血小板54kD钙结合蛋白诱导嗜铬颗粒聚集的特性研究

猪血小板分子量为9.0×10~(-23)kg钙结合蛋白(简称54kD钙结合蛋白)具有诱导猪肾上腺髓质嗜铬颗粒聚集的活性。嗜铬颗粒聚集与蛋白浓度呈正相关。溶液中游离钙浓度在10~(-6)～10~(-3)mol/L范围内,该蛋白的活性与游离钙浓度成正比,显示该蛋白活性呈显著钙依赖性。镁离子对之有拮抗作用,而钡离子则呈正协同效应,但镁、钡离子并不引起54kD钙结合蛋白(以下简称54kD蛋白)诱导嗜铬颗粒聚集,因此该蛋白诱导嗜铬颗粒聚集的活性是钙特异性的。以上性质提示54kD蛋白与Annexin家族钙结合蛋白的性质非常相似,它可能作为血小板胞内的一种钙受体,介导血小板颗粒之间的相互融合以及颗粒与胞膜的相互作用,在血小板分泌时起重要作用。     

先天性巨结肠症嗜铬蛋白颗粒A免疫组化观察

目前已知先天性目结肠症（NI。rchsPrung’sDk－ease，HD）是由于远端结肠肠壁缺乏神经节细胞及肢碱能和肾上腺素能神经功能失调，引起无神经节细肿肠段痉挛、狭窄所致。近年人们注意到嗜铬蛋白颗粒A作为激素前体或／和旁分泌信使广泛存在于肠壁中。大此，本文作者通过免疫细胞化学方法了解其在HD中的分布情况，藉以探讨是否与HD的发病有关。材料和方法一、标本来源标本取自3O例不同年龄经临床和病理证实的普通型巨结肠患儿的正常神经节细胞段和无神经节细用段的病理切片。二、方法与试剂用Labelledstreptavidinblotll。（l－SAil）免…     

猪血小板中54KD钙结合蛋白的荧光研究

猪血小板中５４ＫＤ钙结合蛋白（Ｃａｌｃｉｕｍｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＣａＢＰ）具有λ（ｍａｘ）为３３５ｎｍ的内源荧光发射光谱，钙离子和镁离子与之结合均不改变其λ（ｍａｘ）的波长，但能减弱其发时荧光的强度，在无镁离子存在的条件下，测定不同钙离子浓度下荧光强度的变化，计算出此蛋白质与钙离子的结合常数为３．２×１０－８ｍｏｌ／Ｌ，而在镁离子饱和条件下，与钙离子的结合常数为７．４×１０－６ｍｏｌ／Ｌ。乙醇亦不影响其荧光的λ（ｍａｘ），而对其荧光强度的影响依赖于蛋白质是否与钙离子结合。在未与钙离子结合的状态下，随着乙醇浓度的增加荧光强度也随之而增加：与钙离子结合后，在低浓度乙醇溶液中蛋白质荧光强度减小，乙醇浓度超过１６．６％后，荧光强度逐渐增加，在３５％的乙醇溶液中，５４ＫＤＣａＢＰ对钙离子不敏感。     

嗜铬颗粒蛋白B-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建小鼠嗜铬颗粒蛋白B(chromogranin B,CgB)重组原核表达载体。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出CgB基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中进行表达。结果表达产物经Western Blot分析,在140处有一明显特异带,与预期结果相符。结论构建重组融合表达载体pGEX-CgB,在原核细胞中成功表达出小鼠CgB-GST融合蛋白。     

嗜铬颗粒蛋白B与热休克同源蛋白70相互作用的研究

目的分离和鉴别在肾上腺髓质嗜铬颗粒细胞分泌囊泡中,与嗜铬颗粒蛋白B(CgB)相互作用的蛋白质。方法采用蛋白质捕获、免疫共沉淀和质谱等技术进行研究。结果在嗜铬颗粒细胞内,CgB与热休克同源蛋白70(Hsc70)相互作用。一个Hsc70结合序列定位在CgB的羧基末端区(Ser586-Arg602,SR-17),而且SR-17内的Ser595磷酸化可增强其与Hsc70结合。磷酸化修饰的SR-17可从ATP-Sepharose上洗脱Hsc70。用免疫印迹和免疫组化方法可证实CgB和Hsc70均存在于嗜铬颗粒细胞的胞质和细胞核中。结论Hsc70可能参与CgB的细胞核转位过程。     

癌症患者血小板聚集率和血浆纤维结合蛋白测定和临床意义

对３６例各种恶性肿瘤和３０例正常人进行血小板聚集率（ＰＡｇＴ）和血浆纤维结合蛋白（Ｆｎ）测定和对照，结果发现：恶性肿瘤伴转移者１７例的ＰＡｇＴ和Ｆｎ均显著升高（Ｐ＜０．０１）；恶性肿瘤不伴转移者１９例仅ＰＡｇＴ升高（Ｐ＜０．０１），而Ｆｎ不升高（Ｐ＞０．０５）．提示：ＰＡｇＴ和Ｆｎ对恶性肿瘤有无转移的判断及对恶性肿瘤的血栓和栓塞并发症的防止有一定价值。     

