河南省艾滋病流行区HIV共感染HBV和HCV状况分析

目的:了解河南省艾滋病流行区艾滋病病毒(HIV)共感染乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)状况.方法:首先用Combas Amplicor HIV-1病毒载量检测法对从我省HIV某高发县采集的由输血感染HIV-1的130份血样进行定量测定.挑选出HIV-1病毒载量4.28×102拷贝/mL以上的血浆样本81份,同时收集30份HIV-1阴性健康体检者血浆作为对照,再用巢式PCR法对以上样本进行HBV和HCV测定.结果:81份HIV-1阳性样本中HBV阳性32份(39.5%),HCV阳性72份(88.9%);同时感染HBV和HCV的样本为7份(8.6%).30份HIV-1阴性对照组中,HBV阳性7份(23.3%),与HIV-1阳性组间比较差异无统计学意义(x2=2.51,P>0.05);HCV阳性4份(13.3%),与HIV-1阳性组间比较差异有统计学意义(x2=57.88,P<0.05);HIV-1阴性对照组中未检测出HBV和HCV共感染样本,与HIV-1阳性组相比差异无统计学意义(x2=2.77,P>0.05).结论:经输血感染HIV的患者具有共感染HCV的倾向;对以上途径感染HIV的患者,在进行HIV治疗时应同时进行HBV和HCV检测,阳性者应在治疗HIV-1的同时给予抗HBV和HCV治疗.     

某国产人免疫缺陷病毒核酸定量检测试剂盒的临床应用研究

目的比较某国产人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核酸检测试剂盒与罗氏Cobas TaqMan HIV-1 Test Version2.0(Cobas TaqMan)检测试剂检测HIV-1血浆病毒载量的相关性与一致性。方法采用某国产HIV-1核酸检测试剂/DA3500全自动核酸提取仪和罗氏Cobas TaqMan试剂/COBAS AmpliPrep,平行检测渝西四地220份HIV-1抗体阳性样本的病毒载量,采用配对t检验,相关性分析和Bland-Altman等方法进行统计分析。结果 220份样本中罗氏试剂检测阳性率为93.18%(205/220),某国产试剂检测阳性率90.00%(198/220),罗氏检测阴性为15例,该国产试剂检测阴性为22例,定性分析结果该国产试剂总符合率为89.55%。158例定量线性范围内相关性分析结果显示,该国产试剂与罗氏试剂检测结果相关系数r为0.974 6。此外,Bland-Altman分析两种方法检测病毒载量的结果具有较高的一致性。结论某国产HIV-1核酸检测试剂与罗氏试剂相比,具有较好的相关性和一致性。     

1型HIV感染多重PCR检测方法的建立及临床应用

目的建立检测人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的多重巢式PCR(nPCR)和多重反转录PCR(RT-PCR)方法。将其与已经上市的NASBA法试剂盒进行检测敏感性比较;探讨血浆RNA水平对PCR检测敏感性的影响;评价该方法用于我国HIV-1感染者诊断的价值。方法针对HIV-1的gag、pol和gp41区设计3套引物,建立检测HIV DNA的多重nPCR和检测HIVRNA的多重RT-PCR方法;分别以建立的PCR方法和NASBA法对119例HIV阳性患者进行检测,比较2者的检测敏感性;将患者分为不同的病毒载量组,比较PCR方法在各组患者中的检测敏感性差异;使用建立的PCR方法对10例可疑急性感染者进行检测;扩增HIV-1膜区C2-C3段,对nPCR检测阳性的43例DNA样本进行亚型鉴定。结果多重nPCR的检测敏感度为97.5%(116/119),多重RT-PCR的敏感度为78.2%(93/119),2者的特异度均为100%(50/50),多重nPCR和多重RT-PCR的阳性预测值分别为97.5%(116/119)和78.2%(93/119),阴性预测值均为100%(50/50),准确性分别为98.2%和84.6%。经比较,多重nPCR和多重RT-PCR的检测敏感度都高于NASBA法。在病毒载量<103copy/mL的患者,nPCR的检测敏感性高于RT-PCR,在病毒载量在(103～104)copy/mL的患者及病毒载量≥104copy/mL的患者,2者的敏感性比较相近,均接近100%;检测的10例可疑急性感染者中,有5例患者的nPCR和RT-PCR检测结果阳性,抗体在随访过程中阳转,证实为HIV急性感染者;检测的43例DNA样本分属于B’亚型(37例),AE亚型(5例)和BC亚型(1例)。结论本课题组建立的PCR检测方法可以对我国主要流行的B’、AE和BC亚型病毒株得到很好的扩增效果;nPCR的检测敏感性受血浆RNA水平的影响相对较小,RT-PCR的检测敏感性受血浆RNA水平的影响相对较大;PCR方法可以用于HIV急性感染者的早期诊断。     

