同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达的影响.方法:人脐静脉内皮细胞CRL-1730融合至90%分别加入不同浓度Hcy:空白组0 mmol/L、生理剂量组0.01 mmol/L、病理剂量组0.1 mmol/L、非毒性药理剂量组1.0 mmol/L.毒性药理剂量组5.0 mmol/L,分别刺激细胞6 h,用1.0 mmol/L Hcy刺激内皮细胞1、6、24 h;收集细胞提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Hcy对MCP-1 mRNA的表达情况.结果:不同浓度Hcy刺激CRL-1730 6 h,细胞内MCP-1 mRNA表达差异有统计学意义(P < 0.05).与生理剂量组相比,非毒性药理剂量组MCP-1 mRNA表达升高,毒性药理剂量组表达降低;1.0 mmol/L Hcy刺激CRL-1730不同时间后,MCP-1 mRNA表达随刺激时间延长呈逐渐降低的趋势,24 h表达量最低(P < 0.01).结论:Hcy可以影响人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA的表达,在动脉粥样硬化的发生过程中发挥重要的作用.     

他汀类药物干预对血管内皮细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的 探讨单核细胞与血管内皮细胞相互作用对基质金属蛋白酶1(MMP-1)表达的影响及阿托伐他汀对其干预作用,为预防动脉粥样硬化提供实验依据.方法 体外培养的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-304)及健康人外周血分离的单核细胞用于实验.用(0.6×104,1.2×105,6×105,1.2×106,6×106)单核细胞与1.2×106HUVEC-304共同培养24 h;1.2×106单核细胞与1.2×106HUVEC-304共同培养(6 h,12 h,24 h,48 h);1.2×106单核细胞与1.2×106HUVEC-304共同培养加(0.01、0.05、0.10、0.50、1.00 μmol/L)阿托伐他汀孵育24 h后,采用细胞酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定MMP-1表达水平.结果 单核细胞不分泌MMP-1,单核细胞刺激HUVEC-304分泌MMP-1显著增加(P＜0.05),单核细胞与HUVEC-304 1:1共同培养时HUVEC-304 MMP-1分泌达最高峰(P＜0.001).单核细胞与HUVEC-304 1:1共同培养,HUVEC-304 MMP-1分泌呈时间依赖性,但24 h与48 h MMP-1的含量差异无统计学意义(P＞0.05).0.01 μmol/L阿托伐他汀对HUVEC-304表达MMP-1无影响(P＞0.05),0.05、0.10、0.50、1.00 μmol/L的阿托伐他汀能明显抑制HUVEC-304表达MMP-1(P＜0.05),抑制效应呈浓度依赖性.结论 单核细胞与血管内皮细胞相互作用使MMP-1表达上调可能加速动脉粥样硬化的进程和斑块破裂.阿托伐他汀可抑制单核细胞刺激HUVEC-304表达MMP-1.     

