阿司匹林对酸和胆盐诱导的Barrett食管患者食管鳞状细胞NF-κB活化和CDX2表达的影响

目的探讨阿司匹林对酸和胆盐诱导的Barrett食管(Barrett’s esophagus,BE)患者食管鳞状细胞NF-κB活化和CDX2表达的影响。方法将合并BE的胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease,GERD)患者的食管鳞状细胞(NES-B细胞)和无合并BE的GERD患者的食管鳞状细胞(NES-G细胞)暴露于酸和胆盐中,分别加入和不加入阿司匹林。采用蛋白质印迹法检测细胞内p65、p-p65、p50、IκB、p-IκB的蛋白表达;染色质免疫沉淀法检测p50和p65与CDX2启动子DNA的结合活性;荧光素酶报告基因检测NF-κB/p65的转录活性;免疫荧光技术检测p65蛋白的核转位情况;qRT-PCR法检测CDX2 mRNA的表达。结果NES-B和NES-G细胞在酸和胆盐暴露后均能激活NF-κB,但与NES-G细胞相比,NES-B细胞表现出更高水平的IκB和p65磷酸化,以及更强的NF-κB转录活性。阿司匹林阻断了酸和胆盐诱导的NES-B细胞中IκB磷酸化、p65核转位、CDX2启动子激活和CDX2表达。结论阿司匹林对酸和胆盐诱导的BE患者食管鳞状细胞NF-κB活化和CDX2表达具有抑制作用。     

幽门螺杆菌阳性消化性溃疡患者胃黏膜核因子κ B、β-防御素-2表达及其与胃窦炎症的关系

目的:检测幽门螺杆菌(H pylori)阳性消化性溃疡(peptic ulcer,PU)患者胃窦黏膜组织学改变和炎症相关基因核因子κB(Nuclear-κB, NF-κB)、人β-防御素-2(human β-denfensin-2, HBD-2)蛋白表达,探讨胃窦黏膜炎症及NF- κB、HBD-2在H pylori相关性PU中的作用及其意义．方法:57例PU患者,其H pylori感染者40例, 非H pylori感染者17例,另设正常对照组8例; 观察各组患者胃窦组织学改变,免疫组化法检测胃窦黏膜NF-κBp65、HBD-2的表达．观察 NF-κBp65、HBD-2的细胞定位情况,用One- Way ANOVA方法比较H pylori感染者与非 H pylori感染者及正常组胃黏膜NF-κBp65、 HBD-2表达量,并对PU不同分期患者胃黏膜 NF-κBp65,HBD-2的表达量进行比较;非参数统计方法分析H pylori感染与PU患者胃窦炎症程度的关系、NF-κBp65、HBD-2表达与胃窦炎症程度的关系及H pylori阳性PU NF- κBp65与HBD-2表达的相关性．结果:PU患者胃窦的炎症程度与H pylori感染程度呈正相关(活动性r=0．374,P<0．01:慢性r=0．333,P<0．05)．在H pylori阳性PU患者 NF-κBp65主要表达于胃黏膜上皮细胞和固有层间质细胞胞核,HBD-2主要表达于胃黏膜表层上皮细胞胞质,二者的表达均较H pylori 阴性组显著增强(6．4±3．28 vs 3．78±2．16, P<0．01;12．96±5．03 vs 4．69±2．05,P<0．01),且均与胃窦黏膜炎症程度具有显著相关性(活动性r=0．744,0．524,P<0．01,慢性r=0．650, 0．606,P<0．01);H pylori阳性PU胃黏膜NF- κBp65表达与HBD-2表达呈正相关关系(r= 0．438,P<0．01)．愈合期和疤痕期PU患者NF- κBp65(4．28±2．11．3．65±2．27)、HBD-2(8．15 ±4．28,6．24±3．71)的表达较活动期者(7．14± 3．24,13．56±5．43)显著降低(P<0．05,P<0．01)．结论:H pylori感染导致胃黏膜NF-κBp65． HBD-2表达增加,胃黏膜炎症程度增强．NF- κB可能通过诱导HBD-2的表达,参与胃窦黏膜炎症反应,从而影响了H Hpylori阳关性PU的病理生理过程．     

