急性病毒性心肌炎小鼠心肌中Calpain mRNA表达与心肌细胞凋亡的关系研究

目的检测CMpmn mRNA在柯萨奇病毒B3（Coxsackievirus B3,CVB3）急性心肌炎小鼠心肌组织中的表达,并分析其与心肌细胞凋亡的关系。方法以CVB3单次感染Balb／c小鼠建立急性病毒性心肌炎（n=10）模型,同时设立药物干预组（n=12）及药物对照组（n=10）;同期小鼠腹腔无菌注射等剂量不含病毒的DMEM液作为正常对照组（n=8）。以缺口末端标记法（TUNEL）检测各组心肌细胞凋亡情况,计数凋亡率。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测小鼠心肌组织中Calpain-1及Calpain-2 mRNA的表达。结果急性病毒性心肌炎组较正常对照组及药物对照组心肌组织内Calpain-1（P=0．02及P=0．04）和Calpain-2（P〈0．01及P=0．02）mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦增高（P值均〈0．01）;药物对照组与正常对照组心肌组织内Calpain-1（P〉0．05）和Calpain-2（P〉0．05）mRNA及心肌细胞凋亡率均没有统计学差异（P〉0．05）;药物干预组较正常组心肌组织内Calpain-1（P〈0．01）及Calpain-2（P〈0．01）mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦升高（P〈0．01）;药物干预组较急性病毒性心肌炎组心肌组织内Calpain-1（P=0．04）及Calpain-2（P〈0．01）mRNA表达升高,心肌细胞凋亡率亦升高（P〈0．01）。各实验组小鼠心肌组织中calpain-1及Calpain-2m RNA的表达水平分别与心肌细胞的凋亡呈正相关。结论柯萨奇B3病毒通过激活心肌组织内Calpain,导致心肌细胞的凋亡,从而参与病毒性心肌炎的发生。     

小鼠病毒性心肌炎中Fas/FasL异常表达的研究

目的探讨柯萨奇病毒B3(CVB3)所致小鼠病毒性心肌炎(VM)心肌细胞损伤的变化,观察Fas/FasL介导的细胞凋亡在心肌损伤中的作用.方法采用CVB3制备小鼠病毒性心肌炎动物模型,心肌组织切片HE染色了解心肌损伤情况;电镜检测观察心肌组织中的细胞凋亡;同时采用免疫组化、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)两种方法检测心肌炎小鼠不同时期心肌组织中Fas与FasL基因转录与蛋白的表达.结果光镜观察见对照组小鼠心肌组织无异常改变,实验组病鼠可见心肌细胞坏死和单核、淋巴细胞浸润,后期可见纤维化;电镜观察对照组心肌中未检出凋亡细胞,而病鼠心肌凋亡细胞检出率较高58.33%(7/12例),且细胞凋亡多存在于炎症病灶周围的心肌细胞及病灶处炎性浸润细胞;感染后第7～14天的病鼠心肌组织中,主要表达于心肌细胞的Fas mRNA及蛋白和主要表达于浸润淋巴细胞的FasL mRNA及蛋白均明显增强;FasL蛋白表达水平与心肌病变积分呈正相关(r=0.9082,P＜0.001).结论小鼠病毒性心肌炎中心肌损伤坏死与心肌细胞凋亡共存,通过Fas/FasL基因路径介导的心肌细胞凋亡与病毒性心肌炎的发病过程有关.     

曲美他嗪对病毒性心肌炎小鼠的保护作用及其机制

目的:观察曲美他嗪对M株柯萨奇病毒B3(CVB3m)感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用并探讨其可能作用机制。方法:以CVB3m诱导的病毒性心肌炎Balb/c小鼠模型为研究对象。201只清洁级近交系4～6周龄雄性Balb/c小鼠随机分成5组。正常对照小鼠20只(正常组);病毒性心肌炎小鼠55只(心肌炎组);喂养曲美他嗪10 mg/(kg.d)的正常小鼠20只(药物对照组);喂养曲美他嗪10 mg/(kg.d)的病毒性心肌炎小鼠53只(低剂量治疗组);喂养曲美他嗪20 mg/(kg.d)的病毒性心肌炎小鼠53只(高剂量治疗组)。观察各组血清中肌钙蛋白I(cTnI)水平、血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的变化以及心肌组织中Fas mRNA表达水平的变化。结果:小鼠感染CVB3m后第7天及第14天,与正常组及药物对照组比较,心肌炎组、低剂量治疗组和高剂量治疗组血清cTnI水平、MDA含量显著升高,SOD含量显著降低,Fas mRNA的表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠感染CVB3m后第7天,与心肌炎组比较,低剂量治疗组和高剂量治疗组血清cTnI水平显著降低,MDA含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),与心肌炎组及低剂量组比较,高剂量治疗组SOD含量显著升高,Fas mRNA的表达显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。感染CVB3m后第14天,与心肌炎组比较,低剂量治疗组和高剂量治疗组血清cTnI水平、MDA含量显著降低,SOD含量显著升高,Fas mRNA的表达显著减少,差异有统计学意义(P<0.05),与低剂量治疗组比较,高剂量治疗组上述指标变化更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:曲美他嗪能够减少病毒性心肌炎中心肌细胞的损害。其机制可能与其抗氧化作用以及通过下调Fas mRNA水平抑制心肌细胞凋亡有关。     

