非小细胞肺癌患者血浆DAPK基因甲基化检测及其临床意义

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆中死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因异常甲基化及其在NSCLC筛查和诊断方面的临床意义。方法用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP)检测112例NSCLC患者癌组织、癌旁组织、外周血血浆和112例正常对照组血浆样品中DAPK基因的甲基化情况,并比较各组检测结果。结果癌组织DAPK基因甲基化率为59.8%,高于癌旁组织的8.0%(P<0.001),其中鳞癌、腺癌、腺鳞癌癌组织和癌旁组织间的甲基化检出率比较差异均有统计学意义(P<0.001);NSCLC患者血浆中DAPK基因甲基化检测率为21.4%,对照组血浆未检测到DAPK基因甲基化(P<0.001)。血浆中DAPK基因甲基化检出率与NSCLC临床分类、临床分期和病理类型无明显相关性。结论利用nMSP法对血浆样本DAPK基因甲基化检测可为非小细胞肺癌的筛查和诊断提供有价值的信息。     

非小细胞肺癌患者血清CDH13基因甲基化检测及意义

肺癌是全世界范围内首位肿瘤死因.由启动子异常甲基化造成的特定基因的沉默在肺癌发病机制中起重要作用.钙a附素(cadherin)是调整上皮表型和肿瘤侵袭力的细胞黏附分子.     

甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义

目的：探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation—specific PCR，MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值。方法：选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本，其中32例为肺癌．24例为良性肺部疾病。标本经一般处理，PCR扩增后，产物经电泳EB染色，紫外灯下观察。结果：32例肺癌组织标本中，14例(43．8％)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化，其中9例(643％)在相应的BALF中检测出甲基化存在。5例(35．8％)在相应的痰标本中也检测出甲基化存在。24例良性肺部疾病，其中肺囊肿10例，肺结核14例。手术切除标本和BALF及痰标本中均未检测出p16基因甲基化存在。结论：MSPCR技术对肺癌患者BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性，是一项有潜力的肺癌早期诊断新技术。     

非小细胞肺癌病人血浆p16基因异常甲基化的检测

肺癌高死亡率的根本原因在于早期诊断的困难。现代分子肿瘤学的研究进展揭示了在肺支气管上皮癌变过程中发生的多种分子水平异常,使得我们有可能将外周血等容易取得的微创性样品中的分子病理学改变作为肺癌早期诊断的辅助指标。通过以往的研究我们发现,一条等位基因缺失而另一条等位基因异常高甲基化是肺癌组织中抑癌基因p16失活的重要机制之一。在这项研究中,我们利用从非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)病人外周血血浆中提取的DNA分析了P16基因的甲基化状态。采用改进的甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP)的方法,95例NSCLC病人的血浆DNA被检测,其中肺鳞癌59例,肺腺癌36例。作为对照,75例相应的肿瘤组织被同时分析。结果显示,p16基因启动子区高甲基化状态的检出率在血浆中为72．6％（69／95）,而在相应的肺癌组织中为74．7％（56／75）。值得注意的是,血浆DNAp16基因异常甲基化只是从那些肿瘤组织DNA表现p16基因高甲基化的病例中被检出－二者存在极好的符合率。我们还发现,在Ⅰ期病人中,血浆p16基因异常高甲基化在肺鳞癌（82．4％）,比在肺腺癌（33．3％）中要高得多（P＜0．005）。从而提示,血浆p16基因异常甲基化有可能成为一项早期发现非小细胞肺癌（尤其是鳞癌）的、非常重要的分子病理学指标。而血浆DNA的MSP则是检测这一指标的敏感、可靠并且便于操作的技术之一,成为一种可以应用于人群筛查的方法。     

甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义

目的:探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值.方法:选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本,其中32例为肺癌,24例为良性肺部疾病.标本经一般处理,PCR扩增后,产物经电泳EB染色,紫外灯下观察.结果:32例肺癌组织标本中,14例(43.8%)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化,其中9例(64.3%)在相应的BALF中检测出甲基化存在,5例(35.8%)在相应的痰标本中也检测出甲基化存在.24例良性肺部疾病,其中肺囊肿10例,肺结核14例,手术切除标本和BALF及痰标本中均未检测出p16基因甲基化存在.结论:MSPCR技术对肺癌患者BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性,是一项有潜力的肺癌早期诊断新技术.     

