应用原位多聚酶链反应检测喉癌组织中p53基因

采用原位多聚酶链反应技术检测了５例喉癌石蜡组织切片中ｐ５３基因，结果在全部标本中９０％以上的癌细胞核检测到ｐ５３基因，平均拷贝数为２．２４±０．２３。表明该技术可用于单拷贝基因研究，并对其改进和应用进行讨论。     

肿瘤抑制基因p53及Rb在鼻咽癌中的表达

为观察ｐ５３基因和Ｒｂ基因与鼻咽癌发生的关系，应用聚合酶链反应－单链构型多态分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术），检测３３例鼻咽癌组织、４例鼻咽部炎性组织及３例正常鼻咽部组织中ｐ５３基因第７，８外显子的突变。结果显示，在３３例鼻咽癌中有７例存在ｐ５３基因第８外显子的突变，突变率为２１．２％。在第７外显子中未检测出突变发生。应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，对Ｒｂ基因在鼻咽癌中存在状态进行研究。结果表明，在１３例鼻咽癌组织中有１１例鼻咽癌组织有Ｒｂ基因的缺失或明显减弱，提示ｐ５３基因突变及Ｒｂ基因的缺失而导致的基因失活与鼻咽癌的发生有密切关系。     

肿瘤抑制基因p53及Rb在鼻咽癌中的表达

为观察ｐ５３基因和Ｒｂ基因与鼻咽癌发生的关系，应用聚合酶链反应－单链构型多态分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术），检测３３例鼻咽癌组织、４例鼻咽部炎悸组织及３例正常鼻咽部组织中ｐ５３基因第７，８外显子的突变。结果显示，在３３例鼻咽癌中有７例存在ｐ５３基因第８外显子的突变，突变率为２１．２％。在第７外显子中未检测出突变发生。应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，对Ｒｂ基因在鼻咽癌在存在状态基因突变及Ｒｂ基因的缺     

p53基因蛋白在原发性肺癌的表达及意义

目的 检测原发性肺癌中ｐ５３基因蛋白表达与组织类型、分化程度以及淋巴结转移的关系。方法 应用免疫组化ＩＤＰ法，用鼠抗人ｐ５３单克隆抗体检测ｐ５３蛋白的表达。结果４４例原发性肺癌中ｐ５３基因蛋白表达阳性率５６．８％。其中鳞癌１４例、腺癌３０例、阳性率分别５７．１％、４６．７％。高分化１０例，中分化２０例，低分化１４例，阳性率分别为４０％、５０％、５７．１％。肺癌有淋巴结转移的ｐ５３阳性率为６５．５％     

p53基因cDNA突变及其蛋白高表达与大肠癌预后关系

１００份大肠癌组织,用ＲＴ、ＰＣＲ－ＳＳＳＣＰ检测ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变;Ｐａｂ１８０１单抗免疫组化检测ｐ５３基及其蛋白高表达并对大肠癌术后病人作５年生存随访,比较上述二结果与大肠癌预后的关系。１００例大肠癌中,ＲＴ－ＰＣ、ＳＳＣＰ显示引例大肠癌ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变（５１％）;Ｐａｂ１８０１阳性率６２％。ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变和ｐ５３基因蛋白高表达与Ｄｕｋｅｓ分期无关,ｐ５３基因ｐＤＮＡ突变与ｐ５３基因蛋白高表达相关（Ｐ＜０．０５）。结果提示,Ｐａｂｌ８０１单抗检测ｐＪ３基因蛋白高表达直接相关（ｐ＜０．０５）,ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变是大肠癌预后差的分子生物学标志物（ｐ＜０．０５）。ｐ５３基因蛋白产物受多种因素影响不能反映大肠癌的预后。     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株，研究野生型ｐ５３蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法：用ＤＮＡ转染技术将７重组野生型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ－８６０３中，用ＰＣＲ技术监测外源性ｐ５３基因在瘤细胞中存在的稳定性；用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中ｐ５３的表达情况；用相差显微镜去观察凋亡瘤细胞的形态特点；用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结     

