海南省部分黎族人群TTV感染及研究

目的 研究海南黎族人群TTV感染情况。方法 采用巢式PCR检测血清中TTV DNA,并对2株TTV的部分基因序列进行测定。结果 海南省黎族人群TTVDNA阳性率为8.5%,其基因序列与国内外报导的主要序列核苷酸同源性为98%。讨论 海南黎族人群存在TTV感染。     

肝炎患者TTV的检测及意义

目的：了解肝炎患者输血传播病毒（TTV）感染情况，探讨其可能的致病作用。方法：采用套式PCR方法检测25例肝炎患者TTV DNA，对其中3例进行测序分析。结果：25例各型肝炎中，12例TTV DNA阳性，而18例非甲－庚型肝炎中8例阳性，血清ALT水平均有不同程度升高，序列分析与日本株有很高同源性。结论：证实西安地区也存在TTV感染，TT病毒可能有一定肝损伤作用，TT病毒还可与HBV、HCV重叠感染，但似不加重病情。     

原位PCR在检测肝组织TTV中的应用

目的：探索用原位PCR检测肝组织中的输血传播病毒（TTV）。方法：用原位PCR与原位杂交检测32例肝组织中的TTV，并比较两种方法的检测结果：32位标本中，经原位PCR检测，TTV阳性23例，经原位杂交检测，TTV阳性17例。原位PCR检测的阳性率（71．9％）明显高于原位杂交（53．1％），P＜0．05。原位PCR在肝细胞核，内皮细胞核与肝细胞浆内检测到TTV，而原位杂交只在肝细胞核与肝细胞浆内检测到TTV，结论：本实验结果表明原位PCR是一种新的检测TTV的有效方法。     

保定市在校大学生TTV重叠感染状况调查

目的了解保定市高校大学生中不同人群TT病毒的感染状况。方法采用半巢式聚合酶链反应（semi—nestedPCR）对健康人群、肝炎患者及HCV感染者等5组人群血清进行TTVDNA检测。结果保定市高校大学生中不同人群血清TTVDNA总阳性率17．6％,健康人群血清TTVDNA阳性率9．3％。其他人群血清TTvDNA阳性率由高到低依次为丙型肝炎组31．6％、乙型肝炎组26．9％、急性甲型肝炎组16．7％、HCV感染组9．3％。急性甲型肝炎组、HCV感染组血清TTvDNAI~H性率与健康人群比较差异无统计学意义（P〉0．05）;丙型肝炎组、乙型肝炎组血清rrllVDNA阳性率与健康人群比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论大学生中广泛存在1trV感染组,丙型肝炎、乙型肝炎患者的感染率较高。     

湖南衡阳地区TTV的检测及序列分析

目的　了解湖南衡阳地区肝炎患者TTV的感染情况及TTVORF1部分基因序列。方法　在TTVORF1设计引物 ,采用巢式PCR(RT -PCR)法检测湖南衡阳地区 6 2份肝炎患者血清中TTVDNA ,对PCR产物进行分子克隆和测序分析。结果　 6 2份标本中 17例TTVDNA阳性 (2 9.3% ) ,对其中 2例ORF1部分基因克隆、测序 ,并与日本Okamoto等报道的一株 (N2 2 )相比较。结论　本研究结果显示湖南衡阳地区肝炎患者存在TTV感染 ,与日本发现的TTVDNA序列同源性高于 97%。     

云南某自然村新型DNA病毒—TTV感染调查

目的 了解我国自然人群中新型DNA病毒-输血传播病毒（TTV）的感染情况。方法 采用聚合酶链反应法（nPCR)检测云南某自然村的179位村民血清及粪便TTVDNA，并对检测结果及调查情况作统计学分析。结果 自然人群中TTV感染率约10.6%，感染者血清ALT正常，不同性别、年龄及民族的TTVDNA阳性率无统计学差异；部分血清TTVDNA阳性者粪便中可检测到TTVDNA。结论 我国自然人群中存在TTV无症状感染者，粪-口传播可能是TTV感染的传播途径之一。     

原因不明性肝炎患者血清中TTV DNA的检出及其临床意义

目的：研究原因不明性肝炎患者输血传播性病毒（Rransfusion transmitted virus,TTV)感染的检出状况及其临床意义。方法：在TTV ORF1保守区设计引物,建立巢式聚合酶链反应（Nested-PCR),检测50例原因不明性肝炎、40例健康人与30例乙肝病毒携带者血清中TTV DNA,比较TTV DNA阳性的肝炎患者的临床特征。结果：50例原因不明性肝炎中16例TTV DNA呈阳性（占32％）,比健康人群（2／40,5％）与乙肝病毒携带者（2／30,6．7％）血清中TTV DNA检出率高（P＜0．05）,16例TTV DNA阳性患者中以慢性肝炎占多数（12／16,75．5％）,临床表现为反复、持续ALT异常。结论：TTV在原因不明性肝炎中感染率明显高于其他人群,其可能是本地区原因不明性肝炎的致病因子。     

