hBMP2基因转染对人牙龈成纤维细胞生物学特性的影响

目的分析hBMP2基因转染人牙龈成纤维细胞的生物学特性.方法用脂质体转染法将hBMP2基因转入人牙龈成纤维细胞内,经G418筛选后,获得阳性克隆.以原位杂交和免疫组化对转染细胞进行鉴定;进一步观察细胞形态、生长特性、碱性磷酸酶活性、骨钙素合成以及体外形成矿化结节的能力.结果hBMP2基因转染后,人牙龈成纤维细胞有hBMP2 mRNA的转录和蛋白表达;部分细胞由原来的长梭形转化为多角形,碱性磷酸酶活性和骨钙素合成均明显高于对照组(两组均P＜0.01);在矿化液作用下,能形成体外矿化结节.但细胞的增殖特性无明显变化.结论外源性hBMP2基因能够在人牙龈成纤维细胞表达,并促进其向成骨细胞方向转化,而对细胞的生长特性无明显影响.     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的比较研究

目的：研究人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的差异。方法：用组织块法培养同一患者的牙龈和牙周韧带成纤维细胞,取第4-8代细胞用矿化培养液长期培养,倒置显微镜下观察矿化情况,von Kos-sa染色显示钙盐沉积,生化法测定各组碱性磷酸酶活性,扫描电镜及X线能谱法分析矿化结节中钙磷比例。结果：倒置显微镜下观察牙周韧带成纤维细胞可呈复层生长,形成肉眼可见的白色结节,von Kossa染色显示结节内有钙盐沉积,碱性磷酸酶活性测定表明随着矿化培养时间的延长牙周韧带成纤维细胞组ALP活性比牙龈成纤维细胞组增高明显,扫描电镜下表明结节处电子反射增强,X射线能谱分析显示钙化结节内的钙磷比例与矿化组织相似;牙龈成纤维细胞及对照组体外不能形成钙化结节。结论：人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力不同。     

人牙龈成纤维细胞体外降解胶原能力的测定

目的 :观察体外培养的健康人牙龈成纤维细胞对鼠Ⅰ型胶原降解的影响和时间效应。方法 :在 6孔板底制备胶原膜 ,取固定数量的对数生长期健康人牙龈成纤维细胞接种于胶原膜中央 (2 5× 10 3/孔 ) ,分别于孵育 2 4、48、72h后消化弃去细胞 ,考马斯亮蓝液染色胶原膜 ,显微镜下测定降解区和非降解区的吸光度来判定不同时间段的胶原降解量。结果 :3例标本来源细胞的结果基本一致 ,表现为随时间的延长 ,胶原降解量也相应增加 ,2 4、48、72h的胶原降解量分别约为 2 0 %、40 %、60 %。结论 :健康人牙龈成纤维细胞对鼠Ⅰ型胶原有降解作用 ,而且有一定时间效应 ,这可能是细胞本身的功能变化所为 ,而非细胞数量变化的结果     

重组人骨形成蛋白2对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的:研究重组人骨形成蛋白2 (rhBMP2) 对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs) 的生物学作用。方法:原代培养HPDLFs ,并观察rhBMP2 对HPDLFs 增殖、碱性磷酸酶(ALP) 活性、骨钙素(OC) 合成及矿化结节形成的作用。结果:0125～2 mgPml rhBMP2 对HPDLFs 的增殖无明显作用,015～2 mgPml rhBMP2 显著提高HPDLFs 的ALP 活性,刺激OC合成和矿化结节形成。结论:rhBMP2 对HPDLFs 的作用具有剂量依赖性。rhBMP2 能够刺激HPDLFs 表达成骨细胞表型并促进其表型成熟。     

