肝细胞癌组织中Ras相关区域家族蛋白1A、肿瘤高甲基化基因1和p73基因的异常甲基化

目的探讨肝细胞癌中RAS相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、肿瘤高甲基化基因1(H IC1)和P73基因启动子异常甲基化状况及其与患者临床和病理因素之间的关系。方法收集肝细胞癌组织标本和对应的远癌组织标本各40例及2例健康人的肝组织标本;通过甲基化特异的聚合酶链反应方法检测这些标本中RASSF1A、H IC1和P73基因启动子区的甲基化状况。结果RASSF1A基因在癌和远癌组织中启动子区的甲基化率分别为90.0%和72.5%,癌组织中的甲基化率高于远癌组织(P<0.05)。H IC1基因在癌和远癌组织中的甲基化率分别为77.5%和70.0%。P73基因在癌组织中甲基化率为5.0%,在远癌组织没有发现甲基化。健康人肝组织中未发现任何上述基因的异常甲基化。远癌组织中H IC1基因甲基化患者的年龄[(48±14)岁]比无甲基化患者[(57±11)岁]小(T=2.049,P=0.047)。3个基因甲基化发生情况与患者性别、是否合并乙型肝炎、肝硬化、甲胎蛋白水平、肿瘤大小、有无包膜和门静脉癌栓以及TNM分期之间未发现有统计学相关性。结论肝细胞癌中RASSF1A和H IC1基因启动子的高甲基化是普遍现象,年轻肝细胞癌患者H IC1甲基化现象更常见。     

肝细胞癌中脆性组氨酸三联体基因的甲基化状况及其临床意义

目的 了解肝细胞癌（HCC）中脆性组氨酸三联体（FHIT）基因的甲基化状况及其临床病理意义。方法 应用甲基化特异性PCR（MSP）技术,检测45例HCC癌组织及其相应的癌旁组织、14例正常肝组织和4例HCC细胞株中FHIT基因的甲基化状况,并分析其与临床参数之间的关系。结果 FHIT基因在HCC癌组织、癌旁组织、正常肝组织及HCC细胞株中的甲基化率分别是71．1％、64．4％、14．3％和75．0％。FHIT基因异常甲基化组与非甲基化组在术后1年无瘤生存率比较中有统计学差异（P=0．0430）。结论 HCC中FHIT基因启动子甲基化是一种普遍的早期事件,可能预示着HCC患者预后较差。     

肝细胞癌中抑癌基因的甲基化现象

目的 了解肝细胞癌(HCC)中RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73基因的甲基化状况.方法 应用甲基化特异性PCR技术,检测40例HCC和4例正常肝组织中5种基因启动子区域的甲基化状况,并分析每种基因甲基化程度和临床参数之间的关系.结果 正常肝组织中无基因甲基化.癌组织中,RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73基因的甲基化率分别是:90%、77.5%、70%、30%和5%.相应癌旁组织中,RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73的甲基化率分别为77.5%、77.5%、62.5%、5%和0%.结论 HCC中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件.     

原发性肝癌RASSF1A基因启动子区甲基化及其临床意义

目的 探讨原发性肝癌中RASSF1A基因启动子的甲基化水平及其与临床病理特征的关系.方法 采用MSP测定100例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁组织、6株肝癌细胞株及10例正常肝组织RASSF1A基因甲基化状态,分析甲基化与肝癌临床病理特征的关系.采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理肝癌细胞株,用RT-PCR检测RASSF1A的重新表达情况.结果 100例肝癌组织中有69例(69％)存在RASSF1A基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有15例(15％),6株肝癌细胞株有4株(4/6)发生甲基化,而正常肝组织中无RASSF1A基因甲基化存在,RASSF1A基因异常甲基化在3种组织中的发生率差异有统计学意义(x2=67.75,P＜0.001).RASSF1A基因启动子甲基化与患者乙肝表面抗原及组织分化存在一定相关性.发生甲基化的4株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理后,全部重新恢复表达.结论 原发性肝癌存在RASSF1A基因CpG岛异常甲基化,并与患者乙肝表面抗原及组织分化密切相关.经甲基化抑制剂处理的肝癌细胞株又重新恢复表达,推测CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一.     

