MPTP诱导小鼠黑质神经元凋亡

目的　探讨 1-甲基 - 4苯基 - 1,2 ,3,6 -四氢吡啶 (MPTP)的神经毒性及其作用机制。　方法　 C5 7BL小鼠腹腔注射 MPTP,总量为 15 0 mg/kg,取中脑黑质 Nissl染色 ,TH免疫组织化学 ,TUNEL法和电镜观察黑质致密带的神经元改变。　结果　 MPTP处理后 ,黑质致密带的存活神经元和 TH阳性神经元的数目明显减少 (P<0 .0 1) ,TUNEL结果表明黑质神经元出现明显的 DNA断裂的特征性凋亡改变 (P<0 .0 1) ,黑质致密带神经元的超微结构出现早期凋亡改变。　结论　 C5 7BL小鼠腹腔注射 MPTP,可诱导黑质神经元凋亡 ,细胞凋亡是 MPTP的毒性作用方式之一。     

MPTP对小鼠行为学及脑纹状体多巴胺含量的影响

目的：观察不同剂量对1－甲基－4－苯基－1,2,3,6－四氢吡啶（MPTP）小鼠行为学及脑纹状体多巴胺（DA）去甲肾上腺素（NE）,5－羟色胺（5－HT）及其代谢产物含量的影响,探讨MPTP致帕金森病（PD）样小鼠模型的最佳条件。方法：C57BL小鼠分别给予MPTP不同单日剂量（20－40mg/kg),不同给药次数（1－7）天处理,测定各组小鼠爬杆时间检测动物运动协调性,测定自发活动记数评价动物神经兴奋性,测定通道式水迷宫游出时间评价各组小鼠空间学习记忆能力。应用高效液相色谱法检测动物纹状体内DA,NE,5－HT及其代谢产物含量。结果：MPTP30mg /kg腹腔注射1天,3天,7天及40mg/kg腹腔注射1天,3天后小鼠都再现不同程度爬杆时间延长,自发活动次数减少,但不鼠水迷宫游出时间在给药前后未见明显改变。MPTP处理组与对照组相比DA及其代谢产物3,4－二羟基苯乙酸（DOPAC）含量都有明显降低,而NE,5－HT,及其代谢产物5－羟吲哚乙酸（5－HIAA）含量均未见明显改变。结论：MPTP处理可造成小鼠的帕金森病样症状,但不伴有明显智力障碍,在此种动物模型中,应根据科研目的选择MPTP的应用剂量和给药途径。     

MPTP对小鼠黑质纹状体神经递质代谢相关基因表达的影响

目的 研究1－甲基－4－苯基－1，2，3，6－四氢吡啶（1－methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的的黑质纹状体系统神经递质代谢相关基因表达的变化。方法 通过MPTP注射诱导C57BL小鼠神经元损伤，利用逆转录PCR方法检测酪氨酸羟化酶（TH），单胺氧化酶B（MAO－B），多巴胺转运体（DAT），胆碱乙酰基转移酶（ChAT)以及谷氨酸脱羟酶（GAD65）五种神经递质代谢相关基因的表达变化。结果 在小鼠黑质与纹状体中，MPTP导致TH基因表达显著降低以及GAD65基因表达的上升。MAO－B，DAT，ChAT基因的表达变化在黑质与纹状体则有所不同，在黑质MPTP导致MAO－B与ChAT基因表达的上升以及DAT基因表达下降，在纹状体MPTP导致MAO－B与ChAT基因表达下降，而对DAT基因表达没有明显影响。结论 MPTP对不同神经递质代谢相关基因表达有不同的影响，且具有一定的脑区特异性。     