大肠癌组织p53基因突变及其与临床病理关系的探讨

应用非同位素标记ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对３４例大肠癌组织ｐ５３基因第五外显子突变进行了检测。结果：５０％（１１／２２）结肠癌，８．３％（１／１２）直肠癌存在ｐ５３基因突变，低分化腺癌高于高、中分化腺癌（Ｐ＜０．０５），ＤｕｋｅｓＢ、Ｃ期高于ＤｕｋｅｓＡ期（Ｐ＜０．０５），ｐ５３基因第五外显子突变在已发生淋巴转移的大肠癌组织中呈现较强的趋势。提示：检测结肠癌原发灶ｐ５３基因第五外显子突变，对指导结肠癌的诊断、治疗及预后判断具有一定意义     

p53基因在卵巢肿瘤中的改变

采用聚合酶链式反应——单链构象多态性溴乙锭染色法，分别检测４３例卵巢肿瘤ｐ５３基因外显子５－８。结果显示：卵巢癌ｐ５３基因改变率高于良性肿瘤（ｐ〈０．０５），ｐ５３基因改变见于交界性瘤及Ⅰ－Ⅳ期卵巢癌。提示ｐ５３基因改变与卵巢癌的发生密切相关；它可能参与卵巢癌变的机制，同时可发生在卵巢癌的早期，并对其发展过程中起作用。     

肾癌p53蛋白表达与临床病理指标及预后的关系

采用免疫组化法对５３例肾癌组织中ｐ５３蛋白进行检测，其中ｐ５３蛋白表达阳性１６例（３０．２％），发现肾癌组织ｐ５３蛋白表达与细胞类型、分期、分级及预后均无相关。结果提示：肾癌的发生发展可能是一个多基因变化过程，ｐ５３基因在其发生发展过程中并不起主导作用或只是多种因素之一。     

p53基因在卵巢肿瘤中的改变

采用聚合酶链式反应——单链构象多态性溴乙锭染色法，分别检测４３例卵巢肿瘤ｐ５３基因外显子５－８。结果显示：卵巢癌ｐ５３基因改变率高于良性肿瘤（Ｐ＜０．０５），ｐ５３基因改变见于交界性瘤及Ⅰ－Ⅳ期卵巢癌。提示ｐ５３基因改变与卵巢癌的发生密切相关；它可能参与卵巢癌变的机制，同时可发生在卵巢癌的早期，并对其发展过程中起作用。     

Association between HPV16/18 infection and expression of P53 protein in laryngeal papillomas

Humanpapillomaviruses(HPVs)havebeenfoundtobeinvolvedindevelopmentofproliferativeandinvasivelesionsoflarynx.Recentlytherewasincreasingevidencethatpapillomaviruses(HPV)mightactasetio-logicalagentsoflaryngealpapil1omas.TheP53proteinfunctionsasanegativecellgrowthregu1atorandmayplayanimportantpartingeomicstabilityandDNArepair.OncoproteinsofE6andE7genesofthehigh-riskHPVscanformcomplexeswithtumorsuppressor-geneproductsofp53.TheinteractionofE6proteinwithp53pro-teinpromotesdegradationofthelatter…     

胃癌组织中p53基因突变和p53蛋白表达

目的比较胃癌和癌旁组织中p53基因突变及p53蛋白的表达与淋巴结转移和预后的关系。方法采用PCR．SSCP技术和免疫组织化学S-P法，对石蜡包埋组织进行p53基因外显子6．7和8，9以及p53蛋白的检测。结果（1）p53蛋白的阳性表达在癌组织和癌旁组织中分别为47．6％和38．1％；有淋巴结转移的病例p53蛋白表达52．8％。（2）癌组织中p53外显子7的突变率为23．9％；癌旁组织中突变率为19．0％。癌组织中p53外显子6的突变率为10．5％；癌旁组织为8．6％。癌组织中p53外显子8，9的突变率为1．9％；癌旁组织为1．0％。结论有淋巴结转移的病例中，筇3外显子的突变率和蛋白的表达率均明显增高，提示p53外显子的突变在胃癌的发生发展中是一个重要因素，并促进肿瘤的转移。p53基因突变与p53蛋白高表达在癌组织和癌旁组织中无显著差异。     

Clinicopathology, immunophenotype, T cell receptor gene rearrangement, Epstein-Barr virus status and p53 gene mutation of cutaneous extranodal NK/T-cell lymphoma, nasal-type