匹伐他汀对人主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶9表达的影响

目的 观察匹伐他汀对入主动脉肿瘤坏死因子( TNF-α)刺激血管平滑肌细胞(VSMCs)基质金属蛋白酶9(M MP-9)表达的影响.方法 研究对象:血管平滑肌细胞取自择期开放手术腹主动脉瘤标本,经洗涤、剪切、消化、离心后培养,实验使用第三代细胞.实验分4组,除对照组外,各组分别加入不同浓度TNF-α(1×103、10×103和100×103 ng/L),孵育24h后,测定MMP-9蛋白和mRNA表达,实验重复3次.实验分为6组,各组均加入TNF-α( 100×103 ng/L),干预组分别加入不同浓度匹伐他汀(0.1 ×103、1×103、10×103、100×103和500×103 ng/L),共同孵育24h,测定各组MMP-9 mRNA和蛋白质表达,实验重复3次.免疫组织化学鉴定为VSMCs.通过蛋白质印迹法检测TNF-α对MMP-9蛋白表达的影响、反转录多聚酶链反应观察TNF-α对MMP-9 mRNA表达的影响以及不同浓度匹伐他汀的干预作用.结果 与对照组比较,不同浓度TNF-α(1×103、10×103和100×103 ng/L)分别使VSMCs、MMP-9蛋白表达约增加71％、113％和116％,mRNA表达分别约增加27％、42％和80％.TNF-α呈剂量依赖方式刺激VSMCs MMP-9 mRNA和蛋白表达,差异有统计学意义(P＜0.01)；与对照组相比,不同浓度的匹伐他汀(0.1×103、1 ×103、10×103、100×103和500×103 ng/L)分别使TNF-α( 100 ng/L)刺激VSMCs MMP-9蛋白表达降低10.0％、10.3％、22.1％、28.9％和36.7％,高浓度的拮抗作用显示出统计学差异(P＜0.01)；对mRNA表达也显现相似的效果,匹伐他汀各组mRNA分别减少26％、29％、32％、37％46％(P＜0.01).结论 MMP-9在动脉粥样硬化区域过度表达、活性增强,降解细胞外基质、破坏弹力纤维,可加重临床病情；局部TNF-α可刺激MMP-9分布增加有关.匹伐他汀具有抑制TNF-α上调MMP-9表达的作用,有利于延缓动脉粥样硬化进展、稳定斑块,减少以动脉硬化为基础的急性心血管事件的发生.     

高浓度Hcy致血管内皮损伤的机制

目的:探讨高浓度同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)CRL-1730一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达的影响.方法:用不同浓度Hcy(0～5.0 mmol/L)刺激HUVECCRL-1730,分别作用1～24 h,收集细胞,提取总RNA,逆转录得到cDNA,PCR扩增eNOS基因片段,2%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物,计算相对含量.结果:随着Hcy浓度增高HUVEC CRL-1730 eNOS mRNA表达逐渐降低;随着Hcy作用时间的延长,HUVEC CRL-1730 eNOS mRNA表达降低.病理浓度(0.1 mmol/L)及毒性药理浓度(5.0 mmol/L)Hcy与生理浓度Hcy(0.01 mmol/L)相比可显著降低HUVEC CRL-1730 eNOS mRNA的表达.结论:高浓度Hcy可能通过降低eNOS水平,减少NO合成,导致血管内皮功能损伤.     

血小板微颗粒对人脐静脉内皮细胞VEGF表达的影响

目的:探讨血小板微颗粒( PMPs)影响内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)释放的可能机制及其临床意义.方法:常规培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)CRL-1730,配制不同干预浓度的PMPs与HUVECs共培养不同时间,应用半定量逆转录聚合酶链反应技术测定内皮细胞VEGF、VEGFⅡ型受体Fh/KDR、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)以及胞外信号调节激酶(ERK)mRNA的表达水平.结果:(1)VEGF mRNA的表达水平在0mg/L组高于PMPs10、30、50、100 mg/L干预组(均P＜0.05),VEGFⅡ型受体Flt/KDR mRNA表达水平在0mg/L组低于PMPs10、30、50、100 mg/L(均P＜ 0.05).ERK mRNA表达水平在PMPs50mg/L组高于0mg/L组(P=0.004),PI3K mRNA表达水平在PMPs100 mg/L组高于0 mg/L组(P=0.004).(2)50 mg/L PMPs干预细胞,VEGF mRNA的表达水平在0h组高于4h、24 h组(P＜0.05),KDR mRNA的表达水平在0h组低于4h、24h组(均P＜0.05),PI3K mRNA的表达水平在0h组低于24 h组(P=0.004).结论:PMPs可能通过VEGF受体,激活其下游信号转导通路,发挥促进血管和血管发生为基础的生物学效应.     

