紫外线减活日本血吸虫尾蚴疫苗免疫小鼠肺部iNOS的表达及其与免疫保护关系的研究

目的 研究紫外线照射减活日本血吸虫尾蚴疫苗免疫小鼠后肺部诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的动态表达及其与保护性免疫的关系。 方法 用紫外线照射减活尾蚴疫苗免疫小鼠,30 d后用尾蚴攻击感染。于感染后第4 d、9 d取免疫小鼠和未免疫小鼠肺脏,用RT-PCR半定量的方法检测各组小鼠肺部iNOS的转录水平;用免疫组化方法确定iNOS在肺部的蛋白表达定位。 结果 正常小鼠肺部无iNOS转录和蛋白表达。免疫小鼠和未免疫小鼠感染血吸虫尾蚴后第4 d肺部iNOS有较高水平的转录表达。感染后第9 d,免疫组小鼠iNOS的表达较第4 d下降,而未免疫组小鼠肺部iNOS的表达消失。免疫组化结果表明,免疫组小鼠肺部炎症病灶细胞中存在iNOS的表达。 结论 移行到肺部的血吸虫童虫能诱导肺部表达iNOS,紫外线减活尾蚴疫苗能促使小鼠肺组织较长时间表达iNOS,iNOS在肺部的持续表达可能与该疫苗使宿主产生的免疫保护力有关。     

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴和童虫免疫小鼠的抵抗力研究

本文报告用２５条、５０条、１５０条和３００条紫外线减毒日本血吸虫尾蚴钻皮免疫或减毒童虫皮下注射免疫均能诱导小鼠产生有效的抗攻击感染抵抗力。以２５条免疫量为例，尾钻皮及童虫皮下注射后的减成虫率分别为７２．１％和７０．４％，肝脏减卵率分别为６９．４％和５７．４％，小肠组织减卵率分别为７６．６％和８０．５％，免疫后的有效保护期为７．５个月。     

紫外线致弱日本血吸虫尾蚴诱导BALB／c小鼠免疫保护作用研究

目的观察紫外线（UV）致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB／c小鼠免疫保护作用。方法辐照致弱日本血吸虫尾蚴,经腹部皮肤用UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫诱导BALB／c小鼠,3周后进行攻击感染,同时设正常感染对照组。攻击感染6周后解剖小鼠,计算减虫率、减卵率,并观察虫体发育情况和肝组织细胞免疫应答情况。结果免疫组的减虫率和减卵率分别为37．90％和51．16％;免疫组小鼠体内虫体发育明显滞后于正常感染对照组内虫体;免疫组小鼠肝脏虫卵肉芽肿较正常组明显减少。结论UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB／c小鼠能诱导较好的免疫保护力。     

日本血吸虫尾蚴经口腔粘膜感染小鼠的可行性研究

在寄生虫学与寄生虫病的科学研究与教学活动中 ,经常使用家兔和小鼠作为血吸虫病的动物模型 ,过去通常用经腹壁皮肤或经腹腔注射尾蚴的方法感染动物。经查阅NationalLibraryofMedicine、中国期刊网CNKI数字图书馆及维普资讯镜像站中刊数据库检索系统 ,尚未见尾蚴经口腔粘膜感染动物方法的相关文献报道。本实验进行了经口腔粘膜感染的可行性研究。1　材料与方法1.1　日本血吸虫尾蚴　阳性钉螺由湖南省寄生虫病防治研究所提供 ,以 2～ 4只 /管分别放入指管内 ,管内注满冷开水 ,置于2 5℃有光照的温箱内孵育 4～ 8h ,待尾蚴逸出后备用。1.2…     

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴和童虫免疫小鼠的抵抗力研究

本文报告用２５条、５０条、１５０条和３００条紫外线减毒日本血吸虫尾蚴钻皮免疫或减毒童虫皮下注射免疫均能诱导小鼠产生有效的抗攻击感染抵抗力。以２５条免疫量为例，尾蚴钻皮及童虫皮下注射后的减成虫率分别为７２．１％和７０．４％，肝脏减卵率分别为６９．４％和５７．４％，小肠组织减卵率分别为７６．６％和８０．５％，免疫后的有效保护期为７．５个月。     

