抗PLC/PRF/5肝癌细胞单克隆抗体及其部分特性研究

本文采用杂交瘤技术获得了3株分泌抗PLC/PRF/5细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,经间接ELISA和间接免疫荧光法检测证实,所分泌的抗体为抗PLC/PRF/5肝癌细胞的单抗,具有较好的细胞特异性。3株中2株属IgG_1亚美,1林分泌IgG_2a亚类抗体。     

抗淋球菌单克隆抗体的制备及其生物学特性研究

目的：研制抗淋球菌单克隆抗体,为建立新的淋病诊断方法奠定基础。方法：以淋球菌２９１０６－５株作抗原,按常规淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。并采用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法研究单抗的特异性和敏感性。结果：建立了５个持续分泌抗淋球菌单抗的杂交瘤细胞株。他们所分泌的抗体效价可达１∶８１９２～１∶３２７８６。５株单抗均能与淋球菌发生特异性结合,但对脑膜炎球菌、葡萄球菌、大肠杆菌等１５种其他微生物不起反应。淋球菌的最小检测量为１×１０４个／ｍｌ。结论：本研究建立的单抗在检测淋球菌时有高度特异性和敏感性     

抗结核杆菌耐热抗原单克隆抗体杂交瘤细胞的建立及其特性的初步鉴定

目的：建立针对结核杆菌耐热抗原（Mtb-HAg）的单克隆杂交瘤细胞株,并对其产生的单克隆抗体的特异性和生物学活性作初步鉴定。方法：BALB/C小鼠用Mtb-HAg免疫3次后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以10∶1比例在50%PEG作用下细胞融合,随后在HAT培养液中进行选择性培养,常规有限稀释法筛选克隆和亚克隆化;用间接ELISA法测定单抗效价和特异性鉴定。结果：在细胞融合2次,筛选杂交瘤细胞3次和亚克隆化后,获得了3株杂交瘤细胞株,ⅠC12、ⅡE4、ⅡG8,效价分别为1∶32 000、1∶16 000、1∶16 000。其中ⅠC12杂交瘤株分泌的抗体仅与Mtb-HAg的蛋白峰Ⅰ有阳性反应,但ⅠC12单抗对Mtb-HAg激活人γδT细胞的活性没有明显影响。ⅡE4和ⅡG8杂交瘤株分泌的抗体与Mtb-HAg蛋白峰Ⅰ、峰Ⅱ、峰Ⅲ均无反应。结论：应用杂交瘤技术获得了三株能稳定分泌高滴度抗Mtb-HAg的单克隆抗体细胞株,其中ⅠC12对蛋白峰I有特异性。     

抗人肝再生增强因子单克隆抗体对人肝癌细胞株HepG2增殖活性的影响

目的:检测人肝癌细胞株HepG2细胞有无人肝再生增强因子(hALR)的表达,利用hALR特异性的单克隆抗体(anti-hALR McAb)结合hALR,观察其阻断hALR的作用后,对人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖活性的影响.方法:用免疫细胞化学以及RT-PCR的方法检测HepG2细胞hALR蛋白及mRNA的表达;用3H-TdR掺入法检测hALR特异性单克隆抗体中和hALR后HepG2细胞的增殖情况.结果:①HepG2细胞有hALR的表达.②抗hALR单克隆抗体特异性地阻断hALR的作用后可部分抑制肿瘤细胞自主性生长.结论:抗hALR单克隆抗体能部分抑制肿瘤细胞自主性生长;hALR通过自分泌方式参与了肝癌细胞的自主性生长.     

应用消减免疫法制备抗肝癌单克隆抗体

1　材料和方法1.1　材料　 1实验动物 :BAL B/c雌性小鼠 8wk龄 ,体质量18～ 2 0 g,购自本校实验动物中心 ;2组织细胞 :正常成人新鲜肝组织 ,肝癌组织取自本校外科手术标本 ,部分组织以中性福尔马林固定 ,低温石蜡包埋切片 ,4℃保存备用 .Sp2 /0细胞 ,肝癌细胞株 SMMC- 772 1,HHCC,He PG2由本室保存 ;3主要试剂 :HT,HAT选择培养基 RPMI16 40培养基购自Sigma公司 ,环磷酰胺注射液系连云港德瑞制药有限公司产品 ,Envision购自美国 DAKO公司 .1.2　方法　 1正常成人肝组织于 2 0 0目镍网中研磨后 ,无菌生理盐水悬浮制成肝细胞悬液 …     

抗胃癌细胞单克隆抗体的制备

作者用新鲜胃癌组织匀浆免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备抗胃癌细胞单克隆抗体，一次融合率为９２．８％，获得分泌特异性ＭｃＡｂ杂交瘤细胞１５株，阳性率１３．２％，三次克隆纯化后阳性率１００％，在体外培养１５０余天，分泌能力稳定，选择ＱＹ－１，ＱＹ－２，ＱＹ－３，ＱＹ－４４株ＭｃＡｂ进行鉴定，４株ＭｃＡｂ对正常纤维组织、红细胞等呈阴性反应，而对胚胎的消化道上皮均呈阳性反应，ＱＹ－１￣４ＭｃＡｂ的胃癌反应阳性率     

