乙型肝炎母婴传播的研究进展

我国是乙型肝炎高发国家,慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者中约有40%~50%是经母婴传播。新生儿和婴儿感染HBV后,约90%成为慢性HBV携带者,严重危害下一代人的健康〔1〕。HBV携带者不仅是HBV的主要传染源,同样也是肝硬化、肝癌的高发人群,因此,防治HBV感染是极为重要的公共卫生问题,研究乙肝病毒母婴传播及其阻断措施,对于保护高危的HBsAg阳性孕妇的婴儿具有深远的意义。1乙型肝炎的母婴传播HBV母婴传播的方式主要有3种,即宫内传播:HBV可通过胎盘的损伤直接进入胎儿体内循环使胎儿感染HBV,或者HBV感染胎盘后可穿透胎盘屏障感染胎儿;…     

乙型肝炎复制指标的相关性分析及其临床应用价值研究

 目的探讨HBeAg、HBcAg、Pres1Ag、HBcAb和HBV DNA的关系及其临床应用评价.方法Pres1Ag和HBV M检测采用酶免法,HBV DNA采用荧光探针技术定量PCR法,HBcAg采用固相放射免疫法.结果5项复制指标分别在HBV M不同模式组检出率不等同;HBcAb(+)组的HBV DNA和HBcAg阳性率显著高于HBcAb(-)的HBV M模式组(P<0.01);若以HBV DNA检测阳性为HBV复制金标准,HBcAg检测符合率(83.2%)显著高于其他指标(P<0.01),而HBcAb检测特异性和HBeAg检测灵敏度过低.结论(1)HBcAg与HBV DNA相关性最好.(2)5项指标评价HBV复制的临床意义为:HBV DNA>HBcAg>Pres1Ag>HBeAg>HBcAb.(3)HBcAb仅仅可作为HBV复制的初筛指标.     

HBV(ayw)转基因小鼠HBV复制中间体的检测

目的建立稳定、高灵敏度化学发光Southern blotting检测系统,检测HBV(ayw)转基因小鼠肝脏及其他组织的HBV复制水平。方法采用地高辛标记HBV探针,利用pTHBV1047质粒检测杂交系统的灵敏度及重复性;提取第27代HBV(ayw)转基因小鼠肝、肾、脾和肌肉组织总DNA,经HindⅢ酶切后电泳、转膜,利用高灵敏度化学发光杂交Southern blotting检测各组织中HBV复制中间体的水平。结果地高辛标记的化学发光检测系统灵敏度达0.1pg,且杂交系统稳定可靠。HBV(ayw)转基因小鼠基因组DNA中检测到整合的外源HBV DNA,但低于HepG2.2.15细胞的HBV复制水平。肝、肾、脾和肌肉组织中都有HBV复制中间体存在,以肝组织中含量最高。结论第27代HBV(ayw)转基因小鼠染色体含有稳定的HBV基因整合,为复制型HBV转基因小鼠。     

新疆维吾尔族乙型肝炎病毒慢性无症状携带者的乙型肝炎病毒基因型测定

目的;研究新疆维吾尔族乙型肝炎病毒（HBV）慢性无症状携带者的HBV基因型分布。方法：利用限制性片段长度多态性（RFLP）分析技术,由限制性内切酶AvaⅡ和DpnⅡ作用于HBV DNA前S区扩增片段建立的简便的HBV基因型分型方法,对52例HBeAg阳性的新疆维吾尔族HBV慢性无症状携带者的HBV进行基因型测定。结果：D基因型57．7％（30／52）,C基因型30．8％（16／52）,B基因型11．5％（6／52）,无A、E和F型。结论：新疆维吾尔族HBV慢性无症状携带者的HBV基因型以D型为优势,为我国HBV基因型分布提供了新的资料,并为建立中国人HBV基因库提供依据。     