异丙酚对MPTP损伤的小鼠黑质多巴胺神经元的保护作用

目的　观察异丙酚对 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3 ,6 四氢吡啶 (1 methyl 4 phenyl 1,2 ,3 ,6 tetrahydropyridineMPTP)损伤的小鼠纹状体多巴胺神经元的影响以及可能的作用机制。方法　给予Propofol 10 0mg/ (kg·d)后注射MPTP 2 0mg/ (kg·d) ,用药 6d。 12d后分离纹状体应用高效液相 -电化学方法检测纹状体多巴胺、二羟基苯乙酸及高香草酸的含量水平 ,应用12 5I- β-CIT放射性配基和免疫组化的方法检测多巴胺转运蛋白的活性和黑质神经元的损伤情况。结果　异丙酚可增加MPTP模型鼠多巴胺及其代谢产物的含量 ,异丙酚处理组DA ,DOPAC ,HVA的含量分别为 (8.2 417± 1.692 ) μg/ g、(1.3 81± 0 .486) μg/g和 (1.63 3 9± 0 .5 73 ) μg/ g ,与MPTP损伤组比较 ,明显增加。异丙酚亦可抑制黑质酪氨酸羟化酶 (TH)阳性神经元的减少。MPTP组注射MPTP 6d后 ,纹状体DAT为 (5 .3 13± 0 .64 2 )与正常组 (6.992± 0 .5 48) μg/ g比较显著下降 (P <0 .0 1) ,P +M组纹状体DAT为 (6.5 65± 0 .40 5 ) ,明显高于MPTP组 (P <0 .0 1) ,即减轻纹状体内多巴胺转运蛋白密度下降。结论　异丙酚对MPTP损伤的DA神经元具有一定的保护作用 ,其保护作用可能与抑制多巴胺转运蛋白活性有关     

MPTP小鼠黑质神经元凋亡及相关蛋白表达与还原型谷胱甘肽的干预研究

帕金森病（parkinson’sdiseasePD）是一种神经元变性疾病,主要累及黑质致密部多巴胺能神经元。表现为多巴胺能神经元的进行性减少,虽经过上百年的研究,其病因及发病机制仍不明了。     

1—甲基—4—苯基吡啶啶离子诱发大鼠小脑颗粒细胞凋亡

目的 建立1－甲基－4－苯基吡啶离子（1－methy1-4-phenyl pyridinium ion,MPP^ )诱导的大鼠小脑颗粒细胞凋亡模型。方法 MPP^ 处理大鼠小脑颗粒细胞,分别用甲基绿－派诺宁染色,DNA凝胶电泳,流式细胞术进行检测。结果 浓度为50μmol/L MPP^ 使小脑颗粒细胞发生凋亡。结论 以MPP^ 为诱导剂建立的大鼠小脑颗粒细胞凋亡模型,可用于研究和帕金森病（PD）有关的细胞凋亡的调控机制和筛选抗PD药物。     

MPTP诱导慢性帕金森病小鼠模型的实验研究

目的:观察慢性长期小剂量注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)对小鼠黑质多巴胺能神经元损伤及α-突触核蛋白(α-synuclein蛋白)表达的影响.方法:C57BL小鼠背部皮下注射MPTP 25 mg/kg体重,每周注射2次,连续注射5周,观察小鼠行为学改变,应用免疫组化染色检测酪氨酸羟化酶(Throsine hydroxylase,TH)和α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)的表达,原位末端标记法(TUNEL法)检测多巴胺能神经细胞凋亡.结果:与注射生理盐水组相比,注射MPTP组小鼠出现短暂一过性的震颤、后腿拉直、躬背、竖毛、运动减少等;黑质部酪氨酸羟化酶阳性细胞数目减少,α-突触核蛋白阳性细胞数目增加;生理盐水组未观察到细胞凋亡,MPTP组存在凋亡现象.结论:慢性长期注射MPTP可诱导小鼠行为学改变,黑质部多巴胺神经元细胞凋亡,以及α-突触核蛋白持续表达增多和聚集.     

