p16基因抑制乳腺癌细胞MCF—7增殖的体外和体内实验研究

目的：探讨ｐ１６基因对乳腺癌的治疗作用,为乳腺癌ｐ１６的基因治疗提供实验依据。方法：构建ｐ１６的逆转录病毒载体ｐＬＭＳＮ,包装成病毒后,体外转导ｐ１６基因纯全性缺失的乳腺癌细胞株ＭＣＦ－７,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证明该基因在转导后的ＭＣＦ－７细胞中有表达,用活细胞计数、流式细胞仪、形态观察等方法来检测ｐ１６表达在体外对ＭＣＦ－７细胞生物学行为的影响。进行ＳＣＩＤ鼠体内成瘤实验和逆转录病毒直接注射     

转录因子GATA-2基因在淋巴系白血病中的表达特点

我了解ＧＡＴＡ－２基因在淋巴系白血病中的表达情况。方法 利用反转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）、慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）、多毛细胞白血病（ＨＣＬ）和淋巴细胞白血病等１０１０例病人外周血单个核细胞吕ＣＡＴＡ－２基因。结果 ＧＡＴＡ－２基因在ＡＬＬ和ＣＬＬ中的表达率分别为７９．２％和９４．４％,３例ＨＣＬ均表达ＧＡＴＡ－２,３例淋巴瘤细胞白血病仅１例表达ＧＡＴＡ－     

环丙氧苷诱导转导有外源HSV—tk基因的C6胶质瘤细胞的 …

目的 观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）－环丙氧苷（ＧＣＶ）系统在胶质瘤基因治疗过程中,ＧＣＶ能否诱导转导有ＨＳＶ－ｔｋ基因的胶质瘤细胞凋亡。方法 采用光镜、电镜和荧光显微镜观察转导有ＨＳＶ－ｔｋ基因的大鼠Ｃ６／ｔｋ胶质瘤细胞形态学的改变,以末转导ＨＳＶ－ｔｋ基因的Ｃ６细胞作为对照,并以流式细胞术,ＤＮＡ凝胶电流分析进一步验证细胞凋亡的发生。结果 在５μｇ／ｍｌ ＧＣＶ作用７２ｈ后,Ｃ６     

共刺激信号B7—1表达对小鼠肿瘤细胞生长和转移的影响

为Ｂ７１分子基因在肿瘤免疫基因治疗中的应用提供实验依据。方法通过逆转录病毒介导的基因转移技术，将Ｂ７１ｃＤＮＡ导入具有不同免疫原性的小鼠肿瘤细胞获得表达，并观察转基因细胞在纯系小鼠体内生长和转移的改变。结果由于Ｂ７－１基因的转导表达，使具有免疫原性的ＥＬ４Ｔ淋巴瘤细胞致瘤性丧失；使非免疫原性的Ｂ１６黑色素瘤、Ｐ８１５肥大细胞瘤和ＭＡ８９１乳腺癌细胞的致瘤性减弱；使Ｂ１６细胞的实验性转移和ＭＡ８９１细胞的自发肺转移能力降低。通过转导Ｂ７－１基因的Ｂ１６细胞的免疫接种，可使再次接种的亲本Ｂ１６细胞的致瘤性减弱：但对已生长的亲本Ｂ１６细胞影响不明显。结论Ｂ７１基因导入不同的肿瘤细胞后，可引起机体产生不同程度抗肿瘤免疫反应，使肿瘤细胞在体内的生长和转移能力丧失或减弱，这种反应的强弱与肿瘤细胞本身的特性有关。     

PDGF—B基因的膜型表达产物促进血管平滑肌细胞增殖和胶原合成

考察ＰＤＧＦ－Ｂ基因的膜型表达产物对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增生、胶原合成的影响。制备供转导人ＰＤＧＦ－Ｂ基因的重组逆转录病毒，感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，受染ＮＩＨ３Ｔ３细胞经筛选、扩增后，制备细胞膜上表达产物ＰＤＧＦ－ＢＢ以观察其对ＶＳＭＣｓ生长的影响，并以３Ｈ－ＰｒｏＬｉｎｅ掺入率评估该重组蛋白对ＶＳＭＣｓ胶原合成的影响。结果：重组逆转录病毒介导ＰＤＧＦ－Ｂ基因转移并表达出具有生物学活性的重组ＰＤＧＦ－ＢＢ，免疫荧光细胞化学染色证实其表达；该膜型重组蛋白可促进ＶＳＭＣｓ增殖和胶原合成。     