乙型肝炎病毒基因型测定

目的研究新疆维吾尔族乙型肝炎病毒(HBV)慢性无症状携带者的HBV基因型分布.方法利用限制性片段长度多态性(RFLP)分析技术,由限制性内切酶AvaⅡ和DpnⅡ作用于HBVDNA前S区扩增片段建立的简便的HBV基因型分型方法,对52例HBeAg阳性的新疆维吾尔族HBV慢性无症状携带者的HBV进行基因型测定.结果D基因型57.7%(30/52),C基因型30.8%(16/52),B基因型11.5%(6/52),无A、E和F型.结论新疆维吾尔族HBV慢性无症状携带者的HBV基因型以D型为优势,为我国HBV基因型分布提供了新的资料,并为建立中国人HBV基因库提供依据.     

乙肝病毒外膜大蛋白检测及其对判定HBV DNA复制的意义

 目的 探讨血清乙肝病毒外膜大蛋白(LHBs)检测对于判定HBV DNA复制的临床意义.方法采用酶联免疫方法检测LHBs,Pre - S1和HBV M,采用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA.结果(1)在HBeAg阳性血清中,HBV DNA与LHBs、Pre -S1之间的阳性率差异均无统计学意义(P＞0.05);(2)在HBeAg阴性血清中,HBV DNA与LHBs的阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).HBV DNA与Pre -S1之间的阳性率差异有统计学意义(P＜0.05);(3) 90份乙肝患者血清中LHBs水平与HBV DNA拷贝数呈良好相关性(r=0.918),Pre - S1水平与HBV DNA拷贝数的相关系数为0.765.结论 血清LHBs水平能反映HBV DNA复制程度,其与HBV DNA的相关性优于pre - S1,可作为评判HBV DNA复制新的血清学指标.     

乙型肝炎病毒基因异质性及准种特点研究的临床意义

乙型肝炎病毒（HBV）基因组在慢性HBV感染的个体中存在不同的基因型（genotype)、血清型（serotype)和准种（quasispecies)等基因序列异质性（heterogeneity)的特点。HBV基因序列异质性是普遍存在的，在HBV基因组的各结构基因区、调节基因区都有异质性的特点，而且始终处在持续变化之中。HBV基因序列的异质性具有十分重要的生物医学意义。HBV准种等异质性特点的研究，使我们对于HBV全基因序列、HBV基因突变的规律、HBV抗药性的遗传学基础，甚至导致肝细胞恶性转化的分子生物学机制等都有了全新的认识。准种概念的引入，使我们对于HBV基因序列异质性的认识，从单一病毒株水平提升到HBV种群的水平，是对于HBV基因遗传与变异认识的一次革命性的飞跃。     

乙型肝炎病毒长期携带机理的研究

乙型肝炎病毒(HBV)感染后,从体内是否存在病毒的角度分析,有两种后果:隐性或显性感染后,机体获得抗HBV特异免疫,消灭病毒,机体康复。另一种即感染后未获得抗HBV免疫,或对HBV产生免疫耐受,导致机体长期携带病毒,成为传染源。关于HBV携带的概念各学者的观点不完全一致,目前有狭义和广义两种概念。狭义的HBV携带者即     

孕妇乙型肝炎血清病毒标志物和HBVDNA测定及临床意义

目的探讨孕妇乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清病毒标志物（HBV～M）组合与HBV DNA的关系以便指导免疫干预而阻断母婴传播。方法采用ELISA检测乙肝病毒血清学标志物（HBsAg、HBsAbHBeAgHBeAbHBcAb）,实时荧光定量PCR（FQ—PCR）对268例孕妇检测感染者血清中HBV DNA含量。结果HBsAg阳性组HBVDNA阳性率为49．4％（83／168）,HBsAg阴性组HBV DNA阳性率为11．10％（11／100）,两者差异显著（P〈0．01）,但HBsAg（-）组HBV DNA阳性数占总数中的11．7％（11／94）。结论临床仅根据HBV血清标志物抗原抗体的检测来判断病人的传染性是不全面的,应重视HBsAg阴性低水平HBV复制患者,结合HBV DNA的检测结果进行综合判断,以免造成宫内HBV感染。进行预防接种阻断HBV母婴传播。     