肝细胞癌患者血浆FHIT、SLIT2基因启动子甲基化的检测及意义

目的 探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者外周血浆中FHIT和SLIT2基因启动子甲基化状态及其临床意义.方法 应用甲基化特异性PCR(MSP)检测36例HCC患者血浆及10例健康对照者血浆中FHIT和SLIT2的基因启动子甲基化状态,并分析其与临床参数的关系.结果 36例 HCC患者外周血浆中FHIT和SLIT2的基因启动子甲基化率分别为50.0%(18/36)和27.8%(10/36);10例健康对照者血浆中均未检出基因甲基化改变.外周血浆中FHIT和SLIT2基因甲基化发生率与性别、年龄、HBV感染、肝硬化、肿瘤大小、甲胎蛋白(AFP)水平、肿瘤病理分级及临床分期、有无癌栓及是否为复发病例之间无统计学相关性.联合AFP和血浆中FHIT和SLIT2基因甲基化检测诊断HCC敏感性达86.1%,高于单独应用AFP检测的诊断敏感性(61.1%)(P＜0.05,χ2=5.79).结论 HCC患者外周血浆中可检测到FHIT、SLIT2基因甲基化改变,与临床参数无相关性.联合AFP及血浆DNA甲基化检测可提高HCC的诊断敏感性.     

肝细胞癌MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因甲基化研究

目的了解肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma, HCC)中MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因的甲基化状况。方法应用甲基化特异性PCR(methylation specificPCR,MSP)技术,检测40例HCC和2例正常肝组织中4种基因启动子区域的甲基化状况,并分析每种基因甲基化程度和临床参数之间的关系。结果正常肝组织中无基因甲基化。肝癌组织中,MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因的甲基化率分别是15%、77 5%、37 5%和30%。且87 5%的HCC中至少有一种基因甲基化。相应癌旁组织中,MGMT,DAPK,THBS1和RIZ1的甲基化率分别为5%、77 5%、27 5%和5%。RIZ1基因癌组织中的甲基化率明显高于癌旁组织(χ2 =8 658,P<0 05)。有2种基因甲基化的患者年龄较有1种基因甲基化组的年轻(t=2 389,P<0 05 )。有THBS1基因甲基化的患者年龄较无此基因甲基化组的年轻(t=3 047,P<0 05)。结论HCC中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件。     

肝细胞癌抗原基因在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的　探讨肝细胞癌抗原 (HCA)基因mRNA在肝细胞癌 (HCC)组织中的表达。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法对HCC患者的癌组织和相应癌旁组织及肝硬化和正常肝组织中的 4种HCAmRNA的表达进行检测 ;结合临床病理资料进行分析。　结果　 46例HCC患者中 ,HCA90、HCA51 9、HCA52 0、HCA587基因mRNA阳性率分别是 65 2 %、76 1 %、45 7%和 32 6 % ;至少表达一种HCA者达 82 6 % ;而癌旁组织中仅HCA51 9基因有 6 5 %mRNA表达为阳性。 1 0例肝硬化和正常肝组织中 4种HCA基因均不表达。 4种HCA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性 (P >0 0 5)。在部分AFP正常的患者中存在HCA基因的表达。　结论　HCA基因在HCC中呈高比例、高特异性表达 ,为HCC免疫治疗提供了新的潜在靶位     