黄芪对实验性病毒性心肌炎细胞凋亡及Fas/FasL基因转录的影响

目的　探讨黄芪对实验性病毒性心肌炎细胞凋亡及Fas/FasL基因的影响。方法　Balb/c小鼠 2 4只腹腔感染柯萨奇病毒B3(CVB3)后随机分成 2组 :治疗组 (每天腹腔注射黄芪注射液 10 0mg/ 10g)及对照组。第 8d取心脏标本 ,进行病理学检查、细胞凋亡TUNEL法检测以及逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)分析Fas和FasLmRNA的表达水平。结果　①黄芪治疗组病变积分明显低于对照组 (P <0 0 1)。②黄芪治疗组心肌细胞凋亡指数 (AI)明显低于对照组 (P <0 0 1)。③黄芪治疗组心肌组织Fas和FasL的mRNA相对表达量均明显低于对照组 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。结论　黄芪可通过下调病毒性心肌炎小鼠心肌组织Fas和FasL基因转录 ,减少心肌细胞凋亡和心肌损伤。     

中药芪芍五味合剂对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡和坏死的影响

取240只4周龄Balb/c雄性小鼠,随机等分为6组(每组40只),即正常对照组(A组)、中药对照组(B组)、病毒对照组(C组)、中药治疗组(D组)、维生素C治疗组(E组)、病毒唑治疗组(F组).A、B两组每只小鼠均腹腔接种0.1ml不含病毒的Eagle's液,C～F组每只小鼠服腔接种0.1ml 107.5TCID/ml的柯萨奇B3(CVB3)病毒液.根据分组分别给予不同的药物治疗.结果病毒性心肌炎时心肌细胞的凋亡率和坏死率均显著增加.心肌细胞凋亡高峰在CVB感染后7～10天,而心肌坏死高峰出现在CVB3感染后14天,并且与组织形态学观察一致.应用中药黄芪、赤芍治疗后,心肌细胞凋亡率和坏死率均显著降低(P＜0.05),维生素C和病毒唑均可降低心肌细胞坏死率,但对心肌细胞凋亡影响不大.CVB感染3～7天内,各感染组心肌细胞凋亡率和坏死率均与心肌内病毒滴度呈正相关(r=0.76、P＜0.01,r=0.54、P＜0.05);而感染10～30天,凋亡率及坏死率与病毒含量无相关性.各感染组心肌细胞凋亡率与坏死率均与心肌病理积分呈正相关(r=0.55、P＜0.05,r=0.76、P＜0.01).中药黄芪、赤芍、五味子可明显减轻病毒性心肌炎小鼠的病理损害程度,显著降低病毒性心肌炎心肌细胞凋亡率和坏死率,对心肌细胞有保护作用,其效果超过维生素C、病毒唑.     

大蒜多糖对病毒性心肌炎小鼠心肌凋亡的影响

采用BALB/C小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立病毒性心肌炎模型.随机分为正常对照组、模型组、大蒜多糖治疗组及正常小鼠大蒜多糖处理组.TUNEL法检测心肌凋亡;Western blot等检测心肌caspase-3活性和表达的变化.发现大蒜多糖能显著降低模型组心肌细胞凋亡,下调caspase-3表达及活性.提示大蒜多糖能显著抑制小鼠病毒性心肌炎心肌细胞凋亡,机制与抑制caspase-3表达及活性有关.     