乙型肝炎患者不同血清标志物HBV DNA的表达及意义

 目的探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBVM)表现模式的相关性.方法血清HBV DNA定量检测采用PCR ELISA法,HBVM采用ELISA法.结果在HBVM阳性的366例血清中,有199例HBV DNA阳性,占54.4%.血清HB-/ml占65.2%;HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性者HBV DNA-HBc阳性者HBV DNA阳性率占95.2%,≥106 copiessAg、HBeAg、抗阳性率占29.1%,≥106 copies/ml占17.6%.结论血清HBVM阳性患者中约55.0%的血清HBV DNA阳性,且HBeAg阳性患者中HBV DNA含量及阳性率均明显高于抗-HBe阳性者;在抗-HBs、抗-HBc阳性或HBsAg阴性者血清内也有HBV DNA阳性者.     

HIV/HBV合并感染者HBV核心区与多聚合酶区特异性细胞毒性T细胞表位变异分析

目的 比较人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)/乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)合并感染者与HBV单一感染者外周血HBV核心（core,C）蛋白和多聚合酶(polymerase,P)蛋白的特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位变异的差异,探讨HIV/HBV合并感染者肝病进程加快的可能致病机制。方法 收集慢性HBV感染者的基本检查结果和血标本,并依据抗病毒前HIV抗体检测结果,分为HIV/HBV合并感染组和HBV单一感染组。提取HBV DNA,巢式PCR法扩增HBV C基因与P基因并送PCR产物测序,ContigExpress软件进行序列拼接,Vector NTI软件进行序列比对,参照相应基因型标准序列,分析2组患者的HBV CTL表位变异差异。结果 成功扩增的HBV C基因与P基因的患者共151例,其中HIV/HBV合并感染者83例,HBV单一感染者68例。HIV/HBV合并感染组较HBV单一感染组CTL表位变异发生率均偏高,其中C18-27、C88-96、C139-148表位变异发生率差异比较有统计学意义(χ2=7.509,P=0.006;χ2=3.902,P=0.048;χ2=4.238,P=0.040)。HIV/HBV合并感染组的C18-27表位主要变异氨基酸的类型增多,出现新的S26N(4.8%)、S26T(4.8%)变异类型,而C88-96、C139-148表位主要变异氨基酸相同(L95I、T147A)。结论 HIV/HBV合并感染可增加HBV C蛋白和P蛋白的CTL表位变异,尤其是C18-27、C88-96、C139-148表位变异。C蛋白CTL表位变异增多可能与HIV/HBV合并感染肝病进程加快的致病机制相关。     

靶向HBV C基因的siRNA在HepG2.2.15细胞中对HBV的抑制作用

目的研究靶向HBV C基因的短发夹状RNA(shRNA)表达质粒对HepG2.2.15细胞中HBV的抑制作用。方法设计构建两个靶向HBV C基因的shRNA表达质粒S1和S2,以及用于对照的非同源shRNA表达质粒S3。转染HepG2.2.15细胞后,通过RT-PCR和ELISA方法分别检测细胞中HBV C基因表达和细胞上清中HBV DNA、HBsAg和HBeAg表达。结果在转染后24 h时,HBV C基因mRNA表达量下降58%～83%,HBV DNA下降了2.44～3.36个log值,HBsAg和HBeAg的表达水平分别降低了51%～79%和50%～77%。S1、S2联合运用可以提高对HBV的抑制作用,而S3无抑制效果。结论靶向HBV C基因的shRNA表达质粒S1、S2及其联合运用,均能有效地抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制和表达。     

