参附注射液对缺氧缺血新生大鼠ORP150、XBP1和CHOP mRNAs表达的影响

目的 探讨参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)后脑皮质神经元内质网应激相关因子氧调节蛋白150(oxygen regulate protein 150,ORP150)、X盒结合蛋白1(X-box binding protein1,XBP1)和C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)mRNA表达的影响.方法 新生7d的Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组与参附治疗组(参附注射液,10 ml/kg,腹腔注射,1次/d,连续3d).按照造模后不同观察时间点又分为3h、6h、12 h、24 h、3d、7d6个亚组,每个亚组8只.建立新生大鼠HIBD模型.采用逆转录聚合酶链反应检测大鼠大脑皮质ORP150、XBP1和CHOP mRNA表达.结果 假手术组ORP150、XBP1和CHOP基因表达很弱.生理盐水对照组和参附治疗组ORP150、XBP1和CHOP mRNA表达在模型制作后3h即较假手术组显著性上调(P均＜0.05);XBP1和CHOP mRNA表达分别在6h和12 h时达高峰,之后均有所下降,7d时接近假手术组水平.其中,参附治疗组XBP1和CHOP mRNA表达在模型制作后12 h、24 h和3d时显著性低于生理盐水对照组(P均＜0.05);生理盐水对照组XBP1 mRNA表达与CHOP mRNA表达呈显著正相关(r=0.649,P＜0.05).结论 新生大鼠HIBD可诱发内质网应激反应,ORP150、XBP1和CHOP可能参与了新生大鼠HIBD后迟发性神经元损伤过程.参附注射液可下调XBP1和CHOP mRNA表达,抑制内质网应激反应.     

参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Fas死亡结构域蛋白表达的影响

目的:探讨参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)及其mRNA表达的影响.方法:100只SD大鼠随机分为正常组(n=10)、假手术组(n=10)、脑缺血再灌注组(n=40)和参芎注射液组(n40).线栓法制备大脑中动脉闭塞模型,TUNEL法检测神经细胞凋亡,分别应用免疫组织化学染色和逆转录-聚合酶链式反应检测FADD蛋白和mRNA表达.结果:与正常组和假手术组相比,脑缺血再灌注组凋亡神经细胞计数显著增加(P＜0.01),FADD蛋白和mRNA表达均显著增强(P均＜0.01).与脑缺血再灌注组比较,参芎注射液组凋亡神经细胞显著减少(P＜0.05,P＜0.01),FADD蛋白和mRNA表达显著减弱(P＜0.05,P＜0.01).结论:参芎注射液能通过下调FADD表达抑制大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡.     

参附注射液对脑缺血再灌注大鼠bcl-2、p53表达的影响

目的 研究参附注射液(SFI)对脑缺血再灌注损伤神经元凋亡、bcl-2、p53蛋白表达的影响及对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法 健康大鼠分为缺血对照组和SFI治疗组,再灌注开始时治疗组大鼠腹腔注射SFI,对照组注射生理盐水,于再灌注6、12、24 h处死大鼠取脑组织制切片,分别进行bcl-2、p53蛋白及凋亡细胞检测.结果 TUNEL染色结果各组均有阳性细胞表达,SFI治疗组凋亡细胞数与缺血对照组比较显著减少.bcl-2蛋白结果显示治疗组bcl-2阳性细胞数均明显高于对照组.p53蛋白检测结果显示治疗组阳性细胞数均明显低于对照组.结论 SFI能抑制脑缺血再灌注损伤神经元凋亡,其抗凋亡机制可能与上调bcl-2蛋白及下调p53蛋白表达有关.     

参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的相关研究

目的探讨参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及凋亡相关因子caspase-8、抗凋亡因子FLIP的蛋白及其mRNA表达的影响。方法选择SD大鼠100只随机分为正常组(10只)、假手术组(10只)、模型组(40只)和参芎注射液治疗组(干预组,40只),采用TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学及RT-PCR法分别检测caspase-8、FLIP的蛋白和mRNA表达。结果与正常组和假手术组比较,模型组大鼠各时间点凋亡细胞明显增加(P<0.01),caspase-8、FLIP的蛋白和mRNA表达明显增强(P<0.05,P<0.01)。与同时间点模型组比较,干预组大鼠凋亡细胞明显减少,caspase-8蛋白和mRNA表达明显减弱(P<0.05,P<0.01),FLIP蛋白和mRNA表达分别于再灌注6 h和12 h时间点明显增强(P<0.05)。结论参芎注射液能通过减弱caspase-8表达及增强FLIP表达,从而拮抗大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡。     