Background Extranodal natural killer/T-cell (NK/T cell) lymphoma,nasal-type,is a rare lymphoma.Skin is the second most common site of involvement after the nasal cavity/nasalpharynx.The aim of this study was to investigate the clinicopathologic features,immunophenotype,T cell receptor (TCR) gene rearrangement,the association with Epstein-Barr virus (EBV) infection and p53 gene mutations of the lymphoma.Methods The clinicopathologic analysis,immunohistochemistry,in situ hybridization for EBER1/2,TCR gene rearrangement by polymerase chain reaction (PCR),mutations of p53 gene analyzed by PCR and sequence analysis were employed in this study.Results In the 19 cases,the tumor primarily involved the dermis and subcutaneous layer.Immunohistochemical staining showed that most of the cases expressed CD45RO,CD56,CD3ε,TIA-1 and GrB.Three cases were positive for CD3 and two cases were positive for CD30.Monoclonal TCRY gene rearrangement was found in 7 of 18 cases.The positive rate of EBER1/2 was 100％.No p53 gene mutation was detected on the exon 4-9 in the 18 cases.Fifteen cases showed Pro (proline)/Arg (arginine) single nucleotide polymorphisms (SNPs) on the exon 4 at codon 72.The expression of p53 protein was 72％ (13/18) immunohistochemically.Conclusions Cutaneous NK/T-cell lymphoma is a rare but highly aggressive lymphoma with poor prognosis.No p53 gene mutation was detected on the exon 4-9,and Pro/Arg SNPs on p53 codon 72 were detected in the cutaneous NK/T-cell lymphoma.The overexpression of p53 protein may not be the result of p53 gene mutation.     

p53和ras基因突变及HPV感染与喉鳞癌的关系

①目的　探讨人乳头瘤病毒 16 ,18型 (HPV16 ,18)感染 ,抑癌基因p5 3和癌基因ras突变与喉鳞癌的关系 ,并初步分析 3种致癌因素的相互关系。②方法　应用聚合酶链反应 (PCR)和限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术 ,检测 40例喉鳞状细胞癌组织中 p5 3基因第 5 ,7外显子及ras基因 (N ras ,K ras,H ras)第 12密码子的突变情况 ,同时用PCR技术检测 40例标本中HPV16 ,18的感染情况。③结果　 40例标本检出HPV16阳性标本 14例 ,HPV18阳性标本 4例。 4例标本 p5 3基因第 5外显子第 143密码子发生突变 ,其中 1例HPV16阳性 ,p5 3基因第 7外显子未发现突变。 9例标本ras基因发生突变 (N ras 6例 ,K ras 2例 ,H ras 1例 ) ,其中 2例HPV16阳性 ,但未见 p5 3与ras基因同时发生突变者。HPV阳性和阴性标本中p5 3基因突变率、ras基因突变率的差异均无显著性(χ2 =0 .10 1,1.392 ,P >0 .0 5 )。④结论　HPV感染、p5 3和ras基因突变与喉鳞癌的发生密切相关 ,三者之间的关系尚待进一步探讨。     

前列腺癌p~(53)基因突变的研究

用DNA聚合酶链反应和DNA单链构象多态性分析（DNAPCR－SSCP）技术检测了22例前列腺癌组织和20例前列腺良性增生（BPH）组织的p53基因第5、6、7外显子的突变率。结果发现5例前列腺癌标本检出PCR-SSCP区带异常，提示p53基因突变，突变率为23％；BPH标本均未发现异常。结合临床资料分析表明，p53基因突变与前列腺癌的发生发展相关，且与肿瘤分化程度和临床分期关系密切。     

mdm2和P53在人脑胶质瘤中的相关性分析

目的　通过对人脑胶质瘤标本中 p5 3、mdm2蛋白表达关系的研究 ,探讨人脑胶质瘤的发病机理。 方法　应用免疫组化 (链霉素菌抗生物素蛋白 -过氧化酶法Streptavidin peroxidase ,S -P法 )标记检测 10 0例人脑胶质瘤标本 p5 3和mdm2 ,同时标记DNA原位杂交探针 p5 3。结果 10 0例脑胶质瘤标本 p5 3和mdm2免疫组化标记阳性率分别为 35 %、32 %;p5 3DNA探针原位杂交标记 ,阳性率为 90 %,其中 2 8例免疫组化标记mdm2阳性 ,而 p5 3阴性标本的原位杂交 p5 3阳性率为 89.2 8%(2 5例 )。统计学显示p5 3基因表达和mdm2基因表达有密切关系 (P <0 .0 5 )。结论　mdm2和 p5 3呈明显负相关 ,mdm2在人脑胶质瘤的发病过程中起重要的作用 ;p5 3的缺失不是人脑胶质瘤的主要发病机理 ,mdm2和 p5 3协同作用在脑胶质瘤的发生和发展中起重要作用。     

