PPARs激动剂上调内皮细胞表达eNOS并增加NO生成

目的： 观察PPARα激动剂非诺贝特及PPARγ激动剂赛格列酮对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）抑制NO生成的作用。 方法： 体外培养HUVECs，用1×10-7-1×10-4mol/L赛格列酮和10-5、10-4mol/L非诺贝特预处理HUVECs 24 h，再与10-6mol/L AngⅡ 共同孵育12 h，通过RT-PCR和Western blotting分别检测eNOS mRNA和蛋白表达水平；通过Griees反应测定NO2－/NO3－浓度。 结果： 与对照组相比，10-7mol/L AngⅡ刺激HUVEC 12 h下调eNOS mRNA（0.38±0.19 vs 0.13±0.18，P<0.01）和蛋白（35.90±3.18 vs 6.95±2.19，P<0.01）表达，减少NO生成（50.21 μmol/L vs 21.33 μmol/L，P<0.01）。用10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L赛格列酮预处理24 h，上调eNOS mRNA表达（分别为0.36±0.03、0.36±0.14、0.37±0.16、0.43±0.06，与AngⅡ组比较，均P<0.01）和蛋白表达（分别为11.60±3.31、11.78±5.45、13.93±2.46、22.93±3.17，与AngⅡ组相比，均P<0.01），增加细胞培养液NO2-/NO3-浓度。非诺贝特也上调eNOS mRNA和蛋白表达，增加细胞培养液NO2-/NO3-浓度（P<0.01）。 结论： AngⅡ减少eNOS表达，从而减少NO生成。赛格列酮和非诺贝特预处理24 h，可拮抗AngⅡ对HUVECs eNOS mRNA和蛋白表达的抑制作用，增加NO的释放。     

Quercetin调节肝癌HepG2细胞Fas表达诱导细胞凋亡

目的： 探讨三磷酸肌醇( IP3) 和Fas基因表达变化在quercetin诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法: 以肝癌HepG2 细胞培养72 h为对照, 20、40、60、80 μmol/ L quercetin作用于 HepG2 细胞72 h和60 μmol/L quercetin 作用于HepG2 细胞6 h、12 h、24 h、48 h、72 h,应用同位素试剂盒IP3 - ［3H］ Birtrak检测细胞IP3 含量，RT-PCR分析Fas mRNA表达，Western blotting 分析细胞Fas蛋白表达，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果: 各浓度的quercetin作用于肝癌HepG2 细胞72 h，IP3 含量显著低于对照组［（17.9±1.5 ）pmol/106cells、（15.5±1.1）pmol/106cells、（5.7±0.9）pmol/106cells、（5.5±0.8）pmol/106cells vs （29.4±0.5）pmol/106cells］，Fas mRNA表达显著高于对照组［RI 0.26±0.01、0.30±0.01、0.30±0.02、0.37±0.02 vs 0.19±0.02］，Fas蛋白表达显著高于对照组［RI（灰度与面积之积的相对强度）1.10±0.08、 0.91±0.02、0.78±0.07、0.73±0.05 vs 0.15±0.01］，细胞凋亡率显著高于对照组［（11.2±1.1）%、（15.5±1.1）%、（26.8±2.5）%、（27.1±1.5）% vs （2.6±0.1）%］； 60 μmol/L quercetin 作用于肝癌HepG2 细胞6 h、12 h、24 h、48 h、72 h ，各时相IP3 含量显著低于对照组［（23.3±1.4）pmol/ 106cells、 (12.0±1.4) pmol/ 106cells、(7.5 ±0.8) pmol/ 106cells、(5.6 ±0.5) pmol/ 106cells、(4.3 ±0.6) pmol/ 106cells vs (29.2 ±0.6) pmol/106cells,P<0.01］；12 h后Fas mRNA表达显著高于对照组［RI 0.26±0.02、0.28±0.02、0.26±0.01、0.24±0.01 vs 0.20±0.01］，Fas蛋白表达显著高于对照组［RI 0.65±0.17、 1.20±0.07、1.51±0.06、1.50±0.06、0.97±0.17 vs 0.18±0.01］，24 h后各时相细胞凋亡率显著高于对照组［(7.4 ±0.5)%、(20.5 ±2.0)%、(30.7 ±1.6)% vs (2.6 ±0.1)%，P< 0.01］。结论: Quercetin能减少IP3 生成，上调Fas基因表达，诱导肝癌细胞凋亡。     