香丹注射液对脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡与FADD mRNA表达的影响

目的 研究香丹注射液对脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡及其相关基因表达的影响.方法 线栓法制备脑缺血再灌注大鼠损伤模型,缺血2h后再灌注3、6、12、24h,采用TUNEL检测(原位末端转移酶标记技术)检测细胞凋亡,提取脑组织RNA检测Fas死亡结构域相关蛋白(FADD) mRNA的表达变化.结果 治疗组大鼠缺血再灌注后FADD mRNA表达水平较模型组均降低(P＜0.05),第24小时与假手术组比较无统计学意义(P＞0.05);治疗组大鼠凋亡细胞凋亡率较模型组明显降低(P＜0.01).结论 香丹注射液能降低脑缺血后脑组织中FADD mRNA蛋白的表达,减轻细胞凋亡.     

参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察参芎注射液对脑缺血再灌注大鼠行为学、脑梗死体积和组织病理学的影响,探讨其脑保护作用及机制。方法33只雄性SD大鼠随机分为4组假手术组、对照组、川芎嗪组和参芎组。采用线栓法制作大脑中动脉缺血1h再灌注模型,用Longa5分制评分和氯化三苯四氮唑(TTC)染色法评价行为学和脑梗死体积,再灌注24h时电镜观察缺血边缘区超微结构改变。结果各组在再灌注6h和24h时,Longa评分无显著差异,但参芎组再灌注24h时的Longa评分较再灌注6h时显著改善(P<0·05);川芎嗪组和参芎组的梗死体积较对照组显著缩小(P<0·05),川芎嗪组和参芎组两组比较无显著差异;川芎嗪组、参芎组细胞的损伤程度较对照组显著减轻(P<0·05);在电镜下,参芎组缺血边缘区的神经细胞超微结构改变轻于对照组,优于川芎嗪组。结论参芎注射液对脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,且优于单用川芎嗪。     

小牛血清去蛋白注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase-12表达的影响

目的 探讨小牛血清去蛋白注射液(DCSI)对脑缺血再灌注后大鼠海马Caspase-12表达的影响.方法 健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组和DCSI组.DCSI组于术前1 w开始给药,每日大鼠尾静脉注射DCSI 80 mg/kg,末次给药5 h后建立脑缺血再灌注模型.分别在脑缺血再灌注后的5个时间点进行神经行为学观察,海马病理学、细胞凋亡、Caspase-12蛋白及mRNA表达指标的检测.结果 与假手术组相比,模型组大鼠脑缺血再灌注后的神经功能缺损明显,海马细胞呈明显凋亡表现,Caspase-12蛋白及mRNA表达上调,尤以24h时明显(P＜0.01);DCSI组与模型组相比,功能缺损评分和细胞凋亡相对较轻,Caspase-12蛋白及mRNA表达也相对下凋(P＜0.01,P＜0.05).结论 DCSI对缺血再灌注损伤大鼠大脑具有保护作用,其机制可能与其有效抑制脑组织Caspase-12 mRNA转录水平及蛋白表达、阻断内质网应激启动的凋亡通路有关.     

白蛋白治疗对大鼠脑缺血后海马血管内皮生长因子及其受体1的影响

目的探讨人血白蛋白治疗对大鼠脑缺血早期海马血管内皮生长因子(VEGF)及fam样酪氨酸激酶受体1(flt-1)表达的影响。方法雄性SD大鼠40只,采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组10只、生理盐水组15只和白蛋白组15只。采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白水平,RT-PCR检测脑缺血再灌注后6、24、48h大鼠海马VEGF和flt-1mRNA表达,免疫组织化学和Western blot法检测脑缺血再灌注24h海马VEGF蛋白表达。结果与生理盐水组比较,白蛋白组大鼠神经功能缺损评分于脑缺血再灌注后24、48h明显降低(P<0.05),海马VEGF mRNA和flt-1mRNA表达于脑缺血再灌注后6、24h明显降低(P<0.05,P<0.01),海马VEGF蛋白表达于脑缺血再灌注后24h明显降低(P<0.05)。结论白蛋白治疗可下调脑缺血早期海马VEGF和flt-1mRNA表达,降低海马VEGF蛋白表达水平,改善神经功能缺损。     

