重症烧伤大鼠早期外周血单个核细胞凋亡的实验研究

目的：探讨烧伤后早期外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）凋亡的发生、变化规律及ｂｃｌ－２蛋白表达的变化。方法：应用流式细胞仪、ＤＮＡ凝胶电泳等手段观察烧伤大鼠ＰＢＭＣ凋亡发生的动力学变化、ｂｃｌ－２蛋白的表达及烧伤血清对细胞凋亡的影响。结果：烧伤后６ｈ起,ＰＢＭＣ凋亡率明显增加,随时间的推延呈增高趋势,此时ｂｃｌ－２蛋白表达下调;烧伤血清可以诱导单核细胞株Ｒａｗ２６４．７凋亡。结论：ＰＢＭＣ凋亡在严重烧伤的免疫功能紊乱方面起重要作用,而ｂｃｌ－２基因下调可能是重症烧伤早期ＰＢＭＣ细胞凋亡的分子机制之一;烧伤血清含有（或缺乏）某种物质,可以介导细胞凋亡。     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞凋亡的检测及意义

目的研究激活诱导细胞死亡 (AICD)现象在乙型肝炎慢性化和重型化机制中的意义。方法分离 2 0例慢性 /慢性重型乙型肝炎病人与 10例健康献血员外周血单个核细胞 (PBMC) ,在 PHA的刺激下培养 72 h后收集细胞 ,经流式细胞仪检测凋亡。结果 PBMC凋亡率乙型肝炎组明显高于正常对照组 [(2 5 .48± 14.0 7) % vs(11.45± 5 .2 7) % ,P<0 .0 1];慢性乙型肝炎组 [(30 .5 7± 13.43) % ]明显高于正常对照组 [(11.45± 5 .2 7) % ,P<0 .0 1]和慢性重型乙型肝炎组 [(13.5 9± 6 .44 ) % ,P<0 .0 1];PBMC凋亡率乙型肝炎 HBe Ag(+ )组明显高于正常对照组 [(2 9.5 0± 12 .5 4) % vs(11.45± 5 .2 7) % ,P<0 .0 1]。结论 AICD可能是形成 HBV慢性感染免疫耐受的一个重要机制。     

不同浓度钙卫蛋白对滋养细胞凋亡的影响

目的 研究不同浓度钙卫蛋白在滋养细胞凋亡过程中的影响,进而分析其在妊娠高血压疾病发病机理中的作用。方法 应用MTT法测定滴加钙卫蛋白后滋养细胞的吸光度值,以表达增殖活性,观察滋养细胞在透射电镜下形态结构的改变。结果 24 h和48 h的钙卫蛋白分别作用后,滋养细胞增殖活性随钙卫蛋白浓度增加而降低（r=-0.735;-0.750,P<0.01）。通过透射电镜观察,滋养细胞经钙卫蛋白处理后呈凋亡特征。结论 钙卫蛋白对滋养细胞有诱导凋亡作用,且凋亡率随药物浓度增加而升高。     

细胞凋亡中的钙调节

胞质Ca2 + 升高是细胞凋亡中Ca2 + 调节的经典模式 ,但近年来有证据表明胞质Ca2 + 下降同样能诱导细胞凋亡。目前研究发现 ,胞内Ca2 + 在细胞质、细胞核以及细胞钙库线粒体和内质网的动态平衡破坏和重新分布直接参与细胞凋亡信号的调控 ,而Bcl 2家族蛋白在细胞凋亡过程的胞内Ca2 + 调节及继后的一系列生理效应中发挥特殊作用。细胞凋亡中Ca2 + 调节的深入研究不但有助于阐明细胞凋亡的调控机理 ,同时为相关疾病防治和药物开发提供新的策略     

HBV阳性血清诱导人外周血单个核细胞凋亡的检测及意义

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)对外周血单个核淋细胞(PBMC)凋亡的作用.方法利用10名健康献血员外周血分离PBMC,分为加HBV阳性血清组和加健康人血清对照组,经培养72h后,采用PI染色法在流式细胞仪上检测细胞的凋亡情况.结果加HBV阳性血清组培养细胞的凋亡率为(39.56±7.03)%,明显高于加健康人血清组培养细胞的凋亡率(27.57±7.78)%,两组间具有非常显著的差异(P＜0.02).结论HBV可能具有诱导PBMC凋亡的能力,这可能是形成HBV慢性感染免疫耐受的一个重要机制.     