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫小鼠的皮肤组织细胞反应

目的 :探讨紫外线减毒血吸虫尾蚴免疫宿主的皮肤组织在抗攻击感染中的作用。方法 :88只小鼠分为 4组 ,1、2组分别以 50± 3条紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫或日本血吸虫尾蚴感染 ,5wk后以 10 0 0± 10 0条尾蚴进行攻击感染 ;3、4组分别以减毒尾蚴或尾蚴 10 0 0± 10 0条免疫或初次感染。各组均于感染或接种后 6- 12 0 h定时取局部皮肤组织作病理观察。结果 :( 1)免疫攻击组皮肤组织内炎症细胞杀伤童虫现象最明显、炎症反应最强且持续时间最长 ,嗜酸性粒细胞( EOS)浸润百分数最高 ;( 2 )感染攻击组呈现相似炎症反应但程度略轻 ;( 3)免疫对照组减毒童虫在皮肤内滞留时间延长 ,至 12 0 h皮下仍可见较多童虫 ;( 4 )感染对照组皮肤内的童虫数于 72 h后明显减少 ,童虫周围轻微炎症反应。电镜观察可见免疫攻击组童虫内部结构破坏 ,虫体周围 EOS、淋巴细胞增多 ,肥大细胞颗粒溶解。结论 :提示皮肤组织的细胞免疫反应在血吸虫减毒尾蚴免疫的宿主抗攻击感染保护性免疫中起重要作用。     

日本血吸虫噬菌体肽疫苗诱导小鼠免疫保护作用的初步研究

日本血吸虫病是我国五大寄生虫病之一 ,严重危害人民健康〔1〕,作为预防和控制血吸虫病的一种手段 ,疫苗的研究具有非常重要的意义。目前 ,国内外研究的侯选疫苗有照射致弱尾蚴疫苗 ,可溶性虫卵抗原疫苗 ,核酸疫苗 ,基因工程重组疫苗及血吸虫多抗原肽疫苗等。但由于疫苗的安全性和保护性效果不理想或不稳定 ,以及虫体来源困难等因素 ,至今尚未得到可实际应用的疫苗。噬菌体呈现技术 (PDT)是利用丝状噬菌体体外表达外源性肽段 ,研究蛋白质与蛋白质之间相互识别相互作用的分子生物学技术〔2〕。筛选噬菌体肽库获得的血吸虫特异抗原模拟表位…     

日本血吸虫97kDa DNA疫苗与致弱尾蚴疫苗诱导免疫应答特征的比较研究

目的　对比观察日本血吸虫大陆株副肌球蛋白基因疫苗(Sjc97DNA)与紫外线致弱尾蚴(UVC)疫苗免疫C57BL6小鼠诱导的抗感染保护力及免疫应答特征。　方法　以Sjc97DNA核酸疫苗经后腿胫前肌免疫C57BL6小鼠共2次,每次间隔3wk,末次免疫后3wk攻击感染日本血吸虫尾蚴;UVC疫苗接种同种小鼠后5wk攻击感染上述等量尾蚴。均于攻击感染后7wk计数虫负荷及肝卵负荷。并设空质粒对照及感染对照组。用ELISA分析免疫鼠攻击感染前后血清特异性IgG、IgA及亚型抗体水平,以及脾淋巴细胞体外诱生的细胞因子水平。　结果　Sjc97DNA疫苗及UVC疫苗免疫小鼠均诱生出以Th1型免疫应答为主的IL2、IFNγ及特异性抗AWA、SEAIgG2a、IgG2b亚型及IgA抗体,UVC疫苗组小鼠各细胞因子及抗体水平均显著高于Sjc97DNA疫苗组,但两疫苗组均未测及IL4。攻击感染后,Sjc97DNA疫苗组的减虫率36.3%、减卵率42.4%,明显低于UVC疫苗组的66.9%和75.6%。攻击感染后7wk,两疫苗组小鼠Th2型免疫应答虽有所增强,但仍以Th1型免疫应答占优势;而空质粒对照组和感染对照组小鼠则以Th2型免疫应答为主。　结论　核酸疫苗与紫外线致弱尾蚴疫苗均能诱导产生抗感染免疫保护力,致弱尾蚴疫苗的免疫保护力高于Sjc97DNA。两疫苗诱导的抗感染     