丹红注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠皮质区新生微血管的影响研究

背景新生血管形成是最终的侧支代偿途径,探究丹红注射液对新生血管的影响对其作用机制研究具有一定价值。目的探究丹红注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠皮质区新生微血管的影响。方法2018年12月—2019年6月,将84只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=12)、造模组(n=36)及丹红组(n=36)。参照改良LONGA线栓法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型,其中造模组和丹红组大鼠制备脑缺血再灌注损伤模型,假手术组大鼠不插线栓;丹红组大鼠于拔出线栓后腹腔注射丹红注射液,造模组和假手术组大鼠均于相同时间点腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液。比较三组大鼠造模后24 h、72 h、7 d神经行为学评分、脑梗死体积及脑缺血再灌注皮质区新生微血管数目。结果(1)假手术组大鼠造模后24 h、72 h及7 d神经行为学评分均为0。造模组和丹红组大鼠造模后24 h、72 h神经行为学评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);丹红组大鼠造模后7 d神经行为学评分低于造模组(P<0.05)。(2)假手术组大鼠造模后24 h、72 h及7 d脑梗死体积均为0。丹红组大鼠造模后24 h、72 h及7 d脑梗死体积小于造模组(P<0.05)。(3)造模组和丹红组大鼠造模后24 h脑缺血再灌注皮质区新生微血管数目多于假手术组(P<0.05);造模组和丹红组大鼠造模后72 h及7 d脑缺血再灌注皮质区新生微血管数目多于假手术组,丹红组大鼠脑缺血再灌注皮质区新生微血管数目多于造模组(P<0.05)。结论丹红注射液可有效增加脑缺血再灌注损伤大鼠皮质区新生微血管数量,改善脑侧支循环,进而减轻神经功能缺损、缩小脑梗死体积。     

参芎注射液对脑缺血再灌注大鼠炎症因子变化的影响

目的观察脑缺血再灌注(I/R)大鼠脑组织核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达及血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10质量浓度的变化,并探讨参芎注射液对其影响。方法2006年4月至7月间于苏州大学附属第二医院将54只健康雄性大鼠随机分为生理盐水对照组、川芎嗪组和参芎组。采用线栓法制作大脑中动脉I/R模型,缺血1h时回抽栓线实现再灌注,造模成功后,于再灌注6h、12h及24h3个时间点断头取脑及采血;采用免疫组化法标记脑组织NF-κB、TNF-α及ICAM-1表达;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清IL-1β、IL-6及IL-10质量浓度。结果各组脑组织TNF-α、ICAM-1均随再灌注时间延长而表达增强,但NF-κB于再灌注12h达高峰;与对照组相比,参芎组NF-κB、TNF-α及ICAM-1表达明显减弱(P均<0.05);参芎可降低IL-1β的质量浓度,促使IL-6的峰值提前,提高IL-10的质量浓度(P<0.05或P<0.01)。结论参芎注射液抑制脑I/R炎症损伤的作用优于川芎嗪。     

大鼠局灶性脑缺血/再灌注后血管生成素-1和-2的动态表达变化

目的检测相关细胞因子血管生成素-1(Ang-1)、Ang-2在大鼠局灶性脑缺血／再灌注后表达的动态变化。方法采用免疫组化及原位杂交技术。结果在正常脑组织及缺血／再灌注后均发现Ang-1蛋白及Ang-1 mRNA的中等程度的广泛表达，在再灌注48h时达到高峰，此后虽有所下降，但仍为持续的阳性表达。Ang-2蛋白及Ang-2 mRNA在对照组及假手术组中均呈阴性表达，在MCAO后6h于梗死灶内的一些单个细胞中发现，在12～24h后达到高峰，这种表达一直持续到72h。结论Ang-1、Ang-2在脑损伤的过程中起着重要的作用。     

