miR-let-7b-5p靶向调控LIMD2对胃癌细胞间质-上皮转化的影响

目的：探究微小RNA(mi R)-let-7b-5p靶向调控含LIM域2蛋白（LIMD2）对胃癌（GC）细胞间质-上皮转化（MET）的影响。方法：采用q RT-PCR检测GES-1、SCG-7901、MGC-803、BGC-823细胞中mi R-let-7b-5p相对表达水平；构建绿色荧光蛋白（GFP）和mi R-let-7b-5p稳定过表达细胞株，q RT-PCR法检测mi R-let-7b-5p过表达效率；生物信息学和双荧光素酶实验预测并验证mi R-let-7b-5p与LIMD2靶向关系；构建pcDNA5-LIMD2过表达载体，将细胞分为NC组、mi R-let-7b-5p组、mi R-let-7b-5p-pcDNA5组和mi R-let-7b-5p-LIMD2组，Western Blot检测各组细胞中LIMD2、Vimentin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达；Transwell法检测mi R-let-7b-5p对MGC-803细胞侵袭能力的影响。结果 ：与GES-1相比，SCG-7901、MGC-803、BGC-823细胞中mi R-let-7b-5p相对...     

miR-526b在胰腺癌中的表达及作用

目的:探讨mi R-526b在胰腺癌中的表达与作用。方法:用q RT-PCR法检测mi R-526b在52例胰腺癌和癌旁组织,以及在4种胰腺癌细胞系(Bx PC-3、SW1990、PANC-1和As PC-1)和正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)中的表达。将胰腺癌细胞分别转染mi R-526b模拟物、mi R-526b抑制物及阴性对照序列后,采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术分别测定细胞增殖、侵袭与凋亡情况。生物软件和双荧光素酶报告基因法分析mi R-526b潜在靶基因,并用Western blot和q RT-PCR法及相关性分析验证。结果:mi R-526b在胰腺癌组织中表达量明显低于癌旁组织,在4种胰腺癌细胞系中的表达量均明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(均P0.05)。胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,增殖能力明显降低、细胞凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱,而转染mi R-526b抑制物后则呈反向变化(均P0.05)。分析结果显示XRCC5是mi R-526b靶基因;胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,XRCC5的m RNA和蛋白表达均明显下调,mi R-526b抑制物后则均明显上调(均P0.05);胰腺癌组织中mi R-526b和XRCC5 m RNA表达水平呈显著负相关(r=-0.456,P0.05)。结论:mi R-526b在胰腺癌中下调表达,mi R-526b低表达可促进胰腺癌细胞增殖、侵袭并抑制凋亡,机制可能与上调其靶基因XRCC5的表达有关。     

长链非编码RNA RUSC1-AS1对肝细胞癌恶性生物学行的影响及其与微小RNA-326的关系

背景与目的:有研究表明长链非编码RNARUSC1-AS1(lnc RNARUSC1-AS1)与肿瘤的恶性生物学行为密切相关,但其对肝细胞癌(肝癌)的影响尚不清楚。笔者前期研究显示,lnc RNARUSC1-AS1与微小RNA-326(mi R-326)存在结合位点,因此本研究探讨lnc RNARUSC1-AS1在肝癌中的表达,以及是否通过靶向mi R-326调控肝癌细胞生物学行为。方法:用q RT-PCR检测41例肝癌组织和对应癌旁组织中lnc RNARUSC1-AS1与mi R-326的表达。以lnc RNARUSC1-AS1表达抑制质粒/阴性对照质粒、mi R-326模拟物/阴性对照序列、mi R-326抑制物/阴性对照序列为工具,采用MTT法、Transwell法、流式细胞术、Westernblot法观察接受不同转染处理的MHCC97-H细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力、凋亡以及相关蛋白表达的变化。采用荧光素酶报告实验分析lnc RNARUSC1-AS1和mi R-326的靶向关系,并用q RT-PCR验证。结果:与癌旁组织比较,肝癌组织中lnc RNARUSC1-AS1表达水平明显升高,mi R-326表达水平明显降低(均P0.05)。转染lnc RNARUSC1-AS1表达抑制质粒或mi R-326模拟物后,肝癌MHCC97-H细胞的增殖能力以及迁移与侵袭能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,cyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平明显降低,P21、Bax蛋白表达水平明显升高(均P0.05)。MHCC97-H细胞转染lnc RNARUSC1-AS1表达抑制质粒的同时mi R-326抑制物,前者对MHCC97-H细胞以上作用被取消(均P0.05)。双荧光素酶报告实验及q RT-PCR验证结果显示,mi R-326为lnc RNARUSC1-AS1的靶分子。结论:lnc RNARUSC1-AS1在肝癌中表达上调,其可通过靶向调控mi R-326的表达促进肝癌细胞的恶性生物学行。     