巢式甲基化异性PCR检测肺癌患者MGMT基因异常甲基化

近年来的研究显示肿瘤的发生与DNA甲基化模式的异常关系密切，CpG岛的异常甲基化是导致许多抑癌基因转录失活的一个重要机制。MGMT基因是一个DNA损伤修复基因，其表达失活的主要原因不是缺失、突变或基因重排，启动子的过甲基化可能是其转录调节的主要方式。在本研究中，我们利用改进的巢式甲基化特异性PCR技术检测了53例肺癌患者血清及肿瘤组织中MGMT基因的甲基化状态，并对其在肺癌早期诊断中的潜在应用进行了探讨。     

巢式甲基化特异性PCR检测肺癌患者基因异常甲基化

近年来的研究显示肿瘤的发生与DNA甲基化模式的异常关系密切,CpG岛的异常甲基化是导致许多抑癌基因转录失活的一个重要机制^[1].     

非小细胞肺癌患者血浆EGFR突变表达检测及其临床意义

目的：检测非小细胞肺癌患者血浆表皮生长因子受体（ EGFR）基因突变表达情况,探讨其临床意义。方法采用荧光定量PCR法检测90例非小细胞肺癌患者组织及血浆EGFR的基因突变表达情况,分析两者的一致性,并分析血浆EGFR与患者预后的关系。结果非小细胞肺癌患者的血浆与肿瘤组织中EGFR突变表达是一致的,血浆EGFR突变表达与非小细胞肺癌的病理类型、肿瘤大小及淋巴结转移有关,但血浆EGFR突变表达与非小细胞肺癌患者的疾病进展时间、生存时间无关。结论非小细胞肺癌患者血浆EGFR的检测有可能替代肿瘤组织中EGFR的检测,为无法取得肿瘤组织或取得肿瘤组织困难的患者提供一种更快捷、简便的替代检测方法,但血浆EGFR尚不能确立为独立的预后指标。     

非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA检测临床意义的探讨

目的:应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测肺癌外周血中的表达情况,并探讨其表达的临床意义。方法:用RT-PCR法检测98例肺癌患者外周血CK19 mRNA表达。结果:NSCLC组患者外周血CK19 mRNA的阳性率为77.55%(76/98),显著高于良性病变组的3.57%(1/28)和健康对照组的0,χ2=73.68,P<0.05;Ⅱ期〔87.50%(35/40)〕和Ⅲ期〔88.89%(24/27)〕NSCLC患者的阳性率显著高于Ⅰ期〔54.84%(17/31)〕患者的阳性率,χ2=13.453,P<0.05;淋巴结转移阳性和阴性患者的外周血中CK19 mRNA阳性率分别为89.55%(60/67)和51.61%(16/31),差异有统计学意义,χ2=17.523,P<0.05;而不同病理类型NSCLC患者外周血CK19mRNA阳性率之间差异无统计学意义,χ2=0.414,P>0.05。结论:肺癌患者外周血中CK19 mRNA表达较高可能与肺癌转移有关,检测CK19 mRNA对于早期判断患者转移和复发有一定的临床意义。     

巢式甲基化特异性PCR检测肺癌患者MGMT基因异常甲基化

近年来的研究显示肿瘤的发生与DNA甲基化模式的异常关系密切,CpG岛的异常甲基化是导致许多抑癌基因转录失活的一个重要机制[1].MGMT基因是一个DNA损伤修复基因,其表达失活的主要原因不是缺失、突变或基因重排,启动子的过甲基化可能是其转录调节的主要方式[2,3].在本研究中,我们利用改进的巢式甲基化特异性PCR技术检测了53例肺癌患者血清及肿瘤组织中MGMT基因的甲基化状态,并对其在肺癌早期诊断中的潜在应用进行了探讨.     

