mRNA差异显示

差异基因的分离，对细胞生命过程中调节机制的研究以及致病机制的探讨极有价值。分离差异基因的方法多种多样，但根据所分差异基因性质的不同，可粗略分成两大类：①差异基因的分离，常用方法主要有消减杂交法〔１〕及其改进〔２，３〕，随机引物多态性ＤＮＡ聚合酶链反应...     

mRNA差异显示筛选卵巢癌相关基因

目的：利用ｍＲＮＡ差异显示技术研究正常卵巢上皮和卵巢上皮癌之间的基因表达差异状况,筛选和克隆卵巢上皮癌相关基因。方法：通过ＤＤ－ＰＣＲ分析正常卵巢上皮和卵巢上皮癌总ＲＮＡ将差异片段分离并显示出来,将其回收,利用基因克隆技术将其筛选和克隆出来作为探针进行斑点杂交鉴定、ＤＮＡ序列测定、通过国际互联网络检索ＧｅｎＢａｎｋ进行同源性分析。结果：共筛选克隆鉴定６个差异显示片段。其中４个为未知基因片段,已收录     

IRM-2近交系小鼠肿瘤模型的建立

目的　建立IRM— 2小鼠自发性肿瘤模型和移植性肿瘤模型 ,为肿瘤研究提供实验模型。方法　采用瘤块接种法及悬液接种法。 (1)无菌环境取 2mm3瘤块 ,接种于小鼠腹股沟皮下。 (2 )将瘤块研磨 ,加生理盐水稀释至 1× 10 7 ml,取细胞悬液 0 2ml(含 1× 10 6 细胞 )注入腋窝皮下 ,观察肿瘤生长情况。结果　接种恶性淋巴瘤连续传 70代 ,成瘤率 10 0 % ,移植津白Ⅱ号高乳腺癌瘤株连续 4 5代、移植T 739肺腺癌瘤株 5代 ,成瘤率均为10 0 % ,且生长稳定 ,传代周期固定。结论　该自发性恶性淋巴瘤具有较强的特异性 ,证明该模型是成立的。     

mRNA差异显示法筛选大肠癌相关基因

目的：分离并克隆大肠癌相关基因。方法：分别提取大肠癌与正常大肠粘膜的组织总RNA,用mRNA差异显示法（Differential display polymerase chain reaction,DD-PCR)筛选大肠癌特异性表达产物的cDNA片段,对其进行克隆、测序、序列分析以及斑点杂交初步鉴定。结果：获得了2个在大肠癌高表达而在正常大肠粘膜组织低表达的新基因片段。结论：这2条差异显示新基因片段很可能是与大肠癌相关的致癌基因。     

应用mRNA差异显示技术进行肝癌相关基因的筛选

目的采用mRNA差异显示技术寻找肝癌及非肝癌组织的差异表达基因，筛选肝癌相关基因，为进一步研究创造条件。方法提取手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA，逆转录获得eDNA片段，以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因。对所获得的差异表达基因进行序列分析，并通过CenBank／BLAST数据库进行序列的同源性比较，并以Northern杂交方法对有意义片段予以来源确认。结果自720余条扩增条带中选出28条差异条带，其中“上调”者16条，“下调”者12条。对其中5条差异最为明显的片段进一步分析，其中2条为可能的新基因片段，其中一条经Northern印迹杂交证实确来自源标本组织，且在肝癌组织中有明显高表达趋势。结论mRNA差异显示技术是一种快速、灵敏、高效的差异表达基因的克隆技术，已采用这种技术获得了1条可能的肝癌相关新基因片段，有必要进一步研究。     

IRM-2近交系小鼠对电离辐射抗性的研究

目的观察IRM-2小鼠对电离辐射的耐受性.方法分析测定了IRM-2小鼠对137Csγ射线的LD50及经4.0Gy137Csγ射线照射后不同时间外周血白细胞、骨髓有核细胞总数、骨髓细胞DNA含量和脾结节的变化,并与亲代小鼠ICR和615进行了比较.结果用不同剂量的137Csγ射线照射后,IRM-2小鼠对γ射线的LD50比ICR和615小鼠分别高1.73～1.57Gy和1.44Gy;外周血白细胞数和骨髓有核细胞总数、骨髓细胞DNA含量下降的幅度小且恢复得快;CFU-S的增加也较ICR和615小鼠明显.结论IRM-2小鼠比一般的纯系和杂交品系小鼠具有更强的辐射抗性.     