重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK对黑色素瘤细胞A-375增殖和凋亡的影响研究

目的构建重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK,探讨其对黑色素瘤A-375细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同病毒感染复数(MOI)感染黑色素瘤细胞A-375及人正常皮肤细胞HFF;以MTT法检测细胞增殖情况;并以流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时设空白对照组。结果重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK转染后在黑色素瘤细胞A-375中呈特异表达,在人正常皮肤细胞HFF中无表达。黑色素瘤细胞A-375的增殖随MOI增加而逐渐受到抑制,HFF细胞的增殖无明显变化。慢病毒治疗组A-375细胞凋亡明显优于对照组,而对HFF细胞无明显作用。结论重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK可靶向促进黑色素瘤细胞A-375的细胞凋亡,并抑制其增殖。     

miR-200c通过AKT2对骨肉瘤细胞增殖的影响

[目的]探讨过表达mi R-200c通过对AKT2的相关调控对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,为骨肉瘤的靶向治疗提供新的依据。[方法](1)检测mi R-200c在正常成骨细胞和4种骨肉瘤细胞株中的表达差异;(2)将mi R-200c转染至骨肉瘤细胞株MG-63中,构建稳定过表达mi R-200c骨肉瘤细胞株;(3)预测mi R-200c与AKT2基因的相关结合位点,构建相应的荧光素酶基因表达载体,连同过表达mi R-200c质粒共转染至骨肉瘤细胞株MG-63中;(4)检测两组骨肉瘤细胞株MG-63荧光素酶活性;(5)检测两组骨肉瘤细胞株MG-63中AKT2表达水平;(6)观察两组骨肉瘤细胞株MG-63的增殖能力。[结果](1)与正常成骨细胞(NHOst)相比,mi R-200c在4种骨肉瘤细胞株(HOS、U2OS、Saos-2、MG-63)中表达量明显降低(P0.05);(2)与mi R-NC组相比,过表达mi R-200c组骨肉瘤细胞株MG-63中AKT2 3′-UTR序列结构野生型(WT)的荧光素酶活性明显降低(P0.05),而突变型(MUT)的荧光素酶活性无明显差异(P0.05);(3)与mi R-NC组相比,过表达mi R-200c的骨肉瘤细胞株MG-63中AKT2表达明显降低(P0.05);(4)与mi R-NC组相比,过表达mi R-200c骨肉瘤细胞株MG-63增殖能力明显下降(P0.05)。[结论]mi R-200c在骨肉瘤细胞中低表达,而过表达mi R-200c通过靶向调控AKT2表达抑制骨肉瘤细胞的增殖。因此mi R-200c可能对未来骨肉瘤的预防及治疗提供新的策略。     

