癌光啉(PSD-007)——激光照射体外净化白血病细胞的实验研究

研究用铜蒸汽激光照射癌光啉（ＰＳＤ－００７）介导的光敏作用，对白血病细胞系（ＨＬ－６０）的杀伤敏感性表明：白血病细胞对光敏作用敏感，在ＰＳＤ－００７１０μｇ·ｍｌ－１，激光照射２Ｊ·ｃｍ－２的处理条件下，ＨＬ－６０被抑制９８％，而正常骨髓细胞存活４０±８％。将正常骨髓单个核细胞与ＨＬ－６０细胞按１００∶１比例混合后，ＨＬ－６０细胞仍能被选择性杀伤。电镜下见光敏作用后的ＨＬ－６０细胞生物膜结构明显受损。结果提示：ＰＳＤ－００７——激光照射能选择性杀伤白血病细胞。     

急性白血病Bcl-2反义寡核苷酸基因治疗的实验研究

目的选用２０ｎｔＢｃｌ－２反义硫代磷酸寡核苷酸（Ａｓ－Ｐｓ－ＯＤＮ，ＡＳＰＯ），并以其正义寡核苷酸（ＳＰＯ）为对照做如下问题探讨：（１）普通剂量（５～２０μｍｏｌ）ＡＳＰＯ对ＨＬ６０细胞、正常及缺铁性贫血患者骨髓细胞及急性白血病病人骨髓细胞或外周白血病细胞（幼稚细胞≥８５％）的作用；（２）大剂量（１６０μｍｏｌ）正义或反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞作用的特点，并通过ＡＳＰＯ引起ＨＬ６０细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达变化和ＳＰＯ对ＨＬ６０细胞毒性的变化，寻找可能的最佳效应剂量和最小毒性剂量；（３）ＡＳＰＯ联合化疗药物对ＨＬ６０细胞和原代急性白血病细胞的作用。方法台盼蓝拒染试验和克隆培养测定细胞的生长能力；免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测Ｐ２６Ｂｃｌ－２蛋白表达，ＲＴ－ＰＣＲ法检测Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ（Ｂｃｌ－２／β－ａｃｔｉｎ）相对水平；光、电镜下观察凋亡细胞形态，吖啶橙染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率，ＤＮＡ提取及电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ降解片段的形成；ＭＴＴ法检测ＰＳ－ＯＤＮ及化疗药物的细胞毒作用。结果（１）普通剂量的ＡＳＰＯ即能降低ＨＬ６０细胞及白血病细胞Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的表达，并抑制ＨＬ６０细胞及１８／２０例白血病细     

一磺基酞菁锌的合成和分离及对HL60细胞光敏杀伤的研究

目的合成和分离一磺基酞菁锌（ＺｎＰｃＳ）,并研究其对体外培养人急性白血病细胞（ＨＬ６０细胞株）的光敏杀伤效应。方法采用高效液相色谱法分离纯化ＺｎＰｃＳ,以ＨＬ６０细胞经药物作用４８ｈ红光照射５ｍｉｎ后测定ＺｎＰｃＳ对ＨＬ６０细胞的杀伤作用。结果ＺｎＰｃＳ浓度＜２０μｇ／ｍｌ对ＨＬ６０细胞没有明显暗毒性,在红光照射下,１０～２０μｇ／ｍｌＺｎＰｃＳ在体外能显著杀伤ＨＬ６０细胞,并呈剂量的依赖性。结论ＺｎＰｃＳ对ＨＬ６０细胞表现出很强的光敏杀伤作用,其作用机理可能是ＺｎＰｃＳ与细胞原生质膜相互作用产生高浓度单线态氧（１Ｏ２）,引起细胞生物分子产生过氧化反应。     

用流式细胞仪检测脉冲磁场对HL-60细胞程序性死亡及周期的影响

目的：研究脉冲磁场（ＰＥＭＦ）对人早幼粒白血病（ＨＬ－６０）细胞程序性死亡（ＰＣＤ）及周期的影响。方法：以ＨＬ－６０细胞为研究对象，用流式细胞仪进行分析。结果：以ＰＥＭＦ频率为２５０Ｈｚ，场强为５ＭＴ照射ＨＬ－６０细胞，流式细胞仪分析的结果表明，ＰＣＤ呈时间依赖性增加。作用后８ｈ，ＰＣＤ增加到３８．８６％，明显高于对照组。ＰＥＭＦ对ＨＬ－６０细胞周期有影响，随着磁场作用后时间的延长，Ｇ０／Ｇ１期细胞逐渐减少，Ｇ２／Ｍ期细胞逐渐增加。磁场作用后８ｈ，Ｇ０／Ｇ１期细胞减少到４７．４４％，磁场作用后１６ｈ，Ｇ２／Ｍ期细胞增加到４６．５５％。结论：ＰＥＭＦ诱发ＨＬ－６０细胞ＰＣＤ可能与ＰＥＭＦ改变ＨＬ－６０细胞周期有关。     