NF-κB在TNF-α致人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究核转录因子-κB（nuc lear factor-κB,NF-κB）在TNF-α诱导培养的人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,并用10 ng/m l的TNF-α进行诱导,不同时间段观察NF-κB活性、NF-κB抑制物IκBα表达以及细胞凋亡的情况,EMSA测定NF-κB活性,W estern-b lot检测IκBα的表达情况;Tunel法检测细胞凋亡;并用NF-κB的抑制剂PDTC预处理细胞后来观察TNF-α诱导细胞凋亡的情况。结果TNF-α以时间依赖性诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,NF-κB的活性在处理后10 m in开始增强,2 h后恢复正常,IκBα的表达在10m in开始下降,2 h恢复正常;PDTC能抑制TNF-α诱导的凋亡。结论TNF-α在诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞时,IκBα降解,NF-κB激活,从而引起细胞的凋亡。     

七方胃痛颗粒对H.pylori感染的AGS细胞TFF1表达及ERK/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨七方胃痛颗粒对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染的人胃腺癌AGS细胞三叶因子1(trefoil factor family1,TFF1)的表达及其细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/核因子κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)信号通路的调控机制.方法:采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)法检测TFF1 mRNA的表达,Western blot法检测TFF1、磷酸化ERK及NF-κB蛋白的表达水平;同时采用U0126抑制ERK信号通路后,观察AGS细胞TFF1蛋白表达的变化.结果:10%、20%、30%浓度七方胃痛颗粒药物血清作用H.pylori感染的AGS后,TFF1mRNA表达量为271±33、305±23、327±13,显著高于实验对照组的187±30,(P<0.05);TFF1、p-ERK及NF-κB蛋白表达量分别为271±22、358±31、428±34;175±9、141±3、107±15;116.0±2.6、83±2、53.0±6.6;与实验对组的210±13比较,差异具有统计学意义(均P<0.05).加入U0126阻断ERK信号通路后,TFF1蛋白表达量为115±6,与实验对照组的210±13比较,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:七方胃痛颗粒可能通过抑制ERK/NF-κB信号通路参与调控H.pylori诱导的AGS细胞TFF1表达,促进上皮修复,是其防治H.pylori诱发胃癌可能的机制之一.     

早期胃癌患者H. pylori感染与活检组织PTEN、SOX2和NF-κB p65蛋白的关系

目的探讨早期胃癌患者幽门螺杆菌(H. pylori)感染与活检组织人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、性别决定相关基因簇2(SOX2)和核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达的关系。方法选取2015年1月至2018年2月湖南省脑科医院收治的确诊为早期胃癌并接受手术的患者128例,其中H. pylori阴性者43例(阴性组),H. pylori阳性者85例(阳性组)。取存档的胃癌组织及癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化法检测H. pylori阴性及阳性胃癌组织与癌旁组织中PTEN、SOX2和NF-κB p65蛋白的阳性表达情况,采用Logistic回归分析法分析其与H. pylori感染的关系。结果 H. pylori阳性胃癌组织及癌旁组织中PTEN及SOX2阳性率明显低于H. pylori阴性组织(P0.05),H. pylori阳性胃癌组织及癌旁组织中NF-κB p65阳性率明显高于H. pylori阴性组织(P0.05);胃癌组织PTEN、SOX2阳性率明显低于癌旁组织(P0.05),胃癌组织NF-κB p65阳性率明显高于癌旁组织(P0.05);经Logistic回归分析,胃癌组织PTEN、SOX2蛋白阳性表达降低H. pylori感染风险(OR=0.483、0.562,P0.05),NF-κB p65蛋白阳性表达增加H. pylori感染风险(OR=3.871,P0.05)。结论 H. pylori感染可导致早期胃癌组织中PTEN、SOX2蛋白表达降低,NF-κB p65蛋白表达升高,推测H. pylori可能通过影响PTEN、SOX2及NF-κB p65蛋白的表达而参与胃癌的发生、发展过程。     

乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白与X蛋白对肾小管上皮细胞核转录因子的影响

目的:目的研究167例乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白(C-terminally truncated middle size surface proteins,MHBst167)和X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肾小管上皮细胞核转录因子κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)活化的影响及其相关机制探讨。方法:肾小管上皮细胞系(HK-2)转染mhbst167或(和)hbx后,蛋白印迹法检测NF-κB核易位及其抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor-kappa B,IκBα)磷酸化水平的变化,凝胶电泳迁移率和双萤光素酶报告基因分析进一步检测NF-κB活性;通过对蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活性和细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)磷酸化水平检测探讨NF-κB活化的机制。结果:HK-2细胞转染mhbst167或(和)hbx基因后,NF-κB核易位、磷酸化IκBα、κB结合活性及κB基因转录均增加(P0.05);且PKC激酶活性和磷酸化ERK水平也增加(P0.05),而Raf蛋白均无表达。结论:在肾小管上皮细胞中,MHBst167/HBx可能通过PKC/ERK通路(非Raf依赖性)活化NF-κB。     