rhBMP-2诱导成肌细胞表达成骨表型的研究

目的：检测不同浓度rhBMP-2对诱导成肌细胞成骨表型表达的影响，探索诱导成肌细胞表达成骨表型的rhBMP-2的最适浓度。方法：采用双重酶消化法获取SD大鼠乳鼠的成肌细胞，纯化后，在含15％胎牛血清的DMEM培养液中培养。取第3代培养细胞，按培养液中不同rhBMP-2浓度分组，分为0、0．1、0．5、1．0、1．5和5．0μg／ml共6组（0μg/ml组为对照组1，培养1、2和4周。收集不同时期细胞培养上清液和细胞爬片进行检测，检测指标为：细胞形态和数量、碱性磷酸酶（ALP）活性、骨钙素（OCN）含量、Ⅰ型胶原合成量和钙化结节染色。采用SPSS10．0统计软件包进行统计分析。各组间比较采用方差分析（ANOVA）。结果：应用rhBMP-2后，梭形成肌细胞减少，圆形或多突形成肌细胞明显增加，细胞呈集结性生长，培养4周可形成不透光结节。低、中浓度（0．1-1．5μg／ml）rhBMP-2组细胞数量和对照组之间无显著性差异（P〉0．05），但高浓度（5．0μg／ml）rhBMP-2组细胞数量显著下降（P〈0．05）。0．1～1．5μg／ml 4组rhBMP-2均能促进成肌细胞合成分泌ALP、OCN和Ⅰ型胶原（所有组与对照组比较，P〈0．05），其中0．5和1．0μg/ml 2组促进作用更显著。细胞培养4周后，茜素红S染色法示结节呈红色钙阳性反应。结论：低、中浓度（0．1～1．51μg／ml）rhBMP-2对成肌细胞增殖无显著影响，但高浓度（5．0μg/ml）rhBMP-2可显著抑制成肌细胞增殖。rhBMP-2可有效诱导成肌细胞表达成骨细胞各项表型并能体外成骨，其中0．5～1．01μg／ml是一个较为适宜的诱导浓度。     

烟草对人牙龈成纤维细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的:探讨烟草浸提液(smokeless tobacco,ST)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)在纯钛片上附着及增殖的影响及机制.方法:原代HGFs与不同浓度ST共同培养2h和2、4、6、8d;采用CCK-8法测定细胞黏附及增殖;采用双抗夹心酶联免疫吸附法检测不同时间培养上清液中纤维连接蛋白(fibroneetin,FN)的含量.采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:HGFs在钛片上的黏附率随ST浓度升高呈下降趋势,5.0 g/L和10g/L的ST组黏附率分别为(34.316±7.725)％和(25.478±10.651)％,显著低于对照组(100％,P＜0.01).细胞在钛片上增殖至第2天和第4天,对照组显著大于2.5、5.0、10g/L ST组(P＜0.05);第6天和第8天时,对照组均显著大于0.625～10 g/L各ST组(P＜0.05).ST与HGFs培养到第8天,0.625、1.25、2.5 g/L的ST组FN浓度分别为(69.352±31.640)、(23.595±8.625)和(7.292±2.865) ng/mL,显著低于对照组(142.188±28.126)ng/mL (P＜0.05).结论:ST能显著抑制HGFs在钛片上的黏附和增殖,其机制可能与细胞产生FN减少有关.     

不同来源人牙龈成纤维细胞体外降解胶原能力研究

目的 :体外培养条件下比较健康人及侵袭性牙周炎患者的牙龈成纤维细胞对鼠I型胶原降解的影响和差异。方法 :在 6孔板底制备胶原膜 ,取固定数量的对数生长期健康人及侵袭性牙周炎患者的牙龈成纤维细胞接种于胶原膜中央 ,分别于孵育 2 4、48、72h后消化弃去细胞 ,考马斯亮兰液染色胶原膜 ,显微镜下测定降解区和非降解区的光密度来比较不同时间段各组细胞的胶原降解量。结果 :健康人和侵袭性牙周炎各 3例标本来源细胞的结果基本一致 ,表现为随时间的延长 ,胶原降解量相应增加 ;而各时间段病变组的胶原降解量较健康组明显增加(P <0 .0 5 )。结论 :健康人和侵袭性牙周炎的牙龈成纤维细胞对鼠I型胶原均有降解作用并呈现出时间效应 ,而且病变组的作用更强。     