一种国产HIV-1核酸定量试剂与罗氏试剂的临床对比研究

目的对比分析一种国产人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核酸定量试剂和进口罗氏试剂检测HIV-1血浆病毒载量的相关性和一致性。方法收集2018年1-5月期间在深圳市第三人民医院就诊的HIV/AIDS患者临床检测剩余血浆样本652份,采用某国产HIV-1核酸定量检测Ⅰ代试剂(简称国产试剂)和罗氏Cobas TaqMan HIV-1 Test Version 2.0试剂,平行检测HIV-1感染者血浆病毒载量,采用配对t检验、线性回归和Bland-Altman等方法,对检测结果进行统计分析,评价两种检测试剂检测结果的相关性和一致性。结果进口与国产试剂检测结果均高于或均低于检测下限的样本分别为362例和209例,检测结果一致性较高,达到87.58%(571/652)。两种试剂检测结果均高于检测下限的362例样本中,国产试剂和进口试剂检测的平均病毒载量分别为(74 642±11 077)IU/mL和(103 694±14 883)IU/mL,差异有统计学意义(t=3.842,P=0.000 1)。两种检测方法在病毒载量高于1 000 IU/mL时差异有统计学意义(t=3.867,P=0.000 1),但是在病毒载量低于1 000 IU/mL时差异并无统计学意义(t=1.074,P=0.285 2)。相关性分析显示,两种方法检测结果具有很强的相关性(r=0.962 0,P0.000 1);差异分析显示,Cobas TaqMan与国产试剂定量值差异平均值为-0.009 2 log10IU/mL,95%可信区间为(-0.641 6～0.623 2)log10IU/mL,95%(344/362)的样本检测值在95%可信区间内。结论国产试剂与和罗氏Cobas TaqMan试剂,检测HIV-1血浆病毒载量的结果具有较好的相关性和一致性。     

荧光定量PCR检测HBV-DNA的临床价值

目的:检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA拷贝数,以探讨乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)与血清免疫标志物的关系。方法:荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清样本中HBV-DNA含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBV血清标志物(HBVM)。结果:在HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)组(大三阳组)患者血清HBV-DNA阳性率为97.63%(371/380),平均拷贝数为1.86×107/ml;HBsAg(+)HBeAg(+)组HBV-DNA阳性率为95.65%(22/23),平均拷贝数为1.75×107/ml;HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)组(小三阳组)患者血清HBV-DNA阳性率为43.68%(83/190),平均拷贝数为4.85×105/ml;HBsAg(+)HBcAb(+)组血清HBV-DNA阳性率为82.22%(37/45),平均拷贝数为2.17×105/m1;小三阳及HBsAg(+)HBcAb(+)组HBV-DNA阳性检出率及拷贝数均低于大三阳及HBsAg(+)HBeAg(+)组,与之比较均具有显著性差异(P<0.05);HBVM全阴性组HBV-DNA检出率为1.78%(2/112),平均拷贝数为1.48×105/ml。结论:荧光定量PCR在乙肝的诊断、判断传染性强弱及评价抗病毒治疗效果方面具有较大的临床应用价值。     