大鼠脑缺血再灌注区转录修复偶联因子表达与神经元DNA损伤的研究

目的　探讨大鼠脑缺血再灌注后缺血区不同时相转录修复偶联因子 (CSB/ERCC6 )表达对神经元DNA损伤的作用。方法　Wistar大鼠 5 9只分为对照组、假手术组和实验组 ,实验组又分为缺血 2h再灌注 12、2 4、48、72、12 0、16 8h组 ,分别用原位杂交和原位末端标记 (TUNEL)方法检测大脑中动脉阻塞 2h再灌注不同时相点局部脑组织CSB/ERCC6mRNA表达及神经元DNA损伤的情况。结果　局部缺血区域神经元DNA损伤于再灌注 12h开始出现 ,2 4h最为严重 ,72h开始减轻。大鼠脑缺血再灌注后 48h ,局部脑组织CSB/ERCC6mRNA表达开始升高 ,于再灌注 72h达到峰值 ,持续至 12 0h仍保持较高水平表达。结论　脑缺血再灌注后表达增高的CSB/ERCC6mRNA与局部缺血区域神经元DNA损伤密切相关 ,CSB/ERCC6mRNA作为转录修复偶联因子 ,可能调节了神经元DNA损伤后的自身修复能力。     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血后神经元凋亡及热休克蛋白27和血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨促红细胞生成素对大鼠脑缺血的保护作用。方法采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉制作大鼠局灶性缺血再灌注模型。促红细胞预处理组于缺血开始前2h予腹腔注射促红细胞生成素3000u/kg;缺血再灌注组和假手术组在手术前2h予腹腔注射等量生理盐水。再灌注24h后进行细胞凋亡检测及热休克蛋白27和血管内皮生长因子免疫组织化学染色。结果再灌注24h后,缺血再灌注组可见较多的POD阳性细胞(67.48±11.17个/高倍视野),促红细胞生成素预处理组缺血区阳性细胞数目减少(45.25±4.72个/高倍视野,P<0.01),假手术组偶见个别阳性细胞,正常组未见凋亡细胞;与缺血再灌注组(25.60±4.42个/高倍视野)相比,促红细胞生成素预处理组热休克蛋白27表达增加(67.56±13.84个/高倍视野,P<0.01);促红细胞生成素预处理组血管内皮生长因子表达较缺血再灌注组亦增加(74.90±11.64个/高倍视野比40.14±7.50个/高倍视野,P<0.01))。结论促红细胞生成素预处理后可抑制缺血损伤后缺血侧皮层细胞凋亡,其机制可能是通过上调热休克蛋白27和血管内皮生长因子基因表达而实现的。     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对脑缺血-再灌注大鼠核因子κB和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的 观察垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）对局灶性脑缺血-再灌注大鼠的脑保护作用及对核因子KBp65（NF—kB p65）和肿瘤坏死因子α（TNF—α）表达的影响。方法 取健康雄性SD大鼠72只，采用随机数字法分为假手术组、缺血再灌注组、PACAP组，每组大鼠24只，每组再分为再灌注12h和24h组，每时间点12只大鼠。采用线栓法建立大脑中动脉缺血模型，于缺血后2h进行再灌注。PACAP组于再灌注30min内，由尾静脉注射（5×10^-7）％的PACAP，（5×10^-9）g／kg，假手术组和缺血-再灌注组，用等体积（0．1ml／kg）的等渗盐水代替PACAP。再灌注12、24h取脑，光镜下观察脑组织的结构；并采用Western印迹法检测NF—kBp65的表达，免疫组化法检测TNF—d的表达。结果 ①PACAP组大鼠光镜下脑组织细胞损伤程度与缺血-再灌注组相比明显减轻。②PACAP再灌注12、24h，TNF—α阳性细胞的表达分别为（20．0±2．5）、（30．7±1．3）个／高倍视野，缺血-再灌注组分别为（40．8±3．7）、（60．7±3．5）个／高倍视野，与假手术组的（2．8±0．8）、（3．0±Q7）个／高倍视野的表达比较，差异均有统计学意义（P〈0．01），缺血-再灌注组与PACAP组比较，差异亦有统计学意义（P〈0.01）。③再灌注12和24h，PACAP组NF—kB065表达的灰度值为57±7、49±8，缺血-再灌注组为90±14、74±10，与假手术组的41±17、41±10比较，差异均有统计学意义（P〈0．01），缺血-再灌注组与PACAP组比较差异亦有统计学意义（P〈0．01）。结论 PACAP能抑制大鼠局灶性脑缺血-再灌注后TNF—α、NF—kB p65的表达，这可能是其脑保护作用机制之一。     