RNA干扰survivin基因提高淋巴瘤细胞对阿霉素的敏感性

目的：探讨RNA 干扰下调Burkitt淋巴瘤Daudi细胞系凋亡抑制基因survivin的表达对阿霉素敏感性的影响。方法：构建survivin发夹RNA（shRNA）真核表达载体, 脂质体介导转染Daudi细胞。多重RT-PCR 检测 survivin mRNA 表达；Western blotting 检测Survivin蛋白表达；流式细胞仪（FCM）检测干扰前后细胞凋亡率；MTT 法检测干扰前后细胞对化疗药物阿霉素（adriamycin,ADR）敏感性变化。结果：与无功能control-shRNA处理组和PBS处理组比较，转染survivin-shRNA 细胞的survivin mRNA和蛋白表达率显著降低，抑制率分别为62.32% 和61.88% (P<0.05)；FCM结果示转染组细胞凋亡指数（apoptosis index, AI) 显著高于两对照组(P<0.05)； MTT结果显示，转染组细胞的阿霉素半数抑制浓度(IC50)为（0.25±0.43） μmol/L，显著低于无功能control-shRNA处理组（0.87±0.21） μmol/L和PBS处理组(0.91±0.36) μmol/L,P<0.05；相同剂量ADR对转染细胞的生长抑制率明显高于PBS组和control组。结论： 发夹RNA干扰survivin基因可显著提高Daudi细胞凋亡率和对化疗药物阿霉素的敏感性。     

脂多糖对人支气管上皮细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6表达的影响

目的 观察脂多糖对人支气管上皮细胞16HBE STAT1、STAT3、STAT4、STAT6表达的影响.方法 采用普通RT-PCR检测16HBE细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA表达;Western印迹检测16HBE细胞STAT1、STAT4、STAT6的蛋白表达.分别采用不同浓度的脂多糖在不同的时间点处理16HBE细胞,采用Real-time PCR的方法检测16HBE细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA表达.结果 1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞1 h组、0.25 μg/ml的LPS处理16HBE细胞4 h组、1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞4 h组STAT1、STAT4的mRNA表达较正常对照组显著增高(P＜0.01);0.25 μg/ml的LPS处理16HBE细胞2 h组、1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞2 h组、10 μg/ml的LPS处理16HBE细胞2 h组STAT1、STAT4的mRNA表达较正常对照组有所增高(P＜0.05);1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞1 h组STAT6的mRNA表达较正常对照组显著增高(P＜0.01).所有LPS处理16HBE细胞组STAT3的mRNA表达均较正常对照组减低.结论 人支气管上皮细胞表达STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA和STAT1、STAT4、STAT6的蛋白,一定剂量的脂多糖在某些时间点分别刺激了人支气管上皮细胞STAT1、STAT4、STAT6的mRNA表达.     