MiR-197靶向JAK2调节人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖侵袭能力的研究

目的:探讨miR-197通过调控JAK2对人皮肤鳞状细胞癌细胞A431增殖和侵袭的影响。方法:收集2018年7月-2019年5月于笔者医院经手术切除且被证实为皮肤鳞状细胞癌的组织标本以及对应的癌旁组织标本各40例,RT-qPCR检测miR-197在皮肤鳞状细胞癌组织、癌旁组织、人正常皮肤细胞系HaCaT、人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431、A431-miR-197-siRNA和A431-miR-197-siRNA-NC中的表达情况;Western-Blot检测JAK2在各细胞株中的表达;生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-197和JAK2的靶向关系;MTS法检测miR-197对A431增殖能力的影响;Transwell检测miR-197对皮肤鳞状细胞癌细胞侵袭能力的影响;IFA检测miR-197对上皮间质转化(EMT)相关分子N-cadherin表达的影响。结果:miR-197在皮肤鳞状细胞癌组织和皮肤鳞状细胞癌细胞株A431中的表达水平分别高于癌旁组织和人正常皮肤细胞系HaCaT,差异均具有统计学意义(P<0.05);与A431和A431-miR-197-siRNA-NC相比,稳定下调细胞系A431-miR-197-siRNA中miR-197、JAK2的表达水平均显著下降(P<0.05)。经Target Scan数据库分析发miR-197和JAK2有互补结合位点。下调miR-197能显著降低皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭能力,同时抑制N-cadherin的表达水平。结论:下调miR-197能够靶向抑制皮肤鳞状细胞癌中JAK2的表达和降低EMT相关分子N-cadherin的表达,进而抑制皮肤鳞状细胞癌细胞的EMT进程以及增殖侵袭能力。     

circ_0001658靶向miR-1231对肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨circ_0001658是否靶向miR-1231影响肝癌Huh-7细胞的增殖和凋亡。方法:肝癌组织中circ_0001658和miR-1231表达采用qRT-PCR进行测定。利用CCK-8法检测si-circ_0001658组、miR-1231组、si-circ_0001658+anti-miR-1231组、si-NC组、miR-NC组、si-circ_0001658+anti-miR-NC组细胞活性,克隆形成、流式细胞术检测细胞克隆形成、凋亡,Western blotting检测cleaved-caspase 3和cleaved-caspase9表达。双荧光素酶报告实验检测circ_0001658和miR-1231的靶向结合。结果:与癌旁组织相比,肝癌组织中circ_0001658表达量升高,miR-1231表达量降低。干扰circ_0001658或过表达miR-1231降低Huh-7细胞活性、克隆形成数,增加凋亡率、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达量。circ_0001658靶向调控miR-1231的表达,下调miR-1231表达逆转了干扰circ_0001658表达对肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的作用。结论:干扰circ_0001658表达通过靶向负调控肝癌Huh-7细胞的miR-1231,抑制细胞增殖和诱导凋亡。     

下调MicroRNA-21对胃癌细胞生物学行为及PTEN表达的影响

目的:探讨抑制MicroRNA 21(miR-21)的表达对胃癌细胞的生物学行为及PTEN表达的影响,并分析miR-21参与肿瘤发生、发展的可能机制。方法:应用细胞瞬转的方法将miR-21 inhibitor转染课题组前期试验证实的miR-21高表达胃癌细胞株,应用细胞增殖试验(CCK8方法)、流式细胞技术(Annexin-Ⅴ标记)、Transwell试验检测抑制胃癌细胞株中miR-21表达后,对其细胞增殖、凋亡、周期、迁移的影响;并用Western印迹技术和双荧光素酶报告载体技术检测下调miR-21后,胃癌细胞株PTEN表达的变化。结果:体外增殖试验显示,下调miR-21后对胃癌细胞株的增殖抑制作用明显(P<0.05);体外凋亡试验显示,下调miR-21能增加胃癌细胞株的凋亡(P<0.05);Western印迹试验显示,抑制miR-21表达后胃癌细胞株PTEN蛋白表达明显增加,荧光素酶相对活性明显增加(P<0.05)。结论:下调miR-21的表达对胃癌细胞株的增殖有明显的抑制作用,且促进其凋亡,能降低其体外迁移能力;下调miR-21后,PTEN活性明显增加;PTEN可能是miR-21参与胃癌发生、发展的靶标之一。     