抗人Atg5单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人Atg5单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法以人Atg5重组蛋白作为免疫原免疫Balb／c小鼠,取其脾细胞与SP2／O细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗人Atg5单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、westernB10t、免疫组化鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、亚型及亲和力常数。结果成功筛选到一株能稳定分泌抗人Atg5单抗的细胞株1E783H9,亚型鉴定重链为IgG2b,轻链为kappa链。ELISA法测定腹水抗体效价为1：4．096×lO。,抗体亲和力常数为7．309×10^8mol／L;westernblot显示此单抗能特异性识别人子宫颈癌Hela细胞系中的天然人Atg5蛋白;细胞免疫组化进一步显示Atg5表达在细胞质中。结论成功制备了抗人Atg5单克隆抗体,为进一步研究其与宫颈癌关系及在临床上的应用奠定了基础。     

131I标记抗人肝癌单克隆抗体人体内照射剂量计算

目的观察131I-抗肝癌细胞单克隆抗体(131I-Hepama-1)的生物学分布情况,估算全身正常器官及肿瘤组织内的照射剂量,评价131I-Hepama-1治疗原发性肝癌的安全性及可行性。方法5例原发性肝癌患者,分别于静脉注射131I-Hepama-1后10min～7d采集全身前、后位图像,获得131I-Hepama-1全身生物学分布情况;利用ROI技术勾画各时相、各器官和肿瘤组织的放射性计数,同时留取患者24h尿样。使用ORIGEN5.0统计软件得到各器官和肿瘤的时间-放射性曲线,分别计算各源器官的累积活度和放射性滞留时间,再由计算内照射剂量软件MIRDOSE3.0得出包括脑、甲状腺、肺、肾、肠道等正常器官及肿瘤组织的内照射吸收剂量。结果5例患者各主要器官和肿瘤的平均内照射吸收剂量分别为:全身0.17Gy,正常肝组织2.06Gy,红骨髓0.07Gy,肺1.91Gy,甲状腺49.55Gy,肿瘤16.18Gy。结论经静脉注射131I-Hepama-1治疗原发性肝癌,肿瘤组织可获得较大的内照射吸收剂量,肝脏和其他脏器的吸收剂量较小,临床使用安全,对于治疗肝细胞肝癌具有一定的价值。     

抗猪囊尾蚴KD26抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株建立和特性鉴定

目的: 建立针对猪囊尾蚴KD26抗原的单克隆杂交瘤细胞株,生产相应的单克隆抗体,用于囊虫病免疫保护机制的基础研究和囊虫病临床免疫诊断的应用。方法: 用SDS-PAG E电泳,分离纯化制备猪囊尾蚴KD26抗原免疫6周龄BALB/C小鼠3次,无菌取出脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/O(比率10:1),在50% PEG (4 000MW)作用下进行细胞融合,随后在HT培养液中进行选择性培养、筛选和克隆;常规的中期染色体法分析染色体,单克隆抗体鉴定采用免疫双扩散法测定其免疫球蛋白亚类,采用ELISA法测定单抗效价并作特异性鉴定。结果: 用常规的有限稀释法对杂交瘤细胞进行了3次筛选和克隆化后,获得了1株杂交瘤XH,染色体数为96,能稳定分泌抗猪囊尾蚴KD26单抗,单抗类型为IgG1,抗体滴度为1:1 000,其与血吸虫、弓形虫、细粒棘球绦虫抗原均不发生交叉反应。结论: 应用杂交瘤技术获得了1株能稳定分泌高滴度抗猪囊尾蚴KD26抗原的单克隆抗体细胞株。     

建立分泌抗人精液抑制素杂交瘤细胞株及其单克隆抗体的研究

用人精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠骨髓瘤细胞融合，获得４株分泌抗人精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＩＢ１０，ＩＧ５，ＩＡ４和ＩＡ６。     

分泌小鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

采用活体内生长ＳＰ２／０骨髓细胞为融合伙伴,用ＳＰ２／０细胞与甲胎蛋白免疫的ＢＡＬＡ／Ｃ小鼠脾细胞进行融合,建立了２株稳定分泌抗ＡＦＰ单克隆抗体的小鼠杂交瘤株。冻存两年后复苏,仍稳定地分泌特异抗体。培养上清的抗体效价达１０＾－３,腹水效价达１０＾－６,ＨＭＡ２１５和ＨＭＡ６４识别抗原表位不同,ＨＭＡ２１５和ＨＭＡ６４均属于小鼠ＩｇＧ１亚类。     

抗猪囊虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和特性鉴定

目的：培养、筛选和克隆鼠源杂交瘤细胞株，生产相应特异的针对猪囊虫的单抗并用于临床。方法：用含有弗氏不完全佐剂和1单位IFN的猪囊虫下液皮下注射免疫7周龄小鼠3次后，无菌取出脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP^2/O，在含有50％PEG（分子量4000）的HAT培养液中进行融合，在37℃，含7％CO2的培养箱中培养，随后在正常培养液中进行筛选和克隆化。染色体分析用常规的中期染色体法，单抗类型的滴度测定用ELISA法。结果：用常规的有限稀释法对杂交瘤进行3次筛选和克隆化后获得3株杂交瘤细胞株2H10、5C2和5H6，分别有97、98、和106条染色体，均能稳定地分泌各自特异的单抗。2株单抗为IgG类，另1株为IgM类，滴度分别为1：1000、1：800和1：1600。结论：用杂交瘤技术，我们获得了3株杂交瘤细胞株，均能稳定地分泌高滴度的针对猪囊虫抗原的特异单抗。