银杏叶提取物对肝星状细胞增殖及转化生长因子和结缔组织生长因子基因表达的影响

目的: 研究银杏叶提取物对肝星状细胞增殖及细胞因子TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白表达的影响，以探讨银杏叶提取物抗肝纤维化的可能机制。方法: 用不同浓度(0、1、10、100、500 mg/L)的银杏叶提取物处理HSC-T6，用MTT及流式细胞仪检测其对肝星状细胞增殖及细胞周期的影响，用RT-PCR及Western blotting检测培养24 h及48 h后各组细胞中TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白的表达。结果： 银杏叶提取物10、100、500 mg/L可抑制肝星状细胞的增殖，与空白对照组相比，G0/G1期DNA含量逐渐增加（P<0.05或P<0.01），S期DNA含量则逐渐降低（P<0.01），增殖指数(PI)逐渐降低(P<0.05 或P<0.01)；24 h各组TGF-β1mRNA及蛋白表达较对照组分别低（28±4）%、（39±4）%、（45±3）% (P<0.01)；（27±4）%、（37±4）%、（41±3）% (P<0.01)；48 h组各组TGF-β1mRNA及蛋白表达较对照组分别低（35±4）%、（49±3）%、（54±3）% (P<0.01)；(33±4)%、(48±3)%、(52±3)% (P<0.01)；4 h各组CTGF mRNA及蛋白表达较对照组分别低（29±6）%、（45±4）%、（56±3）% (P<0.01)；（36±4）%、（48±4）%、（49±3）% (P<0.01)；48 h组各组CTGF mRNA及蛋白表达较对照组分别低（48±6）%、（57±4）%、（69±3）% (P<0.01)；(44±6)%、(58±4)%、(62±3)% (P<0.01)。结论: 银杏叶提取物可能通过抑制肝星状细胞的增殖，抑制细胞因子TGF-β1、CTGF基因的表达发挥其抗肝纤维化的作用。     

SLE患者PBMC表达B细胞刺激因子及地塞米松对其表达的影响

目的:探讨SLE患者外周血单个核细胞(PBMCs)BLyS基因和蛋白表达及糖皮质激素地塞米松对其表达的影响。 方法:梯度密度离心法分离25例SLE患者［(31.40±14.23)岁］和20名女性健康志愿者［(28.20±10.36)岁］的PBMCs，分为2组, 地塞米松(1 μmol/L)组和培养基组(仅含RPMI-1640培养基)，分别于培养 0 h、6 h、12 h、24 h 和 72 h 离心收集PBMCs，用RT-PCR法检测刺激后0至 24 h 时点细胞BLyS mRNA的表达情况，流式细胞仪(FACs)和直接免疫荧光法（激光共聚焦荧光显微镜）检测 72 h 膜结合型BLyS蛋白的表达。 结果:(1) SLE患者BLyS mRNA和蛋白表达均高于健康对照(0.40±0.18 vs 0.27±0.20, P<0.01;0.37±0.17 vs 0.25±0.17, P<0.01;0.42±0.26 vs 0.29±0.16, P<0.01;0.39±0.23 vs 0.24±0.18, P<0.01)。(2) 地塞米松显著抑制健康对照和SLE患者PBMCs BLyS mRNA表达，12 h 最为明显 (0.19±0.10 vs 0.31±0.16, P<0.01；0.29±0.18 vs 0.46±0.21, P<0.01）。(3) 地塞米松显著抑制健康对照和SLE患者PBMCs膜结合型BLyS蛋白表达(2.73±1.89 vs 3.67±1.64，P<0.01；3.42±1.53 vs 4.52±1.95，P<0.01)。 (4)直接免疫荧光法激光共聚焦荧光显微镜检测PBMCs 膜结合型BLyS蛋白表达显示地塞米松刺激后BLyS表达减弱。 结论:SLE患者PBMCs BLyS表达增强，其表达受地塞米松负影响。     