山药多糖通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌细胞凋亡的机制研究

目的探究山药多糖(CYPS)通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌(HCC)细胞凋亡的分子机制。方法qPCR检测miR-98-5p在不同HCC细胞系中的表达情况,使用不同浓度的CYPS处理Huh-7细胞,CCK-8检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测TGFβR1和细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2、Bax的表达,双荧光素酶报告基因系统验证miR-98-5p与TGFβR1的靶向关系。结果与人正常肝细胞HL-7702相比,miR-98-5p在HCC细胞系中表达升高(均P<0.05),且在Huh-7细胞中的表达高于其他HCC细胞(P<0.05);CYPS处理可明显抑制Huh-7细胞的增殖活力并诱导细胞凋亡(均P<0.05),且10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力的抑制作用比其他浓度明显。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-98-5p靶向调控TGFβ1。与10-3 kg/L CYPS组相比,miR-98-5p mimics可下调10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力(P<0.05)的抑制作用和对细胞凋亡(P<0.01)的促进作用,CYPS+miR-98-5p mimics+pcDNA-TGFβR1组中细胞增殖活力与CYPS+miR-98-5p mimics组相比明显降低(P<0.05),细胞凋亡水平明显升高(P<0.01)。结论CYPS可下调miR-98-5p,促进TGFβR1的表达,抑制Huh-7细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

CircTP53调节miR-873-5p/CCND1轴对甲状腺癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响

目的:探讨环状TP53(CircTP53)调节miR-873-5p/细胞周期蛋白1(CCND1)轴对甲状腺癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响。方法:体外培养人甲状腺癌细胞TPC-1,随机分为对照组、CircTP53 siRNA、CircTP53 siRNA阴性对照组、共转染组。检测各组TPC-1细胞CCND1上皮间质转化标志蛋白(Vimentin、E-cadherin)表达。结果:与人甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1相比,人甲状腺癌组织源细胞和人甲状腺癌细胞株TPC-1、C643、SW579中CircTP53、CCND1 mRNA表达升高(P<0.05),miR-873-5p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,CircTP53 siRNA组凋亡蛋白Bax/Bcl-2比值、细胞miR-873-5p及E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05)。结论:敲低CircTP53可通过促进miR-873-5p分泌下调CCND1表达,抑制甲状腺癌细胞集落形成,降低细胞活力及迁移侵袭活性,并促细胞凋亡。     

曲安奈德、干扰素α-2b和维拉帕米治疗增殖瘢痕的作用机制比较

目的 比较曲安奈德、干扰素α-2b和维拉帕米局部注射对瘢痕疙瘩和增生性瘢痕增殖、凋亡和TGF-β1表达的影响. 方法 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩各6例,局部注射曲安奈德(40 mg/ml)、干扰素α-2b(150万U/ml)和维拉帕米(2.5 mg/ml)后7 d,切取标本,采用免疫组织化学、末端脱氧核苷酸介导的生物素化的脱氧尿嘧啶DNA切口末端标记方法,检测细胞增殖核抗原和TGF-β1的表达及细胞发生的凋亡情况,并以未注射药物的瘢痕疙瘩和增生性瘢痕以及健康皮肤为对照. 结果 ①曲安奈德可抑制瘢痕疙瘩和增生性瘢痕细胞增殖和诱导细胞凋亡,同时抑制细胞TGF-β1表达从而抑制瘢痕的增殖增生;②干扰素α-2b可通过抑制瘢痕疙瘩、增生性瘢痕细胞的增殖和TGF-β1表达而抑制瘢痕的增殖增生,但其不能诱导细胞凋亡;③维拉帕米可通过抑制瘢痕疙瘩、增生性瘢痕细胞的增殖和诱导细胞凋亡而抑制瘢痕的增殖,同时抑制细胞TGF-β1表达,其诱导细胞凋亡的作用妹强于曲安奈德,但抑制TGF-β1表达作用弱于曲安奈德和干扰素α-2b. 结论 曲安奈德、干扰素α-2b和维拉帕米局部注射后,对瘢痕疙瘩和增生性瘢痕在临床上虽均有效,但作用机制不尽相同.     

