血府逐瘀汤对用血瘀证兔血清损伤的血管内皮细胞的形态学影响

[目的]从形态学角度观察血府逐瘀汤对用血瘀证兔血清损伤的内皮细胞的保护作用。[方法]将正常组、血瘀证组、正常加中药组和血瘀证加中药组兔血清分别加入同批培养的政党中外文 动脉内皮细胞中,用光镜和电镜观察其形态结构的变化。[结果]光镜检查表明血瘀证组内皮细胞收缩变形,细胞间隙增大,胞浆中有暗色颗粒;血瘀证加中药组细胞间隙增大不明显,电镜观察发现,与正常组和正常加中药组相比,血瘀证组细胞内饮液泡明显增多,粗面内质网数目减少并有扩张,线粒体细小,嵴不清,细胞表面仅有少量细长的微绒毛,末端膨大融合;而血瘀证加中药组粗面内制裁网数目较少但不扩张,细胞表面微绒毛未见融合。[结论]血瘀证组兔血清严重损伤体外培养的正常血管内皮细胞,血府逐瘀汤对用血瘀证兔血清损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用。     

从血管内皮细胞损伤研究冠心病血瘀证病理基础

血瘀证是冠心病的一个重要证型,影响冠心病的发生和转归,血管内皮细胞损伤是冠心病血瘀证的重要病理基础。现主要从血管内皮细胞功能与血瘀的关系、血管内皮细胞损伤与冠心病的相关性、冠心病血瘀证与血管内皮细胞相关性研究以及活血化瘀药物对血管内皮细胞损伤的影响四个方面进行探讨。从现代医学角度剖析中医理论,将冠心病血瘀证的病理研究转向了微观的客观化层面,揭示了冠心病血瘀证的本质,为进一步探求有效的治疗方法提供客观依据。     

论中医戒烟预防特发性肺纤维化

血瘀证是冠心病的一个重要证型,影响冠心病的发生和转归,血管内皮细胞损伤是冠心病血瘀证的重要病理基础。现主要从血管内皮细胞功能与血瘀的关系、血管内皮细胞损伤与冠心病的相关性、冠心病血瘀证与血管内皮细胞相关性研究以及活血化瘀药物对血管内皮细胞损伤的影响四个方面进行探讨。从现代医学角度剖析中医理论,将冠心病血瘀证的病理研究转向了微观的客观化层面,揭示了冠心病血瘀证的本质,为进一步探求有效的治疗方法提供客观依据。     

基于“以方验证”建立血流机械力条件下高血压病血瘀证细胞模型的思路探讨

基于目前高血压病血瘀证细胞模型均以静态培养的内皮细胞为研究对象,而体外静态培养的细胞并不能完全符合高血压病血瘀证患者活体细胞的特性,不适合中医整体观、恒动观的传统理论,以及中医特色不强等问题,探讨建立一种以血流动力学改变为主要致病因素的高血压血瘀证细胞模型,并以中医活血化瘀经典方剂进行检验,建立一种符合血瘀的诊断标准,有较公认的病理生理变化指标,用活血化瘀代表方剂治疗可使血瘀状况改善或者逆转的细胞模型,以期为进一步研究血瘀证实质和活血化瘀方药的作用机制提供基础。     

人脐静脉内皮细胞培养技术的研究进展

<正>血管内皮细胞连续覆在血管内膜,其具有重要的生理功能,广泛参与了炎性反应、血管新生、免疫应答、动脉粥样硬化、血管张力调节等生理及病理过程~[1]。血管内皮细胞功能失调与许多心血管疾病的发生有关,冠心病的发生与血管内皮细胞的损伤与其功能异常有密切的关系~[2]。内皮细胞的体外培养是研究内皮细胞生物学与多种疾病关系的重要方法,是目前最简单可靠的被广泛运用于生理研究的人类血管细胞。随着细胞培养技术不断进步,文献报道了一种仪器,使用     

血瘀证血管内皮细胞损伤的抗凝与纤溶障碍研究

【目的】探讨实验性血瘀证兔模型血管内皮细胞抗凝与纤溶功能的变化规律。【方法】复制去甲肾上腺素与牛血清白蛋白诱导的血瘀证兔模型 ,分离其主动脉血管内皮细胞进行原代和传代培养 ,检测模型动物体内血浆及体外细胞液中抗凝血酶Ⅲ (AT -Ⅲ )、组织型纤溶酶原激活物 (t -PA)和纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI)等抗凝和纤溶指标的变化。【结果】与正常组比较 ,血瘀证组兔血浆t-PA和AT -Ⅲ的活性降低 (P <0 .0 1) ,PAI的活性升高 (P <0 .0 1) ;血瘀证组原代培养液中的t -PA活性较正常组降低 (P <0 .0 5) ,PAI活性升高 (P <0 .0 5) ;血瘀证组传代培养液中t-PA、PAI活性与正常对照组的差异均无显著性(P >0 .0 5)。【结论】血管内皮细胞抗凝与纤溶功能障碍在血瘀证形成和发展过程中起着重要作用。     