大蒜籽浸液杀灭日本血吸虫尾蚴的实验研究

目的探讨大蒜籽浸液杀灭日本血吸虫尾蚴的效果。方法配制不同浓度的大蒜籽浸液,分别吸取各种浓度的蒜液100µl于载玻片上,观察蒜液杀灭血吸虫尾蚴的时间;并用已杀灭的血吸虫尾蚴感染小鼠,经灌注法加撕碎法收集虫体,计算感染率。结果大蒜籽原液在2s内可迅速杀死日本血吸虫尾蚴,浓度为1.57%～50.00%蒜液杀死日本血吸虫尾蚴的平均时间为6～484 s。已杀灭的血吸虫尾蚴感染小鼠后均未检获血吸虫成虫,感染率为0;而对照组感染率为93. 00%;两者比较感染率差异有统计学意义(P=0. 000)。结论大蒜籽浸液有较好的杀灭血吸虫尾蚴的效果。     

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠保护力的观察

目的探讨日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护作用。方法采用10^6和10^8CFU疫苗皮下接种免疫BALB／C鼠，免疫后8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染，感染后6周剖杀小鼠，计算减虫率和减卵率，观察肝脏病理变化，测量虫卵肉芽肿周长和面积，测定血清中CAg、IgG及其亚类水平，同时设有PBS和BCG对照。结果疫苗接种组的减虫率为16．64％-46．20％，减卵率为55．75％-60．50％，肝组织病变明显减轻，虫卵肉芽肿的平均周长和平均面积显著减少，血清IgG和IgG2a水平明显升高，10^8CFU组CAg升高。结论日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗是一种新型比较理想的疫苗，值得进一步深入研究。     

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫小鼠的细胞免疫应答和细胞因子的动态变化

目的 :检测细胞免疫在血吸虫疫苗保护性免疫中的作用。方法 :用紫外线减毒日本血吸虫尾蚴 30 0± 5条免疫小鼠及日本血吸虫尾蚴 2 5± 3条感染小鼠。于第 2 wk、4 wk、8wk和 12 wk分别用血吸虫成虫抗原 ( SWAP)、虫卵抗原 ( SEA )及丝裂原 ( Con A或 L PS)体外刺激脾细胞和腹腔巨噬细胞 ( M) ,观察脾淋巴细胞的增殖反应及 M产生 IL- 1和脾细胞产生 IL- 2的活性的动态变化。结果 :两组鼠的脾细胞于免疫或感染后 2 wk- 8wk经 SWAP或 SEA刺激 T淋巴细胞增殖反应显著增强 ,第 12 wk呈现明显抑制 ;免疫组的 M和脾细胞经 SWAP或 SEA刺激于接种后第 4wk IL- 1和 IL- 2活性均显著增高 ,感染组的 M和脾细胞经 SWAP刺激 IL- 1于第 8wk- 12 wk活性增高、IL- 2于第 12 wk活性增高。结论 :提示减毒尾蚴免疫接种能较早地激活 T细胞增殖和细胞因子产生 ,在血吸虫保护性免疫中起重要作用。     