API0134对血小板α颗粒膜蛋白和血小板聚集的影响

２０例急性心肌梗死患者在溶栓后随机分为穿心莲有效成分（ＡＰＩ０１３４,ＡＰＩ）组与对照组,治疗１５ｄ,均同时给予阿司匹林等药物。检测溶栓前后血浆α颗粒膜蛋白（ＧＭＰ－１４０）浓度和ＡＤＰ诱导的血小板聚集反应。结果表明,ＡＰＩ组溶栓后７２ｈ血ＧＭＰ－１４０浓度轻度增加,对照组显著性增加（Ｐ〈０．０１）,ＡＰＩ组ＧＭＰ－１４０在溶栓后７２ｈ和１５ｄ均义（７２ｈ,Ｐ〈０．０５;１５ｄ,Ｐ〈０．０１）。研     

细胞核内的钙及钙结合蛋白

<正>众所周知,钙离子是细胞浆中的第二信使,在细胞的信息传导中起着重要的作用。但对钙离子以及钙结合蛋白(Calcium binding proteins)在细胞核的信息传导和在核内活动的调节中所起的作用知之甚少。近年来,已有一些研究揭示了跨膜核内钙离子梯度的存在和核内钙结合蛋白的多样性,从而引导对钙及钙结合蛋白参与核内活动研究的深入。     

TPA诱导的血小板聚集的研究

应用不同浓度ＴＰＡ诱发血小板聚集，观察２０名正常人血小板的聚集率。结果显示：ＴＰＡ从５ｎｇ／ｍｌ到１０ｎｇ／ｍｌ之间，随着浓度的增加，血小板聚集率逐渐增加，最佳浓度为１０ｎｇ／ｍｌ。当ＴＰＡ浓度〉１０ｍｇ／ｍｌ时，继续增加ＴＰＡ浓度，血小板聚集率将不再升高，且于２０ｍｇ／ｍｌ时出现明显的解聚现象。     

血浆钙离子浓度对血小板聚集的影响

目的 探讨血浆钙离子浓度对血小板聚集检验结果的影响.方法 采集健康志愿者静脉血标本(n=42),添加不同量的氯化钙,采用血浆比浊法进行血小板聚集率检测.结果 血浆Ca2+浓度在2.1-0.12mmol/l时,二磷酸腺苷(ADP)和花生四烯酸(AA)诱导的血小板聚集率分别为(75.9±10.4)％-(51.8±9.6)％和(83.7±13.9)％-(64.4±12.2)％,血小板聚集率随Ca2+浓度的降低而降低;血浆Ca2+浓度在2.1-33.66mmol/L时,ADP和AA诱导的血小板聚集率分别为(75.9±10.4)％-(94.7士4.8)％和(83.7士13.9)％-(93.2±5.5)％,随Ca2+浓度的增高而增高;Ca2+浓度为39.00mml/L时,血小板聚集率明显降低[ADP和AA诱导的血小板聚集率分别为(9.1±5.3)％和(11.1±4.5)％,均P＜0.01].结论 钙离子浓度波动对血小板聚集检验结果有明显影响.低于生理钙浓度(2.1mmol/L血小板聚集率随Ca2+浓度的降低而降低,高于生理钙浓度血小板聚集率随Ca2+浓度的增高而增高;血钙过高(≥39.0mmol/L)抑制血小板聚集.     

老年及青年人大肠癌组织嗜铬蛋白A和P53蛋白聚集的变化

为了解老年及青年人大肠癌组织嗜铬蛋白Ａ和Ｐ５３蛋白聚集变化特征及意义。采用免疫组织化学ＡＢＣ法，检测术前未经化疗和放疗的２５例老年（≥６０岁）及１５例青年人（≤４０岁）大肠癌患者癌组织中ＣＧＡ及Ｐ５３蛋白的变化。结果：老年组患者ＣＧＡ阳性表达５例，占２０％，青年组患者阳性表达１０例，占６７％，老年组ＣＧＡ阳性表达率明显低于青年组（Ｐ〈０．００５，χ＾２检验）；Ｐ５３免疫阳性细胞定量分析发现：老年组     

老年及青年人大肠癌组织嗜铬蛋白A和P53蛋白聚集的变化

为了解老年及青年人大肠癌组织嗜铬蛋白Ａ（ＣｈｒｏｍｏｇｒａｎｉｎＡ，ＣＧＡ）和Ｐ５３蛋白聚集变化特征及意义。采用免疫组织化学ＡＢＣ法，检测术前未经化疗和放疗的２５例老年（≥６０岁）及１５例青年人（≤４０岁）大肠癌患者癌组织中ＣＧＡ及Ｐ５３蛋白的变化。结果：老年组患者ＣＧＡ阳性表达５例，占２０％，青年组患者阳性表达１０例，占６７％，老年组ＣＧＡ阳性表达率明显低于青年组（Ｐ＜０．００５，χ２检验）；Ｐ５３免疫阳性细胞定量分析发现：老年组患者癌组织切片Ｐ５３阳性细胞数为（６６２±５６８）ｍｍ－２，青年组为（１２０８±７６１）ｍｍ－２，老年组明显低于青年组（Ｐ＜０．０５）。提示：青年和老年大肠癌可能有不同的发病学基础，这种不同的发病学基础是影响其临床特征的重要因素之一。     