附子联合MPTP诱导肝阳上亢型PD小鼠亚急性模型与慢性模型的建立及比较

目的 附子联合1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(anendons combined 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导C57BL/6小鼠肝阳上亢PD亚急性模型和肝阳上亢PD慢性模型的建立,通过行为学、病理学及分子生物学方法对模型进行评估。方法 小鼠随机分为正常组、模型组、肝阳上亢PD亚急性组MPTP[25mg/(kg·d)]注射7天、肝阳上亢PD慢性组[25mg/(kg·d)],每3.5天注射1次,注射5周,在注射MPTP前,各模型组附子煎液灌胃4周。爬杆、转棒实验检测小鼠行为学变化;免疫组化检测小鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶(trosine hydroxylase,TH)的表达,免疫印迹检测各组小鼠蛋白含量变化,实时定量PCR检测TH mRNA表达变化。结果 与正常组比较,肝阳上亢PD慢性组小鼠行为变化明显,模型组及肝阳上亢PD亚急性组小鼠变化较低,在爬杆实验中,肝阳上亢PD慢性组小鼠爬杆时间明显长于模型组及肝阳上亢PD亚急性组(P<0.05),转棒实验中,肝阳上亢PD慢性组小鼠在棒时间明显短于模型组及肝阳上亢PD亚急性组(P<0.05)。中脑黑质区TH阳性细胞表达含量方面,与正常对照组比较,肝阳上亢PD慢性组TH表达量显著下降(P<0.05),模型组及肝阳上亢PD亚急性组表达量高于肝阳上亢PD慢性组;免疫印迹及实时定量PCR检测结果表明,肝阳上亢PD慢性组小鼠在蛋白及mRNA表达量均为最低(P<0.05)。结论 肝阳上亢PD慢性组小鼠与单纯MPTP模型组及肝阳上亢PD亚急性组比较,损伤程度更高,周期更长,更具有与人类PD相似的临床症状,提示该模型有望成为PD发病机制研究潜在的稳定模型。     

β-catenin在MPTP致C57BL/6小鼠多巴胺能神经元损伤模型腹侧中脑的表达变化

目的 探讨在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenvl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)致C57BL/6小鼠多巴胺能神经元损伤模型中β-catenin在腹侧中脑不同时间点的表达变化.方法 采用腹腔注射MPTP制备C57BL/6小鼠帕金森病模型.40只雄性C57BL/6小鼠,随机分为8组(n=5):对照组、MPTP 0 d组、MPTP 1 d组、MPTP 2 d组、MPTP 4 d组、MPTP 7 d组、MPTP 14 d组、MPTP 21 d组.在末次注射MPTP后的相应时间点将动物处死,Western blot法检测腹侧中脑磷酸化β-catenin(phosphorylated β-catenin,p-β-catenin)以及总β-catenin蛋白的表达;免疫组化法检测腹侧中脑β-catenin蛋白阳性细胞表达.结果 MPTP致伤显著增加了C57BL/6小鼠腹侧中脑总β-catenin蛋白的水平,然而p-β-catenin蛋白并没有明显的改变.免疫组化检测显示MPTP处理后第7天β-catenin蛋白在腹侧中脑各区域黑质网状部(SNr),黑质致密部(SNpc)以及被盖腹侧区(VTA)的表达增多并发生了核转移.结论 MPTP所致腹侧中脑区β-catenin蛋白表达增加与帕金森病发生发展的病理机制有关.     

17β-E2抗低剂量MPTP致雌鼠黑质听觉P50诱发电位异常的研究

目的摸索低剂量环境毒素1-甲基-4苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）损伤单侧中脑黑质建立帕金森病大鼠模型，观察17β-雌二醇对抗由低剂量MPTP致雌鼠黑质听觉P50诱发电位异常的作用，探讨其可能机制．方法将139只成年雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为9组：正常对照组、MPTP帕金森病模型组、生理盐水溶剂对照组、去卵巢空白对照组、去卵巢＋MPTP帕金森病模型组、去卵巢＋雌激素替代组、去卵巢＋先雌激素替代后给予MPTP帕金森病模型组、去卵巢＋橄榄油溶剂对照组、假手术空白对照组．     

Growth Inhibition and Apoptosis Induction in Human Hepatoma Cells by Tanshinone Ⅱ_A