一磺基酞菁锌的合成和分离及时IL—60细胞光敏杀伤的研究

目的 合成和分离一磺基酞菁锌（ＺｎＰｃＳ）,并研究其对体外培养人急性白血病细胞（ＩＬ－６０细胞株）的光敏杀伤效应。方法 采用高效液相色谱法分离纯化ＺｎＰｃＳ,以ＨＬ６０细胞经药物作用４８ｈ红光照射５ｍｉｎ后测定ＺｎＰｃＳ和ＨＬ６０细胞的杀伤作用。结果 ＺｎＰｃＳ浓度２０μｇ／ｍｌ对ＨＬ６０细胞没有明显暗毒性,在红光照射下,１０￣２０μｇ／ｍｌ ＺｎＰｃＳ在体外能显著杀伤ＨＬ６０细胞,并呈剂量的信赖     

LDL－阿克拉霉素复合物对白血病HL－60细胞的生长抑制作用

选择人急性早幼粒白血病细胞株ＨＬ－６０进行体外培养，以正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）作为对照细胞，观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对ＨＬ－６０细胞生长的影响、ＬＤＬ与抗癌药物阿克拉霉素（ＡＣＭ）复合物的入胞作用以及对ＨＬ－６０细胞株的选择性杀伤作用。结果表明：１．ＬＤＬ对ＨＬ－６０细胞的生长无明显影响；２．ＬＤＬ作为载体可增加ＡＣＭ进入ＨＬ－６０细胞的量，但对ＰＢＬ的影响不明显；３．ＬＤＬ载体可增强ＡＣＭ对ＨＬ－６０细胞的杀伤力，而对ＰＢＬ无明显影响。提示ＬＤＬ是脂溶性抗肿瘤药物的良好载体     

甲基莲心碱增强阿霉素抑制人急性粒细胞性白血病细胞增殖

目的：观察甲基莲心碱（Ｎｅｆｅｒｉｎｅ，Ｎｅｆ）对阿霉素（ＡＤＭ）抑制人急性粒细胞性白血病（ＨＬ６０）细胞增殖作用影响。方法：采用ＭＴＴ比色法测定Ｎｅｆ及Ｎｅｆ与ＡＤＭ合用对ＨＬ６０细胞增殖的影响，同时应用软琼脂培养克隆形成法检测Ｎｅｆ及Ｎｅｆ与ＡＤＭ合用对ＨＬ６０细胞克隆形成能力的作用，结果：１ＭＴＴ比色法测定了Ｎｅｆ（１２．５μｇ．ｍｌ＾－１能增强ＡＤＭ抑制ＨＬ６０细胞增殖（Ｐ〈０．０５）。２     

用流式细胞仪检测脉冲磁场对HL—60细胞程序性死亡及周期的 …

目的：研究脉冲磁场（ＰＥＭＦ）对人早幼粒白血病（ＨＬ－６０）细胞程序性死亡（ＰＣＤ）及周期的影响。方法：以ＨＬ－６０细胞为研究对象，用流式细胞仪进行分析。结果Ｌ：以ＰＥＭＦ频率为２５０ＨＺ，场强为５ＭＴ照射ＨＬ－６０细胞，流式细胞仪分析的结果表明，ＰＣＤ呈时间依赖性增加。作用后８ｈ，ＰＣＤ增加到３８．８６％，明显高于对照组。ＰＥＭＦ对ＨＬ－６０细胞周期有影响，随着磁场作用后时间的延长，Ｇ０／Ｇ１期     

羟基磷灰石微晶体对人白血病HL—60细胞株的生长抑制作用

采用体外细胞培养和ＭＴＴ测定等方法，研究羟基磷灰石微晶体（ＨＡＰ－Ｓｏｌ）对人白血病细胞株（ＨＬ－６０）的生长抑制作用。将不同浓度的ＨＡＰ－Ｓｏｌ（０．００１－０．０２ｍｇ／ｍｌ）分别加入ＨＬ－６０细胞（１０＾４／孔），置３７℃，５％ＣＯ２培养４８小时。结果显示：①不同浓度ＨＡＰ－Ｓｏｌ对ＨＬ－６０细胞集落形成可产生影响：在倒置显微镜下，可见全部测定孔细胞集落形成均较对照孔低下，且呈剂量依赖关系，     

