apoAⅠ启动子-93 bp～-63 bp片段及-75 bp位点突变对基因转录调控作用的研究

目的：研究载脂蛋白A Ⅰ（apoA Ⅰ）启动子区域-93 bp～-63 bp对基因转录活性的影响,探讨-75 bp位点G→A置换在基因转录中的作用.方法：在人类基因组数据库中截取并下载apoAⅠ基因启动子序列,对照基因图谱人工合成apoAⅠ启动子区域-93 bp～-63 bp片段,-75 bp位点分别为突变型（A）或野生型（G）,进行生物素标记.培养HepG2细胞,提取核蛋白混合物.将核蛋白与标记好的两条DNA链结合,进行电泳迁移率（EMSA）实验,观察两者结合情况.结果：apoAⅠ启动子-93 bp～-63 bp区域可与某种特异性核蛋白转录因子结合.-75 bp位点为G等位基因的探针与含A的探针相比,核蛋白的结合明显增多.同时,竞争抑制实验表明,含G的探针与核蛋白的亲和力高于含A的探针.结论：apoAⅠ基因启动子-93 bp～-63 bp区域通过与核蛋白转录因子的结合参与基因调控,-75 bp位点G→A置换降低与转录因子的亲和力,降低apoAⅠ转录活性从而影响基因表达.     

基质金属蛋白酶基因多态性与冠心病的关系

目的：探讨基质金属蛋白酶基因MMP-3、MMP-9和MMP-12启动子基因多态性与冠心病及其血浆水平的关系.方法：对经冠状动脉（冠脉）造影证实的急性心肌梗死患者59例（AMI组）、稳定性心绞痛患者58例（SAP组）和99例经冠脉造影证实无冠状病变的对照组进行了研究.ELISA法检测血浆MMPs的水平,多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性法（PCR-RFLP法）分析MMP-3、MMP-9、MMP-12启动子的3个部位基因型变异状况和等位基因分布频率.结果：AMI组和SAP组血浆MMP-9水平明显高于对照组（P＜0.05）.各组基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义（P＞0.05）.未检出MMP-12启动子的-82A/G变异的基因型.不同基因型之间血浆MMPs的水平差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：MMP-3和MMP-9启动子区域两个位点的基因变异不影响其血浆水平的表达.未发现天津地区MMP-12的-82位A/G变异的基因多态现象,血浆MMP-9水平升高与冠心病发病有关.     

ABCA1基因启动子区域VNTR-ZNF位点多态性及与血浆HDL水平的关系

目的:探讨腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)基因启动子区域VNTR-ZNF位点多态性的分布频率及其与血浆高密度脂蛋白(HDL)水平的关系。方法:随机抽取166例冠心病患者和99例健康对照者,采用PCR扩增法和聚丙烯酰胺凝胶电泳对VNTR-ZNF位点ACCCC插入和缺失进行检测。结果:被检总人群ABCA1基因VNTR-ZNF位点等位基因频率分别为插入型为31.3%(166/530),缺失型68.7%(364/530);基因型频率分别为插入型6.4%(17/265),缺失型43.8%(116/265),插入/缺失型49.8%(132/265),2组间基因型频率和等位基因频率比较差异无统计学意义,血浆HDL及HDL亚组水平在3种基因型间差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论:天津地区ABCA1基因的VNTR-ZNF位点基因型分布与欧洲地区不同,此基因变异对血浆HDL水平无明显影响。     

肝脂酶基因多态性与甘油三酯的相关性研究

目的探讨肝脂酶(LIPC)基因rs3829461多态性与甘油三酯(TG)之间的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测160例高甘油三酯(HTG)组和318例TG水平正常对照组LIPCrs3829461基因型,并探讨其与血脂水平的关系。结果 (1)HTG组该位点与对照组的基因分布频率分别为81.88%、17.50%、0.67%,对照组分别为82.39%、16.98%、0.63%,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)HTG组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白水平低于对照组,而总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、TG、载脂蛋白(apo)A1、apoB明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)按性别分层,HTG组男性CC型HDL-C明显低于对照组,TC、TG、apoA1、apoB明显高于对照组;HTG组男性CT-C+TT型TC、TG高于对照组;HTG组女性CC型HDL-C低于对照组,TC、TG、LDL-C、apoB高于对照组;HTG组女性CT+TT型HDL-C低于对照组,TC、TG、apoB高于对照组。多因素Logistic回归分析LIPCrs3829461基因多态性不是高TG水平的危险因素。结论 LIPCrs3829461基因多态性与高TG水平无相关性。     