Forskolin对人WISH细胞水通道蛋白 8 表达及分布的影响

 目的 探究调控人羊膜上皮细胞水通道蛋白8（AQP8）表达的信号转导通路 。方法 以腺苷酸环化酶激动剂 Forskolin 处理体外培养的人羊膜上皮细胞株 WISH 细胞，将 WISH 细胞随机分为不同浓度 Forskolin 作用 24 h 组和单一浓度 Forskolin 作用不同时间组。前者培养基中分别加入 Forskolin 0（对照组）、5、10、20、40、100、200 μmol/L，培养 24 h；后者培养基中加入 Forskolin 100 μmol/L 后分别培养 4、8、16、24、48 h。采用蛋白质印迹技术检测各组细胞 AQP8 蛋白表达水平；RT-PCR 技术检测 Forskolin 处理不同时间组细胞 AQP8 mRNA 表达水平；免疫荧光细胞化学方法检测 Forskolin 100 μmol/L 作用 24 h 组细胞 AQP8 蛋白的分布。结果 对照组 WISH 细胞 AQP8 蛋白表达水平为 0.027 ± 0.003，AQP8 mRNA 表达水平为 0.026 ± 0.003。不同浓度 Forskolin 处理组中，除了 5 μmol/L 组外，其余各组 AQP8 蛋白表达水平均高于对照组（P < 0.05），高峰值出现在 100 μmol/L 组（0.157 ± 0.006）。Forskolin 处理不同时间的各组 WISH 细胞，其 AQP8 mRNA 和蛋白的表达水平均高于对照组（P < 0.05），AQP8 mRNA 表达水平在 16 h 组达峰值（0.087 ± 0.007），AQP8 蛋白表达水平在 24 h 组达峰值（0.158 ± 0.007）。免疫荧光细胞化学染色显示，Forskolin 100 μmol/L 作用 24 h 组细胞膜上的黄绿色免疫荧光信号较对照组明显增强。结论 Forskolin 可上调 WISH 细胞 AQP8 mRNA 及蛋白表达水平，使细胞膜上 AQP8 蛋白的分布增加，提示细胞内 cAMP-蛋白激酶 A 信号转导途径的激活在人羊膜上皮细胞 AQP8 表达的调控中发挥重要作用。     

4-羟基壬烯醛诱导支气管上皮细胞凋亡

目的探讨4-羟基壬烯醛(4-HNE)对支气管上皮细胞(16-HBE)凋亡的诱导作用及其机制。方法将支气管上皮细胞(16-HBE)分为空白对照组、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L4-HNE作用4h组,观察4-HNE作用4h后的细胞凋亡情况。Western印迹方法检测磷酸化(p-)SAPK-JNK和caspase-3蛋白表达的情况。结果细胞经30μmol/L、50μmol/L4-HNE作用后,姬姆萨染色可见明显细胞凋亡改变。对照组、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L4-HNE组的AnnexinV-PI染色凋亡细胞数分别为1.94±1.03,2.03±1.04,43.36±1.3,65.92±3.45。30μmol/L和50μmol/L4-HNE组与对照组及10μmol/L4-HNE组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。各组p-SAPK-JNK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。30μmol/L、50μmol/L4-HNE刺激组caspase-3的表达较对照组和10μmol/L4-HNE组差异有统计学意义(P<0.01)。结论30、50μmol/L4-HNE可通过caspase-3的激活引起支气管上皮细胞的凋亡。     

蛋白酶体抑制剂MG132对NK/T淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的： 探讨蛋白酶体抑制剂MG132（Z-leu-leu-leu-CHO,三肽基乙醛）对NK/T淋巴瘤细胞的增殖和细胞周期分布的影响,研究蛋白酶体抑制剂MG132治疗NK/T细胞淋巴瘤的潜在应用价值。方法: 用蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞,噻唑蓝［ 3（4,5二甲基噻唑2）2,5二苯基四氮唑溴盐,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide,MTT］法检测细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡。结果: 1 μmol/L MG132作用24 h,HANK1细胞增殖抑制率为（57.72±7.44）%,而0.1 μmol/L MG132作用24 h,增殖抑制率仅为（3.98±0.07）%;MG132剂量大,增殖抑制率高;1 μmol/L MG132作用24 h后,HANK1细胞G1和G2期细胞分别为（72.33±3.44）%和（12.86±1.29）%,对照组为（63.63±2.29）%和（7.94±1.91）%,用药组G1和G2期细胞明显高于对照组（P<0.01,P<0.05）; 早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞分别为（33.57±2.10）%和（16.66±0.47）%,而对照组仅为（7.18±0.82）%和（3.81±1.06）%,与对照组相比,凋亡率明显增高 (P<0.01,P<0.01)。结论: MG132抑制NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖,使细胞周期G1和G2期阻滞,促进细胞凋亡,并存在剂量和时间依赖关系,蛋白酶体抑制剂MG132很可能成为治疗进展期NK/T细胞淋巴瘤的药物。     