褪黑素对高糖条件下牛主动脉内皮细胞NOS活性和iNOS mRNA表达的影响

目的 观察褪黑素(Melatonin, Mel)对高糖条件下牛主动脉内皮细胞一氧化氮合酶(nitric oxidase,NOS)活性及表达诱生型一氧化氮合酶(iNOS)基因的影响,以探讨Mel的血管内皮保护作用.方法 原代培养牛胸主动脉内皮细胞,取3～5代用于实验.实验分5组:A组为低糖对照组,培养液中葡萄糖浓度为5.5mmol/L;B组为高糖(33mmol/L)对照组;C组为高糖(33mmol/L)、亚生理浓度Mel组(10-13mol/L):D组为高糖(33mmol/L)、生理浓度Mel(10-9mol/L)组;E组为高糖、药理浓度Mel(10-5mol/L)组.体外孵育24h后, 比色法检测培养液中NOS活性,逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法检测内皮细胞iNOS mRNA表达.结果 A组NOS活性及iNOS mRNA表达均显著低于B组(均P＜0.01);B组与C组比较两者均无显著性差异(均P＞0.05);D组、E组NOS活性均显著低于B组(均P＜0.05);D组、E组iNOS mRNA表达均显著低于B组(均P＜0.01).结论 生理及药理浓度Mel对高糖条件下牛主动脉内皮细胞有一定的保护作用.     

雷公藤多苷对特应性皮炎患者细胞因子表达的影响

目的:探讨雷公藤多苷对特应性皮炎(AD)患者IL-2、IL-4、IFN-γ和IL-10细胞因子表达的影响.方法:RT-PCR方法测定与不同浓度雷公藤多苷共同培养AD患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-2、IL-4、IFN-γ和IL-10mRNA表达.结果:(1)IL-2 mRNA表达,高浓度组与对照组、低浓度组、中浓度组比较差别均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).中浓度组与对照组比较差别有统计学意义(P＜0.01).(2)IL-4 mRNA表达,对照组与高浓度组、中浓度组和低浓度组比较差别均有统计学意义(P＜0.01).(3)IFN-γmRNA表达,高浓度组与对照组、低浓度组和中浓度组,中浓度组与对照组之间差别有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).(4)IL-10mRNA表达,高浓度组与中浓度组之间差别无统计学意义(P＞0.05),其余各组差别均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论:雷公藤多苷对体外培养AD患者PBMC中IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-10 mRNA均有抑制作用,但在低浓度时对高表达的IL-4和IL-10有抑制作用,对低表达IL-2、IFN-γ抑制作用不显著.     

地塞米松对人羊膜上皮WISH细胞糖皮质激素受体α表达的影响

目的 观察地塞米松对体外培养人羊膜上皮WISH细胞糖皮质激素受体(GR)-α表达的调节.方法 将体外培养的WISH细胞分为不同浓度地塞米松(10-8、10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L)作用48 h组,和单一浓度地塞米松作用不同时间组(终浓度10-6mol/L,培养24、48、72 h).两组均设空白对照组.采用RT-PCR方法检测各组细胞中GR-a mRNA的表达.结果 在不同浓度地塞米松作用48 h后,10-4mol/L组细胞GRα mRNA表达强于空白组,其余各组细胞GR-α mRNA表达均弱于与空白组(P＜0.01).在地塞米松作用不同时间组,各亚组细胞GR-α mRNA表达与空白组相比,均明显减弱(P＜0.01).结论 低浓度地塞米松可下调WISH细胞中GR-α mRNA表达；高浓度地塞米松可上调GRα mRNA的表达.GR-α mRNA表达不随地塞米松作用时间的延长而下降.临床上常规剂量和疗程应用地塞米松促胎肺成熟时,不会导致促分娩发动作用.     