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫小鼠的细胞免疫应答和细胞因子的动态变化

目的 :检测细胞免疫在血吸虫疫苗保护性免疫中的作用。方法 :用紫外线减毒日本血吸虫尾蚴 300±5条免疫小鼠及日本血吸虫尾蚴 25±3条感染小鼠。于第 2wk、4wk、8wk和 12wk分别用血吸虫成虫抗原(SWAP)、虫卵抗原 (SEA)及丝裂原(ConA或LPS)体外刺激脾细胞和腹腔巨噬细胞(Mφ),观察脾淋巴细胞的增殖反应及 Mφ产生 IL- 1和脾细胞产生 IL- 2的活性的动态变化。结果 :两组鼠的脾细胞于免疫或感染后2wk- 8wk经 SWAP或 SEA刺激 T淋巴细胞增殖反应显著增强,第12wk呈现明显抑制;免疫组的Mφ和脾细胞经SWAP或SEA 刺激于接种后第4wk IL-1 和IL-2 活性均显著增高, 感染组的Mφ和脾细胞经SWAP 刺激IL-1 于第8wk-12wk活性增高、IL-2 于第12wk 活性增高。结论: 提示减毒尾蚴免疫接种能较早地激活T 细胞增殖和细胞因子产生, 在血吸虫保护性免疫中起重要作用。     

大蒜油杀灭日本血吸虫尾蚴作用研究

目的探讨不同浓度的大蒜油对日本血吸虫尾蚴活性的影响。方法采用蒸馏法提取大蒜油,并配制成不同浓度,观察杀灭日本血吸虫尾蚴的时间;用经大蒜油处理3min的日本血吸虫尾蚴感染小鼠,45d后处死,计数检获成虫数,计算感染率和减虫率,试验设去氯离子自来水为对照。结果大蒜油原液1s内可迅速杀死日本血吸虫尾蚴,稀释度为10-2、10-3、10-4、10-5、10-6的大蒜油杀死日本血吸虫尾蚴的平均时间分别为(2.4±0.54)s、(28.4±4.24)s、(60.6±3.43)s、(387.0±19.05)s和(820.4±22.34)s;用以上稀释度大蒜油处理后的血吸虫尾蚴感染小鼠,感染率分别为0、0、0、0、60.00%、80.00%,对照组感染率为100%。结论大蒜油有较强的杀灭日本血吸虫尾蚴作用。     

日本血吸虫尾蚴细胞的传代培养及抗原性检测

目的 探索体外培养日本血吸虫尾蚴细胞的增殖与传代技术。 方法 无菌收集日本血吸虫活尾蚴5 000～10 000条,置于含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中,用组织刀快速割切尾蚴使成组织碎裂物,加入250 U蟹胶原酶在26℃下孵育30 min,然后离心去酶,加入含有青霉素(100 U/ml)、链霉素(O.1 mg/ml)、两性霉素B(0.25μg/ml)和适量促细胞生长物的RPMI 1640改良培养基中作原代培养,当贴壁细胞增殖长满瓶底时,以1:2的接种率进行传代培养;获取第5代培养细胞作ELISA检测血吸虫病患者血清中抗体。 结果 在原代培养的第3天可见尾蚴组织的周围有呈单个存在或索状排列的发亮细胞,第10天可见单层细胞形成,第14天贴壁细胞长满瓶底并作传代培养;在传代培养中可见细胞呈均匀生长,每7～14 d传代一次;用第5代培养细胞作抗原,检测31例患者的阳性率为90.3％,检测30名正常人血清的假阳性率为6.7％。 结论 日本血吸虫尾蚴细胞体外传代培养至第5代,可用于免疫学研究。     

致弱尾蚴感染血清对日本血吸虫尾蚴和成虫抗原免疫识别初步研究

<正> 众所周知,血吸虫减毒尾蚴可诱导宿主产生较高免疫保护力,但是,刺激宿主免疫系统的究竟是哪些目标抗原,目前仍未定论。血清被动转移实验证明减毒尾坳多次免疫后血清可诱导宿主产生针对幼虫期的免疫保护,因此我们用多次免疫兔血清初步筛选日本血吸虫可溶性尾蚴中的保护性抗原,以期为血吸虫疫苗的研制提供一些新的线索。     