用PCR方法检测肝组织中的新型肝炎病毒TTV

选取非甲－非庚型肝炎后肝病死亡患者肝组织,提取肝组织DNA,应用PCR方法检测TTV,观察肝组织中TTV的感染情况。结果表明：16例肝病患者肝组织中TTV阳性者9例,总检出率56％。提示TTV可以感染肝组织,可能是导致非甲－非庚型肝炎的重要病原。     

原位PCR在检测肝组织TTV中的应用

目的　探索用原位PCR检测肝组织中的输血传播病毒 (TTV)。方法　用原位PCR与原位杂交检测32例肝组织中的TTV ,并比较两种方法的检测结果。结果　 32例标本中 ,经原位PCR检测 ,TTV阳性 2 3例 ,经原位杂交检测 ,TTV阳性 17例。原位PCR检测的阳性率 (71.9% )明显高于原位杂交 (5 3.1% ) ,P <0 .0 5。原位PCR在肝细胞核、内皮细胞核与肝细胞浆内检测到TTV ,而原位杂交只在肝细胞核与肝细胞浆内检测到TTV。结论　本实验结果表明原位PCR是一种新的检测TTV的有效方法。     

荧光定量PCR检测TTV方法学建立及临床应用

目的　建立一种灵敏度高、特异性好、操作简便的荧光实时定量PCR技术。方法　设计针对TT型肝炎病毒(TTV)基因保守序列非转录区的一对引物和一条荧光基团双标记探针。将PCR扩增所得的产物片段克隆 ,作为定量检测的标准品。对 36例丙肝患者及 12 3例不同血清标志物阳性的乙肝患者、16 6例健康体检者血清中TTVDNA定量检测 ,评估TTVDNA在不同人群中检出阳性率的差异显著性。结果　该方法检测TTVDNA的灵敏度高于普通套式PCR ELISA方法 ,线性范围为 10 2～ 7拷贝 /ml;批间CV为 13.2 %～ 16 .0 % ,批内CV为 6 .5 %～ 11.3%。健康体检者、丙肝患者、乙肝患者三组人群阳性检出率无显著性差异 ;且乙肝患者 (TTVDNA )血清ALT水平与TTVDNA载量无显著相关性 (P >0 .0 5 ) ;乙肝患者血清ALT异常与正常两组TTVDNA阳性检出率无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　该方法操作简单、灵敏度高、特异性好、结果数据化 ,适合于临床实验室进行临床标本的TTVDNA定量检测。     

献血员、肝炎患者TTV DNA检测及部分TTV基因序列分析

目的了解献血员、肝炎患者中的输血传递病毒(TTV)感染状况及基因型别。方法设计合成引物采用半套式聚合酶链反应（hemi-nestPCR）方法,对195份献血员血清、72份不同型别的肝炎患者血清进行了TTVDNA的PCR检测,并对部分阳性株进行序列测定及计算机分析。结果①在血清丙氨酸转氨酶（ALT）异常,HBsAg及抗HCV阴性的99份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本36份,阳性检出率为36.3%;而在ALT正常的96份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本16份,阳性检出率为16.6%,明显低于ALT异常献血者。②在72例不同肝炎患者中,共检出39例TTVDNA阳性血清,总检出率为54.16%,在非甲-非庚型肝炎患者中TTVDNA阳性率为87.5%,而在明确诊断为甲-庚型肝炎的患者中TTVDNA阳性率为50%,两组相比差异显著（P<0.05）。对8株阳性株序列分析结果显示,测序的8个分离株与9个G1、G2代表株核酸的同源性为60.4%～99.1%,氨基酸的同源性为55.4%～98.6%。经系统发育分析表明,这8个TTV分离株中有7株可分属于G1、G2两个基因型的5个亚型,而另1株为G1型的新亚型。结论①献血者中存在TTV感染,提示TTV可以导致感染个体的肝功能异常,TTV可能与HBV感染相似,亦存在“健康携带状态”。②非甲-非庚型肝炎患者的TTV感染率明显高于明确病原的甲-庚型肝炎患者,TTV感染与肝炎有关,可能是非甲-非庚型肝炎的病原之一。③8个TTV分离株中7个分属于G1、G2两个基因型中的5个亚型,另有1株为G1型的新亚型。     

献血者中TTV感染情况调查及部分序列分析

目的调查了解淮阴地区献血者中一种新的肝炎相关病毒——TTV的感染情况.方法用巢式聚合酶链反应(nest-PCR)技术对淮阴地区220名专业献血者进行血清中输血传播病毒(TTV)的检测,并在PUC18中对其开放读码框2(ORF2)基因进行了克隆.结果序列分析表明,该序列与国内外发现的TT病毒AB008394(日本株)、AF079173(中国河北株)对应位置核苷酸同源性为98%和97%,献血者中TT病毒阳性率为18%.结论病毒ORF2基因高度保守,献血者中有较高的TTV感染率.     