供转导PDGF-A基因的高滴度逆转录病毒的制备

目的制备高滴度供转导血小板衍生生长因子Ａ链（ＰＤＧＦ－Ａ）基因的重组逆转录病毒,为体内、外深入研究该基因表达产物自分泌和旁分泌的生物学功能奠定基础。方法将人ＰＤＧＦ－ＡｃＤＮＡ片段插入含巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子序列的逆转录病毒ＧＩＮａ载体的多克隆位点中,将构建的重组质粒导入病毒包装细胞ＰＡ３１７中,经Ｇ４１８筛选并扩增,以病毒液感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞,测病毒滴度,选择出抗性克隆,进行免疫组织化学检测,表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析和３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测生物学活性。结果病毒滴度最高为１．４×１０５ＣＦＵ／ｍｌ;免疫荧光染色法和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实ＰＤＧＦ－ＡＡ的表达;抗性细胞条件培养基的细胞活性高达５１．２Ｕ／（１０６·ｄ）。结论供转导ＰＤＧＦ－Ａ基因的高滴度逆转录病毒得以制备,该基因获得有效表达,表达产物具有明显的致丝裂活性。     

转导Caspase-1基因对人胃癌细胞药物敏感性的影响

许多研究表明,化学药物对敏感肿瘤细胞有促凋亡作用［１,２］。胃癌的发生发展与肿瘤细胞凋亡受抑有关,而且胃癌细胞对化疗药物的敏感性差。Ｃａｓｐａｓｅ－１基因是哺乳动物细胞促凋亡基因,转染该基因可使肿瘤细胞的增殖受抑,但对化疗药物的敏感性如何尚未见报道。为全面了解转导Ｃａｓｐａｓｅ－１基因后肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,本实验观察了４种化疗药物对转染Ｃａｓｐａｓｅ－１基因的胃癌细胞的杀伤作用。１　材料和方法１．１　质粒、逆转录病毒载体构建及转染胃癌细胞株　人Ｃａｓｐａｓｅ－１－ｐＧＥＭ－１质粒由美国Ｔ…     

腺病毒CD-80基因转导B16-F10细胞的体外生物学特征

目的 探讨含hB7-1基因的重组腺病毒hCD80rAd对B16－F10肿瘤细胞体外生物学特性的影响。方法 以腺病毒为载体，将CD80基因导入B16－F10肿瘤细胞后，以PCR方法检测基因导入，以电镜、FACS等方法观察对其体外生物学特性的影响。结果 重组腺病毒的滴度可达10^10PFU/mL,200MOIs rAd可使95％以上的B16－F10细胞被感染。转染CD80基因后，B16－F10细胞的生长能力、克隆形成能力等均无变化，电镜下，细胞表面结构及胞内超微结构有轻微变化。结论 重组腺病毒hCD80rAd可以有效地将hCD80基因导入肿瘤细胞而不会引起明显的生物学特性改变，制备肿瘤苗是可行的。     

人bax真核表达载体的构建及其在人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR中的表达

目的：构建人ｂａｘ真核表达载体,经脂质体导入人胃癌耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,并检测ｂａｘ基因在转导株的表达．方法：采用分子克隆技术将ｂａｘ基因插入真核表达载体ｐＢＫ－ＣＭＶ的多克隆位点之间,以脂质体介导法将目的基因导入受体细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,Ｇ４１８筛选克隆细胞,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｂａｘ基因的表达．结果：成功地构建了重组质粒ｐＢＫ－ｂａｘ,将之转入细胞后,经Ｇ４１８筛选３０ｄ获得了稳定的细胞克隆,即ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ－ｂａｘｃｅｌｓ．Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证实了ｂａｘ基因转导株具有明显的Ｂａｘ蛋白表达．结论：ｂａｘ真核表达载体的构建,为胃癌耐药的临床治疗打下了基础．     

人骨形成蛋白2反义RNA对骨肉瘤细胞OS-9901生物学活性的影响

探讨骨形成蛋白（BMP）对人骨肉瘤细胞的作用及意义．方法：将重组人BMPZ基因的反义核酸逆转录病毒表达载体PDOR－AB用脂质体导入BMP表达阳性的骨肉瘤细胞OS－99OI，观察骨肉瘤细胞OS－99OI的BMP表达、增殖活性、肿瘤抑制基因＂m23的表达、细胞周期和电镜下形态改变．结果：转染后，OS－99o1细胞中内源性的BMP表达产物明显下降；增殖活性明显下降；肿瘤转移抑制基因＂m23表达未见改变；细胞周期分析表明：GI期细胞比例上升，S期比例下降；电镜观察可见细胞质中溶酶体增多，染色质有断裂现象．结论：反义核酸技术阻断BMPZ在OS－99o1细胞中的表达后，肿瘤细胞的增殖活性降低，证实骨肉瘤细胞中BMP的表达增加了肿瘤细胞的增殖活性．