梅毒对HIV-1感染者病毒载量和CD4+T细胞计数的影响

目的:评估梅毒对HIV-1感染者血浆HIV-1病毒载量,CD4 T细胞计数的影响.方法:于1年前对HIV-1感染者进行梅毒ELISA和RPR检测,对RPR检测阳性者根据其CD4 T细胞计数和病毒载量进行配对,与1年后重新检测CD4 T细胞计数与病毒载量比较,用配对资料的t检验分析梅毒对HIV感染者CD4 T细胞与病毒载量的影响.结果:在271例HIV-1感染者中,共11例梅毒阳性者,占4.1%.本研究中包括HIV-1感染者20例,其中10例梅毒与HIV-1共感染者.在梅毒与HIV共感染者病例中,CD4 T细胞计数明显降低(99个细胞/ml),但病毒载量的变化没有显著差异.结论:梅毒显著地降低HIV-1感染者的CD4 T细胞数量,但病毒载量没有明显的变化.为了延缓HIV-1感染者进入AIDS阶段的时间,应加强对梅毒的治疗和采取相应的预防措施.     

两种巢式PCR方法在HIV-1早期检测的应用和比较

目的 建立并应用HIV-1早期检测的单重巢式PCR和多重巢式PCR方法检测HIV-1感染,探讨两种方法检测结果的差异.方法 针对HIV-1主要流行毒株的pol、gag、env 3个基因的保守序列设计巢式PCR引物,建立单重巢式PCR和多重巢式PCR方法.运用两种巢式PCR方法对118例HIV-1阳性样本和48例HIV-1阴性样本进行检测.结果 多重巢式PCR方法的灵敏性为96.6%,高于env区单重巢式PCR的80.5%和pol区单重巢式PCR的88.1%(P＜0.05),但与gag区单重巢式PCR检测结果(90.7%)差异无统计学意义(P＞0.05);多重巢式PCR的特异性为99.2%,高于env区单重巢式PCR的85.4%(P＜0.05),但与gag区和pol区的特异性差异无统计学意义(P＜0.05);多重巢式PCR方法的平均重复性为98.3%,检测下限至少可以达到250 copy/ml.结论 多重巢式PCR检测方法与单重巢式PCR检测方法相比,具有更高的灵敏性、特异性以及较好的重复性,能检测到较低拷贝数的样本,是一种快速、简便、可靠的HIV-1早期检测方法.     

HBsAg阳性产妇血清和乳汁中HBV DNA载量分析

目的：探讨HBsAg(+)产妇血清和乳汁中HBV DNA载量关系及相关性,为慢性乙型肝炎产妇母乳喂养提供实验依据。方法对148例HBsAg(+)产妇血清和乳汁中乙肝病毒采用实时荧光定量PCR (FQ-PCR)方法检测HBV DNA,按产妇血清HBV载量分为HBV DNA载量<420 IU/ml组、420~104 IU/ml组、105~106 IU/ml组、107~108 IU/ml组,并同时收取产妇乳汁进行HBV DNA检测,比较不同组间乳汁HBV DNA阳性率以及血清HBV DNA与乳汁HBV DNA的相关性。结果148例HBsAg(+)产妇血清HBV DNA阳性率为31.8%(47/148),乳汁阳性率为16.2%(24/148),两者比较差异有统计学意义(χ2=7.355,P<0.05);HBsAg(+)产妇血清HBV DNA载量<420 IU/ml时,其对应的乳汁中均未检出HBV DNA;血清HBV DNA载量在420~104 IU/ml区间时,其对应乳汁中HBV DNA检出率为14.3%(3/18);血清HBV DNA载量在105~106 IU/ml区间时,其对应乳汁中HBV DNA检出率为71.4%(5/7);血清HBV DNA载量在107~108 IU/ml区间时,其对应乳汁中HBV DNA检出率为84.2%(16/19)(χ2=20.88,P<0.05);当血清HBV DNA含量升高时,乳汁中含量也相应增高,二者中度相关(r=0.628)。结论 HBsAg(+)产妇乳汁有不同载量的HBV DNA存在,其含量低于相应血清;随着血清HBV DNA载量的升高,产妇乳汁中HBV DNA载量有增高趋势,母乳喂养有潜在的传染性。     