HLA—DRB1基因多态性与河南汉族人群急性淋巴细胞白血病关 …

目的：探讨急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）易感性与ＨＬＡ＿ＤＲＢ１基因多态性之间的关联性,找出ＡＬＬ的易感基因。方法：采用序列特异笥引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）ＤＮＡ分型技术对５６例ＡＬＬ患者和１０５例健康对照组进行进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因分型。结果：ＡＬＬ组与ＨＬＡ－ＤＲ７基因关联,基因频率为２４．１％,ＲＲ＝２．５６,χ＾２＝７．３４,Ｐ〈０．０１,病因分数为０．２９．其他等位基因频率ＡＬ     

Wilms肿瘤基因反义寡苷酸对白血病细胞凋亡的影响

目的 了解Ｗｉｌｍｓ肿瘤基因（ＷＴ１）反义寡核苷酸（ＡＳＯ）对白血病细胞凋亡的作用。方法 应用ＷＴ１ＡＳＯ以及足叶乙甙（ＶＰ－１６）作用Ｋ５６２、ＨＬ－６０细胞系,然后应用流式细胞仪测定ＤＮＡ含量以确定白血病细胞的凋亡数。结果 Ｋ５６２细胞系经ＷＴ１ ＡＳＯ作用２４ｈ和６０ｈ后细胞凋亡数分别为１４．６％和２６．８％;而ＷＴ１有义寡核苷酸（ＳＯ）组分别为３．１％（２４ｈ）和３．９％（６０ｈ）;加入少     

猪苓多糖和维生素D3衍生物联合对白血病细胞的诱导分…

目的 探讨猪苓多糖、１，２５（ＯＨ）２ＶｉｔＤ３（ＶｉｔＤ３）或二才联合对白血病细胞的诱导分化作用。方法 用猪苓多糖、ＶｉｔＤ３或二才联合对ＨＬ－６０、Ｋ－５６２及白血病原代细胞进行体外诱导分化试验。结果 当猪铃多糖为０．０６ｍｇ／Ｌ时，４３／５０例ＨＬ－６０细胞株平行样本和大约１／３Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５原代白血病细胞有不同程度的向成熟单核样分化的作用。１０＾－６ｍｏｌ／ＬＶｉｔＤ３时，诱导作用与上述     

视黄酸及芳维甲对HL—60细胞细胞周期素及相关激酶P34^cdk2蛋…

目的：本研究从细胞周期调控这一角度来探讨视黄酸类物质阻遏白血病细胞增殖的分子机理方法：采用两步过量胸苷阻断将ＨＬ－６０细胞同步化于Ｇ１／Ｓ期边缘，５×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ视黄酸或芳维甲处理１ｄ～４ｄ后收获细胞，以流式细胞仪（ＦＣＭ）分析细胞周期相分布，免疫印迹法检测ＣｙｃｌｉｎＥ，ＣｙｃｌｉｎＤ１和Ｐ３４＾３ｋｄ２蛋白表达水平。结果Ｃｙｃｌｉｎ和Ｄ１蛋白表达量具有周期依赖性，Ｇ１期开始增加Ｓ期达到     

白血病患者血清可溶性白细胞介素-2受体的检测

目的：检测白血病患者血清可溶性白细胞介素－２受体（ＳＩＬ－２Ｒ）水平、缓解期ＣＤ４、ＣＤ８及慢笥粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者ｐｈ＾１染色体阳性率以按摩ＳＩＬ－２Ｒ水平变化的临床意义及其与ＣＤ４、ＣＤ８及ｐｈ＾１阳性率的关系。方法：双抗体夹心酶联免疫吸附法测ＳＩＬ－２Ｒ,ＡＰＡＡＰ法测ＣＤ４－ＣＤ８阳性率;Ｒ显带法测ＣＭＬ的ｈｐ＾１阳性率。结果：白血病组ＳＩＬ－２Ｒ水平高于对照组（Ｐ均〈０．０１）,且     

高温、利多卡因、足叶乙苷联合法体外净化白血病细胞

采用体外造血细胞培养技术，应用高温、利多卡因、足叶乙苷（足叶乙甙，ＶＰ－１６）联合法，研究其在体外对白血病细胞的杀伤作用。结果表明：高温、利多卡因、ＶＰ－１６三者联用比高温＋利多卡因、高温＋ＶＰ－１６，能更有效地杀伤白血病细胞，而正常粒单系克隆形成单位（ＧＭ－ＣＦＵ）仍约有５０％存活。４１℃６０ｍｉｎ＋０．７５ｍｍｏｌ／Ｌ利多卡因＋８．５μｍｏｌ／ＬＶＰ－１６联合处理后，ＨＬ－６０、Ｕ９３７、Ｋ５６２细胞分别只存活０．０１％、９．４０％、３３．６６％。另外，从这个联合方案说明对于不同类型的白血病效果不一，在其自身骨髓移植（ＡＢＭＴ）时，体外净化骨髓要采用不同的净化方案。     