阿托伐他汀对大鼠缺血再灌注脑组织中CD40L和MMP-3的抑制作用

目的:探讨阿托伐他汀对脑缺血再灌注损伤的脑保护作用机制.方法:采用Zealonga线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型血管内皮细胞间黏附分子.将Wistar大鼠随机分组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、阿托伐他汀治疗组(AT组).采用免疫组织化学法检测大鼠脑组织CD40L、金属基质蛋白酶-3(MMP-3)的表达.结果:AT组脑组织CD40L、MMP-3表达及脑含水量和神经功能评分较IR组低(P＜0.01),而较Sham组明显增高(P＜0.01).结论:阿托伐他汀可以通过抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织CD40L、MMP-3表达,发挥脑保护作用.     

罗格列酮通过抑制肾组织MMP-9过表达而减轻糖尿病大鼠肾损害

目的观察罗格列酮是否抑制肾组织基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)过表达而减轻糖尿病大鼠肾损害.方法糖尿病模型建立1周后,大鼠灌胃给予罗格列酮(5 mg·kg-1·d-1)或生理氯化钠溶液.在第8周,检测尿白蛋白(ALB)、尿视黄醇结合蛋白(RBP)和尿MMP-9排泄率以及外周血血糖;以电镜观察肾脏病理变化,并以逆转录PCR检测肾脏MMP-9mRNA表达.结果糖尿病大鼠的血糖、尿ALB,RBP和MMP-9排泄水平均显著升高(P＜0.01);罗格列酮显著降低尿ALB,RBP和MMP-9排泄率(P＜0.01).糖尿病大鼠肾脏MMP-9mRNA表达明显上调(P＜0.01),而罗格列酮显著减低MMP-9mRNA表达(P＜0.01).罗格列酮还明显减轻糖尿病大鼠的肾脏病理改变.结论罗格列酮对大鼠糖尿病肾损害具有一定的保护作用,可能部分与其抑制肾脏MMP-9过表达有关,而不依赖其降血糖作用.     

基质金属蛋白酶抑制剂的临床应用评价

目的:评价基质金属蛋白酶抑制剂临床应用的疗效与安全性.方法:查阅国内外近期相关文献,就该类药物的研究进展和目前的临床实验作一评述.结果与结论:基质金属蛋白酶抑制剂对于多数癌症患者来说是易于耐受的,但需长期给药才能达到最佳治疗效果,长期治疗无耐药现象产生;它可抑制肿瘤的发展,使肿瘤保持稳定,并阻止肿瘤的播散和转移,但不能使肿瘤完全消退;与常规化疗联合应用疗效更佳.随着几种基质金属蛋白酶抑制剂药物3期临床实验的开展,其治疗方案将在临床实践中不断完善和改进,为恶性肿瘤的治疗提供一种更完美的、更为有效的治疗方法.     

Oxaprozin: A new hope in the modulation of matrix metalloproteinase 9 activity

Oxaprozin (4,5‐diphenyl‐2‐oxazolepropionic acid) is a non‐steroidal, analgesic and antipyretic propionic acid derivative, whose activity in treating inflammatory disorders is well known. The aim of this study was to investigate the ability of oxaprozin to modulate the activity of matrix metalloproteinase 9 (MMP‐9), a zinc‐dependent endopeptidase involved in a wide range of physiological and pathological events associated with extracellular matrix (ECM) remodelling. The interaction between oxaprozin and MMP‐9 was firstly investigated in silico by molecular docking and analysis with LIGPLOT software. Subsequently, the potential inhibitory activity of oxaprozin against MMP‐9 and the possible mechanism of the ligand–enzyme interaction were investigated in vitro. Taking into account the in silico findings, MMP‐9 can be considered a potential target of oxaprozin, which seems to be able to chelate the catalytic zinc ion through the nitrogen of the oxazole ring and the carboxylate moiety. Moreover, one of the phenyl rings interact with the S1′ inhibitor‐binding pocket through hydrophobic interaction. Gelatin zymography and enzymatic inhibition assay confirmed the potential role of oxaprozin as a competitive inhibitor of MMP‐9. These observations sound particularly interesting if we consider the pathological role of MMP‐9, especially evident in inflammatory conditions and cancer. This work may represent a starting point to improve the understanding of the role of oxaprozin, as well as its structural analogues, in modulating the MMP‐9 function.     