小鼠感染日本血吸虫后iNOS的表达及NO介导的杀虫作用研究

目的研究小鼠在感染日本血吸虫后肺部诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的动态表达及一氧化氮(NO)对童虫的杀伤作用。方法在感染日本血吸虫后不同时间点剖杀小鼠并取其肺组织,用半定量RTPCR的方法检测肺部iNOS的转录水平;用NOS的抑制剂AG(Aminoguanidine,氨基胍)处理感染小鼠,比较处理组与对照组虫荷的高低以确定NO对童虫的杀伤作用。结果未感染小鼠肺部无iNOS转录表达,感染后第4d肺部iNOS有较高水平的转录表达,第9d表达消失;AG处理小鼠的虫荷较未处理组高(P<0.05)。结论移行到肺部的童虫能诱导肺组织表达iNOS,由iNOS产生的NO能对童虫发挥杀灭作用。     

致弱日本血吸虫尾蚴诱导BALB/c小鼠早期免疫应答动态变化研究

目的比较辐照致弱日本血吸虫尾蚴免疫小鼠与正常感染小鼠早期免疫活化程度及其动态变化差异。方法采用流式细胞术（FCM）和免疫组织化学（IHC）方法比较辐照致弱尾蚴免疫小鼠与正常感染小鼠早期脾组织和/或肺组织中树突状细胞（DC）表面分子CD11c、T细胞表面分子CD25表达差异及脾细胞和外周血中CD3＋CD25＋/CD3＋T细胞比例,分析T细胞免疫活化程度及其动态变化。结果在感染后7d,脾细胞中的CD3＋CD25＋/CD3＋T细胞比例致弱尾蚴免疫组为（19.52±3.65）%,明显低于正常感染组的（22.12±3.24）%;而在第14、21天,致弱尾蚴免疫组这一比例分别为（28.73±3.94）%和（26.43±0.40）%,均高于正常感染组的（13.68±3.64）%和（14.42±2.24）%。在攻击感染后7、14、21d,致弱尾蚴免疫组与正常感染组小鼠在肺组织中的CD11c＋DC表达率分别为（1.05±0.16）%和（0.96±0.15）%、（1.34±0.15）%和（1.09±0.17）%、（1.49±0.14）%和（0.97±0.16）%,脾组织中CD11c＋DC表达率分别为（2.05±0.26）%和（1.95±0.18）%、（2.24±0.25）%和（2.17±0.25）%、（2.18±0.26）%和（2.06±0.18）%。在攻击感染后7、14、21d,致弱尾蚴免疫组与正常感染组小鼠在肺组织中CD25＋T细胞表达率分别为（1.24±0.13）%和（1.17±0.16）%、（1.48±0.11）%和（1.25±0.13）%、（1.55±0.14）%和（0.97±0.12）%,脾组织中CD25＋T细胞表达率分别为（3.25±0.22）%和（2.93±0.20）%、（4.57±0.23）%和（3.69±0.24）%、（4.28±0.24）%和（3.86±0.26）%,紫外线辐照致弱尾蚴免疫小鼠较正常感染小鼠在攻击感染后第7、14、21天能在肺组织募集更多的CD11c＋DC并激活更多的CD25＋T细胞。结论致弱日本血吸虫尾蚴免疫小鼠在攻击感染后14、21d,小鼠体内T细胞激活程度和肺部DC活化程度均高于正常感染组,提示致弱尾蚴在肺部可募集更多抗原递呈细胞并使之活化。     

生姜液杀灭日本血吸虫尾蚴的实验研究

生姜原液在3 s内可迅速杀死日本血吸虫尾蚴,浓度为50%、25%和12.5%生姜液杀死血吸虫尾蚴的平均时间为10 s3、4.8s和420 s;已杀灭的血吸虫尾蚴对小鼠无感染性。     

日本血吸虫尾蚴平均期望寿命的初步实验观察

本文报道了在室内两种水状态下尾蚴期望寿命的实验观察。结果在25℃恒温条件下，日本血吸虫尾蚴在静水中的平均期望寿命为27．52h，最长存活时间为46h；在动水中的平均期望寿命为25．04h，最长可存活50h。