大剂量Bcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸对细胞系的毒性作用

目的 探讨大剂量Ｂｃｌ－２反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）对ＨＬ６０细胞系的毒性作用,同时了解毒性与剂量的关系。方法 应用四氮唑蓝比色法、台盼蓝拒染试验,ＣＦＵ－ＨＬ６０克隆培养法观察大剂量Ｂｃｌ－２ ＡＳＰＯ对ＨＬ６０细胞的毒性作用,同时应用免疫细胞化学染色及流式细胞仪检测Ｐ２６ Ｂｃｌ－２蛋白表达,吖啶橙染色及ＤＮＡ片段电泳对细胞凋亡的观察。并以其正义ＰＳＯＤＮ（ＳＰＯ     

c-myb反义核酸对急性白血病细胞系HL-60细胞的作用

目的探讨运用反义核酸技术来封闭或阻断原癌基因ｃ－ｍｙｂ的表达的机制。方法利用急性白血病ＨＬ－６０细胞株，运用人工合成的硫代正义、反义核酸处理５天后及未经处理的细胞，观测细胞生长情况，细胞超微结构及ＭＹｂ癌基因蛋白表达的变化情况。结果未经处理的ＨＬ－６０细胞呈指数生长，经过正义核酸处理的细胞生长未受影响；经反义核酸处理的细胞生长被抑制，被抑制达６０％，差别显著（Ｐ＜０．０１）。而未处理及正义组无差别（Ｐ＞０．０５），免疫组化示经反义核酸处理后细胞ｃ－ｍｙｂ蛋白表达受抑制，阳性率从６６．７％±２．２％下降至２３．７％±１．１％。电镜观察，经过正义核酸及未处理的细胞形态无明显改变，经反义核酸处理后的细胞发生不同程度改变，部分损伤性改变，部分诱导凋亡。结论ｃ－ｍｙｂ癌基因蛋白产物对ＨＬ－６０细胞增殖至关重要，硫代反义核酸抑制癌基因蛋白表达，具有细胞毒及诱导凋亡作用，达到抑制ＨＬ－６０细胞增殖目的。     

温热伍用（60）￣Co照射对NSY42129人大肠癌细胞及其耐热细胞杀伤作用的研究

应用不同剂量６０Ｃｏ（１５００ＣＧＹ，１００ＣＧＹ和５００ＣＧＹ）照射对ＮＳＹ４２１２９人大肠癌细胞及其耐热细胞的杀伤作用进行研究。结果表明：①１５００ＣＧＹ的６０Ｃｏ一次性照射即能杀伤ＮＳＹ４２１２９人大肠瘤细胞近５０％。②温热本身除能杀伤部分肿瘤细胞外，同６０Ｃｏ射线伍用还具有协同杀伤作用，其高、中、低不同剂量６０Ｃｏ对癌细胞的杀伤指数分别为６４．９％，５３．１％和５１．８％；而单纯照射组的仅为４６．１％、３９．２％和３７．６％，③耐热细胞对６０Ｃｏ照射不敏感，其高中低剂量６０Ｃｏ的细胞杀伤指数仅为２７．８％，２０．８％和１８．１％。     

创伤多器官功能不全综合征与HLA—DRB1相关性研究

目的 研究创伤后ＭＯＤＳ与ＨＬＡ－ＤＲＢ１相关性。方法 对ＰＣＲ对３７例创伤对３７例创作后ＭＯＤＳ患者１８例对ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因引物进行扩增,用ＥＬＩＳＡ进行ＩＬ－１０测定。结果 创作后ＭＯＤＳ患者ＤＲ２（ＤＲＢ１＊１５０１－ＤＲＢ１～１５０２）基因频率显著升高。ＤＲ２＾＋较ＤＲ２＾－的ＭＯＤＳ患者血浆ＩＬ－１０水平和病死率显著升高（Ｐ〈０．０１）。结论 创伤后ＭＤＤＳ与ＨＬＡ－ＤＲ２（ＤＲＢ１     

白血病细胞株HL60和HL60/DNR的多药耐药性

目的研究白血病细胞的多药耐药性（ＭＤＲ）。方法用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＨＬ６０，ＨＬ６０／ＤＮＲＭＤＲ１的ｍＲＮＡ表达，用流式细胞仪分析单抗ＵＩＣ２标记的细胞株Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达，了解它们摄取和滞留荧光素Ｒ１２３的功能。结果ＨＬ６０／ＤＮＲ在ｍＲＮＡ水平高度表达ＭＤＲＩ，在蛋白质水平高度表达Ｐｇｐ，功能性试验中细胞内Ｒ１２３最终浓度ＨＬ６０为ＨＬ６０／ＤＮＲ的５０倍。结论ＨＬ６０／ＤＮＲ为典型的表达ＭＤＲ１的细胞株