失巢凋亡在As斑块破裂中的作用及机制

失巢凋亡是一种特殊形式的细胞程序性死亡,不仅参与了机体组织自身平衡的调节,而且还参与了许多病理过程的发生,如动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)、急性冠脉综合征、心力衰竭、动脉瘤和肿瘤等。该文综述了失巢凋亡在As斑块不稳定性和破裂中的作用及机制。     

Pharmacodynamic considerations in the use of matrix metalloproteinase inhibitors in cancer treatment

Introduction: Matrix metalloproteinases (MMPs) are classified in the family of zinc-dependent endopeptidases, which can degrade various components of an extracellular matrix and a basement membrane. Studies have demonstrated that MMPs relate to the development of malignant tumors and induce angiogenesis, resulting in the invasion and metastasis of tumor cells. MMPs are highly expressed in malignant tumors and are related to cancer patients’ malignant phenotype and poor prognosis. Therefore, blocking the expression or activity of MMPs may be a promising strategy for cancer treatment.

Areas Covered: This study aimed to explain the MMP structure, regulatory mechanism, and carcinogenic effect; investigate the matrix metalloproteinase-inhibitors (MMPIs) that are currently used in clinical trials for cancer treatment; and summarize the trial results.

Expert Opinion: Currently, the results of clinical trials that have used MMPIs as anticancer agents are unsatisfactory. However, MMPs remain an attractive target for cancer treatment. For example, development of the specific peptide or antibodies in targeting the hemopexin domain of MMP-2 may be a new therapeutic direction. The design and development of MMPIs that have selectivity will be the primary focus in future studies.     

宫颈癌中细胞外基质金属蛋白酶诱导剂的表达及临床意义探讨

目的检测细胞外基质金属蛋白酶诱导剂(EMMPRIN)在宫颈癌中的表达及与金属蛋白酶-2(MMP-2),金属蛋白酶-9(MMP-9)的关系,以探讨EMMPRIN在宫颈癌浸润转移中的作用。方法应用免疫组化的方法检测110例早中期宫颈癌标本中EMMPRIN、MMP-2及MMP-9的表达,用卡方检验和相关分析了解其与临床病理参数的关系。结果 EMMPRIN、MMP-2及MMP-9表达于宫颈癌组织中。EMMPRIN、MMP-2及MMP-9在宫颈癌中的表达分别为70.9%(78例)、62.7%(69例)、及52.7%(58例)。EMMPRIN的阳性表达分别和世界妇产科联盟(FIGO)分期(P=0.001),病理学类型(P<0.001)、分化程度相关(P<0.001),呈现显著性相关;但与年龄、肿瘤大小、宫旁浸润、淋巴结转移、肿瘤复发以及生存率无显著性相关。EMMPRIN在宫颈癌中分布表达和MMP-2(P<0.001,相关系数r=0.583)及MMP-9(P<0.001,相关系数r=0.556)呈现正相关性。结论宫颈癌EMMPRIN的表达和MMP-2及MMP-9呈相关性,提示EMMPRIN在肿瘤的局部转移浸润及预后的相关性中起着举足轻重的作用。     

2型糖尿病大鼠肺组织基质金属蛋白酶－2、9及其抑制因子－1的表达变化

目的通过检测2型糖尿病大鼠肺组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶－9（MMP-9）及基质金属蛋白酶抑制因子－1（TIMP—1）的表达变化,探讨MMP－2、MMP－9及TIMP－1在糖尿病肺损伤中的作用。方法通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）的方法,建立2型糖尿病大鼠模型,采用光镜动态观察12周、24周时对照组、糖尿病组的大鼠肺组织的形态学改变,用MassoN三色染色观察肺组织胶原沉积情况,应用免疫组织化学方法检测2组大鼠肺组织MMP－2、MMP－9及TIMP－1的动态表达变化情况。结果糖尿病大鼠肺组织胶原含量明显增多,糖尿病大鼠肺组织MMP－2、MMP－9、TIMP－1表达增多,同时MMP－2／TIMP－1、MMP-9／TIMP－1比例也增加。随病情进展,上述变化更加明显。结论糖尿病大鼠出现了肺间质纤维化,MMP-2、9及TIMP－1表达增多及其比例紊乱参与了糖尿病肺组织病变的发生发展,可能是糖尿病肺纤维化发生的机制之一。     