黄芪总黄酮通过抑制内质网应激对小鼠病毒性心肌炎保护作用的实验研究

目的:探讨黄芪总黄酮对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞内质网应激凋亡的作用。方法:将60只雄性Balb/c小鼠均分为病毒性心肌炎组、正常组及黄芪总黄酮组。病毒性心肌炎组与黄芪总黄酮组腹腔内无菌注射含0.1ml 10-9 50TCIDCVB3,正常组不注射CVB3病毒。黄芪总黄酮组小鼠每日腹腔注射20mg·L-1黄芪总黄酮0.2ml,观察小鼠的一般情况,7d时行血流动力学检查后处死取心脏标本,用TUNEL法检测各组小鼠心肌细胞凋亡情况,RT-PCR检测各组小鼠心肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78和GRP94的mRNA表达水平。结果:1与正常组相比,病毒性心肌炎组小鼠血流动力学指标明显降低(P0.05);与病毒性心肌炎组小鼠相比,黄芪总黄酮组小鼠血流动力学指标有显著改善(P0.05)。2TUNEL染色显示,与正常组相比,病毒性心肌炎组小鼠心肌细胞凋亡明显增多(P0.05);与病毒性心肌炎组小鼠相比,黄芪总黄酮组小鼠心肌细胞凋亡显著减少(P0.05)。3与正常组相比,病毒性心肌炎组小鼠内质网伴侣蛋白GRP78和GRP94的mRNA表达水平均明显升高(均P0.05),且其变化趋势与心肌细胞凋亡数相似;与病毒性心肌炎组小鼠相比,黄芪总黄酮组小鼠内质网伴侣蛋白GRP78和GRP94的mRNA表达水平明显下降(均P0.05)。结论:黄芪总黄酮对病毒性心肌炎心力衰竭小鼠内质网应激介导的心肌细胞凋亡有保护作用,这可能是黄芪总黄酮改善病毒性心肌炎心力衰竭小鼠血流动力学的作用机制之一。     

病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的检测及意义

目的 研究病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌细胞凋亡及其意义。方法 实验用TUNEL法结合电镜观察小鼠接种VMC病毒后3、5、7、9、15、35天心肌细胞凋亡情况。结果 发现小鼠在接种VMC病毒后的3、5、7、9、15、35天各时点凋亡心肌细胞数目较正常对照组明显增加(P<0.01)。小鼠在接种病毒后7～9天,电镜下心肌细胞可见凋亡。结论VMC中存在异常的心肌细胞凋亡现象,心肌细胞凋亡可能参与了VMC的发病。     

柯萨奇B病毒性心肌炎小鼠急性期心肌组织微小RNA1初始体和连接蛋白43的表达

目的观察柯萨奇B病毒性心肌炎小鼠急性期心肌组织微小RNA1初始体(pri-miRNA-1)和连接蛋白43(Cx43)表达变化,探讨病毒性心肌炎(VMC)室性心律失常发生机制。方法40只4周龄雄性Balb/c小鼠随机分为VMC组(n=20)和对照组(n=20)。VMC组小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)Nancy株悬液0.1ml,对照组小鼠腹腔注射不含病毒的RPMI1640培养基0.1ml,分别于接种病毒后第14天无痛苦处死全部小鼠并留取心脏。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心室肌组织pri-miRNA-1的表达,免疫组织化学法检测Cx43蛋白水平表达,并进行半定量分析。结果①VMC组小鼠心室肌组织pri-miRNA-1表达量明显高于对照组(0.82±0.04vs0.63±0.07,P(0.01);②VMC组小鼠心室肌组织炎症病灶中变性、坏死周围心肌细胞Cx43表达明显减弱,甚至阴性,分布不规则,Cx43蛋白表达明显低于对照组(0.27±0.01vs0.42±0.02,P(0.01);③VMC组小鼠心室肌组织的pri-miRNA-1表达量与Cx43蛋白水平呈显著负相关(r=-0.868,P(0.01)。结论CVB心肌炎小鼠急性期心肌组织pri-miRNA-1表达上调,Cx43蛋白表达下降,miRNA-1可能通过抑制Cx43表达促进室性心律失常的发生。     

单核细胞趋化蛋白1在病毒性心肌炎中的作用及黄芪甲甙干预研究

目的 探讨单核细胞趋化蛋白1在病毒性心肌炎中的作用及黄芪甲甙干预后的变化.方法 55只雄性Bal/c小鼠随机分为正常对照组(n=10)、模型对照组(n=15)、低剂量干预组(n=15)及高剂量干预组(n=15),后3组小鼠经腹腔接种0.1mL柯萨奇病毒B3建立病毒性心肌炎模型,低剂量干预组和高剂量干预组于病毒接种后当天分别以0.01g/L、0.09g/L黄芪甲甙0.1mL灌胃,正常对照组和模型对照组均以羧甲基纤维素钠溶液灌胃,第15天处死全部存活小鼠,心脏石蜡切片HE染色计算病理积分,免疫组织化学染色检测单核细胞趋化蛋白1蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应检测单核细胞趋化蛋白1mRNA表达.结果 正常对照组、模型对照组、低剂量干预组及高剂量干预组死亡率分别为0、46.7%、40.0%、13.3.0%,高剂量干预组死亡率明显低于模型对照组和低剂量干预组(P<0.05).模型对照组心肌单核细胞趋化蛋白1mRNA及蛋白表达水平均明显高于正常对照组(P<0.01),高剂量干预组病理积分及单核细胞趋化蛋白1mRNA、蛋白表达量较模型对照组、低剂量干预组显著降低(P<0.05或0.01).结论 单核细胞趋化蛋白1参与病毒性心肌炎发病过程,黄芪甲甙对病毒性心肌炎的治疗作用可能与其抑制单核细胞趋化蛋白1表达有关.