微小RNA-130b在嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞损伤中的作用及机制

目的探讨微小RNA-130b(miR-130b)在嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)诱导的足细胞损伤中的作用及机制。方法小鼠肾脏足细胞系MPC5予以PAN 25、50、100μg/mL干预,实时定量PCR检测MPC5细胞系内miR-130b及其宿主基因2610318N02Rik(RIK)表达;转染miR-130b抑制剂(miR-130b inhibitor)或对照(NC inhibitor)后予以PAN 100μg/mL刺激,24 h后采用Western blot检测足细胞裂孔膜蛋白Synaptopodin和Nephrin蛋白表达变化;采用鬼笔环肽染色检测足细胞骨架改变;采用流式细胞技术检测细胞凋亡变化;采用Targetscan 7.2预测miR-130b潜在靶基因,Western blot检测miR-130b模拟物(mimic)对于潜在靶基因PGC1α蛋白表达的影响;采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-130b mimic对于荧光活性的影响。结果 PAN可以抑制足细胞内的miR-130b及宿主基因RIK表达;与转染NC inhibitor组比较,miR-130b inhibitor提高足细胞裂孔膜蛋白synaptopodin和nephrin表达;鬼笔环肽染色显示抑制miR-130b可以部分缓解PAN诱导的足细胞骨架紊乱及重组;流式细胞技术检测结果示干扰足细胞miR-130b表达可以减少PAN诱导的细胞凋亡;Targetcan 7.2分析显示PGC1α是miR-130b的潜在靶基因,Western blot结果显示,转染miR-130b mimic可以降低足细胞内PGC1α表达;双荧光素酶报告基因系统结果示,与NC mimic及突变的PGC1α3'-UTR共转染组比较,miR-130b mimic与野生型PGC1α3'-UTR共转染组荧光素酶活性降低。结论 miR-130b通过靶向抑制PGC1α表达参与PAN诱导的足细胞损伤。     

circPLOD2调节miR-217/ANLN轴对结肠癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的：探讨circ PLOD2对结肠癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响以及对mi R-217/ANLN轴的调节机制。方法：将HT-29细胞分为NC组、si-NC组、si-circ PLOD2组、si-circ PLOD2+anti-mi R-NC组、si-circ PLOD2+anti-mi R-217组。q RT-PCR检测细胞中circ PLOD2、mi R-217、ANLN m RNA的表达；CCK-8法检测细胞增殖活性；流式细胞仪检测细胞凋亡；Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及PD-L1的表达；ELISA检测免疫逃逸相关因子TNF-α、IL-2、IFN-γ的水平；双荧光素酶报告基因实验验证circ PLOD2、mi R-217、ANLN三者的靶向关系。结果：与si-NC组相比，si-circ PLOD2组HT-29细胞中circ PLOD2、ANLN水平、细胞增殖活性、Bcl-2、PD-L1表达降低（P<0.05）,mi R-217水平、细胞凋亡率、Bax表达以及TNF-α、IL-2、IFN-γ水平升高（P<0.05），且双荧光素酶基因报告实...     

miR-7-5p抑制胰腺癌细胞放疗后加速再增殖的体外实验研究

目的 研究放疗后濒死胰腺癌细胞（PANC-1）释放的微小RNA-7-5p（miR-7-5p）对存活PANC-1加速再增殖效应的相关机制。方法 通过慢病毒感染,建立荧光素酶标记的PANC-1-LUC胰腺癌细胞放疗后加速再增殖模型。通过RT-qPCR检测miRNA-7-5p的表达水平,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,双荧光素酶法验证miR-7-5p靶基因,Western blotting检测γH2A.X与DDIT4 蛋白的表达情况。结果 miR-7-5p在受辐照PANC-1（10 Gy）濒死细胞上清中表达下调,受辐照PANC-1细胞与存活PANC-1-LUC细胞共培养,可促进放疗后存活PANC-1-LUC细胞加速再增殖及其DNA损伤修复,而上调miR-7-5p可抑制放疗后胰腺癌细胞PANC-1-LUC再增殖。进一步研究表明,miR-7-5p在胰腺癌细胞中通过靶向下调DDIT4通路促进凋亡信号。结论 受辐照胰腺癌细胞可通过下调miR-7-5p促进DDIT4表达,从而抑制细胞凋亡及调控细胞周期再分布来加速再增殖,表明提高miR-7-5p的水平能够提高胰腺癌细胞的放疗敏感性,这将为改善胰腺癌放疗抵抗提供了一种新的思路和方法。     

