分别含K88,K99和LT-B亚单位抗原基因的重组痘苗病毒的构建

本文构建了分别含K88,K99和LT-B亚单位抗原基因的重组痘苗病毒,并观察了这3种基因的表达情况。首先将K88亚单位基因克隆入痘苗转移或体PGJP-5中,得到嵌合质粒P_5-K88,将K99和LT-B亚单位基因分别克隆至痘苗转移载体PJ16中,得到重组质粒PJK-9和PLT-B。再经细胞体内同源重组技术,将以上3种基因分别插入到痘苗病毒天坛株的TK基因中,经5-BUdR的选择压力在人TK~--143细胞中挑选TK~-表型病毒,分别以相应的~(32)P标记的基因片段为探针进行杂交筛选重组病毒株。我们得到7株含K99亚单位基因的重组病毒V-K99(Ⅰ～Ⅷ),5株含K88亚单位基因的重组病毒V-K88(Ⅰ～Ⅴ);1株含LT-B亚单位基因的重组病毒V-LTB,ELISA检测结果表明,在以上3种重组病毒感染的人TK~--143细胞培养液和细胞裂解物中均未测出相应的基因表达产物。以上结果表明这3种基因可能不易在痘苗系统内有效表达。     

回转器模拟微重力对大肠杆菌基因和蛋白表达的影响(英文)

目的研究回转器模拟微重力对革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli)基因与蛋白表达的影响。方法采用回转器模拟微重力效应,连续2周作用于大肠杆菌ATCC 25922菌株,选取16个靶基因,RT-PCR反应检测处理菌株和对照菌株基因表达的变化;提取菌体蛋白进行双向电泳,电泳图谱采用ImageMaster 2D Platinum软件分析,找出差异表达蛋白,进行基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI TOF/TOF质谱)分析。结果在模拟微重力效应作用下,处理菌株与对照菌株相比,16个靶基因中有4个靶基因表达上调,5个下调;15个差异表达蛋白点,其中4个表达上调蛋白质谱鉴定为抗转录终止蛋白NusG、固氮铁蛋白、硫醇过氧化物酶,1个表达下调蛋白为未知蛋白,2个新增蛋白为谷氨酰胺ABC转运周质蛋白,1个表达消失蛋白为IclR转录调节蛋白家族。结论模拟微重力效应可引起大肠杆菌基因及功能蛋白表达的变化。     

超顺磁氧化铁(SPIO)的MR免疫成像现状及研究进展

随着分子生物学技术的发展,MR成像技术的不断完善,磁共振免疫成像(magnetic resonance immunoimaging,MRII)逐渐引起了人们的关注.MRII是以顺磁性物质为示踪剂标记到抗人肿瘤单克隆抗体(McAb)上,利用McAb与肿瘤抗原的特异性结合,使顺磁性元素选择性浓聚于肿瘤局部而产生靶向增强,实现肿瘤定向特异性强化的一种新的成像方法,从而实现肿瘤的早期定性和定量诊断的新的无创伤成像技术[1].     

乙型肝炎病毒核心抗原高表达质粒的构建

我们利用了外切酶剪切,人工接头平端连接等DNA重组技术将乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因片段插入于乳糖启动子下游的β-半乳糖苷酶结构基因中,获得了能高效表达HBcAg的重组质粒。ELISA方法检测表明,转化的大肠杆菌每毫升培养物含一万酶联免疫反应单位。     

我国登革2型病毒04株包膜蛋白基因的核苷酸及其相应的氨基酸序列

本文报告我国登革2型04株包膜蛋白基因的核苷酸及氨基酸序列,并与登革1、3、4型及其它2型毒株如几内亚C株(NGC)、牙买加株1409(JAM)、候选疫苗株S1以及马来西亚当地流行株M1(登革出血热)、M2(登革休克综合征)。 M3(登革热)进行比较。结果表明D_2-04株E蛋白基因的核苷酸序列与NGC,JAM和S1的同源性分别为95.0％、97.4％和90.0％;与M1、M2、M3的同源性分别为93.3％、92.1％和94.3％;与其它登革血清型的同源性大约为65％。登革2型04株蛋白的氨基酸序列与NGC、JAM、S1、M1、M2、M3的类似性分别为96.8％、97.2％、91.4％、95％、95.6％和94.3％。与其它登革血清型氨基酸类似性大约为62％～68％;与其它黄病毒的类似性范围为43％～47％。推断的氨基酸序列显示出7个保守的半胱氨酸残基及两个潜在的糖基化位点,分别位于Asn-67和Asn-153位。     

大肠癌癌旁粘膜肿瘤相关抗原表达与核仁组成区的研究

应用组织化学、免疫组织化学及核仁组成区染色方法,对1050例大肠癌及癌旁粘膜的粘液性质、肿瘤相关抗原表达、核仁组成区蛋白的变化进行了研究。结果大肠腺癌上皮与正常肠粘膜之间确实存在过渡性粘膜,有多种肿瘤相关抗原表达,核仁组成区相关嗜银蛋白(Ag-NOR)数量介于癌组织与正常粘膜之间。说明癌旁上皮细胞存在与大肠癌相同的肿瘤相关抗原和癌瘤细胞的特性。     