肝癌抑癌基因GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A异常甲基化检测及其临床意义

目的 研究肝细胞癌中的GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A 4种基因启动子区域甲基化状态的表达差异,并探讨其在肝癌发生中的作用.方法运用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation-specific PCR,MSP）技术,分别检测35例肝癌组织及其相应的癌旁组织和20例正常对照肝组织中4种候选抑癌基因（GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A）启动子区域的甲基化表达情况,并结合临床病理资料进行分析.结果在肝细胞癌、癌旁及正常对照肝组织中检测到GSTP1基因启动子区的甲基化率分别是57.1 （20/35）,25.7％（9/35）,0％ （0/20）;p16基因启动子区甲基化率分别是54.3％ （19/35）,37.1％ （13/35）,0％ （0/20）; RIZ1基因启动子区甲基化率分别是68.6％ （24/35）,14.3％ （5/35）,0％ （0/20）;RASSF1A基因启动子区甲基化率分别是88.6％ （31/35）,74.3％（26/35）,10％ （2/20）,其中癌组织中GSTP1和RIZ1基因甲基化率均显著高于相应的癌旁组（P＜0.01）和正常对照肝组织（P＜0.01）,癌组织中p16、RASSF1A启动子区甲基化率高于癌旁组织,但二者无统计学意义（P＞0.05）,但明显高于正常对照肝组织（P＜ 0.01）.在肝癌组织中肿瘤有包膜侵犯者GSTP1基因甲基化阳性率明显高于无包膜侵犯者（P＜0.05）;乙肝表面抗原（HbsAg）阳性的肝癌患者p16基因甲基化阳性的比率要显著高于HbsAg阴性者（P＜0.05）;而RIZ1、RASSF1A与临床病理资料间均没有统计学意义（P＞ 0.05）.结论RIZ1、GSTP1基因甲基化状态具有肝癌特异性,或可作为临床肝癌辅助诊断的分子标记物.慢性HBV感染可能是导致p16甲基化而失活的原因,GSTP1基因启动子甲基化可能与肝细胞癌的侵袭性有关.     

肝细胞癌中SLIT2基因甲基化状态研究

目的 SLIT2基因甲基化已在多种肿瘤中被发现,我们拟了解肝细胞癌(HCC)中SLIT2基因的甲基化状态及临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测50例HCC癌组织及相应的癌旁组织,4个HCC细胞系, 8例肝血管瘤旁和4例供肝组织,了解SLIT2基因在上述组织中的甲基化状态,并分析其与临床资料间的相关性。结果 8例肝血管瘤旁和4例供肝组织均未发生甲基化,4个HCC细胞系有3个出现甲基化。50例HCC癌组织及其相应的癌旁组织中, 分别检测到39例(78％)和26例(52％)发生甲基化;癌组织与癌旁组织甲基化率比较,有显著统计学差异(P=0．006);TNM Ⅲ期组SLIT2甲基化率高于TNM Ⅰ／Ⅱ期组(P=0．035);甲基化阳性组的半年无瘤生存率低于阴性组,但差异无统计学意义 (P=0．208)。结论 SLIT2基因甲基化是HCC中的频发事件,可能参与HCC的发展。     

基因启动区异常甲基化导致肝癌中RASSF1A基因外失活的研究

目的观察肝癌组织中的抑癌基因RASSF1A的表达情况和由于启动区异常甲基化导致其基因外失活的状况，并分析DNA异常甲基化与肝癌临床相关因素之间的关系。方法利用RT—PCR和MS-PCR的方法，结合DNA测序和Taq I酶切消化法，分析了24例肝癌标本、4株肝癌细胞株（SMMC7721、HepG2、BEL7402和BEL7703）中RASSF1A基因的表达情况，以及其基因启动区异常甲基化的情况。采用甲基化抑制剂5＇-Aza—CdR处理肝癌细胞株，观察RASSF1A重新表达的情况。结果66．7％的肝癌组织未表达RASSF1A；4株肝癌细胞株中仅SMMC7721检测到RASSF1A的表达。83．3％的肝癌组织及4株肝癌细胞株都发生了异常甲基化，而正常肝组织和正常肝细胞株（L02）中却未发现甲基化。甲基化与肝硬化、乙肝表面抗原、肿瘤分化程度及血管浸润和远处转移有相关性。原来RASSF1A表达失活的3株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5＇-Aza—CdR处理后，又重新恢复了表达。结论基因转录启动区的异常甲基化是导致肝癌中RASSF1A表达失活的主要原因。检测RASSF1A启动区异常甲基化可作为一种有潜在应用价值的生物分子指标来用于肝癌的早期发现和早期诊断，以及预后的判断。     

RASSF1A promoter hypermethylatlon in plasma and tumor tissue of patients with hepatocellular carcinoma