自动核酸提取实时荧光定量PCR检测全血及血浆中EBV DNA载量的性能评价

目的探讨自动核酸提取实时荧光定量PCR方法检测全血及血浆中EBV DNA载量的方法学性能。方法评价自动核酸提取实时荧光定量PCR方法的线性范围、灵敏度、精密度及抗干扰等方法学性能,比较自动核酸提取法和煮沸提取法的相关性。用该方法检测152例EB病毒感染儿童的全血及血浆中的EBVDNA载量,比较分析全血与血浆中的EBVDNA载量关系。结果本法的线性范围为5×102~5×108Copies/ml,检测灵敏度为500 Copies/ml。批内CV为3.78%~4.57%,批间CV为6.35%~7.56%,总CV为7.24%~8.62%。肝素、胆红素、溶血对本检测方法均无干扰。EBVDNA载量在5×103~5×108Copies/ml范围内,本法()与煮沸提取法()的相关性良好(=0.924+0.873,2=0.900,<0.01),结果相差在1.0 logCopies/ml以内。80例EB病毒活动性感染组儿童,全血EBV DNA阳性率60%,血浆EBV DNA阳性率25%,全血EBV DNA阳性率高于血浆(=0.016);72例EBV非活动性感染组全血EBV DNA阳性阳性率5.6%,血浆EBV DNA阳性率0。活动性感染组全血EBV DNA阳性率高于非活动性感染组(<0.01)。结论自动核酸提取实时荧光定量PCR方法检测全血及血浆中的EBV DNA载量,具有灵敏高、抗干扰能力强、定量准确、操作简便的优点,适合临床实验室常规开展。     

鼻咽癌病人血浆和外周血白细胞EB病毒DNA定量分析

目的比较鼻咽癌(NPC)病人治疗前后血浆、外周血白细胞Epstein-Barr病毒(EBV)DNA水平的变化及癌组织EBV整合状况,探讨这些变化与NPC临床病理变化的关系.方法对150例初诊NPC病人治疗前后血浆和外周血白细胞、75名正常人血浆和外周血白细胞、49例NPC组织及47例鼻咽慢性炎组织EBV-DNA进行荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)分析.结果 NPC病人治疗前血浆EBV-DNA水平及检出率分别为82 500拷贝/ml(中位数)和92%,均显著高于治疗后(0拷贝/ml,19%)和正常人(0拷贝/ml,12%)(P<0.05),而NPC病人治疗后和正常人血浆EBV-DNA水平和检出率差异均无显著意义(P>0.05).NPC病人治疗前外周血白细胞EBV-DNA水平及检出率(0拷贝/肌动蛋白,24%)与治疗后(0拷贝/肌动蛋白,14%)和正常人(0拷贝/肌动蛋白,16%)三者间差异均无显著意义(P>0.05).NPC病人治疗前、后及正常人血浆EBV-DNA水平与对应外周血白细胞EBV-DNA水平均无显著相关性(P>0.05).EBV-DNA(荧光定量PCR法)和EBER1(原位杂交法)在NPC组织检出率均为100%,显著高于鼻咽慢性炎组织中EBV-DNA和EBER1检出率(分别为40%和0)(P<0.05).NPC组织EBV-DNA水平为27.8拷贝/肌动蛋白(中位值),显著高于鼻咽慢性炎组织(0拷贝/肌动蛋白)(P<0.0001),NPC组织EBV-DNA水平与对应癌组织内EBER1阳性细胞占组织总细胞比率(中位值0.35)有显著正相关性(相关系数r= 0.513)(P<0.0001).NPC病人治疗前血浆EBV-DNA水平随临床TNM分期越晚而显著增高(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期中位值分别为2500、32 590、86 000和166 200拷贝/ml)(P=0.004).而NPC治疗前外周血白细胞EBV-DNA水平在TNM各期均为0拷贝/肌动蛋白,差异无显著意义(P>0.05).结论研究结果提示NPC病人血浆EBV-DNA水平是反映NPC肿瘤消长情况的灵敏、可靠的指标,可在分子水平对NPC的TNM分期进行补充.NPC病人血浆EBV-DNA水平与外周血白细胞EBV-DNA水平没有相关性,提示血浆EBV-DNA可能来源于肿瘤细胞的裂解释放,并反映病人体内瘤荷大小.     