RT-PCR法检测非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA的临床意义

目的:检测非小细胞肺癌患者外周血CK19mRNA的表达情况,探讨其表达的临床意义。方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)方法,分别检测非小细胞肺癌患者和对照组患者外周血中CK19mRNA的表达。结果:43例非小细胞肺癌患者外周血中CK19mRNA表达阳性率为56%,对照组阳性率为5%,两组外周血CK19mRNA阳性率比较有显著性差异(P<0.01);外周血CK19mRNA阳性率与病理类型无相关性;淋巴结转移阳性和阴性患者的外周血中CK19mRNA阳性率分别为66%(21/32)和18%(2/11),二者差异显著(χ²=6.65,P<0.05)。随TNM分期上升,CK19mRNA阳性率增加(χ²=18.03,P<0.01)。结论:CK19mRNA可作为RT-PCR法检测非小细胞肺癌患者外周血微转移的分子标志物,该方法敏感性高,有助于早期诊断肺癌血行转移,指导临床分期和治疗。     

非小细胞肺癌患者血清Ras相关区域家族1A基因启动子异常甲基化检测及其临床意义

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区域的甲基化状态及其临床意义.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测75例NSCLC患者血清RASSF1A基因启动子区域的甲基化状态,并分析其与临床病理参数之间的相关性.结果75例NSCLC患者血清RASSF1A基因启动子区域异常甲基化检出率为30.7%(23/75),而35例肺部良性疾病患者和15例健康志愿者中检出率均为0,差异有统计学意义(P＜0.001).RASSF1A启动子异常甲基化与NSCLC患者的年龄、性别、病理类型无显著相关性,但在晚期及肿瘤分化程度较低的患者中检出率较高(P＜0.05).结论 RASSF1A启动子异常甲基化在NSCLC的发生、发展中起重要作用,有望成为NSCLC辅助诊断和预后判断的分子标记.     

血浆HOXA7基因甲基化在非小细胞肺癌诊断中的应用

  目的  检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）血浆中同源盒基因（homeobox, HOX）家族成员HOXA7基因启动子甲基化水平, 并评估HOXA7甲基化与肿瘤标志物血清癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）、糖类抗原（carbohydrate antigen 199, CA199）和细胞角蛋白19片段抗原21-1（cytokeratin 19 fragment antigen 21-1, Cyfra21-1）水平辅助诊断NSCLC的价值。  方法  选取河南省肿瘤医院2012年1月至2016年12月住院的经病理组织学确诊为NSCLC患者80例为试验组, 50例健康人为对照组。采用定量甲基化特异性PCR（quantitative methylation-specific PCR, qMSP）检测血浆HOXA7甲基化水平, 电化学发光检测血浆CEA、CA199和Cyfra21-1水平。构建受试者工作特征曲线（ROC）分析各指标鉴别NSCLC的临床价值, 并分析HOXA7甲基化与临床病例参数、肿瘤标志物之间的关系。  结果  与健康对照组相比, NSCLC患者血浆中HOXA7基因甲基化水平异常增高（χ2＝36.972, P < 0.0001）, HOXA7甲基化诊断NSCLC的敏感度为68.8%（55/80）, 特异度为86.0%（43/50）。血浆HOXA7甲基化与性别、年龄、有无吸烟史和病理类型无关（均P>0.05）, 但与TNM分期有关（P < 0.05）, 其中Ⅳ期患者血浆HOXA7甲基化水平最高。肿瘤标志物中Cyfra21-1诊断NSCLC的价值最高, 敏感度为70.00%, 特异度为90.00%。HOXA7甲基化联合三指标诊断NSCLC的效能最高（AUC=0.893, 敏感度73.75%, 特异度94%）。HOXA7甲基化与Cyfra21-1的相关系数最高（r=0.564, P < 0.05）。  结论  HOXA7基因甲基化水平对NSCLC的诊断有一定价值, 与NSCLC的恶性程度相关, 联合肿瘤标志物检测可以提高NSCLC的诊断效能。      

非小细胞肺癌患者外周血和肺癌组织中ZIC1启动子甲基化检测的临床意义

目的 探讨ZIC1基因在NSCLC患者外周血和肺肿瘤组织中的甲基化状态,及其对NSCLC的预后评估意义.方法 选取95例NSCLC患者外周血、癌和癌旁组织,另选取95例健康体检者外周血为对照组.用MSP法比较外周血和癌组织的ZIC1甲基化检出率;分析ZIC1在外周血和癌组织的甲基化和NSCLC临床病理因素的相关性.结果...     

p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响

目的探讨p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响。方法原发性肺癌患者47例及同期无呼吸系统疾病又未患任何肿瘤同性别者94例作对照,采用甲基化特异性PCR等技术,检测p16基因甲基化。结果p16基因甲基化在肺癌组织和正常肺组织中检出率分别为44.7%(21/47)和17.0%(8/47),两者有显著差异(P<0.05)。37例非小细胞肺癌吸烟者中有21例肺癌组织发生p16基因甲基化,而10例非小细胞肺癌非吸烟者中无一例肺癌组织发生p16基因甲基化。p16基因甲基化与年龄、饮酒、肺癌病理分型及肺癌临床分期之间均无明显的相关性(P>0.05)。结论p16基因甲基化与非小细胞肺癌发生的关系非常密切,p16基因甲基化与吸烟有关。检测p16基因甲基化与否,可能有助于肺癌的诊断。     