BCL-2,p53蛋白在乳腺原位癌中的表达

目的 :探讨BCL - 2 ,p53蛋白在乳腺原位癌及正常乳腺组织中的表达及相互关系。方法 :采用免疫组化检测 15例正常乳腺组织 ,10例小叶原位癌及 4 5例导管原位癌 (DuctalCarcinomainsitu ,DCIS)。结果 :BCL - 2蛋白在正常乳腺组织及小叶原位癌中的表达均阳性 ,p53蛋白均阴性 ,基因表型呈BCL - 2 /p53-。4 5例DCIS中 ,BCL - 2蛋白阳性率 77.8% (35/ 4 5) ,p53蛋白阳性率 2 4 .2 % (11/ 4 5)。BCL - 2蛋白表达与DCIS组织学分级密切相关 (P <0 .0 1)。DCIS中有 6 6 .7%呈BCL - 2 /p53-表型 ,多为高分化和中分化病例 ,还有 33.3% ,多为差分化病例 ,坏死出现率比呈BCL - 2 /p53-表型的病例高 (P <0 .0 1)。结论 :正常乳腺组织及小叶原位癌均呈BCL - 2 /p53-表型 ;6 6 .7%导管原位癌与正常乳腺组织具有相似的凋亡调控基因 (BCL - 2 /p53- ) ,非正常表型DCLS病例多代表分化差的病例 ,可能这些病例不受正常凋亡调控基因的控制 ,结果导致肿瘤细胞的存活和生长。     

p53基因和FHIT基因联合检测在肺癌早期诊断中的意义

目的探讨p53基因突变和FHIT基因缺失在肺癌的筛查和早期诊断中的应用价值。方法收集利用自荧光支气管镜(AFB)活检的27例正常支气管黏膜、74例非典型增生、23例原位癌、161例浸润癌及32例良性病变新鲜标本,应用聚合酶链式反应(PCR)及DNA测序技术检测p53基因突变,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及DNA测序技术检测FHIT基因表达缺失。结果在正常黏膜、非典型增生、原位癌、浸润癌及良性病变中p53基因突变率分别为:0、27.0%、52.2%、67.7%、0。FHIT基因缺失率分别为:0、55.4%、65.2%、66.5%、9.4%。两基因联合检测阳性率分别为:0、56.8%、86.9%、90.7%、9.4%。非典型增生与原位癌组织中p53基因突变差异有统计学意义(P<0.05),非典型增生、原位癌、浸润癌组织FHIT基因缺失差异无统计学意义(P>0.05),组织病理学分类不同的浸润癌组织p53基因突变率和FHIT基因缺失率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p53基因突变和FHIT基因缺失在肺癌及非典型增生组织中是频发事件,在肺癌的发生发展中起重要作用,两基因联合检测可提高肺癌诊断的敏感性及特异性,对肺癌的早期诊断有重要意义。     

人原发性食管癌组织中多种抑癌基因的研究

应用ＰＣＲ扩增与直接测序技术，分析１０例食管癌和癌旁组织标本中多个抑癌基因ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ和ＭＣＣ的突变与丢失。结果：１０例中６例有ｐ５３基因突变；５例有Ｒｂ基因改变；３例有ＡＰＣ改变；３例有ＭＣＣ基因改变；８例食管癌标本中至少有一种抑癌基因有改变；６例至少有两种或多种抑癌基因改变，１例癌旁组织中也有两个抑癌基因改变。结果表明，食管癌癌变与多个抑癌基因变化的累积有关。     

Ha-ras、p53基因变异与膀胱癌预后关系的探讨

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测了３９例膀胱癌及７例正常膀胱组织中Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异，并结合临床分期、病理分级等参数进行了综合分析。结果表明，膀胱癌组织中Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异率分别为３６％、３０．８％，两者均显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０５）；且与分级分期呈正相关。复发肿瘤的Ｈａ－ｒａｓ基因突变率显著高于原发肿瘤；６例标本同时呈现Ｈａ－ｒａｓ基因与ｐ５３基因突变。提示Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异及相互作用在很大程度上参与了膀胱癌的发生及演变，并与其生物学行为密切相关，有望成为判断肿瘤恶性程度、自然病程及预后的评估指标