雌激素对载脂蛋白AⅠ基因启动子不同区域转录活性的影响

目的:探讨雌激素对载脂蛋白(Apo)AⅠ基因启动子不同区域转录调节活性的影响。方法:利用含荧光素酶报告基因的表达载体pGL2构建携带ApoAⅠ基因启动子不同区域片段的重组质粒和同时携带ApoCⅢ/AⅣ基因片段的重组质粒。阳离子脂质体法将重组质粒与pRL-null内参质粒共转染HepG2细胞,加入10μmol/L雌激素刺激24h检测细胞荧光素酶报告基因的荧光强度,以反映ApoAⅠ的转录水平。结果:pGL2/-256AⅠ,pGL2/-2500AⅠ,pGL2/-256AⅠCⅢAⅣ及pGL2/-2500AⅠCⅢAⅣ转染后雌激素组荧光素酶相对活性明显高于对照组(P<0.05);而pGL2/-41AⅠ及pGL2/-41AⅠCⅢAⅣ质粒转染后雌激素组与对照组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ApoAⅠ启动子-256~-41区域可能包含与雌激素作用相关的反应元件,受雌激素刺激后转录活性增强。     

血红素加氧酶-1启动子基因多态性与高血压的关系

目的:探讨血红素加氧酶-1(HO-1)基因启动子区域的(GT)n双核苷酸重复序列多态性与天津地区原发性高血压(EH)的关系及与血浆炎症因子、胆红素水平的关联性.方法:选择102例EH患者(EH组)及134例正常对照组作为研究对象,采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增染色体DNA中含HO-1基因相应的DNA片段,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术分析基因型.自动生化分析仪分析血浆胆红素水平.酶联免疫吸附(ELISA)法分析血清白细胞介素(IL)-10及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平.结果:EH组血浆胆红素、TNF-α、IL-10水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).HO-1重复≥32次长等位基因在EH组的分布明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).HO-1长等位基因携带者血浆胆红素水平低于短等位基因携带者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HO-1基因启动子区域的(GT)n双核苷酸重复多态性可能与EH人群的易感性有关.HO-1长等位基因携带者患高血压的危险性增大.     

碱提类肝素组分Ⅱ对肝脂酶的影响

应用大鼠离体肝脏灌流技术观察类肝素组分Ⅱ(C_2)对肝灌流液中肝脂酶(HL)活性的影响。C_2具有较强的释放HL的作用,可使肝灌流液中HL活性升高。在一定剂量范围内,该作用与其剂量呈正相关,且与其抗凝作用并不平行。     

乙型肝炎病毒C基因启动子区及前C区突变与乙型肝炎病情的关系

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)C基因启动子(BCP)双突变及前C区nt1896位点突变与乙型肝炎临床表现及e抗原(HBeAg)表型的关系。方法采用巢式聚合酶链反应(PCR)扩增nt1660~1935的HBVDNA片段及PCR产物直接测序的方法检测BCP区及前C区基因的变异情况。结果130例经证实为HBVDNA阳性的急慢性肝炎患者中共有75例BCP区nt1762、nt1764双突变,HBeAg阳性组BCP突变者32例(58.2%),而HBeAg阴性组43例(57.3%)。检出前C区nt1896突变者20例,其中慢性肝炎10例(12.8%)、重型肝炎2例(25.0%)、肝硬化8例(22.2%);nt1896突变者在HBeAg阳性组3例(5.5%),HBeAg阴性组17例(22.7%),两组比较差异有统计学意义。nt1896突变组丙氨酸转氨酶(ALT)及HBV DNA水平较无突变组差异均有统计学意义。结论BCP双突变及前C nt1896均与肝炎的慢性化、重型化及肝硬化的发生密切相关,前者对HBeAg的表达及HBV-DNA水平并无明显影响;后者影响HBeAg的表达,并且增强病毒复制水平。     

河南地区汉族人群药物代谢酶CYP2C19，NAT2和TPMT基因多态性分析(英文)