血浆Ca2+浓度对血小板聚集功能的影响

目的 探讨不同Ca^2＋浓度对ADP诱导血小板聚集的影响。方法 在不同Ca^2＋浓度下,用比浊法测定ADP诱导洗涤人血小板聚集百分率。结果 ADP诱导血小板聚集作用与外源性Ca^2＋浓度相关。结论 建立了ADP诱导人洗涤血小板聚集反应时胞浆外Ca^2＋的最适浓度。     

钙结合蛋白CaBP_(72)免疫特性的研究

将SDS—PAGE纯的CaBP_(72)(钙结合蛋白,分子量72KDa)免疫家兔,获抗血清。抗血清经硫酸铵盐析粗提,再经DEAE纤维素柱层析等处理得纯化抗体。用改良的过碘酸氧化法将纯化的抗体与辣根过氧化物酶(HRP)经两步法进行偶联,经Sephadex G-200柱层析纯化得酶标结合物。其中抗体与辣根过氧化物酶的克分子之比为1:1。测定CaBP_(72)的ELISA线性检测范围为2～40ng。三氟啦嗪(TFP)可增强抗原抗体的反应性:最大作用浓度为0.8mM,此时可使抗原抗体的结合率提高240％。CaBP_(11)与抗CaBP_(72)抗体有弱交叉反应,反应率小于0.1％,但CaBP_(11)、CaBP_(12)的混合品对抗CaBP_(72)抗体的交叉反应性可提高10倍以上,但仍不超过0.1％。     

可溶性耐药相关钙结合蛋白

可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin),是一种22ku的胞浆蛋白,具有典型的"E-F hand"钙结合位点.sorcin可在多种耐药细胞株中高表达,推测可能是通过影响细胞内Ca2+浓度而参与耐药表型的维持,但sorcin表达的量与耐药程度之间的关系还不明了.在多种正常组织中也发现sorcin的表达,在心肌细胞中,sorcin通过影响Ca2+通道的活性而在兴奋-收缩偶联循环中发挥重要作用.     

毛木耳多糖诱导血小板聚集作用研究

目的：研究毛木耳多糖具有诱导血小板聚集作用。方法：体外试验采用家兔颈动脉采血，体内试验用大白鼠，记录不同条件下的血小板聚集曲线，并比较其差异性。结果与结论：体外试验呈明显的剂量反应关系，该作用受毛木耳另一提取物Ap-f和阿斯匹林抑制，体内试验促进ADP诱导的血小板聚集，增加血小板血栓的重量。     

API0134对血小板α颗粒膜蛋白和血小板聚集的影响

２０例急性心肌梗死患者在溶栓后随机分为穿心莲有效成分（ＡＰＩ０１３４,ＡＰＩ）组与对照组,治疗１５ｄ,均同时给予阿司匹林等药物。检测溶栓前后血浆α颗粒膜蛋白（ＧＭＰ－１４０）浓度和ＡＤＰ诱导的血小板聚集反应。结果表明,ＡＰＩ组溶栓后７２ｈ血浆ＧＭＰ－１４０浓度轻度增加,对照组显著性增加（Ｐ＜０．０１）。ＡＰＩ组ＧＭＰ－１４０在溶栓后７２ｈ和１５ｄ均低于对照组,差异有显著意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＡＰＩ组１ｍｉｎ和５ｍｉｎ血小板聚集率均低于对照组,差异均有显著意义（７２ｈ,Ｐ＜０．０５;１５ｄ,Ｐ＜０．０１）。研究表明,ＡＰＩ与阿司匹林联合应用可抑制溶栓后血小板的活化,优于阿司匹林单独应用,因此ＡＰＩ有可能用于临床预防溶栓后的再闭塞。     

六味地黄方及其配伍对血小板聚集的影响

目的 研究六味地黄方及其配伍对血小板聚集率的影响。方法 以比浊法测定六味地黄方及其配伍对二磷酸腺苷 (ADP)、血小板活化因子 (PAF)、花生四烯酸 (AA) 诱导的家兔体外血小板聚集率的影响,运用荧光法观察血小板经 ADP 激活前后的［Ca²⁺］_i 的变化。结果 六味地黄方及其配伍对 ADP、PAF、AA 诱导的家兔体外血小板聚集率均具有不同程度的抑制作用,且呈明显的量效关系;在终质量浓度为生药 9.26 mg/mL 时,除山药/茯苓药对外,均不同程度降低 ADP 激活的血小板释放 Ca²⁺ 的作用。结论 六味地黄方及其配伍均具有不同程度抗血小板聚集作用,其中以山茱萸/丹皮药对作用尤为显著,其抗 ADP 诱导血小板聚集的作用可能与抑制血小板内钙释放有关。