目的 探讨肝细胞癌( hepatocellular carcimona,HCC)患者外周血浆和肿瘤组织中RASSF1A基因甲基化及其临床意义.方法 应用甲基化特异性PCR(MSP)检测36例HCC患者血浆及其对应癌组织中的RASSF 1A基因启动子甲基化状态,并分析其与临床参数的关系.结果 癌组织和外周血浆中RASSF1A基因甲基化率分别为83.3％ (30/36)和61.1％ (22/36),二者相关系数为r=0.561(P =0.0004).外周血浆和肿瘤组织中RASSF1A基因甲基化率与患者性别、年龄、HBV/HCV感染、肝硬化、肿瘤大小、AFP水平、肿瘤病理分级及临床分期、有无癌栓及是否为复发病例等之间无统计学相关性.以AFP≥400 ug/L为阳性,本组病例AFP阳性率为44.4％;以AFP≥20 ug/L为阳性,本组病例阳性率为69.4％.全部患者中,血浆RASSF1A基因甲基化检出率为61.1％,AFP联合血浆RASSF1A基因甲基化检测HCC的检出率为75％ (27/36).结论 HCC患者血浆和肿瘤组织中RASSF1A基因甲基化率有良好的一致性.血浆DNA甲基化联合AFP检测对HCC早期诊断具有一定意义.癌组织和血浆中基因甲基化改变与各临床参数无相关性.     

膀胱移行细胞癌患者RASSF1A蛋白表达和启动子区甲基化的研究

目的:探讨RASSFlA(RAS association domain family1A)蛋白表达水平与启动子甲基化的关系.方法:应用免疫印迹技术(western-blot)检测10例正常膀胱组织和23例膀胱移行细胞癌(Badder transitional cell carcinoma,BTCC)组织中RASSFlA蛋白表达水平;用甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)方法检测正常膀胱组织,BTCC组织中RASSF1A基因启动子CPG岛甲基化状态.结果:RASSF1A蛋白在正常膀胱组织中全部表达,在BTCC组织中表达率为30.4%(7/23),二组间表达差异有统计学意义(P＜0.05),但各肿瘤分期、病理分级间的表达差异无统计学意义(P＞0.05).在正常膀胱组织中,RASSF1A基因启动子未发生甲基化;在BTCC组织中,RASSF1A基因启动子甲基化频率为60.9%(14/23),二组间表达差异有统计学意义(P＜0.05).在14份启动子异常甲基化的BTCC标本中,13份同时伴有RASSFIA蛋白表达缺失或下调,两者存在明显相关性(P＜0.05).结论:RASSFlA基因启动子在BTCC组织中发生异常甲基化,使RASSF1A蛋白表达缺失,推测RASSFIA基因启动子CPG岛异常甲基化导致RASSF1A基因失活从而引起肿瘤的发生,而与肿瘤的进展可能无关.     

A new classification for hepatocellular carcinoma with hepatic vein tumor thrombus

BackgroundHepatic vein tumor thrombus (HVTT) is a significant poor risk factor for survival outcomes in hepatocellular carcinoma (HCC) patients. Currently, the widely used international staging systems for HCC are not refined enough to evaluate prognosis for these patients. A new classification for macroscopic HVTT was established, aiming to better predict prognosis.MethodsThis study included 437 consecutive HCC patients with HVTT who underwent different treatments. Overall survival (OS) and time-dependent receiver operating characteristic (ROC) curve area analysis were used to determine the prognostic capacities of the new classification when compared with the different currently used staging systems.ResultsThe new HVTT classification was defined as: type I, tumor thrombosis involving hepatic vein (HV), including microvascular invasion; type II, tumor thrombosis involving the retrohepatic segment of inferior vena cava; and type III, tumor thrombosis involving the supradiaphragmatic segment of inferior vena cava. The numbers (percentages) of patients with types I, II, and III HVTT in the new classification were 146 (33.4%), 143 (32.7%), and 148 (33.9%), respectively. The 1-, 2-, and 3-year OS rates for types I to III HVTT were 79.5%, 58.6%, and 29.1%; 54.8%, 23.3%, and 13.8%; and 24.0%, 10.0%, and 2.1%, respectively. The time-dependent-ROC curve area analysis demonstrated that the predicting capacity of the new HVTT classification was significantly better than any other staging systems.ConclusionsA new HVTT classification was established to predict prognosis of HCC patients with HVTT who underwent different treatments. This classification was superior to, and it may serve as a supplement to, the commonly used staging systems.     