血瘀证兔血清对培养的血管内皮细胞活性因子基因表达的影响

【目的】探索血瘀证形成和发展过程中血管内皮细胞活性因子内皮素和一氧化氮 (NO)改变的分子机理。【方法】用半定量RT -PCR方法 ,观察血瘀证兔模型血清对体外培养的血管内皮细胞内皮素 (ET)和组成型NO合成酶 (constitutivenitricoxidesynthase ,cNOS)基因表达的影响。【结果】血瘀证动物模型血清导致体外培养的内皮细胞中ET - 1mRNA表达升高 (P <0 .0 1) ,cNOSmRNA表达下降 (P <0 .0 1) ,两者呈显著负相关 (r=- 0 .857,P <0 .0 1)。【结论】血管内皮细胞中ET基因高表达及cNOS基因低表达导致的二者平衡失调在血瘀证形成和发展过程中起着重要作用。     

血瘀证兔模型血管内皮细胞中一氧化氮合酶 的基因表达及其分泌一氧化氮的变化

【目的】了解实验性血瘀证动物模型血管内皮细胞中一氧化氮合酶(NOS)的基因表达及其分泌NO的变化。【方法】用半定量RT-PCR方法检测模型组体内血管内皮细胞及体外培养的细胞中组成型一氧化氮合酶mRNA的表达,并相应测定分泌的NO水平。【结果】与对照组比较,模型组兔体内血管内皮细胞中组成型NOS(cNOS)基因表达以及血浆和原代培养液中NO水平皆明显下降(P＜0.01),同期血浆中NO含量与内皮细胞中cNOSmRNA的表达水平呈正相关(r=0.739,P＜0.01)。两组间体外培养的传代细胞中cNOS基因表达及培养液上清中NO含量无明显差异(P＞0.05),但NO水平都比各自原代培养液中的明显升高(P＜0.01,P＜0.05)。【结论】短期内血瘀证兔模型体内内源性NO水平降低主要是cNOS基因表达下降导致的,随时间的延长,不排除诱导型NOS(iNOS)及体内其他因素对分泌NO的综合影响。     

血浆sICAM-1、sVCAM-1含量与冠心病气虚血瘀证的相关性研究

目的 :通过检测冠心病(CHD)患者的血浆可溶性细胞间黏附分子(sICAM-1)和可溶性血管细胞黏附分子(sVCAM-1)等血管活性物质的含量,探讨血管内皮细胞功能与冠心病气虚血瘀证的相关性。方法:对CHD气虚血瘀证组112例、CHD非气虚血瘀证组108例、非CHD气虚血瘀证组110例和健康人对照组100例检测,分析血管内皮细胞产生的sICAM-1、sVCAM-1等血管活性物质。结果:sICAM-1和sVCAM-1的异常程度均呈CHD气虚血瘀证组>CHD非气虚血瘀证>健康人对照组的趋势(P<0.05或P<0.01);而CHD气虚血瘀证组与非CHD气虚血瘀证组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:血管内皮细胞分泌的sICAM-1和sVCAM-1等血管活性物质与CHD形成及病情变化密切相关,是CHD气虚血瘀证重要病理标志物。     