miR-135通过打靶PRKD3对黑色素瘤细胞增殖和迁移的作用

目的探讨miR-135通过打靶PRKD3对黑色素瘤细胞增殖和迁移的作用。方法通过MTT实验检测miR-135对黑色素瘤细胞增殖的作用,Transwell实验检测miR-135对黑色素瘤细胞迁移能力的作用。采用miRDB软件对miR-135的靶向蛋白进行预测分析,通过荧光素酶报告基因实验验证黑色素瘤细胞中miR-135对PRKD3的靶向作用。通过Western Blot检测miR-135对黑色素瘤细胞中PRKD3、CDK4/6和MMP2表达水平的影响。结果 miR-135能够抑制黑色素瘤细胞的增殖,当miR-135过表达后,黑色素瘤细胞的迁移能力受到抑制。miRDB软件预测分析发现,miR-135可以与PRKD3靶向作用;荧光素酶的基因实验证实,miR-135能够直接作用于PRKD3。Western Blot实验结果显示,miR-135过表达后黑色素瘤细胞中PRKD3、CDK4/6和MMP2的表达受到抑制。结论 miR-135能够通过打靶PRKD3来抑制黑色素瘤细胞的增殖和迁移能力。     

长链非编码RNA MALAT-1通过EZH2-β-catenin信号通路调控肾癌细胞的增殖、凋亡及侵袭

目的探究长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(LncRNA MALAT-1)在肾癌组织及肾细胞癌(RCC)细胞株中的表达情况及其在调控RCC细胞增殖、凋亡及侵袭过程中的作用机制。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测正常和RCC组织以及HK-2、786-O、ACHN及Caki-1细胞中MALAT-1的表达情况;将786-O细胞随机分为3组,分别转染MALAT-1-siRNA沉默载体(si-MALAT-1组)及MALAT-1-siRNA阴性表达载体(si-NC组),空白对照组加入PBS(Blank组)。采用CCK-8法、流式细胞术法、Transwell法检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力;利用Western blot法检测Zeste基因同源物增强子2(EZH2)及β-catenin的蛋白表达水平。结果与正常组织及细胞株HK-2相比,肾癌组织及细胞株786-O、ACHN及Caki-1中MALAT-1的表达水平明显增加(P<0.05);与Blank组和si-NC组相比,si-MALAT-1组RCC细胞活性和侵袭能力明显降低、细胞凋亡率明显增加、EZH2及β-catenin的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论LncRNA MALAT-1在肾癌组织及RCC细胞中表达上调;抑制MALAT-1的表达能够抑制RCC细胞的增殖和侵袭,促进凋亡,其机制可能与下调EZH2-β-catenin信号通路的表达有关。     

microRNA-10b表达变化对人胰腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨microRNA-10b(miR-10b)的表达变化对人胰腺癌细胞ASPC-1生物学行为的影响。方法:胰腺癌细胞ASPC-1细胞株分别以脂质体法转染正义、反义miR-10b真核表达载体和空载体,用荧光显微镜观察转染效率。以未转染的ASPC-1细胞为空白对照,检测各转染组miR-10b和RhoC蛋白表达,并检测各组细胞生长、凋亡及侵袭能力。结果:各组转染48 h后,转染效率达50%~70%;与空白对照组比较,正义miR-10b转染组细胞miR-10b表达和RhoC蛋白表达量明显增加,凋亡率明显降低,生长活性和侵袭能力明显增强(均P<0.05);而反义miR-10b转染组细胞以上检测结果与正义miR-10b转染组细胞呈相反改变(均P<0.05);空载体转染组所有指标与空白对照组间无明显差异(均P>0.05)。结论:上调miR-10b的表达,能促进胰腺癌细胞ASPC-1的生长、侵袭并抑制凋亡,该作用可能与其调控RhoC表达有关。     