H pylori相关性胃溃疡、胃癌组织中VEGF和NF-κB的表达及意义

目的：探讨H pylori相关性胃溃疡、胃癌组织中VEGF,NF-κB的表达及三者的相互关系,进一步了解H pylori致胃溃疡、胃癌的发病机制．方法：选择胃镜室及外科手术切除的36例胃溃疡和52例胃癌病理标本,应用免疫组化SABC法,检测H pylori,VEGF及NF-κB的表达．结果：H pylori( )组胃溃疡发病率与H pylori(-)组比较差别有显著性(78％vs 22％,P＜0．05),36例胃溃疡组织中H pyloH( )组VEGF,NF-κB表达明显高于H pylori(-)组(53．6％vs 12．5％,P＜0．05；39．3％vs 0,P＜0．05)；52例胃癌组织中H pylori( )组VEGF,NF-κB表达明显高于H Pylori(-)组(84％vs 40．7％,P＜0．05；80％vs 48．1％,P＜0．05)；NF-κB与VEGF在胃渍疡、胃癌组织中的表达具有相关性(r=0．997,P＜0．05)．结论：胃溃疡、胃癌组织中NF-κB,VEGF的表达与H pyiori感染相关,其中H pylori感染为初始因素,而H pylori对NF-κB的激活,则可能是胃溃疡、胃癌发病的关键步骤,三者的协同作用导致胃溃疡、胃癌的发病．     

通过NF-κB调控蛋白激酶SPAK通路促进NR8383细胞炎症介质释放及氧化应激发生

目的分析SPAK在高渗透压应激所致大鼠肺泡世噬细胞系(NR8383)细胞炎症介质释放及氧化应激发生中的作用。 方法在细胞培养液中加入核因子κB(nuclear factor κappa-B, NF-κB)的抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲盐酸(1-Pyrrolidinecarbodithioic acid, PDTC)阻断其磷酸化,检测其对高渗刺激引起的SPAK表达升高的抑制作用。通过siRNA干扰技术下调SPAK的表达,检测NR8383细胞炎症介质TNF-α和IL-1的分泌以及MPO活性和LDH释放,阐明SPAK在细胞应对高渗透压刺激时的调控作用。 结果高渗透压刺激可以导致NR8383细胞中的NF-κB的磷酸化并上调SPAK蛋白表达,而通过对NR8383细胞进行PDTC预处理,NF-κB的磷酸化及SPAK蛋白表达水平可以显著受到抑制。而SPAK表达下调可以减轻高渗刺激所致的炎症因子释放增加,降低MPO活性以及H₂O₂浓度。 结论磷酸化NF-κB可以调控SPAK转录及翻译,而SPAK可以通过促进炎性介质释放、诱导氧化应激参与到高渗透压刺激的调控中。     

核转录因子-κB抑制因子对中性粒细胞凋亡的影响

目的 探讨脂多糖(LPS)刺激下核转录因子-κB(NF-κB)抑制因子(IκBα)对中性粒细胞凋亡的影响.方法 离体培养人中性粒细胞,分为生理盐水对照组(A组)、来普霉素B(LMB)干预组(B组)、LPS刺激组(C组)和LMB +LPS组(D组).各组分别在刺激后120 min ,用 Western印迹检测细胞核、胞浆中IκBα含量,用NF-κBp65试剂盒检测细胞核NF-κB活性,流式细胞仪检测中性粒细胞凋亡百分比.结果 C组胞浆及胞核中IκBα含量较A组中明显减少,而NF-κB活性显著增加,中性粒细胞凋亡比例减少;D组胞核中IκBα含量较C组中明显增多, NF-κB活性明显抑制,中性粒细胞凋亡比例增加.结论 IκBα的核内聚集可抑制NF-κB活性,并促进炎症状态下中性粒细胞凋亡.     

三氧化二砷对HL-60细胞活性及NF-κB表达的影响及意义

收集1．0、2．5、5．0mmol／L三氧化二砷（ATO）体外作用48h后的急性髓系白血病细胞株（HL-60细胞），MTT法分析细胞活性，RT-PCR法检测NF-κB基因表达水平。结果HL-60细胞均有明显凋亡；1．0μmol／LATONF-κB表达上调，2．5μmol／LATO作用后NF-κB基因表达明显降低，5．0μmol／LATO作用后细胞数减少，未作NF-κB检测。认为ATO可促进HL-60细胞凋亡；NF-κB活性高表达对HL-60细胞凋亡起一定作用；临床应用ATO时应注意用量，保证有效药物浓度。