RASSF1A在胃癌中的表达及其甲基化状态的研究

目的：研究胃癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化及其蛋白表达情况,分析两者之间的关系及其在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化SP法检测39例胃癌组织,39例相应癌旁组织及30例对照组织中RASSF1A蛋白表达,应用甲基化特异性PCR法检测上述组织RASSF1A启动子CpG岛甲基化状态。结果：1）胃癌组RASSF1A蛋白表达阳性率53.8%明显低于癌旁组97.4%及正常对照组100%（P〈0.05）;2）胃癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化率为64.1%,显著高于癌旁组织甲基化率7.7%及对照组0%（P〈0.05）;3）在胃癌组织中,甲基化组RASSF1A蛋白表达明显低于非甲基化组（P〈0.05）。结论：胃癌组织RASSF1A蛋白表达缺失或低下,与其启动子甲基化程度增高显著相关,RASSF1A启动子甲基化在胃癌发生、发展中起一定作用。     

An unusual case of jaundice: Biliary tumor thrombus in fibrolamellar hepatocellular carcinoma

BackgroundFibrolamellar hepatocellular carcinoma (FL-HCC) is a rare and unique variant of hepatocellular carcinoma (HCC) whose presentation remains inadequately described. We present a resectable case of FL-HCC which involved tumor thrombus of the common bile duct.PresentationA 27 year-old male presenting with jaundice, abdominal pain, vomiting, hepatic dysfunction and hyperbilirubinemia was found to have a large liver mass and lymphadenopathy on preoperative imaging. A right hepatectomy with perihepatic lymph node dissection and cholecystectomy was performed. Intraoperative cholangiogram demonstrated common bile duct (CBD) obstruction. CBD exploration revealed biliary tumor thrombus relieved with biliary thrombectomy.DiscussionFL-HCC can initially present with invading obstructing biliary tumor thrombus of the CBD causing jaundice.ConclusionPreoperative surgical approach should consider CBD exploration on an individual basis for underlying obstructive biliary tumor thrombus.     

Aberrant promoter hypermethylation in biliary tract carcinoma

Biliary tract carcinoma is a relatively rare tumor with a poor survival rate. The molecular biological mechanisms underlying the development of biliary tract carcinomas are not well understood. Promoter methylation is an important epigenetic mechanism for suppressing tumor-suppressor gene activity. There is limited information regarding the abnormal methylation of cancer-related genes in biliary tract carcinoma; however, a few insights have been obtained into the role of epigenetic silencing in the progression of biliary tract carcinoma. In this review, we summarize recent data on gene silencing by promoter hypermethylation, and we discuss the implications for biliary tract carcinomas.     

Importance of tumor/stroma interactions in prognosis of hepatocellular carcinoma

Hepatocellular carcinoma (HCC) is the third largest cause of cancer deaths worldwide. It seems to be needed to find new ways to address the mechanisms involved in the progression of HCC, which can provide a prognostic evaluation and new therapeutic targets. Several studies have established that crosstalk between tumor cells and the microenvironment plays a key role in tumor progression and metastasis. In this context, the work of Zhu et al. contributes to assess interactions between tumor and microenvironment associated-macrophages promoting tumor progression and metastasis. Indeed, they concluded that the interplay of osteopontin (OPN) and peritumoral macrophages (PTMs) represents a new insight into tumor progression and therapeutic targets for HCC. Historically, tumor-infiltrating leukocytes have been considered to be manifestations of an intrinsic defensive mechanism against developing tumors, however, now, it is know that that leukocytes infiltration can promote tumor phenotypes, such as angiogenesis, growth, and invasion. Characterization of functional heterogeneity of stromal cell components, and specifically the analysis of stromal fibroblasts can provide a new focus on mechanisms involved in the progression of HCC. All of this opens the possibility to provide prognostic information for HCC based on biological parameters derived from peritumoral status from tumors.