逆转录巢式多聚酶链反应对输血后肝炎HCV核酸检测及临床意义

本文采用逆转录巢式多聚酶链反应等方法，对４９例输血后肝炎患者同时检测ＨＣＶ ＲＮＡ，ＨＢＶ ＤＮＡ及其有关血清学标志，结果显示：ＨＣＶ与ＨＢＶ感染率分别为８１．６％，３４．６％，其中双重感染者占２２．４％。抗－ＨＣＶ与ＨＣＶ ＲＮＡ符合率为７９．４％，抗－ＨＣＶ阴性患者中，４０％可检出ＨＣＶ ＲＮＡ，表明检测抗－ＨＣＶ对诊断排除ＨＣＶ感染有一定意义，但抗－ＨＣＶ阴性并不能排除ＨＣＶ感染。     

用PCR检测乙型肝炎患者血清巨细胞病毒活动性感染

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２５例乙型肝炎患者血清中巨细胞病毒脱氧核糖核酸（ＣＭＶ－ＤＮＡ）诊断ＣＭＶ活动性感染、同时与酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测血清中ＣＭＶ－ＩｇＭ的结果相比较。结果显示：ＣＶＭ－ＤＮＡ阳性率为３２．８０％，同于ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率１５．０２％，各型肝炎中，急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化血清ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率分别为１９．０５％，３５．２９％。血清ＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的乙     

TT病毒核酸和抗体在肝病患者中的检测及临床意义

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,分别检测１３２例各型肝病患者和１２０例献血员血清ＴＴＶ－ＤＮＡ和抗ＴＴＶ－ＩｇＧ。结果两种方法的检出率有较大的差异。ＰＣＲ法的敏感度和重复性均优于ＥＬＩＳＡ法。病毒在肝病患者中的阳性率显著高于献血员（Ｐ〈０．０５）,提示ＴＴ病毒可能与肝脏疾病有相关性。     

部分人群中输血传播病毒的检测

目的 了解部分人群是否有输血传播病毒（ＴＴＶ，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ Ｖｉｒｕｓ）感染。方法 利用半套式ＰＣＲ方法对慢性乙肝患者，慢性丙肝患者，血液透析者，健康人群中ＴＴＶ的感染状况进行了筛选。结果 ２４０例慢性乙肝患者中发现２例ＴＴＶ阳性，１００例慢性丙肝患者中发现４例ＴＴＶ阳性。２０例血液透析者和１００例健康人群中都未发现ＴＴＶ感染。结论 慢性丙肝患者比慢性乙肝患者有较     

巢式PCR检测胎儿组织人细小病毒B19感染

作用设计合成的两对引物建立了巢式ＰＣＲ－ＥＢ染色法检测Ｂ１９ＤＮＡ新技术，扩增产物为１０４ｂｐ片段，敏感性达０．００７ｆｇ，是一般ＰＣＲ的１００倍，是一种特异、敏感、简便、快速诊断Ｂ１９感染的新方法。用该方法检测了５７例自然流产和死胎的胎儿组织，１７例阳性，其中自然流产１１／４２（２６５），死胎６／１５（４０％），证实了国内胎儿有Ｂ１９病毒感染，和自然流产、死胎可能相关，并对ＰＣＲ实验中防污染措     

TTV核酸模板快速制备方法

目的 寻求建立适合大批量临床标本检测TT病毒（TTV）核酸快速制备方法,直接用于PCR扩增。方法 应用蛋白酶K裂解酚氯仿抽取法与直接快速裂解法,分别制备TTV核酸做PCR模板,用于TTV的聚合酶链反应的快速检测。结果 在30例非甲－非庚型肝炎血清和50例慢性乙型肝炎患血清,应用经典的蛋白酶K裂解酚氯仿抽取法和直接快速裂解法,分别制备TTV核酸模板,在相同条件下进行PCR扩增,结果两种制备方法的符合率为89％。结论 TTV是一种新发现的肝炎病毒,目前主要以实验室检测病毒核酸的存在为诊断依据,建立了具有快速、简便、适合大批量临床标本中TTV核酸制备方法,对TTV肝炎的快速诊断,具有重要的意义。     

巢式聚合酶链反应检测不同人群隐匿性乙型肝炎病毒感染

目的：探讨不同人群隐匿性乙型肝炎病毒（HBV）感染情况。方法：采用巢式聚合酶链反应（PER）检测268例健康献血员、386例健康体检自然人群、73例不明原因肝炎患者、26例丙型肝炎患者、38例肝硬化患者和36例肝癌患者血清HBV DNA。结果：隐匿性乙型肝炎病毒感染率分别为0．37％、4．92％、35．62％、19．23％、10．53％和16．67％。隐匿性HBV感染者中,抗HBc或抗HBc和抗HBe阳性者占51．29％。结论：隐匿性HBV感染在不同人群中广泛存在,其与抗HBc存在高度相关。