2型糖尿病血瘀证血管内皮细胞损伤模型的研究

目的 建立2型糖尿病血瘀证的血管内皮细胞损伤模型.方法 取对数生长期的正常人脐静脉内皮细胞(ECV-304),干预分组如下:空白对照组(无血清的DMEM)、健康组(健康人血清)、糖尿病血瘀证组(糖尿病血瘀证患者血清)和糖尿病非血瘀证组(糖尿病非血瘀证患者血清).采用MTT法观察细胞活性;在倒置相差显微镜、扫描电镜和透射电镜下观察细胞形态的变化;应用放免法测定内皮素(ET)含量;硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量;利用双抗夹心ELISA法检测各组细胞培养上清液中内皮细胞蛋白C受体(EPCR)、血管内假性血友病因子(vWF)和血栓调节蛋白(sTM)的含量;应用激光扫描共聚焦显微镜,采用Fluo-3/AM作为荧光指示剂观察细胞内游离钙浓度的变化;并采用荧光探针标记的鬼笔环肽染色法观察细胞肌动蛋白微丝分布的差异.结果 ①10%浓度的糖尿病血瘀证组的OD值较健康组明显降低(P＜0.001);②糖尿病血瘀证组的ET水平比空白对照组和糖尿病非血瘀证组升高(P＜0.001);糖尿病血瘀证组的NO水平比空白对照组降低(P＜0.001);但和糖尿病非血瘀证组相比差异没有统计学意义(P＞0.05);③内皮细胞经过患者血清损伤后,糖尿病血瘀证组分泌的EPCR含量比空白对照组升高(P＜0.001),但低于糖尿病非血瘀证组(P＜0.001);糖尿病血瘀证组分泌的vWF和sTM含量比空白对照组升高(P＜0.001),和糖尿病非血瘀证组相比差异没有统计学意义(P＞0.05);④糖尿病血瘀证组胞浆内荧光分布不均匀,荧光强度高于正常对照组和糖尿病非血瘀证组(P＜0.001);⑤空白对照组和健康组细胞骨架微丝分布多规则清晰,保持着细胞的正常外形,糖尿病血瘀证组的细胞骨架微丝断裂且排列紊乱,糖尿病非血瘀证组细胞微丝断裂但排列较为规则.结论 应用2型糖尿病血瘀证患者血清干预ECV-304可以在体外表现出血管内皮细胞损伤的种种征象,初步建立一种病证结合的血瘀证细胞损伤模型.     

LDL和HDL对培养的人血管内皮细胞的影响

本文以不同胆固醇浓度的低密度脂蛋白和高密度脂蛋白或将其混合,施加于培养呈融合状态的人脐带静脉血管内皮细胞。通过相差显微镜、扫描电镜和透射电镜观察,发现LDL对内皮细胞有损伤作用,并随所含胆固醇浓度的增高,其损伤程度加重,损伤机制可能与脂质过氧化物的增加有关。HDL对内皮细胞有保护作用,可使其免遭LDL的损伤,可能与HDL可阻止LDL所引起内皮细胞膜中胆固醇的过多或毒性堆积等有关。     

维生素E对内皮细胞诱发血管平滑肌细胞凋亡的抑制作用

目的：研究维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞（EC）诱发的血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡是否具有抑制作用。方法：以氢过氧化枯烯为诱发剂引发培养的血管EC的脂质过氧化反应,将制备的内皮细胞条件培养液（EC－CM）作为实验因素作用于培养的VSMC。彩和透射电子显微镜,免疫组织化学等方法观察维生素E对内皮细胞条件培养液诱发的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果：电镜可见VSMC凋亡小体。免疫组织化学结果显示,VSMC的P53蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达下调。加维生素E组电镜改变轻微,p53,bcl-2异常表达减轻,结果：维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞诱发的血管平滑肌细胞凋亡具有抑制作用。,     

不同浓度牛磺酸对兔角膜内皮细胞的影响

目的 探讨牛磺酸对兔眼角膜内皮细胞的毒副作用。方法 取家兔6只（共12眼）,每只眼制取6片组织片,用组织块培养法培养兔角膜内皮细胞,细胞接种于12孔培养板,分别加入2%、4%、6%、8%、10%的牛磺酸液（同一动物的左右眼加同一浓度牛磺酸溶液）,设立空白对照。倒置显微镜观察角膜内皮细胞的生长情况;在培养的第1、2、4、6、8天,将部分培养细胞用Wright染色后观察细胞形态。结果 空白对照和加入2%、4%、6%牛磺酸溶液培养的角膜内皮细胞,1周后均形成内皮细胞层,细胞形态呈六角形或类圆形。加入8%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第4天时生长不良,细胞胞体小;第8天时培养细胞死亡。加入10%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第2天时出现生长不良,细胞胞体小,部分细胞已死亡。同一动物的左右眼角膜内皮细胞生长速度和细胞形态相似。结论 2%~6%牛磺酸对兔角膜内皮细胞的生长无不良影响,提示该浓度范围的牛磺酸对角膜内皮细胞无毒副作用。     

中医药调控内皮祖细胞的现状与思路

内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)是修复损伤血管内皮的细胞库,EPC功能异常和数量减少是内皮功能障碍的主要原因,而内皮功能障碍是多种内皮损伤性疾病的始动因素.利用细胞疗法输注体外扩增的EPC来修复受损血管内皮已成为当前防治心脑血管疾病的有效手段.但单独输注EPC修复受损血管内皮的疗效不甚明显,其与血管内皮损伤后局部微环境的改变以及多种细胞因子的干预影响EPC的动员、归巢和分化有较大关系.因此探讨药物干预促进EPC对受损血管内皮的修复具有一定的科学意义,而中医药是伟大的宝库,从中选择有效的药物和方法促进EPC修复受损血管内皮具有广阔的应用前景.     