β-淀粉样蛋白对原代培养大鼠海马神经细胞Sorcin、RyR2mRNA基因表达的影响

目的 研究β-淀粉样蛋白(Aβ)对原代培养的大鼠脑海马神经细胞内钙稳态相关蛋白Sorcin、RyR2mRNA的影响.方法 新生1-3天的Wistar大鼠,取其海马组织,原代培养8d后,用已老化过的Aβ25-35对海马神经细胞进行1μmol/L,10μmol/L和20 μmol/L剂量的染毒,培养24和48 h后分别观察海马神经细胞形态、和海马神经细胞内钙调节相关蛋白Sorcin、RyR2mRNA的基因表达水平.结果 随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长,可发现随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长,海马细胞出现细胞凋亡的比例增加,其中Aβ25-35 20 μmol/L染毒48 h培养海马细胞中出现了大量早期凋亡细胞和少量中期凋亡细胞.实时定量PCR结果显示,10 μmol/L Aβ5-35在对原代细胞染毒24和48 h后Sorcin mRNA的相对表达量为(1.42±0.03)和(1.63±0.02),与对照组相比,表达增加(P＜0.05);20μmol/L Aβ25-35在对原代细胞染毒24h和48 h后Sorcin mRNA的相对表达量(2.11±0.05)和(2.23±0.05),与对照组相比,表达增加(P＜0.05);20 μmo]/L Aβ25-35在对原代细胞染毒24和48h后RyR2mRNA的相对表达量为(1.64±0.03)和(1.95±0.03),表达显著高于对照组相(P＜0.05).结论 Aβ具有神经毒性,可抑制海马神经细胞的生长,可通过作用于钙调节相关蛋白的表达,诱发阿尔茨海默氏病(AD)的发生.     

二苯乙烯苷通过抑制ROS减轻6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡

目的:探讨2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside,TSG)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的PC12细胞凋亡的影响及其可能的机制.方法:4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测...     

西红花酸对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的通过H2O2诱导PC12细胞损伤,建立氧化应激损伤的体外模型,以探讨西红花酸对细胞损伤的保护作用及其相关机制。方法观察不同浓度(0、50、100、200、300、400μmol/L)H2O2损伤PC12细胞12 h,用CCK-8检测细胞活力;不同浓度(0.1、1、5、10μmol/L)西红花酸预处理PC12细胞24 h,观察西红花酸对H2O2(200μmol/L)损伤细胞后的恢复作用,CCK-8检测细胞活力;罗丹明Rh123染色,流式检测线粒体膜电位(MMP);DCF-DA染色荧光照相术检测活性氧(ROS)水平;Western blot检测磷酸化ERK1/2的表达情况。结果 H2O2(0～400μmol/L)作用PC12细胞12 h后,细胞活力分别为(100±4.1)%、(102±1.9)%、(89±11.2)%、(52±2.6)%、(42±1.6)%、(8±0.4)%,细胞损伤呈明显的浓度依耐性;西红花酸预处理后,细胞活力由(45.12±3.15)%,分别上升为(51.88±4.24)%、(65.14±8.19)%、(57.66±5.58)%、(53.61±4.57)%;西红花酸(1μmol/L、5μmol/L)预处理组减少了线粒体膜电位(MMP)的下降,有效清除活性氧(ROS),激活磷酸化ERK1/2。结论上述实验表明西红花酸能对抗H2O2诱导的氧化应激损伤,表明西红花酸有抗氧化作用。     