VEGF用于急性脑梗死神经元保护及再生的实验研究

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）在急性脑梗死中神经元保护及再生作用。方法48只SD大鼠，随机分为4组，利用MCAO模型。A组（12只），缺血1h后再灌注24h＋生理盐水，对照组；B组（12只），缺血1h后再灌注1h＋VEGF；C组（12只），缺血1h后再灌注12h＋VEGF；D组（12只），缺血1h后再灌注24h＋VEGF。模型成功后侧脑室注射rrVEGF164，VEGF注射后连续3d分别腹膜下注射BrdU6mg/100g。术后第7天，取脑切脑片。分别TTC染色，HE染色。免疫组化观察。结果VEGF，Tunnel染色凋亡细胞阳性数，BrdU阳性细胞数，在缺血再灌注12h，24h组与对照组相比，阳性细胞数有统计学差异。结论VEGF在急性脑梗死后有抗细胞凋亡及神经元保护作用，并有促进缺血后神经元再生作用。     

红细胞生成素对脑缺血再灌注大鼠大脑皮质基质金属蛋白酶-9和BCL-2表达的影响

目的 通过研究重组人红细胞生成素(recombinant human etythropoietin,rhEPO)对局灶性脑缺血再灌注大鼠基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteimse-9,MIMP-9)和BCL-2表达的影响,探讨EPO脑保护作用的可能机制.方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞冉灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型,腹腔注射rhEPO进行干预,通过旺染色光镜观察组织病理学变化,应用免疫组化技术检测缺血侧大脑皮质MMP-9和BCL-2的表达.结果 HE染色:在各时间点,rhEPO组存活神经细胞数量显著较多,损伤程度显著较轻.MMP-9免疫组化染色:正常对照组和假手术组偶见阳性细胞;生理盐水对照组缺血侧脑组织MMP-9阳性细胞在再灌注后6 h开始出现,24 h达高峰,72 h开始减少;rhEPO组MMP-9阳性细胞变化趋势与生理盐水对照组相似,但在同一时间点显著少于生理盐水对照组(t分别为12.023 6、12.635 0和12.779 6,P均<0.01).BCL-2免疫组化染色:对照组和假手术组未见阳性细胞;生理盐水对照组缺血侧脑组织BCL-2阳性细胞数在再灌注后6 h达高峰,24 h数量减少,72 h进一步减少;rhEPO组BCL-2阳性细胞变化趋势与生理盐水对照组相似,但在同一时间点显著多于生理盐水对照组(t分别为5.763 1、8.110 1和5.798 7,P均<0.01).结论 rhEPO可能通过抑制MMP-9表达和上调BCL-2表达抑制缺血侧皮质神经细胞凋亡而发挥保护作用.     

小鼠局灶性脑缺血后原蛋白转化酶1及神经肽Y的表达

目的观察小鼠局灶性脑缺血后脑皮质神经细胞内原蛋白转化酶1(PC1)及其作用底物神经肽Y(NPY)的表达变化,探讨PC1在神经细胞缺血损伤中的作用。方法将24只雄性C57小鼠用计算机随机法分为假手术组和缺血-再灌注4、24 h组,每组各8只。采用线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞模型,阻塞1 h再灌注。采用Western Blot法、实时荧光定量核酸扩增检测小鼠脑皮质神经细胞中PC1及NPY蛋白、mRNA的表达变化。结果 (1)与假手术组比较,缺血侧皮质脑组织PC1mRNA缺血-再灌注4 h组表达增加(2.66±0.24),缺血-再灌注24 h组增加(2.07±0.23),差异均有统计学意义(均P0.05)。与假手术组比较,缺血-再灌注4 h组PC1前体蛋白水平明显增加(P0.05),24 h组差异无统计学意义(P0.05)。(2)与假手术组比较,缺血-再灌注4 h组前体NPY前体蛋白水平及mRNA增加(P0.05),mRNA表达为2.31±0.27;24 h组蛋白前体水平增加(P0.05),NPY mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论小鼠脑缺血-再灌注后PC1前体表达增多,从而影响PC1的加工活性,导致PC1的作用底物NPY蛋白以前体形式堆积,可能为神经细胞缺血损伤的内在机制之一。