An experimental study of endovascular brachytherapy using liquid32P filled balloon catheter

Objective To observe the effect of endovascular brachytherapy on the prevention of restenosis after interveneional therapy and to investigate its possible mechanisms. Methods In the balloon injuried rabbit model,pathological sections of iliac arteries were observed and the changes of vascular histomorphology were estimated by computer analysis of photomicrograms. Using immunohistochemical techniques, proliferating cell nuclear antigen （PCNA） was quantified to assess the proliferation of vascular smooth muscle cells. Results After rabbit iliac arteries were injured by balloon overstretch angioplasty, neointima were shown to be less proliferative in the irradiated group than in the control group, from PCNA scores. The formation of neointima was suppressed with the external elastic laminar area increasing and without the luminal area decreasing in the irradiation group. Conclusion Endovascular brachytherapy using a liquid (32)P filled balloon catheter system could prevent restenosis possibly by inhibiting the formation of neointima and improving positive vascular remodeling.     

血管内皮生长因子对血管内皮细胞分泌功能的影响及一氧化氮在其中的作用

目的 :观察血管内皮生长因子 (VEGF)对兔离体主动脉内皮细胞分泌功能的影响 ,了解一氧化氮 (NO)在其中所起的作用 ,以明确VEGF的作用机制。方法 :先进行兔主动脉内皮细胞的培养和鉴定 ,然后行传代培养。在第 3～ 5代主动脉内皮细胞培养液中加入不同浓度的VEGF ,培养 6h ,取上清液测定内皮素 (ET)、血管性血友病因子 (vWF)值 ,并应用一氧化氮合成酶 (NOS)抑制剂N -硝基 -L -精氨酸甲酯 (L -NAME)后观察ET、vWF值的变化情况。结果 :VEGF可抑制血管内皮细胞 (VEC)分泌ET、vWF ,并且呈剂量依赖性 (r =- 0 .96 881P <0 .0 1,r=- 0 .9711P <0 .0 1) ,NOS抑制剂L -NAME可剂量依赖性地阻断其效应 (P <0 .0 1)。结论 :NO在VEGF抑制VEC分泌ET、vWF中起中介作用 ,NO是VEGF作用机制中的一个重要通路。     

不同浓度葛根素对体外培养血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度葛根素对体外培养血管内皮细胞增殖的影响。方法：取3只5d龄SD大鼠·分离心脏，在体外消化收集血管内皮细胞并进行培养，第3代细胞用于实验。除空白对照组外·血管内皮细胞分别于含0．01、0．1、1、10和100umol／L葛根素的培养基中进行培养。24h后纠置显徽镜下观察细胞形态并进行细胞计数，采用甲基噻唑基四唑比色法、免疫组织化方法和流式细胞仪检测血管内皮细胞的增殖情况。结果：与空白对照组比较，1、10和100umol／L葛根素组血管内皮细胞细胞计数增加（P〈0．05，P〈0．01）·增殖细胞梭抗啄阳性细胞比率及细胞分裂增殖指数增加（P〈0．05，P〈0．01）．结论：葛根素对体外培养的血管内皮细胞有明显的促进增殖作用，其作用与葛根素的剂量有关。     

Role of pigment epithelium-derived factor on proliferation and migration of choroidal capillary endothelium induced by vascular endothelial growth factor in vitro

Background Pigment epithelium-derived factor （PEDF） is expressed in several normal organs and identified as an inhibitor of neovascularization. In the present study, we investigated the effect of PEDF in an in vitro model of ocular choroidal neovascularization. Methods Microdissection was used to isolate the human choroidal endothelial cells （CECs）, followed by the use of superparamagnetic beads （Dynabeads） coated with the CD31 antibody, which selectively binds to the endothelial cell surface. The mitogenic and motogenic effects of vascular endothelial growth factor （VEGF） on cultured choroidal capillary endothelial cells were examined in the presence or absence of PEDF （1, 10, 100, and 1000 ng/ml） using cell counts and migration assays. Results Cells bound to the beads were isolated using a magnetic particle concentrator and they were successfully cultured and characterized to be endothelial cells that possessed greater than 95% immunoreactivity to von Willebrand factor. PEDF suppressed the proliferation and migration of VEGF-induced choroidal capillary endothelial cells. However, the concentration of PEDF which we used has little effect on normal CECs. Conclusions PEDF played an important role on the growth and migration of VEGF-stimulated choroidal endothelial cell These findings suggest that PEDF may be an effective approach to the treatment of choroidal neovascular disorders.