瘤体内注射脂质体包裹的IL—2基因的抗肿瘤作用及其局部…

脂质体可以介导体内的细胞因了基因治疗，将脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接注射到小鼠黑色素瘤（Ｂ１６－Ｆ１０）瘤体内，结果发现，肿瘤的生长明显受到抑制，部分小鼠的瘤体完全消退，存活期明显延长，从瘤体中分离的肿瘤细胞经Ｇ４１８筛选后产生阳性克隆，其上清中分泌有ＩＬ－２，肿瘤局部浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）具有较高的杀伤活性，提示瘤体内注射质包裹的ＩＬ－２基因后，可增强肿瘤细胞的免疫原性，激活瘤体具部的抗肿瘤免     

瘤体内注射IL－2基因后肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞的功能分析

将脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接注射至Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤瘤体内，研究肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）的功能变化。１０ｄ后，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定显示瘤体内注射ＩＬ－２基因后肿瘤细胞及ＴＩＬ中ＩＬ－２ｍＲＮＡ表达阳性；经Ｇ４１８筛选后的肿瘤细胞培养上清中可检测出ＩＬ－２；肿瘤细胞表面表达了较高水平的ＭＨＣⅠ类抗原（Ｈ－２Ｋ￣ｂＤ￣ｂ）；ＴＩＬ表面粘附分子ＬＡＦ－１表达也明显高于对照组，其杀伤Ｂ１６细胞的活性明显增强。结果表明瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，可在肿瘤原位将基因转移至肿瘤细胞及ＴＩＬ中，提高肿瘤细胞的ＭＨＣⅠ类抗原的表达，增强肿瘤细胞的免疫原性，并通过提高ＴＩＬ粘附分子的表达，共同促进ＴＩＬ的肿瘤特异性杀伤功能。     

瘤体内注射IL—2基因后肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞的功能分析

将脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接注射至Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤瘤体内，研究肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）的功能变化。１０ｄ后，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定显示瘤体内注射ＩＬ－２基因后肿瘤细胞及ＴＩＬ中ＩＬ－２ｍＲＮＡ表达阳性；经Ｇ４１８筛选后的肿瘤细胞培养上清中可检测出ＩＬ－２；肿瘤细胞表面表达了较高水平的ＭＨＣＩ类抗原（Ｈ２Ｋ＾ｂＤ＾ｂ）；ＴＩＬ表面粘附分子ＬＡＦ－１表达也明显高于对照组，其     

脂质体介导的IL—2基因疗法的建立及其免疫增强作用

用反相蒸发技术制备出包裹有ＩＬ－２ＤＮＡ的脂质体，将其直接注射至小鼠腹腔中，经１０ｄ后发现，腹腔细胞体外培养的上清中含有较高水平的ＩＬ－２，腹腔巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的活性明显增强，脾细胞体外增殖、脾细胞ＮＫ活性及体外诱导的ＬＡＫ活性均明显高于对照组；同时经脂质体转染ＩＬ－２基因的脾脏细胞具有较高的内源性ＬＡＫ活性。这表明，脂质体能将目的基因经腹腔途径直接转染体内细胞，表达出基因产物－ＩＬ－２。这种     

脂质体介导的IL－2基因疗法的建立及其免疫增强作用

用反相蒸发技术制备出包裹有ＩＬ－２ＤＮＡ的脂质体，将其直接注射至小鼠腹腔中，经１０ｄ后发现，腹腔细胞体外培养的上清中含有较高水平的ＩＬ－２，腹腔巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的活性明显增强，脾细胞体外增殖、脾细胞ＮＫ活性及体外诱导的ＬＡＫ活性均明显高于对照组；同时经脂质体转染ＩＬ－２基因的脾脏细胞具有较高的内源性ＬＡＫ活性。这表明，脂质体能将目的基因经腹腔途径直接转染体内细胞，表达出基因产物──ＩＬ－２。这种靶细胞表达的基因产物可作用于体内免疫系统，调节机体的免疫功能。本文结果为细胞因子的基因治疗的研究提供了一种简便有效的方法。     