氯化镧对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞分泌白细胞介素-8的影响

目的探讨稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导人牙龈成纤雏细胞分泌白细胞介素-8（IL-8）的影响。方法组织块法培养人牙龈成纤维细胞，用脂多糖对其进行诱导，ELISA法检测IL-8分泌量。结果经氯化镧处理的成纤维细胞虽有脂多糖诱导但细胞分泌IL-8量明显低于对照组（P〈0．01）。结论氯化镧具有抑制脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-8的作用，据此推测氯化镧的抗炎作用机理可能与其抑制脂多糖介导的炎症因子释放有关。     

可溶性CD14对LPS诱导人牙龈成纤维细胞活化的影响

目的:观察重组表达的sCD14对LPS的炎症介导作用的影响。方法:将异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记的LPS分别和sCD14以及阳性对照内毒素中和蛋白(endotoxin neutralizing protein,ENP)孵育后,加入人牙龈成纤维细胞培养系统中,通过流式细胞仪测定LPS与细胞结合后的荧光强度;采用ELISA检测细胞培养上清中的TNF-α和IL-6的含量。结果:sCD14和ENP可导致细胞膜平均通道荧光强度减低,LPS诱导的细胞因子TNF-α和IL-6分泌量显著下降。结论:sCD14和ENP使人牙龈成纤维细胞的LPS结合量显著下降,表明sCD14和LPS中和蛋白可竞争性结合LPS,引起细胞培养系统中游离LPS浓度下降,对细胞的炎症介导作用减小。     

骨形成蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子对人骨髓基质细胞的生物学作用

目的：探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(b—FGF)单独或联合作用对人骨髓基质细胞(HBMSC)增殖和分化的影响。方法：利用四唑盐比色法(MTT)、碱性磷酸酶(ALP)测定法观察不同浓度的rhBMP-2和b—FGF单独或联合作用时HBMSC的增殖和分化情况。结果：rhBMP-2对HBMSC的增殖和ALP表达均有促进作用；b—FGF促进HBMSC增殖，但抑制ALP表达；rhBMP-2和b—FGF联合作用时HBMSC的增殖和ALP活性较单独作用有显著提高。结论：rhBMP-2和b—FGF联合应用时对HBMSC的增殖和向成骨细胞分化具有协同作用。     

重组人骨形成蛋白-2/珊瑚复合人工骨的动物实验研究

本研究将重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）和珊瑚以一定的方式复合后,植入小鼠股部肌袋和兔颅骨标准大小缺损,以单纯珊瑚植入作对照,术后不同时间取材,通过组织学方法检测其骨诱导活性和骨修复能力．结果显示：ｒｈＢＭＰ－２／珊瑚复合人工骨植入小鼠肌袋１周,诱导软骨形成,３周,形成编织骨,６周,形成含骨髓的板层骨,同时,珊瑚被部分降解吸收;复合人工骨植入兔颅骨缺损后,以引导成骨和诱导成骨双重机制完成骨修复过程,术后１２周,植入物完全被成熟的骨组织取代,其骨修复效果明显优于单纯的珊瑚．此复合人工骨具有骨传导和骨诱导活性,骨修复能力较强,是一种较理想的新型生物性植骨材料     

rhBMP-7对大鼠成骨细胞增殖及分化能力的影响

目的研究重组人骨形态发生蛋白-7（recombinant human bone morphogenetic proteins,rhBMP-7）对大鼠成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法从SD大鼠取材进行原代培养,经碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）和矿化结节检测鉴定为成骨细胞后传代至第3代,接种至96孔培养板。分为A、B、C、D、E、F共6组,每组3个复孔,rhBMP-7浓度分别为0．000、0．500、1．000、5．000、10．000、50．000mg/L。应用四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法及PNPP偶氮法,分析不同浓度rhBMP-7作用72h后对大鼠成骨细胞增殖和ALP活性的影响,应用单因素方差分析和LSD法统计数据。结果作用72h后,6种浓度rhBMP-7对大鼠成骨细胞ALP活性促进作用的差异有统计学意义（F=11．840,P=0．000）,B组成骨细胞ALP活性高于A组,但差异无统计学意义（P=0．078）,C、D、E、F组大鼠成骨细胞ALP活性均高于A组（P值均为0．000）,rhBMP-7浓度为50．000mg／L时对ALP活性的影响最明显（P=0．000）。作用72h后6种浓度rhBMP-7对大鼠成骨细胞增殖影响的差异有统计学意义（F=2．726,P=0．026）;rhBMP-7能促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,同A组（rhBMP-7浓度为0．000mg／L）相比,当rhBMP-7浓度为50．000mg／L时并作用至第3天时,大鼠成骨细胞增殖最显著（P=0．000）。结论一定剂量的rhBMP-7明显促进了大鼠成骨细胞的增殖和分化。     