泛昔洛韦等3种药物抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

 目的评价泛昔洛韦、膦甲酸钠及氧化苦参碱的体外抗HBV作用.方法采用MTT法检测3种药物对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC5o),并在此基础上观察不同浓度药物作用于HepG2.2.15细胞后第3、5、7和9天培养上清中HBsAg、HBeAg及HBV DNA含量的变化,比较不同药物抗HBV的效果.结果泛昔洛韦和氧化苦参碱对HepG2.2.15细胞有明显的抗HBV活性,在实验浓度范围内,随着药物浓度增加和作用时间延长,其抗HBV活性增强;膦甲酸钠对HBV无明显抑制作用.结论泛昔洛韦和氧化苦参碱具有明显体外抗HBV活性,而膦甲酸钠体外对HBV无明显抑制作用.     

慢性乙肝患者石蜡包埋肝组织中HBV cccDNA定量检测方法的建立

目的建立慢性乙肝患者微量石蜡包埋肝组织共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)定量检测方法。方法以37例慢性乙肝患者甲醛固定石蜡包埋肝组织为研究对象,提取肝组织HBV DNA,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)消化后,利用滚环扩增加跨缺口实时荧光PCR扩增技术检测肝组织中HBV cccDNA含量,以β-actin为内参照。通过已知浓度的模板DNA进行梯度稀释鉴定该方法的灵敏度,并对该方法进行批内和批间重复性检测。应用该方法分析37例慢性乙肝患者肝组织HBV cccDNA与血清总HBV DNA、肝组织总HBV DNA的关系,以及肝组织HBV cccDNA和HBV DNA与血清HBeAg表达之间的关系。结果成功建立了微量石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的定量检测方法,该方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。HBeAg阳性者肝组织中cccDNA含量明显高于HBeAg阴性者,HBV cccDNA水平与血清总HBV DNA水平(R2=0.48,P=0.042)及肝组织总HBV DNA水平(R2=0.63,P=0.001)呈正相关。结论该方法可特异灵敏地定量检测微量石蜡包埋组织切片中的HBV cccDNA。     

定量聚合酶链反应检测HBV感染患者血清HBV DNA的临床意义

采用信号引物能量转换定量聚合酶链反应（PCR）检测104例不同HBV感染患者血清HBV DNA含量。结果：不同HBV感染患者HBV含量范围在10^4.49-10^9.93拷贝／ml，其中急性乙肝含量显著低于慢性乙肝、乙肝后肝硬变和原发性肝癌患者的含量（P＜0.05和P＜0.01)；HBeAg( )患者的含量显著高于HBeAg(-)／抗－HBe( )患者的含量（P＜0.001)；相关分析显示：血清HBV DNA含量与血清ALT水平无明显相关。结论：HBV感染的慢性化可能与血清HBV DNA含量高有关，肝损伤与血清HBV DNA含量无明显关系；e系统血清传换后，HBV并未停止复制，只是复制水平降低，应用定量PCR检测血清HBV DNA含量有助于HBV感染患者预后的判断和重新评价HBV感染的自然史及HBVM的临床意义。     

孕妇乙型肝炎病毒携带状态与母婴传播的关系

慢性乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus HBV）感染是全世界共同关注的问题。HBV的围产期传播是重要的传播途径,但是其确切的传播规律和机制至今仍未完全阐明。我们通过对HBV阳性孕妇配对检测其胎儿脐血HBV标志物，探讨孕妇HBV携带状态与母婴传播的关系，现报告如下。     