用mRNA差异显示法比较SHR和WKY大鼠肾脏组织的基因表达

用ｍＲＮＡ差异显示技术观察ＳＨＲ与ＷＫＹ大鼠肾脏组织在ｍＲＥＮＡ表达水平上的差异。方法 取１２周龄的ＳＨＲ及ＷＫＹ大鼠，提取肾脏总ＲＮＡ，用含１２个寡聚核苷酸的Ｔ１１Ａ或Ｔ１１Ｇ引物进行逆转录，用Ｔ１１Ａ，ＡＰ１－３，Ｔ１１Ｇ，ＡＰ６，Ｔ１１Ｇ－ＡＰ７－８引物对逆转录产物进行多聚酶链式反应，反应产物进行聚丙烯胺凝胶电泳及放射自显影。     

mRNA差异显示技术筛选何首乌中二苯乙烯苷合成相关基因

【目的】筛选和克隆何首乌中二苯乙烯苷代谢相关酶基因。【方法】采用mRNA差异显示技术,对何首乌中二苯乙烯苷含量差异悬殊的不同组织(根、茎、叶)进行差异表达基因的筛选,将得到的差异基因连接pMD19-T载体进行测序后,通过数据库比对预测其基因功能。【结果】发现差异片段51条,选取其中9条进行半定量PCR验证,获得3条阳性差异片段。其中1条阳性片段为何首乌茎和叶特异表达,与甘氨酸脱氢酶高度同源,另外2条阳性片段为何首乌块根特异表达,分别与烯酰辅酶A水合酶、氨基肽酶N高度同源。【结论】通过mRNA差异显示技术得到的3个同源序列可为进一步研究何首乌中二苯乙烯苷生物合成途径提供帮助。     

用mRNA差异显示PCR技术筛查慢性砷中毒相关基因片段

目的：对慢性砷中毒组织的表达差异基因进行分析。方法：采用mRNA差异显示PCR技术(mRNA differential display PCR)，以慢性砷中毒病人具有皮损表现的手掌部皮肤组织为标本，正常人体手掌部皮肤组织为对照，提取组织mRNA，对砷中毒组织的表达差异基因进行分析，选择高表达和低表达的基因片段各一条进行了克隆和序列分析，经RNA印迹法确证，并在基因数据库中进行了同源性比较。结果：获得25条差异表达明显的cDNA片段，分别在砷中毒病人组织中呈高表达和低表达，已测序的两个序列均为未知基因序列。结论：慢性砷中毒病人病变皮肤组织与正常人体皮肤组织相比在mRNA水平有基因表达差异，差异表达的片段可能为砷中毒相关基因片段。     

mRNA差异显示技术的应用与改进

目的：克隆和研究高低分化胆管癌间差异表达基因。方法：对ｍＲＮＡ差异显示ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）的一系列条件进行了探索和改进,建立了有效的ＤＤＲＴ－ＰＣＲ法。结果;在高,低分化胆管癌差异分化基因的研究方面获得了满意的结果,共获得９个有显著差异的ｃＤＮＡ片段,测序后进行同源序列比较,有一个与层粘连蛋白受体基因高度同源,还有一个可能是一个新基因的部分序列。结论：通过对传统方法的改进,大大提高了工作效率     

银染mRNA差异显示法克隆肝癌相关基因

目的 建立银染mRNA差异显示方法,筛选并克隆肝癌相关基因,方法 以建系的人肝癌细胞HepG2和正常的肝细胞L02的总RNA为模板,用5′-dT11G锚定引物和8条随机引物（AP1-AP8）组合进行RT-PCR扩增,PCR产物经60g.L^-1尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,凝胶银盐染色显示差异的DNA片段。结果 建立了快速敏感的银染mRNA差异显示方法,分离并克隆了一些肝癌相关基因,结论 建立的银染mRNA差异显示法简单、有效,在差异表达基因的筛选中有较高的实用价值。     

银染mRNA差异显示方法的改进与优化

目的 对银染mRNA差异显示方法进行改进与优化,建立具有良好重复性和稳定性的银染mRNA差异显示新方法.方法 通过对银染mRNA差异显示方法中的PCR参数进行优化以及凝胶电泳和加样方式进行改进.结果 经改进与优化的银染mRNA差异显示方法具有良好的重复性、稳定性,差异条带清晰易辨.结论 经改进和优化的银染mRNA差异显示方法具有良好的重复性、稳定性,可以代替传统的放射性同位素方法,应用于基因差异表达的研究.     