去氢表雄酮及G6PD基因反义寡核苷酸对Raji细胞的某些影响

目的:观察去氢表雄酮（DHEA）及G6PD基因的全硫代修饰反义寡核苷酸对体外培养Raji细胞的抑制作用。 方法:分别用不同浓度DHEA及G6PD反义寡核苷酸作用于体外培养Raji细胞，观察细胞存活、生长情况，同时采用逆转录-聚合酶链反应检测Raji细胞G6PD基因mRNA表达水平，测定G6PD活性。 结果:DHEA及G6PD反义寡核苷酸不影响Raji细胞存活，50 μmol/L、500μmol/L浓度的DHEA作用72 h小时及10.0 μmol/L反义寡核苷酸作用48 h后均明显抑制Raji细胞生长（P＜0.01）；当DHEA≥5.0 μmol/L时，作用Raji细胞72 h，则G6PD活性明显低于未用DHEA作用的对照组（P＜0.01），但不影响G6PD基因mRNA表达；10.0 μmol/L反义寡核苷酸作用Raji细胞48 h后，G6PD基因mRNA表达水平低于未用反义寡核苷酸作用的对照组，G6PD活性亦明显低于对照组（P＜0.01）。 结论:一定浓度的DHEA及G6PD反义寡核苷酸均能抑制Raji细胞G6PD活性并不同程度影响细胞生长，但其抑制机制不同。     

地西他滨联合丙戊酸钠促进胃癌MGC-803细胞凋亡和G0/G1期阻滞的机制研究

目的: 探讨地西他滨(DCA)和丙戊酸钠(VPA)联用对胃癌细胞株MGC-803凋亡和细胞周期的影响及机制。方法: DCA 1.5 μmol·L^-1、DCA 3.0 μmol·L^-1、VPA 1.5 mmol·L^-1、DCA 1.5 μmol·L^-1+VPA 1.5 mmol·L^-1和DCA 3.0 μmol·L^-1+VPA 1.5 mmol·L^-1作用MGC-803细胞72 h。Annexin V/PI法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR检测nm23-H1 mRNA表达。结果: VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组 和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组 凋亡率均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。MGC-803细胞G₀/G₁期比例在VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组(61.55%±2.38%)和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组(66.75%±2.48%)的表达水平均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。nm23-H1 mRNA在VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组(1.84±0.46)和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组(2.88±0.42)的表达水平均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论: DCA联合VPA能显著促进MGC-803细胞凋亡及G₀/G₁期阻滞,其机制可能与促nm23-H1基因的表达有关。     

永生化人肝细胞系的建立和生物学特性研究

目的建立永生化人肝细胞系（IHCL），评价其作为制备生物人工肝细胞材料的可行性。方法利用基因转移技术对原代培养的人肝细胞转染永生化基因猴病毒40大T抗原和人端粒酶逆转录酶，建立IHCL。以噻唑蓝法测定IHCL细胞生长曲线；流式细胞仪分析细胞增殖周期；裸鼠皮肤和肝脏局部接种观察细胞致瘤性；RT-PCR检测肝细胞相关基因mRNA表达；蛋白质印迹法检测肝功能相关蛋白的表达。应用Cytodex3微载体培养IHCL，分析细胞的生长状态和细胞密度。将IHCL细胞分别与5例重症肝功能衰竭患者的血清共培养，培养前后检测血清中胆红素和尿素氮水平，评价IHCL的解毒功能。结果所建立的IHCL具有原代肝细胞的形态，并具有较好的增殖能力，细胞已经传代超过80次。IHCL细胞以DNA二倍体整数倍方式增殖，细胞倍增周期为38h。裸鼠接种IHCL部位均未见肿瘤生长。RT-PCR检测显示IHCL细胞表达仅α1-抗胰蛋白酶、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶、谷胺酰胺合成酶和谷胱甘肽硫转移酶的mRNA；蛋白质印迹分析证实IHCL细胞表达这4种蛋白。IHCL细胞可以在微载体上贴附生长，细胞密度可以达到2．86×10^6个／ml。将IHCL细胞与重症肝功能衰竭患者血清共培养12、24和48h后，血清中总胆红素由（346±94）μmol／L分别下降至（330±97）、（315±97）和（295±100）μmol／L，直接胆红素由（243±70）μmol／L下降至（218±76）、（198±79）和（184±75）μmol／L，24、48h与共培养前比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；而尿素氮进行性地升高，由（6．6±0．9）μmol／L分别升高至（9．0±0．9）、（9．9±1．1）和（12．5±1．6）μmol／L，3个时间点与共培养前比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论所建立的IHCL细胞系具有正常人肝细胞的基本生物学特性和主要的功能特性，具备成为生物人工肝细胞     