HBV序列与耐药分析信息平台的初步建立

目的 采用生物信息和网络信息技术建立一个带有临床资料和代表性克隆基因的多功能乙型肝炎病毒(HBV)序列数据库及HBV耐药分析平台.方法 平台的构建基于J2EE框架,支持Windows、Linux等操作系统,支持Oracle、Sqlserver、Mysql等数据库.整合了序列比对、进化分析、抗原表位分析、耐药变异分析和耐药分析等生物信息学功能.收录的HBV基因序列、克隆和相关临床信息来源于2007年7月-2009年6月解放军302医院诊治的6880例HBV感染患者.结果 初步建立了该信息平台并进行了应用.平台收录了本课题组检测分析的HBV全基因组序列516条,HBV反转录酶(RT)/S或前核心启动子/前C功能基因或调控序列11456条,代表性HBV基因组或基因克隆613条以及患者的临床资料,实现了HBV序列比对、基因型/亚型和血清型分型、s/C/P/X蛋白氨基酸序列预测、T细胞抗原表位分析、耐药分析、患者临床信息检索等功能.应用该数据平台分析我国大样本慢性HBV感染患者HBV耐药变异和基因型流行特点,表明功能实用可靠.结论 HBV序列和耐药分析信息平台的建立有助于充分利用我国患者的HBV序列和相关信息资源,服务于乙肝患者的临床耐药检测和HBV病毒学特性研究.     

乙型肝炎相关性肝细胞肝癌HBV血清标志物特征探讨

目的探讨乙型肝炎相关性肝细胞肝癌（HCC）乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物特征。方法选择2009年6月~2013年6月临床确诊的有明确HBV感染史的HCC患者312例,分析患者HBV DNA载量,定量检测HBV标志物（包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）并分析其组合方式。结果①312例HCC患者中,HBV DNA阳性299例（299/312,95.83%）。HBeAg阳性者41例（41/312,13.14%）,其HBV DNA载量为（5.79±2.53）Log10copies/ml;HBeAg阴性者271例（271/312,86.86%）,其HBV DNA载量为（4.59±1.66）Log10copies/ml（P〈0.01）。②HBV标志物存在6种组合方式,6.09%患者HBsAg阴性,86.86%患者HBeAg阴性。结论 HBV DNA多为低至中等水平,HBV DNA阳性者中高病毒载量者仅为少数;HBeAg阴性者远多于HBeAg阳性者;HBsAg滴度较低,少数患者HBsAg阴性。     

177例吸毒者HBV感染流行病学及危险因素调查研究

为了解 HBV 在吸毒人群中的流行和引起感染的危险因素,我们用 ELISA 法对167例静脉毒品成瘾者、10例口吸毒品成瘾者、6例劳教所工作人员及58例供血员做了 HBV 感染标志检测。结果发现,各人群 HBV 感染率分别为70.7%、30.0%、16.7%和10.3%。静脉毒品成瘾者 HBV 感染率显著高于其它各人群,后3种人群间则无显著性差异。有 HBV 标志的静脉毒品成瘾者,HBsAg 阳性率仅占22.9%,抗—HBs 和/或抗—HBe 阳性率占55.9%。表明昆明市静脉毒品成瘾者是 HBV 感染的高危人群。造成 HBV 感染的流行可能与用 HBV 感染者注射器静注毒品、注射器和稀释毒品溶剂不消毒等因素有关。     

阿德福韦、拉米夫定联合治疗拉米夫定耐药乙型肝炎的抗耐药优势

乙型肝炎病毒（HBV）是一种DNA病毒，它通过逆转录在肝细胞中进行复制。HBV聚合酶在HBV复制过程中起着重要的作用．已知核苷类药物耐药突变均发生在HBV聚合酶上。与其它DNA聚合酶不同，HBV聚合酶是一种逆转录酶，缺乏校正的功能，同时HBV复制能力强，每日可产生1012～1013个病毒，因此发生突变的概率高，使HBV变异率高于其他DNA病毒10倍左右。核苷类药物主要是通过与HBV聚合酶的天然底物（dNTP）竞争来达到抑制HBV聚合酶的活性，从而达到抑制HBV复制的作用。但是由于它不能清除肝细胞内病毒的环状DNA（cccDNA），未达到血清转换，停药后HBVDNA又可再度复制．所以需长期使用。