HIV和HCV感染者重叠感染HGV对病毒复制的影响

目的 :了解人免疫缺陷病毒 (HIV)感染者和丙型肝炎病毒 (HCV)感染者重叠感染庚型肝炎病毒 (HGV)的情况 ,探讨重叠感染病毒在体内的相互作用机理。方法 :用定量 PCR测定 HIV和 HCV感染者血浆中病毒载量 ,同时用 RT- PCR检测这些患者 HGV的感染情况 ,并对部分 HGV阳性者进行序列测定。结果 :317例 HIV患者中检出 HGV阳性 12 3例 ,阳性率为 38.8% ;91例 HCV患者中 HGV阳性 19例 ,阳性率为 2 0 .9% ,统计学分析有显著差异。进一步研究显示 ,HIV和 HGV重叠感染中 HIV病毒载量明显低于单独 HIV感染者 [(1.8± 0 .6 )× 10copies/ ml vs(1.9± 1.1)× 10 2 copies/ ml];而 HCV和 HGV重叠感染者中 HCV的病毒载量与单独 HCV感染者比较没有显著差异 [(1.5± 0 .6 )× 10 4copies/ ml vs(5 .4± 1.8)× 10 4copies/ ml]。序例分析表明 ,与 HIV或 HCV重叠感染的 HGV来源于同一病毒株。结论 :HIV感染者有很高的 HGV重叠感染率 ,而且 HGV感染能明显抑制 HIV在体内的病毒复制。     

荧光定量巢式逆转录PCR(FQ-nRT-PCR)在检测HCV-RNA中的意义

目的:采用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测丙型肝炎患者外周血清HCV-RNA,探讨HCV-RNA的临床应用价值。方法:用FQ-nRT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测192例HCV感染患者血清,比较HCV-RNA和抗-HCV的临床意义。结果:192例丙型肝炎患者血清标本中,HCV-RNA检出率为75.53%(145/192),抗-HCV检出率为91.66%(176/192)。急性丙型肝炎患者HCV-RNA定量均值达5.21×106拷贝/ml,慢性肝炎次之,肝硬化相对偏低,为5.14×103拷贝/ml。结论:192例丙型肝炎患者抗-HCV检出率高于HCV-RNA检出率,但HCV-RNA对丙型肝炎的早期诊断具有灵敏度高、定量准、假阳性率低等优点,此外在病毒复制水平及抗病毒治疗的疗效评估方面具有重要的临床价值。     

FQ—PCR方法检测女性尖锐湿疣（CA）患者HPV的基因分型

目的探讨女性尖锐湿疣（CA）患者感染人类乳头瘤病毒（HPV）的基因类型和分布。方法采用荧光定量聚合酶链反应（FQ．PCR）方法检测256例CA患者疣体组织或分泌物中的HPV类型。结果HPV6、11型阳性率为93％（238／256）,HPV16、18型阳性率为15．2％（39／256）,HPV6、11型和HPV16、18同时阳性为10．9％（28／256）。定量检测病毒载量最高为1．0×10^8eopies／ml,最低为2．2×10^4eopies／ml。结论本地区尖锐湿疣患者感染以HPV6、11低危型为主,少数为HPV16、18高危型;荧光PCR检测技术具有灵敏度高、特异性强及检测时间短等特点,能够及时准确的为HPV患者临床治疗及预后判断提供可靠的依据。     

HIV viral load response to antiretroviral therapy according to the baseline CD4 cell count and viral load.

