流式细胞术检测AG对骨肉瘤细胞凋亡的影响。不同浓度AG处理后,使用Western blot检测骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭和凋亡相关蛋白的水平。应用Western blot进一步检测Wnt信号通路中的β-catenin及其相关分子c-Myc的表达量。结果:与空白组相比,AG处理组中143B骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0. 05),且呈浓度依赖性。迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶9(MMP-9)、波形蛋白(vimentin)和Snail蛋白的水平均下调(均P<0. 05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达量升高,凋亡相关蛋白caspase-3的蛋白水平下降而cleaved caspas...     

靶向泛素连接酶SIAH2的shRNA对人肝癌细胞株HepG2细胞周期和凋亡的影响

 目的：探讨shRNA介导的泛素连接酶SIAH2(seven in absentia homolog 2)基因表达抑制对人肝癌细胞株HepG2细胞周期和凋亡的影响。方法：用已构建的pGenesil-SIAH2重组质粒转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察转染效率。采用RT-PCR和Western blotting 技术检测重组质粒对SIAH2 mRNA和蛋白表达的影响,MTS比色法测定重组质粒转染对细胞体外增殖能力的影响,流式细胞术检测重组质粒转染后细胞周期和凋亡的变化。结果：与对照组相比,pGenesil-SIAH2能显著抑制SIAH2 mRNA和蛋白的表达水平;pGenesil-SIAH2转染组细胞增殖速度明显减慢;pGenesil-SIAH2组细胞明显阻滞于G1期,细胞凋亡率明显升高。结论: pGenesil-SIAH2能有效抑制HepG2增殖,使细胞周期阻滞在G1期,并诱导其早期凋亡。上述研究为以SIAH2为靶点的肝癌基因治疗提供实验依据。     

糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B对人肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其分子机制

 目的：研究糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B（glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B,GPNMB）对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其分子机制。方法：以人HepG2细胞为研究对象,构建GPNMB的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）以及过表达载体,转染入细胞后分别采用MTT法、流式细胞术和Transwell小室法观察其对HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果：增殖实验结果表明GPNMB可促进HepG2细胞的增殖;流式细胞术检测发现GPNMB对HepG2细胞凋亡几乎无影响;细胞侵袭结果表明GPNMB可促进HepG2细胞的侵袭;当整合素β1亚基基因被siRNA沉默后,GPNMB对HepG2细胞增殖和侵袭的促进作用均受到明显抑制。结论: GPNMB可能通过与整合素β1亚基相互作用促进肝癌细胞的增殖和侵袭能力,提示GPNMB可以作为治疗肝癌的潜在靶点。