Selective coating of cylindrical matrices with a central hole. II. An interpretation of the release process

A swellable perforated matrix was prepared and coated on one or more of its surfaces. Two drugs having different water solubility were chosen to load the matrix. To clarify the effect of the matrix swelling on the release process, the release rate was analysed according to the swelling area i.e., the surface area from which the drugs could be released. According to the experimental release data, the drug solubility usually predominated at the beginning and the matrix swelling at the end of the release process. When the interior hole was the only uncoated surface, pseudo-zero order kinetics were obtained when the drug solubility allows the control of the drug release by the matrix swelling.     

姜黄素对心脏压力过负荷大鼠主动脉细胞外基质的影响

目的：探讨姜黄素对心脏压力过负荷大鼠主动脉基质的影响。方法：腹主动脉部分结扎致大鼠心脏压力负荷增高，姜黄素灌胃3wk后测定大鼠单单位长度主动脉湿重／体重比值；Woessner法测主动脉胶原含量，酶谱半定量测定法测基质金属蛋白酶（MMP2）活性。结果：模型组主动脉显重／体重比值增加、组织胶原含量增高，主动脉MMP2活性下降，姜黄素灌胃3wk后降低主动脉湿重／体重比值，主动脉胶原含量降低，MMP2活性改变不明显。结论：姜黄素可逆转心脏压力过负荷大鼠主动脉的肥厚，其机制主要与抑制胶原合成有关。     

软骨寡聚基质蛋白与疾病关系的研究进展

软骨寡聚基质蛋白（COMP）为细胞外基质（ECM）中的非胶原糖蛋白，通过其不同结构域与组织中的多种ECM、细胞表面黏附分子、生长因子等相互作用，参与了多种疾病的发病过程，并发挥不同作用。本文就COMP的基本结构、功能，以及在骨关节系统病变、心血管系统疾病、组织纤维化和癌症等疾病发生过程中发挥的作用进行了综述。     

Evaluating the swelling,erosion, and compaction properties of cellulose ethers

Swelling, erosion, deformation, and consolidation properties can affect the performance of cellulose ethers, the most commonly used matrix former in hydrophilic sustained tablet formulations. The present study was designed to comparatively evaluate the swelling, erosion, compression, compaction, and relaxation properties of the cellulose ethers in a comprehensive study using standardised conditions. The interrelationship between various compressional models and the inherent deformation and consolidation properties of the polymers on the derived swelling and erosion parameters are consolidated. The impact of swelling (K_w) on erosion rates (K_E) and the inter-relationship between Heckel and Kawakita plasticity constants was also investigated. It is evident from the findings that the increases in both substitution and polymer chain length led to higher K_w, but a lower K_E; this was also true for all particle size fractions regardless of polymer grade. Smaller particle size and high substitution levels tend to increase the relative density of the matrix but reduce porosity, yield pressure (P_y), Kawakita plasticity parameter (b^?1) and elastic relaxation. Both K_W versus K_E (R²?=?0.949–0.980) and P_y versus. b^?1 correlations (R²?=?0.820–0.934) were reasonably linear with regards to increasing hydroxypropyl substitution and molecular size. Hence, it can be concluded that the combined knowledge of swelling and erosion kinetics in tandem with the in- and out-of-die compression findings can be used to select a specific polymer grade and further to develop and optimize formulations for oral controlled drug delivery applications.