Summary:In order to study the effect of tanshinone Ⅱ_A on growth and apoptosis in human hepatomacell line BEL-7402 in vitro,the human hepatoma cell line BEL-7402 was treated with tanshinone Ⅱ_Aat various concentrations for 72 h.Growth suppression was evaluated by MTT assay;apoptosis-relat-ed alterations in morphology and biochemistry were ascertained under cytochemical staining(Hoechst33258),transmission electron microscopy(TEM),and DNA agarose gel electrophoresis.Apoptoticrate was quantified by flow cytometry(FCM).The results showed thst Tanshinone Ⅱ_A could inhibitthe growth of hepatoma cells in a dose-dependent manner,with IC_(50) value being 6.28μg/ml.Aftertreatment with 1—10 μg/ml tanshinone Ⅱ_A for 72 h,BEL-7402 cells apoptosis with nuclear chro-matin condensation and fragmentation as well as cell shrinkage and the formation of apoptotic bodieswere observed.DNA ladder could be demonstrated on DNA electrophoresis.FCM analysis showedhypodiploid peaks on histogram,and the apoptotic rates at 5     

MPTP致小鼠黑质致密部多巴胺能神经元损伤及定量研究

目的建立正常小鼠黑质致密部部位-细胞数量标准曲线,并以之判定MPTP损伤的小鼠PD模型中多巴胺能神经元的损失.方法根据小鼠大脑解剖图谱观察小鼠黑质致密部的走向,酪氨酸羟化酶免疫组化染色显示正常小鼠大脑黑质致密部及多巴胺能神经元;观察计数MPTP处理小鼠的大脑黑质致密部多巴胺能神经元,与正常小鼠的相似部位进行比较.结果建立了正常小鼠黑质致密部部位-细胞数量分布图,利用曲线对MPTP处理小鼠所得到的切片进行分析,发现样本中多巴胺能神经元明显减少,证明判定方法可行而有效.结论本实验成功建立了MPTP致小鼠黑质致密部多巴胺神经元损伤模型,并对其损伤判定进行了标准化.     

百草枯增加小鼠黑质细胞caspase-3mRNA的表达及其酶活性

目的 探讨百草枯对C57b1／6小鼠黑质细胞caspase-3 mRNA的表达及其活性的影响。方法 应用RT-PCR技术检测C57b1／6小鼠暴露于百草枯不同时间后黑质细胞中caspase-3 mRNA表达的变化，并采用比色法测定相应时间点黑质细胞的caspase-3酶的活性。结果 C57b1／6小鼠暴露于百草枯后黑质细胞中caspmse-3 mRNA的表达明显增加，caspase-3酶的活性也相应地增加，这种增加与黑质细胞的凋亡相一致。结论 百草枯可诱导C57b1／6小鼠黑质细胞表达caspase-3 mRNA，增加caspase-3酶的活性，促进黑质细胞的凋亡。     

MPTP对C57小鼠纹状体DA释放节律的影响

目的观察MPTP(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶)对C57BL/6J小鼠纹状体DA(多巴胺)、5-HT(5-羟色胺)等神经递质的释放节律性的影响。方法取120只SPF级C57BL/6 J小鼠,随机分为2组:MPTP组连续5 d腹腔注射MPTP-HCl 36mg/(kg.d),对照组注射生理盐水300μL。5 d后24 h内分6个时间点:ZT0、ZT4、ZT8、ZT12、ZT16、ZT20,取纹状体,用HPLC-ECD法检测各时间点2组纹状体中DA、5-HT的水平。结果MPTP组纹状体DA水平明显降低(P<0.05);对照组DA高峰出现在ZT0(即8:30 am),低谷在ZT16(即1:30 am),MPTP组DA的高峰和低谷出现的时相未发生改变。2组5-HT均无明显节律性释放。结论小鼠纹状体的DA水平呈节律性变化,5-HT无节律性变化,MPTP作用后对DA的节律性变化无影响。表明此模型纹状体DA的减少与DA释放节律性之间不存在必然联系。     

5-氟尿嘧啶诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制研究

目的 研究５－氟尿嘧啶（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ,５－ＦＵ）体外诱导胃癌ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡作用,及细胞凋亡与Ｋｉ－６７抗原、核增殖抗原（ＰＣＮＡ）、Ｐ５３蛋白、Ｂａｘ蛋白、死亡受体Ｆａｓ表达的关系。探讨５－ＦＵ诱导胃癌细胞凋亡作用的机制。方法 应用流式细胞仪和３’－ＯＨ末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测凋亡细胞,电镜观察凋亡细胞的形态改变,免疫组织化学法检测细胞Ｋｉ－６７、ＰＣＮＡ、Ｐ５３、Ｂ     