脊索瘤中microRNA的差异性表达及其RNA编辑

目的 :检测脊索瘤组织中micro RNA(mi RNA)的差异性表达情况,探讨其RNA编辑。方法 :使用RTq PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction)技术检测骶骨脊索瘤组织11种候选mi RNA的表达水平,将其与髓核组织中的表达水平进行比较,对表达异常的mi RNA前体(pri-mi RNAs)的DNA和c DNA序列进行对比,检测是否存在RNA编辑。使用蛋白印迹法(Western blot)检测脊索瘤组织中RNA编辑的关键酶RNA腺苷脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADARs)的表达。构建ADAR的表达载体,同时构建ERBB2和HOXA1的3′-非翻译区报告载体并转染mi RNA模拟物和抑制物,将其和ADAR的表达载体共转染至人胚肾细胞293T(HEK293T细胞),用q RT-PCR检测mi RNA的表达水平,并通过荧光素酶报告基因活性分析法对已测得异常表达的mi RNA的靶基因ERBB2和HOXA1进行活性分析,检测ADAR与测得异常表达的mi RNA的靶基因的关系。结果:与髓核组织相比,脊索瘤组织中mi R-10a和mi R-125a的相对表达程度明显下调(P<0.05)。脊索瘤组织中mi R-10a和mi R-125a的前体c DNA序列中出现了腺苷酸向鸟苷酸(A-G)突变,而在髓核组织中mi R-10a和mi R-125a前体的c DNA序列中无此改变,mi R-10a和mi R-125a在成熟过程中出现了A-I RNA编辑。4组脊索瘤组织中有3组存在ADAR1过度表达,2组存在ADAR2过度表达。转染了mi RNA抑制物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现上调,而mi R-10a和mi R-125a的表达出现下调,mi R-10a的靶基因ERBB2和mi R-125a的靶基因HOXA1的荧光素酶活性显著增高;相反,转染了mi RNA模拟物的HEK293T细胞中ADAR1表达出现下调,而mi R-10a和mi R-125a的表达出现上调,ERBB2和HOXA1的荧光素酶活性显著降低。结论:ADAR1的过度表达可能通过介导A-I RNA编辑影响mi R-10a和mi R-125a的成熟和表达,参与脊索瘤发生中的细胞异常增殖调控。     

重楼皂苷Ⅰ通过调控LncRNA CEBPA-AS1/miR-195-5p通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及促进细胞凋亡的初步研究

目的:探讨重楼皂苷Ⅰ (PPI)是否通过调控长链非编码RNA CEBPA-AS1 (LncRNA CEBPA-AS1)/微小RNA-19 5-5p(miR-195-5p)通路影响瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡。方法:原代培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,使用不同浓度的PPI处理细胞,s i-CEBPA-AS1、pcDNA-CEBPA-AS1分别转染至细胞;采用MTT检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测LncRNA CEBPA-AS1、miR-195-5p的表达量;双荧光素酶报告实验检测LncRNA CEBPA-AS1与miR-195-5p的靶向关系。结果:与Control组比较,PPⅠ可明显降低细胞存活率、S期细胞比例、Bc1-2蛋白水平、LncRNA CEBPA-AS1的表达水平,提高G_0/G_1期细胞比例、凋亡率、miR-195-5p的表达水平,差异均有统计学意义(p0.05)。与si-NC组比较,si-CEBPA-AS1组细胞存活率、S期细胞比例降低,G_0/G_1期细胞比例、凋亡率升高,差异均有统计学意义(p0.05)。双荧光素酶报告实验证实LncRNA CEBPA-AS1可靶向调控miR-195-5p;转染pcDNA-CEBPA-AS1可明显逆转PPⅠ对细胞增殖、细胞周期及凋亡的作用。结论:重楼皂苷Ⅰ可能通过下调LncRNA CEBPA-AS1的表达及上调miR-195-5p的表达从而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及促进细胞凋亡。