新生大鼠同种心脏移植免疫耐受的实验研究

目的探讨诱导新生大鼠免疫耐受性。方法实验组新生SD大鼠胸腺内接种成年wistar大鼠2.5×10     

异种胸腺,骨髓联合移植诱导受体免疫耐受

异种胸腺、骨髓联合移植诱导受体免疫耐受胡军１贾赤宇２马文煜１陈璧２蔡振杰３陈志云４张戈４岳小红４（１第四军医大学微生物学教研室西安７１００３３２第四军医大学西京医院烧伤科３第四军医大学唐都医院心脏外科４第四军医大学学员一大队）关键词胸腺骨髓异种移植免...     

异种造血嵌合体模型的免疫耐受机制

目的 在已建立的大鼠→免异种造血嵌合体模型中，了解异种移植免疫耐受机制。方法 通过直接、间接免疫荧光染色技术及补体介导的细胞毒试验等方法，检测大鼠MHC－Ⅰ类分子阳性细胞以及体液免疫。结果 检测出大鼠MHC－Ⅰ类分子阳性细胞比例为31.0%-61.9%，且此细胞体液免疫功能正常；同时在此模型中检测出有较高浓度的兔抗大鼠单个核细胞抗体存在，且受体补体功能正常。结果 （1）用我们所建立的方法进行异种骨髓移植是成功的；（2）在受体补体活性正常的嵌合体模型中大鼠单个核细胞与兔抗大鼠单个核细胞抗体出现的共存现象（即适应accomm-oda-tion），是形成此嵌合体的原因。     

T细胞疫苗诱导异种胰岛移植免疫耐受的实验研究

目的体外制备供体特异性T细胞疫苗（T cell vaccine）,探讨T细胞疫苗免疫（T cell vaccination）诱导异种胰岛细胞移植免疫耐受的作用。方法腹腔注射链脲佐菌素诱导建立Balb／c小鼠Ⅰ型糖尿病模型,用酶消化法和密度梯度离心法无菌分离纯化Wistar大鼠胰岛细胞。制备Balb／c小鼠针对Wistar大鼠的T细胞疫苗：实验随机分为三组,G1：糖尿病小鼠对照组;G2：胰岛细胞移植组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞移植＋1640培养液（对照组）;G3：胰岛细胞移植加T细胞疫苗免疫组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞＋T细胞疫苗（实验组）,于d1,d7,d14,d21实验组Balb／c小鼠接种TCV（1×107／mL）,对照组用1640替代。接种前和每次接种后第5d分别进行混合淋巴细胞反应。胰岛细胞移植：将Wistar大鼠的胰岛按1200。1500IEQ／kg经肝门静脉导入小鼠体内,移植后观测血糖和体重变化。结果异种胰岛细胞移植可以诱导I型糖尿病小鼠血糖降至正常水平且维持一段时间,对照组小鼠移植后（5．12±1．36）d即发生排斥,实验组移植物存活时间达（20．25±3．45）d。结论TCV能够有效延长异种胰岛移植物的存活时间,是一种潜在诱导异种胰岛移植免疫耐受的方法。     

小鼠对大鼠异种皮肤移植耐受的诱导

目的探索更为温和的适合临床应用的诱导异种移植耐受的方案。方法给小剂量照射（ 300 rad）的 C57BL/6 (B6)小鼠静脉注射抗小鼠 CD4单抗 0.5 ml后输注 Lewis大鼠骨髓细胞 ,并联合应用腹腔注射环磷酰胺诱导耐受。于耐受诱导后 30 d对受体小鼠作耐受状态的检查,包括供体特异性皮肤移植、混合淋巴细胞反应（ MLR）及迟发型超敏反应（ DTH）。并通过过继转移实验、外源 IL- 2对耐受小鼠供体特异性 MLR的影响等进一步探讨耐受形成的机制。结果 Lewis大鼠的皮肤移植物在耐受 B6小鼠中存活期特异性延长, MLR及 DTH检查证明 B6小鼠对 Lewis大鼠的脾细胞产生特异性耐受,对无关第三者 DA大鼠及 BALB/c小鼠的脾细胞仍表现出强烈的免疫应答。体内外过继转移实验表明 ,耐受不能被转移 ,未发现抑制细胞的存在。耐受小鼠供体特异的 MLR可以被外源 IL- 2逆转 ,说明耐受主要不是克隆排除,而与克隆不应答有关。结论应用低剂量照射、骨髓移植、环磷酰胺及抗 CD4单抗等方法法可以有效诱导出小鼠对大鼠的移植耐受。     