目的：了解细胞色素P450(cytochromes P450,CYP)2C19,N-乙酰基转移酶2(arylamine N- acetyltransferase 2,NAT2)和硫嘌呤甲基转移酶(thiopurine S-methyltransferase,TPMT)基因常见的遗传多态性在河南地区汉族人群中的分布及其频率。方法：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)对210名河南地区汉族人群的CYP2C19突变基因(*2和*3)、NAT2突变基因(*6和*7)和TPMT突变基因(*3A,*3B和*3C)进行检测。用聚合酶链反应-等位基因特异性扩增(PCR-ASA)对NAT2突变基因(*5)和TPMT突变基因(*2)进行检测。结果：CYP2C19*2和*3等位基因分布频率分别为34．76%和6．4%,同时携带2个等位突变基因的慢基因型频率占14．8%。NAT2*4(wt),*5(341C),*6(590A)和*7(857A)等位基因分布频率分别为59．1%,4．1%,26．4%和9．5%,慢基因型分布频率占19．5%。TPMT*3C等位基因分布频率为1．2%,未发现TPMT*2,TPMT*3A或TPMT*3B。结论：CYP2C19,NAT2和TPMT基因常见的遗传多态性在汉族人群中的分布及其频率与白人存在明显差异,这将有助于我国汉族人群临床药动学研究和给药剂量的确定。     

β2-AR27位点基因多态性对气道高反应性的保护性作用研究

目的 探讨β2-AR 27位点基因多态性与哮喘的关系及其对气道高反应性的保护作用.方法 采用多聚酶链反应（PCR）-等位基因扩增法,对149例具有气道高反应性的咳嗽变异型哮喘患者进行β2-AR 27位点基因多态性分析检测,同时追踪2年,观察其发展成典型哮喘的比率,并与90名健康对照者进行比较.结果 （1）中国南方汉族人群β2-AR 27位点基因多态性分布以杂合子所占比例较高（57%）,突变型纯合子比率较小（20%）;（2）哮喘组β2-AR 27位点谷氨酸/谷氨酸基因型频率,明显低于健康对照组（9%VS20%）,OR为0.4（P＜0.05）,95%CI为（0.2～0.9）,谷氨酸等位基因频率与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;（3）β2-AR 27位点基因多态性在典型哮喘组谷氨酸/谷氨酸基因型分布频率明显低于哮喘稳定组（P＜0.05）.结论 中国南方汉族人群中27位点基因多态性与哮喘关联,Glu27可能具有气道保护作用.     

人破骨细胞分化因子基因启动子报告载体的构建

目的：构建能够报告人破骨细胞分化因子（ODF）基因启动子活性的表达载体。方法：以人基因组DNA为模板，PCR扩增含有ODF基因启动子的2段序列（-2433-1243 bp和-1262-＋100bp）。通过T-A克隆将这2个序列片段分别连接到pGEM-TEasy克隆载体上。利用特定的限制性内切酶位点。将这2个序列片段酶切后进行正确拼接并定向克隆到不含启动子的pEGFP-1报告基因载体上。将该重组质粒pEGFP-1-ODF瞬时转染成骨细胞系UMR106．检测其能否在ODF基因启动子（-2358-＋100bp）的调控下表达报告基因增强型绿色荧光蛋白（EGFP）。结果：pEGFP-1-ODF经酶切鉴定和序列分析证实与设计完全一致。细胞瞬时转染结果表明，pEGFP-1-ODF转染的UMR106能表达EGFP。结论：人ODF基因启动子报告载体的成功构建。为进一步研究ODF基因表达转录水平的调控机制奠定了基础。     

甲状腺乳头状癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化与临床病理学的关系

目的：探讨甲状腺乳头状癌及癌旁组织中RASSF1A基因启动子甲基化改变的特点与临床特征的关系。方法：从甲状腺乳头状癌及癌旁组织中提取基因组DNA，采用甲基化特异性PCR检测RASSF1A基因启动子甲基化情况。结果：（1）甲状腺乳头状癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化的发生率为55．9％（19／34），癌旁组织中RASSF1A基因启动子的甲基化的发生率为23．5％（8／34），癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化显著高于癌旁组织（P〈0．05）。（2）有淋巴结转移的甲状腺乳头状癌组织RASSF1A基因启动子的甲基化的发生率为77．8％（14／18），高于无淋巴结转移组的31．3％（5，16），差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）临床Ⅱ～Ⅲ期甲状腺乳头状癌患者中RASSF1A基因启动子的甲基化发生率为88．9％（8／9），高于I期的44．0％（11／25），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：甲状腺乳头状癌组织中存在RASSF1A基因启动子区的异常甲基化，甲基化可能与甲状腺乳头状癌发生发展过程有关。     