脂质体介导的IL—2基因疗法增强机体巨噬细胞免疫功…

本文报道了脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接腹腔内注射后，巨噬细胞在介导该基因疗法中的作用及其功能变化。结果发现巨噬细胞是ＩＬ－２基因表达的主要靶细胞；巨噬细胞的吞噬功能、抗原提呈能力、Ｆｃ受体和Ｉａ抗原表达以及分泌ＩＬ－１、ＴＮＦ水平及杀伤肿瘤细胞的活性均明显提高。巨噬细胞功能的上述变化表明，通过腹腔途径应用脂体介导的ＩＬ－２基因疗法治疗腹部肿瘤可能具有一定的可行性。     

IL—6基因转染的瘤苗体内诱导的抗肿瘤免疫功能与效果

经丝裂霉素C体外处理后,将IL-6基因转染的、高分泌的IL-6的B16黑色素瘤细胞制成瘤苗。结果发现,体内注射IL-6基因转染的瘤苗后,小鼠脾脏CTL活性、NK活性及IL-2诱导的LAK活性显著升高。经IL-6基因转染瘤苗体内治疗后,荷瘤小鼠的皮下肿瘤生长显著减慢、肺转移结节数显著降低、存活期显著延长,若同时合用低剂量IL-2,则上述治疗效果更好。可见IL-6基因转染的瘤苗能有效地通过诱导机体抗肿瘤免疫功能而发挥抗肿瘤作用,与低剂量IL-2合用后,IL-6基因转染的瘤苗的抗肿瘤效果更佳。     

IL－2基因转移的瘤苗与IL－1、低剂量环磷酰胺合用后的肿瘤治疗作用及其免疫学机理

经ＩＬ－２基因转移瘤苗治疗后荷瘤小鼠肺转移结节明显减少、存活期明显延长，与ＩＬ－１或低剂量Ｃｙ合用后，可使荷瘤小鼠的肺转移结节更少，存活期更长，特别是当ＩＬ－２基因转移的瘤苗、ＩＬ－１、低剂量Ｃｙ三者合用时抗肿瘤转移效果最强。对瘤苗治疗后荷瘤小鼠体内免疫功能的研究表明，小鼠脾脏ＣＴＬ活性、ＮＫ活性、ＩＬ－２导的ＬＡＫ活性均显著增强，脾脏细胞分泌ＩＬ－２和ＴＮＦ水平也显著升高，当与ＩＬ－１、低剂量Ｃｙ合用时，上述抗肿瘤免疫功能升高得更加明显，可见ＩＬ－２基因转移的瘤苗能通过有效地激活体内抗肿瘤免疫功能而具有显著的抗肿瘤转移效果，将其与ＩＬ－１或低剂量Ｃｙ联合应用时抗肿瘤效果更佳，当三者同时合用时抗肿瘤效果最佳。     

脂质体介导的IL-2基因疗法增强机体巨噬细胞免疫功能的研究

本文报道了脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接腹腔内注射后，巨噬细胞在介导该基因疗法中的作用及其功能变化。结果发现巨噬细胞是ＩＬ－２基因表达的主要靶细胞；巨噬细胞的吞噬功能、抗原提呈能力、Ｆｃ受体和Ｉａ抗原表达以及分泌ＩＬ－１、ＴＮＦ水平及杀伤肿瘤细胞的活性均明显提高。巨噬细胞功能的上述变化表明　，通过腹腔途径应用脂质体介导的ＩＬ－２基因疗法治疗腹部肿瘤可能具有一定的可行性。     

联合应用IL-2及IL-4基因转染瘤苗对实验性肺转移肿瘤的治疗作用

将IL—2基因转染的高分泌IL—2的B16黑色素瘤细胞株(B2)及IL—4基因转染的高分泌IL—4的B16黑色素瘤细胞株(B4)制备成新型瘤苗,用以治疗实验性肺转移荷瘤小鼠,并辅以低剂量环磷酰胺,结果表明,荷瘤小鼠存活期明显延长;肺部转移结节数明显减少;两种瘤苗联合治疗后的疗效较单独使用明显,当辅以低剂量环磷酰胺时治疗效果更加明显。体内免疫功能检测表明,经两种瘤苗联合治疗的荷瘤小鼠脾细胞NK及CTL杀伤活性升高得更加明显,但对LAK活性及腹腔巨噬细胞杀伤活性无明显协同增强作用;脾细胞经诱导后产生的细胞因子中,IL—2含量有所升高。     