胸腺移植诱导猪源性异种移植物免疫耐受的研究进展

临床器官移植中，同种器官供体来源的严重不足，使异种器官移植成为解决这一问题的可能途径。猪成为异种器官移植的理想供体[1]。目前，在攻克猪→人异种器官移植的第一道障碍——超急性排斥反应方面已经取得了突破性进展[2,3]。但异种移植后以细胞免疫为主的排斥反应较同种移植中除抗体介导的血管性排斥（）外的另一主要障碍，目前的DXR免疫抑制治疗尚难解决这一问题。而通过诱导人免疫活性细胞（主要是细胞）对异种移植物的耐受则可消除或减轻T急、慢行排斥反应，还可以免除或减少免疫抑制剂的使用，避免或减轻其毒副作用，是临床异种器…     

供者特异性抗原诱导异种免疫耐受的初步研究

目的：为探讨异种免疫耐受的可能性。方法：以豚鼠－大鼠心脏移植建立超急排斥反应模型,在眼镜蛇毒因子（ＣＶＦ,３０Ｕ／ｋｇ）及环磷酰胺（ＣｙＰ）的覆盖下,将供者特异性或非特异性血管内皮细胞以４．０×１０６个／只,注入受者的门静脉,２周后行颈部心脏移植。结果：移植供心存活时间获得延长至（４６．１±５）ｍｉｎ,加用ＣｙＰ后延长尤为明显（５４．５±９．７ｍｉｎ）,同时血管内皮细胞溶解率下降,ＣｙＰ对移植物存活也有一定的延长作用（３４．６±８．７ｍｉｎ）,而非特异性血管内皮细胞则无此作用。结论：在豚鼠－大鼠异种移植模型中,供者特异性血管内皮细胞经门静脉径路注射可诱导受者产生一定程度的免疫耐受。这种耐受的产生机制尚需进一步研究。     

经门静脉输注供者特异性血管内皮细胞诱导豚鼠一大鼠异种移植免疫耐受的实验研究

为探讨异种移植免疫耐受的可能性，以豚鼠一大鼠异位心脏移植超急排模型，在CVF（30U／kg）及环磷酸胺（CyP）覆盖下将供者特异性血管内皮细胞以4．0X106／只经受者门静脉输注，2周后行颈部心脏移植使移植供心存活时间获得延长（44．8～64．2min），同时血管内皮细胞溶解率下降。环磷酰胺及脾切除有一定延长移植物存活的作用（25．9～43．3min，30～47．2min），而非特异性血管内皮细胞无此作用。提示经门静脉输注供者特异性豚鼠血管内皮细胞可诱导大鼠产生一定程度的免疫耐受，这种耐受的产生机制尚需进一步研究。     

改良袖套法建立异种心脏颈部移植模型

目的:采用改良Heron袖套法建立小鼠→大鼠异种心脏颈部移植模型.方法:选择NIH小鼠和Wistar大鼠分别作为供体和受体.用聚乙烯套管将小鼠升主动脉与大鼠右颈总动脉端端套入吻合,同法将小鼠肺动脉与大鼠右颈外静脉端端套入吻合,以建立小鼠→大鼠颈部异位心脏移植模型.结果:进行移植手术30次,成功率93.3%.移植后心脏平均存活时间2.13±0.8天.结论:改良袖套法操作简单、迅速、稳定、便于观察,是较理想的动物模型.     

大鼠-兔异种异位心脏移植模型的建立

目的　研究非协调性异种心脏移植 ,建立大鼠 -兔异位心脏移植模型。　方法　以 SD大鼠为供体 ,新西兰白兔为受体 ,应用袖套技术 ,将供心主动脉与受体颈总动脉、供心肺动脉与受体颈外静脉吻合。　结果　完成实验 4 8例 ,手术成功率 10 0 %。供心缺血时间 12± 5 min,吻合时间 2～ 4 min。　结论　应用袖套技术建立大鼠 -兔异位心脏移植模型 ,克服了腹腔心脏移植的局限性 ,简化了心脏移植实验技术     