Graves病白细胞减少与CTLA-4基因多态性的相关性

目的：探讨天津地区汉族人Graves病（GD）合并白细胞减少，与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-H4（CTLA-4）基因外显子1第49位点A／G和启动子-318位点C／T二态性的相关性。方法：运用PCR—RFLP技术分析40例GD白细胞减少患者、56例GD白细胞正常患者及60例正常人CTLA-4基因、外显子1第49位点和启动子-318位点基因型．计算并比较各组基因型和等位基因频率。结果：GD组第1外显子第49位点基因型GG和等位基因G的频率明显高于正常对照组，3组人群的CTLA-4基因启动子-318位点的基因型与等位基因的分布差别无统计学意义。GD白细胞减少组与GD白细胞正常组之间基因型、等位基因的分布差别无统计学意义。结论：CTLA-4基因外显子1G49可能是天津地区汉族人Graves病的易感基因，而其与启动子-318位点可能不是天津地区汉族人GD合并白细胞减少的易感基因。     

N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与宁夏回族原发性高血压的关系

目的:探讨N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)C677T位点突变与宁夏回族人群原发性高血压(EH)之间的关系。方法:收集原发性高血压病患者(EH组)146例,健康体检正常血压者(NT组)112例,抽外周静脉血提取DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度(PCR-RFLP)多态性技术检测MTHFR基因多态性。结果:EH组和NT组CC、CT和TT基因型总体分布频率差异有统计学意义(P<0.05),EH组TT基因型频率及T等位基因频率均高于NT组,差异有统计学意义(P<0.05)。CC基因型组和CT+TT基因型组舒张压差异无统计学意义(P>0.05),但收缩压、脉压和平均动脉压CT+TT基因型组高于CC基因型组,差异有统计学意义(P<0.05)。二元逐步Logistic回归结果显示,CT+TT基因型,女性,BMI、TG、BUN增高为EH的危险因素,GLU为保护因素。结论:MTHFR基因C677T多态性可能与宁夏回族EH发病有关,T等位基因有可能是宁夏回族人群EH的易感基因。     

一种新的脂蛋白脂肪酶基因突变(C562→T)

目的:筛查国人(天津地区)脂蛋白脂肪酶基因突变情况,并探讨其对血脂水平的影响。方法:利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术,对386例患者(血脂正常组278例,血脂异常组108例)的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查,对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。结果:在386例样本中,检出1例外显子3C562→T(Leu103→Leu)同义突变杂合子。结论:新LPL突变(C562→T)的发现,对进一步阐述LPL结构与功能的关系有重要的参考价值。     

国人ACE基因插入/缺失多态性与冠心病关联性Meta分析

目的:对国人血管紧张素1转换酶(ACE)基因内含子16插入(I)/缺失(D)多态性与冠心病的关联性进行Meta分析。方法:以冠心病组和健康对照组基因型分布的OR值为统计量,全面检索到相关文献并剔除不符合要求的文献,排除发表偏倚的影响。应用REVMAN3.1软件对各研究结果进行一致性检验和采用相应的数学模型进行数据合并。结果:冠心病组631例,健康对照组505例,数据合并结果DD/(ID+II)OR(95％可信区间)为2.72(2.08,3.55),P<0.01。结论:国人ACE/ID多态性的DD基因型与冠心病危险性增加有关联。     

Identification of the Promoter of Human Carbonyl Reductase 3 (<Emphasis Type="BoldItalic">CBR3</Emphasis>) and Impact of Common Promoter Polymorphisms on Hepatic <Emphasis Type="BoldItalic">CBR3</Emphasis> mRNA Expression

Purpose  Recent studies suggest that polymorphisms in human carbonyl reductase 3 (CBR3) influence the pharmacodynamics of doxorubicin. First, we sought to identify the promoter of CBR3. Next, we examined whether two CBR3 promoter polymorphisms (CBR3 -725T>C and CBR3 -326T>A) dictate promoter activity and hepatic CBR3 mRNA levels. Methods  The promoter activities of CBR3 reporter constructs were investigated in HepG2 and MCF-7 cells. CBR3 mRNA levels were documented in 95 liver samples from white (n = 62) and black (n = 33) donors. Genotype-phenotype correlation analyses were used to determine the impact of the CBR3 -725T>C and CBR3 -326T>A polymorphisms on hepatic CBR3 mRNA levels. Results  We identified the promoter of human CBR3. Liver samples from black donors showed higher relative CBR3 mRNA levels than samples from whites (CBR3 mRNA_blacks = 3.0 ± 3.1 relative fold vs. CBR3 mRNA_whites = 1.6 ± 1.5 relative fold, p = 0.021). The variant -725C and -326A alleles did not modify the gene reporter activities of engineered CBR3 promoter constructs. In line, hepatic CBR3 mRNA levels were not associated with CBR3 -725T>C and CBR3 -326T>A genotype status. Conclusions  These studies provide the first insights into the regulation and variable hepatic expression of polymorphic CBR3.