CONTEXT: It is unclear whether delay in initiation of antiretroviral therapy (ART) may lead to a poorer viral load response for patients with human immunodeficiency virus (HIV). OBJECTIVE: To characterize the relationship of viral load response to ART with baseline CD4 cell count and baseline viral load. DESIGN: Inception cohort of 3430 therapy-naive patients with HIV, of whom 3226 patients had at least 1 viral load count after the start of ART. SETTING: Three cohort studies of patients cared for in HIV clinics in Europe between 1996 and 2000. PATIENTS: All patients initiating ART consisting of at least 3 drugs initiated in or after 1996 and for whom CD4 cell count and viral load were available in the prior 6 months (at most). MAIN OUTCOME MEASURES: Viral load decrease to below 500 copies/mL; viral load rebound to above 500 copies/mL (2 consecutive values). RESULTS: Of 3226 patients during the median follow-up of 119 weeks, 2741 (85%) experienced viral suppression to less than 500 copies/mL by 32 weeks. Relative hazards (RHs) of achieving this were 1.08 (95% confidence interval [CI], 0.98-1.21) and 0.94 (95% CI, 0.84-1.04) for baseline CD4 cell counts between 200 and 349 x 10(6)/L and baseline CD4 cell counts lower than 200 x 10(6)/L, respectively, compared with baseline CD4 cell counts of 350 x 10(6)/L or higher, after adjustment for several factors including baseline viral load. For baseline viral load, the RHs were 0.95 (95% CI, 0.84-1.07) and 0.65 (95% CI, 0.58-0.74), for 10 000 to 99 999 and 100 000 copies/mL or greater, respectively, compared with less than 10 000 copies/mL, but the probability of viral load lower than 500 copies/mL at week 32 was similar in all 3 groups. Subsequent rebound above 500 copies/mL was no more likely with a lower baseline CD4 cell count or higher viral load. CONCLUSION: In this study, lower CD4 cell counts and higher viral loads at baseline were not associated with poorer virological outcome of ART. Those with baseline viral loads of greater than 100 000 copies/mL had a slower rate of achieving viral suppression.     

巢式PCR联合焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒耐药基因检测中的敏感性与特异性分析

目的评价巢式PCR联合焦磷酸测序法在乙型肝炎病毒(HBV)耐药基因检测中的敏感与特异性。方法选取rtM204I(ATT)突变型和rtM204(ATG)未突变型质粒,按照不同比例混合后,采用巢式PCR联合焦磷酸测序法对突变位点进行检测,并与常规PCR焦磷酸测序法进行比较,对两种方法的线性及一致性进行分析;选取不同病毒载量临床标本,采用巢式PCR焦磷酸测序法检测耐药突变位点,并与巢式PCR Sanger测序法进行比较,对两种方法的敏感性及特异性进行分析。结果常规PCR焦磷酸测序和巢式PCR焦磷酸测序结果拟合曲线R2>0.99,P<0.05,线性模型有显著性意义。分别将常规PCR焦磷酸测序和巢式PCR焦磷酸测序结果与预测值的差值进行分析,巢式PCR能够较常规PCR更好的反映实际值,在90%比例处优于常规PCR。临床75例患者标本巢式PCR Sanger测序与巢式PCR联合焦磷酸测序结果灵敏性比较提示,Sanger测序的灵敏性为92%,巢式PCR联合焦磷酸测序的灵敏性达到100%,差异有统计学意义(P<0.01)。对于不同病毒拷贝数标本的灵敏性不同,其差异主要表现在低浓度组(HBV DNA≤3log10 copies/ml),Sanger测序的灵敏性为78%,而焦磷酸测序的灵敏性可以达到100%,差异有统计学意义(P<0.01)。阴性对照,两种方法均未检出HBV病毒,两种方法的特异性均较好。结论巢式PCR联合焦磷酸测序的方法监测乙肝病毒变异同巢式PCR联合sanger测序相比,有更好的灵敏性,尤其是在低病毒拷贝数时,差异明显,这对于临床提早发现耐药突变株,指导临床及时更换用药有重要意义。     

乙肝标志物模式与病毒载量的相关性研究

目的研究慢性乙肝患者血清标志物和病毒载量之间相关性。方法血清HBV DNA测定用荧光定量分析PCR法和乙肝标志物采用化学发光酶免疫定量法,分别对222例慢性乙肝患者血清HBV DNA和乙肝标志物检测并比对分析。结果血清学检测乙肝表面抗原（HBsAg）＋乙肝病毒e抗原（HBeAg）＋乙肝病毒核心抗体（HBcAb）组与乙肝表面抗原（HBsAg）＋乙肝病毒e抗原（HBeAg）组其病毒载量显著高于其它组（病毒载量高于105拷贝/m l分别达91.9%和77.8%）。结论 HbeAg与HBV DNA定量水平具有良好的相关性,同时检测乙肝标志物和HBV DNA才能准确反映不同个体HBV感染状态及病毒复制情况