胰腺癌K—ras基因的研究

采用PCR技术,以福尔马林固定、石腊包埋切片中所含DNA为模板,成功地对19例胰腺导管癌中的18例进行了K-ras基因的扩增。应用特异核酸探针和Southern杂交,检测了扩增后K-ras基因并发现15例(83.3％)胰腺导管癌含有K-ras基因点突变。其中12密码由GGT转换为GAT5例(33.3％),12密码由GGT转换为GTT6例(40.0％),13密码由GGC,转换为GAC4例(26.6％)。未证实K-ras基因突变与癌分化程度、转移和浸润率以及患者予后的关系。结果提示K-ras基因突变在胰腺导管癌中极为常见,可能在胰腺癌发生中起重要作用;检测此基因突变可作为胰腺导管癌早期诊断和发生监测的生物学指标。     

胃粘膜肠化生组织YNZ22基因杂合缺失及p53基因突变、蛋白表达的研究

为探讨YNZ22基因杂合缺失（LOH）及p53基因突变、蛋白表达在胃粘膜肠上皮化生中的作用,应用PCR－RFLP、PCR－SSCP及免疫组化技术检测了不同类型肠化生组织中YNZ22基因LOH、p53基因素5－8外显子突变及其蛋白表达。结果显示,YNZ22 LOH率为19.4%（6／31）,p53突变率为29.8%(14/47),p53蛋白表达率为10.0%（6/60)。将肠化生分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,发现Ⅲ型肠化生中p53突变率及其蛋白阳性表达率分别为57.1%(8/14)和27.8%(5/18),无显著高于Ⅰ（18.2%)、Ⅱ型肠化生（2．4％）（均P＜0.05)。p53蛋白表达与p53基因突变显著相关（P＜0.05),YNZ22 LOH与p53突变及蛋白表达无显著相关性（P＞0.05)。提示,YNZ22基因LOH及p53基因异常可能在胃粘膜肠化生的发生及其癌变中起一定作用,p53基因有可能成为胃癌早期诊断的分子指标。     

粪便中检测K-ras基因突变对老年大肠癌诊断价值的研究

探讨粪便K-ras基因检测在老年大肠癌临床诊断中的价值。收集连续就诊的23例老年大肠癌患者，20例结肠癌瘤性息肉患者及20名健康老年查体者的粪便，并从中提取DNA，应用等位基因特异性杂交技术检测粪便K-ras基因第12位密码子第1，2位碱基突变情况。结果K-ras基因突变在大肠癌患者为56．52％（13／23），明显高于正常查体者的5％（1／20）（P＜0．01），与结肠腺瘤性息肉组的30％（6／20）比较，差异无显著性意义（P＞0．05）。92．31％（12／13）的大肠癌K-ras基因突变位点发生在第12位密码子第2位碱基。研究表明，结肠癌患者组织及粪便中K-ras基因突变的检出具有良好的一致性，提示粪便中检测K-ras基因突变是一种无创性的老年大肠癌的诊断方法。     

HCMV的IE2介导野生型p53基因促凋亡作用的研究

选择野生型P53缺失型的Jurkat细胞系，首先将wt-p53-pLXSN稳定转染入Jurkat细胞（Jurkat-wt-p53),再分别或联合转染TE1，TE2基因，并利用流式细胞仪分析。结果显示，转染了IE2基因的Jurkat-wt-p53细胞在瞬时转染24h后出现光镜下可见的细胞凋亡改变，此时取样进行流式细胞仪测定细胞周期分布状况，可见转染了IE2基因的Jurkat-wt-p53细胞周期分布较其他各组发生了明显的 变化，G1期和S期细胞分布减少，而G2期细胞增多，细胞阻滞于G2／M期，并且出现了细胞凋亡亚二倍体峰,引起细胞凋亡。研究表明，在Jurkat 细胞中HCMV的IE2基因可介导野生型P53基因的促凋亡作用。     

重组质粒pMG611中K99和F41抗原基因在E．coli中表达条件的研究

本文通过ELISA方法测定了重组质粒pMG611在不同宿主和培养条件下，K99和F41菌毛抗原的表达水平。研究结果表明重组质粒pMG611在HB101和RRI宿主菌中较在C600宿主菌中表达更多的K99和F41菌毛抗原。实验中还探讨了培养基、温度和丙氨酸对两种菌毛抗原表达的影响。     

醛糖还原酶基因5‘端（AC）n重复序列的多态性与2型糖尿病患 …

为探讨中国人北方汉族２型ＤＭ醛糖还原酶（ＡＲ）基因５’端的（ＡＣ）ｎ的多态性与糖尿病视网膜病变易感性的关系,用＾３２ＰｄＣＴＰ掺入ＰＣＲ,６％甲酰胺聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射性自显影的方法,分析了１１６例２型ＤＭ「包括无并发症（ＮＤＣ）组６６例,视网膜病变（ＤＲＰ）组５０例」和４２例正常对照组（ＣＯＮ）ＡＲ基因５’端（ＡＣ）ｎ的多态性。结果显示,ＤＭ组和对照组均发现７种等位基因Ｚ－６～Ｚ＋６,Ｚ－２