mRNA差异显示技术在胃肠肿瘤中的应用

胃肠肿瘤占我国恶性肿瘤半数以上,且容易复发和转移。许多研究表明,胃肠肿瘤的发生、转移涉及一系列基因（包括显性癌基因、错配修复基因及抑癌基因）的变化,其相互间存在复杂的转导、调控、抑制或激活的关系。mRNA差异显示技术是近年来检测基因表达的新方法,因其具有操作简单、适用范围广、敏感性高、原料要求少及可以同时比较多个样品等优点,目前在肿瘤研究领域已被广泛应用。通过分离并克隆胃肠肿瘤差异表达的基因,不仅有助于揭示胃肠肿瘤的发病机制,而且为临床诊断和治疗提供新的思路。该文就差异表达基因技术在胃肠肿瘤中的应用进展进行综述。     

维吾尔族和哈萨克族2型糖尿病患者白细胞mRNA差异显示比较分析

目的:寻找维吾尔族2型糖尿病人与维吾尔族正常人、哈萨克族2型糖尿病人与哈萨克族正常人以及2个民族2型糖尿病人之间外周血白细胞mRNA差异表达的基因。方法:应用荧光mRNA差异显示技术分析2个民族2型糖尿病人和正常人外周血白细胞,分离差异表达的基因片段后测序,测序结果提交GenBank进行同源性分析。差异条带经反向Northern blot验证。结果:发现2个民族糖尿病人与正常人之间均存在差异片段,但差异并不集中在某个民族的正常人或2型糖尿病人中,而是离散分布。筛选出的12个差异表达明显的cDNA片段高度同源于人类染色体上的某些区域,但50%以上功能目前尚不清楚。结论:发现的12个在维吾尔族和哈萨克族2型糖尿病人与正常人外周血白细胞中差异表达的基因可能与2型糖尿病有关。     

银染mRNA差异显示方法的建立

目的：建立银染mRNA差异显示方法，为差异表达基因片断的分离克隆奠定基础，方法：采用随机引物和锚定引物各1条，建立差异显示反转录聚合酶链式反应（DDRT－PCR）和银染方法，对DDRT－PCR过程中各实验影响因素进行优化，割取差异条带进行二次扩增。结果：当总RNA用量为0．2ug，引物浓度为0．6－1．0umol/L,dNTP浓度为200unmol/L,MgCl2浓度为1．6－2.0mmol/L，时，同时起始5个循环的退火温度为50℃，扩增效率最佳，特异性好，背景 干净，结论：DDRT－PCR方法简便，灵敏，高效，可用于分离差异表达基因。     

用mRNA差异显示技术初步筛选食管癌相关基因

用ｍＲＮＡ差异显示技术初步筛选食管癌相关基因王尧河１）张云汉１）高冬玲１）付淑莉１）王宏２）夏贞彪２）李春海２）罗庆良２）１）河南医科大学第一附属医院病理科，河南省肿瘤病理学重点实验室郑州４５００５２２）军事医学科学院北京１００８５０关键词食管肿瘤...     

应用mRNA差异显示技术筛选卵巢癌耐药相关基因

目的 筛选卵巢癌泰素耐药相关基因。方法 采用间歇诱导法建立了卵巢癌泰素耐药细胞株Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｌ－２５;采用ｍＲＮＡ ＤＤ比较Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｏｌ－２５对泰素耐药增加４４倍,同时对顺铂也产生了耐药。比较Ｓｋｏｖ３和Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｏｌ－２５的ｍＲＮＡ,获得２２个差异条带。对其中５个差异条带进行了ＤＮＡ序列测定,有３个与已知的基因高度同源,分别为ｔＰＡ、Ｋｉａａ０３７２和ＬＤＬＣ。２个为未知     

荧光标记mRNA差异显示技术分离肝纤维化相关基因

肝纤维化是各种慢性肝病共同的病理基础,是发展至肝硬化的关键环节。多种原因,如酒精、药物、某些化学物质和病毒,都可引起肝纤维化。目前研究发现,多种基因都参与肝纤维化的发生,随着研究的不断深入,参与肝纤维化发生的新基因在不断发现。本研究应用荧光mRNA差异显示技术查找肝纤维化发生的相关基因,从基因水平上阐明肝纤维化的发生机制。     

mRNA差异显示技术在紫杉醇诱导的表达基因克隆中的应用

作者应用ｍＲＮＡ差异显著，ＤＮＡ序列分析和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术，对紫杉醇处理人乳癌细胞诱导的表达基因进行ｃＤＮＡ克隆研究，１２个克隆有明确的ｍＲＮＡ水平表达改变，其中６个ｃＤＮＡ克隆核苷酸序列与已知的ｃＤＮＡ序列有较高的同源性，其余６个尚无同源性基因。克隆重Ｃ３Ｐ３与人腺苷基蛋氨酸合成酶基因序列同源性达９９％，紫杉醇诱导该酶基因转录活动和基因产物活性增高，提示ｍＲＮＡ差异显著技术筛选ｍＲＮＡ水