新生大鼠胸腺内接种同种和异种脾细胞对移植心脏存活的影响

目的 :诱导新生大鼠免疫耐受。方法 :将Wistar大鼠或豚鼠脾淋巴细胞通过胸腺途径分别注射给新生SD大鼠 ,8～ 10周龄时分别行同种Wistar大鼠或异种豚鼠供心移植 ,观察移植心存活的时间及病理学改变。结果 :胸腺内注射Wistar大鼠脾淋巴细胞者接受Wistar供心移植 ,供心存活时间显著延长 ,平均存活 >6 0 4d(P <0 0 0 1) ;而胸腺内接种豚鼠脾淋巴细胞者接受豚鼠供心移植 ,供心平均存活仅 9 8d(P >0 0 5 )。结论 :单一胸腺内接种同种脾细胞可以诱导新生大鼠的免疫耐受 ,但不能诱导异种免疫耐受     

胸腺内接种同种脾细胞诱导新生期大鼠免疫耐受的研究

为了诱导新生大鼠免疫耐受。方法：将 ２．５ ｘ １０７个 Ｗｉｓｔａｒ大鼠脾淋巴细胞通过胸腺途径注射给 新生ＳＤ大鼠,４－６周龄时取其脾淋巴细胞与Ｗｉｓｔａｒ大鼠脾淋巴细胞（２０ Ｇｙ照射）进行混合培养,作氚标记并测定 放射强度。结果：实验组放射强度平均为（１０．８５±２．５６）Ｂｑ;对照组为（２４．８２±５．４４）Ｂｑ,２组比较差异显著（Ｐ＜ ０．００１）。结论：新生期大鼠胸腺内接种同种脾淋巴细胞可以诱导其免疫耐受。     

胸腺内注射异基因脾细胞诱导移植心免疫耐受的实验研究

目的通过大鼠同种异体心脏异位移植,探讨胸腺内注射异基因脾细胞对移植心的影响.方法用供体脾细胞(SC)在心脏移植前21d预处理受体鼠,术后1周每日腹腔注射环孢素A(CsA)10mg/kg.检测移植心存活时间、混合淋巴细胞反应(MLR)及细胞介导的细胞毒试验(CML).结果胸腺注射脾细胞抗原联合短期应用CsA组的移植心平均存活时间较其他组显著延长(P＜0.05),移植心耐受的受体鼠中MLR增殖活跃,产生免疫耐受的受体鼠的T细胞对供体鼠的靶细胞无明显的细胞毒作用.结论胸腺内注射供体脾细胞抗原预处理受体同时联合短期应用CsA,可诱导产生移植心脏的免疫耐受,且诱导移植耐受的抗原量以2.5×107脾细胞为好.     

供体骨髓细胞输注诱导免疫耐受延长猪-猴异种角膜移植植片存活的研究

目的观察受体猴在环磷酰胺(CTX)预处理下输注供体猪骨髓(BM)细胞后对猪-猴角膜移植植片的存活时间的影响,并探讨相关免疫调节机制。方法供体为五指山小型猪(WZS),受体为恒河猴。将18只受体猴采用数字表法随机分为3组,组1为CTX预处理后行1次骨髓细胞输注,组2为CTX预处理后行2次骨髓细胞输注,组3为CTX预处理后不行骨髓细胞输注。之后行穿透性角膜移植术,术后观察植片的存活情况并分别应用混合淋巴细胞反应测定、免疫浊度法和流式细胞仪检测受体猴全身免疫状态。术后1个月取角膜植片行组织病理学检查。结果组1的角膜植片平均存活时间为(36.0±4.7)d,组2为(32.8±6.4)d,组3为(17.7±3.2)d。与组3相比,组1和组2均能明显延长植片存活时间(P<0.01)。混合淋巴细胞反应测定显示组1和组2受体猴对供体脾脏淋巴细胞的反应性降低,而组3的反应性无明显变化。3组术后第1～2周内IgG、IgA、IgM、补体C3、C4浓度升高,组1和组2术后外周血中CD4+T细胞呈下降趋势,CD8+T细胞呈先上升后下降趋势,CD16+T细胞术后1周达最高值;而组3中CD4+T细胞术后升高,CD8+T细胞先下降后上升,CD16+T细胞术后2周达最高值。术后1个月组织病理学检查可见组1和组2植片中少量淋巴细胞浸润,前房无渗出膜,无噬酸性粒细胞浸润;而组3植片中大量淋巴细胞浸润,角膜内皮层破坏,内皮面形成渗出膜,有噬酸性粒细胞浸润。结论CTX预处理下输注供体骨髓细胞能够明显延长异种角膜植片的存活时间,降低受体淋巴细胞对供体特异免疫反应性,免疫排斥反应的发生与体液免疫和细胞免疫有关。     