银杏叶提取物对MPTP诱导帕金森小鼠保护作用的研究

目的观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导不同年龄段的帕金森(parkinson’s disease,PD)小鼠的防治作用。方法将8周龄及32周龄各60只C57BL/6小鼠随机分为阴性组,模型组,GBE给药高、中、低剂量组及阳性组,采用腹腔注射MPTP法制备PD动物模型,采用银杏叶提取物进行灌胃治疗。运用爬杆、悬挂和游泳实验检测小鼠肢体运动功能,采用分光光度法测定小鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,采用免疫组化法观察小鼠大脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)及纹状体多巴胺转运蛋白(DAT)阳性细胞数目的变化。结果 (1)与阴性对照组比较,8周龄模型组小鼠运动功能得分、大脑GSH-Px活性、黑质TH阳性细胞及纹状体DAT阳性细胞平均光密度值均显著下降,脑组织MDA含量显著升高,说明PD模型复制成功。与模型组比较,银杏叶提取物给药组8周龄小鼠运动功能得分、SOD与GSH-Px活性、黑质TH阳性细胞平均光密度值均显著提高,MDA含量显著下降。(2)与阴性对照组比较,32周龄模型组小鼠运动功能得分、黑质TH阳性细胞以及纹状体DAT阳性细胞平均光密度值均显著下降,SOD与GSH-Px活性降低,脑组织MDA含量升高,说明模型复制成功。与模型组比较,银杏叶提取物给药组32周龄小鼠运动功能得分、SOD活性、黑质TH及纹状体DAT阳性细胞平均光密度值均显著提高,脑组织MDA含量显著下降。结论银杏叶提取物对MPTP诱导的不同年龄段PD小鼠有一定的防治作用。     

MPTP对小鼠纹状体多巴胺含量的影响

报道1—甲基—4—苯基—1,2,3,6—四氢吡啶(MPTP)给C_(57)-BL黑色小鼠腹腔注射后,应用高效液相色谱—电化学检测法,测定纹状体多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NA)、5—羟色胺(5-HT)及其代谢产物3,4—二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA),5—羟基吲哚乙酸(5-HIAA)的含量。结果与对照组相比,用药组小鼠纹状体DA、5-HT及其代谢产物显著降低,其中DA减少94%(P<0.001),DOPAC减少61%(P<0.05),HVA减少65%(P<0.001)。实验结果表明用MPTP给予小鼠所产生的动物模型,对研究帕金森病是一种较为有用的方法。     

5一FU静脉、腹腔化疗诱导小鼠腹水瘤细胞凋亡研究

为探讨5－Fu静脉和腹腔给药途径诱导小鼠腹水瘤细胞凋亡的规律及其抗肿瘤作用机制，将45只腹腔内接种H22细胞的小鼠随机分为对照、静脉和腹腔内化疗3组。各组于注药后第3、5、7d分别收集腹水细胞行细胞形态观察、DNA电泳分析和流式细胞仪检测。结果显示，化疗组腹水细胞均呈现典型细胞凋亡形态学特征，同时可见细胞坏死。细胞凋亡率呈时间依赖性（P＜0．01），且腹腔内化疗组细胞凋亡率各时间点均明显高于静脉组（P＜0．01），提示5－Fu抗肿瘤作用机制是引起肿瘤细胞死亡和诱导和诱导肿瘤细胞凋亡共同作用的结果：腹腔内化疗效果明显优于静脉化疗。     

弱电场对博来霉素诱导裸鼠移植瘤凋亡的影响

目的 弱电场下探索电穿孔促进博来霉素诱导头颈部肿瘤凋亡的效果。方法 采用免疫组化的方法对人头颈部癌裸鼠移植瘤的肿瘤组织切片(40张)进行TUNEL检测。其中A,B为电化学组A：50v(E),20μg(B);B：100v(E),20μg(B);C药物组：20μg(B);D,E电压组D：50v,E：100v;F：为对照组予以PBS。结果 A、B两组调亡明显,C组凋亡极少,D,E两组无凋亡细胞。结论 弱电场下电穿孔促进了博来霉素对头颈部肿瘤的诱导凋亡效果。