IL—2,IL—4基因转染后肿瘤细胞表面ICAM—1分子的表达及其作用

为了进一步研究细胞因子基因转染后肿瘤细胞体内致瘤原性、免疫原性变化的分子机制，将ＩＬ－２、ＩＬ－４基因转染入Ｂ１６黑色素瘤细胞，观察了其体内接种后致瘤原性变化，通过ＦＡＣＳ法检测了其细胞表面粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的表达水平，分析了其细胞表面ＩＣＡＭ－１表达水平以及它们与肿瘤细胞对ＬＡＫ、ＣＴＬ等免疫效应细胞杀伤敏感性变化的关系。结果表明，ＩＬ－２、ＩＬ－４基因转染后Ｂ１６细胞体内致瘤原性明显     

白细胞介素2基因转移的肿瘤细胞克隆的建立及其体内外生长特性的研究

为了开展ＩＬ－２基因转移后免疫原性增强的新型瘤苗抗肿瘤作用的研究，须首先获得ＩＬ－２基因转移后、能够高分泌ＩＬ－２的肿瘤细胞并确定其生长特性。本室构建了含５６３ｂｐ的小鼠ＩＬ－２全长ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２，采用磷酸钙ＤＮＡ共沉淀法将ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２转移入Ｂ１６黑色素瘤细胞中，通过Ｇ４１８抗性筛选、有限稀释法及活性检测，获得一株高分泌ＩＬ－２（５０６Ｕ／ｍｌ）克隆，并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法证实ＩＬ－２基因已转入该克隆中。结果表明ＩＬ－２基因转移的肿瘤细胞体外生长能力没有明显变化，但体内致瘤原性显著下降，从而为制备新型瘤苗打下了基础。     

IL－3基因转染的肿瘤细胞增强机体免疫功能的实验研究

建立了ＩＬ－３基因转染的Ｂ１６小鼠黑素瘤细胞株（Ｂ１６－ＩＬ－３），发现其体内的致瘤性和肺转移能力明显下降。对其免疫机理作一探讨。结果发现接种Ｂ１６－ＩＬ－３细胞的小鼠脾细胞体外所诱生的ＬＡＫ活性和ＣＴＬ活性显著升高，外周血和脾细胞的ＣＤ４￣＋／ＣＤ８￣＋比值都有所升高；此外，在裸鼠体内，Ｂ１６－ＩＬ－３细胞的致瘤性也有一定程度的降低。结果表明ＩＬ－３基因转染的肿瘤细胞能诱导机体的特异性和非特异性免疫功能，参与机体的抗肿瘤作用。     

重组痘苗病毒载体介导的IL-2基因局部转染对小鼠黑色素瘤的治疗作用

采用编码人ＩＬ－２基因的重组痘苗病毒载体（ｒＶＶ－ＩＬ－２），以ｉｎｖｉｖｏ模式体内局部转染小鼠黑色素瘤，结果肿瘤生长速度明显减慢，荷瘤小鼠存活期显著延长。体内免疫功能的检测表明，荷瘤小鼠脾细胞的ＮＫ活性及诱导后的ＬＡＫ、ＣＴＬ活性明显高于对照组，表明采用ｒＶＶ－ＩＬ－２载体介导ｉｎｖｉｖｏ的肿瘤基因治疗具有一定的前景。     

逆转录病毒载体介导人GM－CSF基因转染肿瘤细胞

应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）介导人ＧＭ－ＣＳＦ基因转染肿瘤细胞获得表达。经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将含有人ＧＭ－ＣＳＦ基因的重组逆转录病毒载体ｐＺＩＰ－ＧＭ转染兼性病毒包装细胞系ＰＡ３１７，继之用病毒收获液感染人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１和人胃癌ＢＧＣ－８２３，经ＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ１测活和双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ测定表明：人ＧＭ－ＣＳＦ基因在人肿瘤细胞中获得稳定高效表达。为进─步建立ＧＭ－ＣＳＦ的转基因治疗模型提供了基础。