非小细胞肺癌微转移检测及其临床意义

肺癌是人类常见的恶性肿瘤，肺癌患者的预后与肿瘤的复发和转移有着密切的关系。近十多年来我们对于肺癌的发生发展规律有了进一步的认识，对其治疗也取得了很大的进展，但非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）的生存率并未得到明显的提高。Coello等报道，Ⅰ期NSCLC患者，在肿瘤完全切除后，其复发率仍高达25％～50％。因此在手术前判断常规检查不能发现的隐匿存在于手术切除范围以外的淋巴结／远隔脏器及血液中的微量转移癌细胞，就显得格外重要。     

非小细胞肺癌患者外周血中WNT7A甲基化检测的诊断价值

目的 探索WNT7A甲基化和NSCLC临床病理因素的关系。方法 选取120例NSCLC患者为NSCLC组,另外选择120位健康者为对照组,采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）法检测两组的WNT7A启动子甲基化率,并分析WNT7A甲基化和NSCLC临床病理因素的关系。结果 NSCLC组患者的外周血中WNT7A甲基化率显著高于对照组（P<0.05）,WNT7A基因甲基化率与患者的性别、病理类型、年龄、吸烟史等无显著相关性（P>0.05）,而与肿瘤大小、远处转移、TNM分期、胸腔积液显著相关（P<0.05）。有胸腔积液、肿瘤直径＞5 cm的NSCLC患者外周血中WNT7A基因甲基化检出率显著高于无胸腔积液、肿瘤直径≤5 cm患者（均P<0.05）;TNM分期为Ⅲ~Ⅳ的NSCLC患者外周血中WNT7A基因甲基化检出率显著高于分期为Ⅰ~Ⅱ的NSCLC患者（P<0.05）。结论 WNT7A基因甲基化在NSCLC患者中检出率较高,可作为NSCLC有效的诊断依据。     

FHIT基因甲基化检测对肺癌早期诊断的临床意义

目的探讨人原发性肺癌中FHIT基因启动子区的甲基化状态及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链技术（MSP）,对59例人原发性肺癌组织（肺癌组）、32例肺正常组织（正常组）、15例癌旁组织（癌旁组）及11例支气管鳞状化生组织进行FHIT基因5’-CpG岛甲基化状况检测,甲基化阳性标本采用基因克隆测序技术进行序列测定。结果肺癌组、癌旁组和正常组的FHIT基因甲基化率分别为37．3％（22／59）、20．0％（3／15）、0（0／32）,三组相比差异有统计学意义（P〈0．01）;支气管鳞状化生组织的甲基化阳性率为18．1％（2／11）。FHIT基因甲基化率肺癌吸烟者与非吸烟者差异无统计学意义（P〉0．05）。FHIT甲基化扩增产物测序结果显示,所有CpG岛中的胞嘧啶均保持不变,而CpG岛二核苷酸以外的胞嘧啶经过PCR扩增后,则被胸腺嘧啶取代。结论FHIT基因5’-CpG岛甲基化参与了肺癌的演变,可能在肺癌发生的早期阶段,采用MsP方法进行FHIT甲基化检测,可能对肺癌的早期诊断具有一定的临床意义。     

SFRP1基因甲基化及其蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨SFRP1基因甲基化及其蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法用免疫组化SP法和甲基化特异性PCR法检测60例非小细胞肺癌组织,21例肺良性疾病肺组织中SFRP1基因甲基化及SFRP1蛋白的表达情况。结果肺癌组织SFRP1基因甲基化阳性高于肺良性疾病肺组织,差异有显著性(P=0.001);SFRP1基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);非小细胞肺癌中SFRP1蛋白阳性率低于肺良性疾病肺组织,差异有显著性(P=0.004);SFRP1蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);SFRP1甲基化和SFRP1蛋白表达缺失存在相关性(P=0.002)。结论 SFRP1基因甲基化可能是导致SFRP1蛋白表达降低的重要机制,进而导致非小细胞肺癌的发生发展。