绿茶多酚主要成分对百草枯诱导PC12细胞损伤的保护作用

探讨绿茶多酚的主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对百草枯(paraquat,PQ)诱导的PC12细胞损伤的影响及可能机制。建立PQ损伤的PC12细胞体外模型,经不同浓度EGCG预处理后,分别用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活性,Hochest33258染色观察凋亡时细胞核形态的变化,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡比例,免疫细胞化学染色观察细胞色素c蛋白表达水平。1、5、10μmol/LEGCG对PQ诱导的PC12细胞损伤具有一定的保护作用。与PQ组(54.6±3.5%)相比,1、5、10μmol/LEGCG预处理组细胞活力分别上升为66.5±2.7%、74.4±2.6%、83.7±3.2%。Ho-chest33258染色发现PQ组较多胞核出现固缩凝集(43.5±8.4%),而EGCG预处理组则较少(分别为30.7±7.9%、17.9±6.8%、11.2±4.4%)。FCM检测也提示EGCG预处理可降低细胞的凋亡百分率,正常组、PQ组、EGCG预处理组(1、5、10μmol/L)分别为4%、39.9%、32.6%、20.1%和10.4%。另外,免疫细胞化学染色发现EGCG预处理可下调PQ诱导的细胞色素c在胞浆中的过表达。以上结果提示EGCG可减轻PQ诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与下调细胞色素c在胞浆内的过表达有关。     

土荆皮乙酸促进喉癌细胞系HEp-2凋亡

目的本文观察土荆皮乙酸(PAB)对人喉表皮样癌细胞系2(HEp-2)的增殖和凋亡的影响。方法细胞分组及处理:以0、0.5、1、2、4、8和16μmol/L的PAB分别处理细胞24、48和72 h;MTT法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot和qPCR检测细胞Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白及mRNA表达;免疫组化检测细胞PARP和c-PARP蛋白的表达。结果 PAB呈时间-浓度依赖性抑制HEp-2增殖。与对照组比较,4和8μmol/L PAB组HEp-2细胞凋亡率均显著升高(P<0.01);4和8μmol/L PAB组HEp-2细胞的Bcl-2和PARP表达均显著下降(P<0.05);Bax、caspase-3和c-PARP的表达均显著升高(P<0.05)。结论 PAB可激活线粒体凋亡途径,诱导HEp-2细胞凋亡。     

奥氮平对鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的保护作用

探讨非典型抗精神病药物奥氮平对鱼藤酮诱导神经元凋亡的可能保护作用及其机制。以NGF诱导后的PC12细胞作为细胞模型,采用鱼藤酮诱导细胞凋亡。用不同浓度奥氮平、氟哌啶醇预处理后,观察鱼藤酮对PC12细胞的作用,分别用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Hoechst33342染色观察细胞形态学改变,并对二者的结果进行比较。鱼藤酮以剂量依赖的方式杀死PC12细胞。鱼藤酮(6μmol/L)作用后,奥氮平(50μmol/L)组预处理48h的细胞活力显著高于对照组(无药物预处理)(P<0.05);鱼藤酮(4、6、8μmol/L)作用后,氟哌啶醇组(20、40、60μmol/L)的细胞活力均低于对照组。流式细胞仪检测结果显示,对照组、氟哌啶醇(20μmol/L)组、奥氮平(50μmol/L)组、空白对照组(无药物预处理以及鱼藤酮处理)的细胞凋亡率依次为(32.2±1.3)%、(42.1±1.0)%、(14.0±1.0)%和(1.3±0.3)%。Hoechst33342染色结果显示,对照组每个视野多见凋亡细胞,细胞核裂解为碎块,氟哌啶醇组更明显;奥氮平组凋亡细胞数量较氟哌啶醇组及对照组为少。结果提示奥氮平对鱼藤酮诱导PC12细胞的凋亡具有保护作用,这可能是奥氮平和氟哌啶醇在精神分裂症病人应用中有不同的治疗效果和副作用的部分机制。