rhBMP2缓释微球对牙龈成纤维细胞的生物学作用

目的：观察甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dex-GMA)载重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP2)缓释微球(MPs)对体外培养的人牙龈成纤维细胞(GFCs)的生物学作用。方法：采用体外细胞培养技术,将rhBMP2缓释微球和GFCs一起培养,采用M1Tr法检测其对GFCs的增殖状况的影响;碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测细胞ALP活性以反映rhBME2缓释微球对其分化状况的影响,并与单纯rhBMP2的作用进行比较。结果：rhBMP2缓释微球具有良好的生物学活性,能显著促进的GFCs增殖及分化,并维持10d以上,其效应高于单纯施加rhBMP2的效应。结论：所制备的rhBMP2微球比单纯rhBMP2对GFCs有更为明显的生物学效应,可以达到对生长因子的有效缓释。     

人重组骨形成蛋白-2诱导NIH3T3细胞向成骨细胞表型转化

目的探讨人重组骨形成蛋白一2 (rhBMP-2)对NU13T3成纤维细胞生物学行为的影响。方法培养 NIH3T3细胞，加人外源性rhBMP-2，用生长曲线、唾哇蓝(MIT)比色、流式细胞仪(FCM)分析、BrdU检测观察细胞的增殖和DNA合成，并检测碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OC)含量观察细胞是否有成骨趋向。结果加药组细胞的增殖活性下降、DNA合成变慢，All]活性和OC含量均增高。结论rhBMP-2使NIH3T3细胞增殖活性变弱，表现成骨细胞表型。     

复合骨形成蛋白治疗剂治疗根尖周病的动物实验研究

目的　观察复合重组人骨形成蛋白-2 (rhBMP-2)治疗剂治疗狗牙实验性根尖周病的疗效。方法　采用根 管内封入内毒素细菌混合液的方法建立根尖周病动物模型,将由rhBMP-2、磷酸三钙、胶原和甲硝唑制成的复合rh- BMP-2治疗剂作为根尖屏障用于狗牙实验性根尖周病的治疗,行X线及组织学观察治疗效果,同时设有载体组(根 尖屏障材料不含rhBMP-2)和对照组(根尖屏障材料为氧化锌丁香油糊剂加牙胶尖)。结果　复合rhBMP-2治疗剂具 有X线阻射特性,实验组治疗根尖周病的有效率明显高于载体组和对照组;组织学观察显示,实验组根尖周组织新 生活跃,修复质量明显优于载体组和对照组(P<0.05)。而且rhBMP-2治疗剂用量少,可操作性好。结论　复合rh- BMP-2治疗剂治疗根尖周病有较好的效果。     

重组人骨形成蛋白牙槽嵴内诱导成骨的实验研究

目的:探讨原核表达重组人骨形成蛋白-7牙槽嵴内诱导成骨的作用效果。方法:拔除大白兔的切牙建立动物模型,以明胶海绵作为载体,将原核表达的重组人骨形成蛋白-7与之复合后植入即刻拔除牙齿的牙槽窝内进行干预治疗,通过扫描电镜观察及钙含量测定,探讨原核表达重组人骨形成蛋白-7牙槽嵴内诱导成骨的作用效果。结果:扫描电镜观察显示:实验组的骨创愈合比对照组大约提前4~6周;钙含量测定显示实验组明显高于对照组,差异有统计学意义。结论:重组人骨形成蛋白-7具有良好的诱导牙槽嵴内成骨的效果。