微囊化大鼠胰岛移植物的制备与异种移植

为了解决胰岛移植中排斥反应,用海藻酸钠—聚赖氨酸生物膜制备微囊化大鼠胰岛,体外培养,胰岛素释放试验功能良好,与单纯胰岛无显著性差异;异种移植可成功地纠正糖尿病小鼠的高血糖状态平均达4个月之久。表明:大鼠胰岛微囊化可在不使用免疫抑制剂的情况下,有效地延长胰岛在糖尿病小鼠体内的生存期。     

用大鼠原代心肌细胞构建工程化心肌组织的研究

目的探索用大鼠原代心肌细胞构建工程化心肌组织的方法。方法用胶原、M atrigel、2倍DMEM分别与含0.04?TA的0.25%胰酶制备的乳鼠原代心肌细胞(实验组)和0.1%胰酶制备的原代心肌细胞(对照组)混合,注入环形槽内形成心肌条带,一周后行力学拉伸继续培养一周。常规HE染色等对组织工程化心肌组织,即心肌条带进行评价。结果心肌条带出现自发性跳动,HE染色显示与正常成年大鼠心肌组织类似,电镜结果显示条带中的心肌细胞含有丰富的肌原纤维,肌小节结构和Z带清晰可见。用含0.04?TA的0.25%胰酶制备的原代乳鼠心肌细胞构建的心肌条带,拉伸后第4天形成一致性跳动。免疫组化检测提示肌钙蛋白阳性细胞数多于对照组。电镜观察显示,条带的心肌细胞中肌原纤维较对照组明显增多。结论这一方法可构建工程化心肌组织,心肌细胞制备方法的改进以及液态Ⅰ型胶原浓度的精确测定,可显著提高构建心肌条带的成功率及条带的生理功能,使其更接近正常心肌组织。     

增龄对大鼠胸腺形态结构及细胞免疫功能的影响

目的:系统地探讨不同年龄大鼠淋巴细胞转化规律与胸腺质量、胸腺指数增龄变化引起胸腺萎缩的机制。方法:大鼠按年龄分组,测定其胸腺质量及体质量大小,应用植物血凝素(PHA)丝裂原诱导的脾细胞增殖反应,利用噻唑蓝(MTT)颜色反应法观察淋巴细胞转化;在光镜、电镜下观察胸腺主要结构的年龄变化。结果:测定显示,随着年龄的增加,胸腺指数明显下降。脾脏淋巴细胞的增殖活性明显下降。同时胸腺组织的光、电镜观察胸腺皮质变薄,胸腺细胞稀疏,皮、髓质分界不清;大量的脂肪、纤维代替了部分胸腺细胞,线粒体肿胀,嵴减少,部分细胞凋亡。结论:增龄过程中,大鼠胸腺萎缩退化,胸腺指数下降;免疫结构退化与功能下降。     

新生大鼠心脏微血管内皮细胞的分离培养及鉴定

目的:介绍一种改良的心脏微血管内皮细胞(CMECs)的分离培养及鉴定方法。方法:应用酶消化法分离大鼠CMECs,再用差速贴壁进行纯化。结果:用光学显微境、免疫细胞化学法进行第Ⅷ因子相关抗原染色来鉴定CMECs,其纯度约98%。结论:该法简单且经济。     

己酮可可碱对非协调性异种心脏移植的影响

【目(的】探讨己酮可可酮碱（PTX）对非协调性异种心脏移植［CTx(DC)］存活时间的影响。【方法】50只雄性豚鼠和50只雄性SD大鼠随机分成A、B、C3组进行异种心脏（豚鼠-大鼠）移植于颈部,移植前1hA组受体生理盐水1mL腹膜腔内注射(ip),B组受体PTX50mg/kgip,C组供体、受体均以PTX50mg/kgip。用免疫组织化学方法检测移植心脏血管内皮细胞（EC）P-选择素表达情况。【结果】①B、C组移植心脏平均存活时间分别为25.6min和25.9min,较A组13.9min明显延长,P<0.05。②移植后8min和排斥时移植心脏血管ECP-选择素表达B、C组不如A组明显,P<0.05。【结论】PTX可以通过保护EC,延长CTx（DC）存活时间。