核钙信号与细胞凋亡调节

核Ca2 浓度具有独立的调节系统 ,凋亡过程中也存在复杂的Ca2 调节步骤 ,即从内切酶激活到关键核蛋白的裂解过程 ,核Ca2 信号可能参与了细胞凋亡的发生。     

单纯疱疹病毒1型诱导的Hela细胞凋亡及钙浓度的变化

一方面认为宿主细胞可利用细胞凋亡来清除病毒感染细胞 ;另一方面病毒可以抑制细胞凋亡 ,以利于自身增殖需要。而病毒诱导细胞凋亡还是抑制凋亡 ,取决于多方面因素。Ｌｅｐｐａｒｄｉ研究表明野生株ＨＳＶ 1感染Ｖｅｒｏ细胞并不引起Ｖｅｒｏ细胞凋亡 ,但缺乏调节性基因α4的Ｈ     

CRT-E2-EGFP表达、胞内定位及其对B16细胞凋亡的影响

目的:观察CRT-E2融合蛋白在小鼠黑色素瘤B16细胞中的表达及其定位,并探讨CRT引起的E2蛋白表达定位改变对B16细胞增殖及调亡的影响.方法:构建荧光真核表达载体pEGFP-CRT、pEGFP-E2、pEGFP-CRT-E2,将上述载体以及空载体pEGFP-C1经脂质体瞬时转染B16细胞,West-em blot分析确认目的蛋白表达.荧光显微镜下观察CRT-E2融合蛋白在细胞中表达定位;流式细胞术检测不同重组表达载体转染B16细胞24 h、48 h后,对细胞周期的影响和诱导凋亡的情况.结果:CRT-E2融合蛋白在B16细胞中正确表达,主要分布于细胞质,能将细胞阻滞于G1期,有效诱导肿瘤细胞发生凋亡(P<0.01).结论:成功构建CRT-E2真核表达载体,外源性CRT能够引起E2蛋白表达定位于细胞质,并明显促进了肿瘤细胞的调亡.     

细胞凋亡对尖锐湿疣患者外周血单个核细胞的影响

目的 :探讨激活诱导细胞死亡 (AICD)对尖锐湿疣患者细胞免疫功能的影响。方法 :分离CA患者和健康体检正常人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,在PHA的刺激下体外培养 2 4小时后收集细胞和上清液 ,经流式细胞术检测凋亡细胞 ,采用酶联免疫吸附试验检测培养上清液IL 2及IL 10。结果 :发现CA组新鲜血PBMC的凋亡率很低和对照组相似 (P >0 0 5 ) ,培养 2 4小时后CA患者的外周血单个核细胞凋亡明显高于正常对照组 (P <0 0 0 1) ,CA患者的培养上清液IL 2浓度明显低于对照组 (P <0 0 0 1) ,而IL 10浓度显著高于对照组 (P<0 0 0 1)。结论 :AICD可能是引起尖锐湿疣患者细胞免疫功能低下的一个重要机制 ,在尖锐湿疣患者发病机制中起重要作用。     

钙联蛋白调控内质网应激诱导的细胞凋亡

内质网应激(ERS)可诱导多种细胞凋亡,与疾病发生发展密切相关.钙联蛋白(CNX)是内质网中重要的类凝集素分子伴侣,通过参与未折叠蛋白反应募集凋亡相关因子、激活IRE1-JNK激酶等途径,调控ERS诱导的凋亡.本文就其研究现状进行阐述.     

活动性狼疮肾炎患者外周血单个核细胞基因谱的表达

目的:利用cDNA基因芯片技术检测活动性狼疮肾炎患者与健康人外周血单个核细胞基因表达的差异,探讨其在狼疮肾炎发病中的意义。方法:提取活动性的狼疮肾炎患者的外周血单个核细胞和健康人外周血单个核细胞的mRNA,分别用标有荧光素的dCTP反转录制备cDNA探针,将探针与含有8000点cDNA的CSC-GE-80芯片杂交后扫描荧光强度,上述方法在3组患者中重复3次,从而筛选出恒定的差异性表达的基因。结果:发现活动性狼疮肾炎患者外周血单个核细胞有75个基因表达异常,其中表达上调的基因有42个,下调的基因有33个。结论:多个基因的变化与活动性狼疮的发病相关,其中defensinα₁、S100A8、S100A9基因的上调可能参与了狼疮肾炎的炎症过程。     

慢性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞胞内钙的影响及其机制研究

目的:研究慢性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)胞内钙浓度(［Ca²⁺］_i)的影响及L-型钙通道和胞内钙库的作用,为缺氧性肺动脉高压(HPH)发病机制的进一步研究提供理论依据。 方法:复制大鼠缺氧性肺动脉高压动物模型，利用Fura－2/AM钙离子成像方法测定PASMCs在不同钙离子浓度细胞外液及L-型钙通道阻滞剂nifedipine和IP3R钙通道抑制剂肝素干预前后 ［Ca²⁺］_i变化。 结果:(1)缺氧＋含钙外液组PASMCs ［Ca²⁺］_i 显著高于对照＋含钙外液组（P<0.05）。缺氧＋含钙外液组PASMCs ［Ca²⁺］_i显著高于缺氧＋无钙外液组（P<0.05）。(2)缺氧nifedipine组PASMCs［Ca²⁺］_i在加药前后无显著差异（P>0.05）。（3）缺氧未干预组与缺氧肝素组PASMCs ［Ca²⁺］_i无明显差异（P>0.05）。 结论:慢性缺氧可使PASMCs的［Ca²⁺］_i增加。慢性缺氧引起［Ca²⁺］_i增加可能与细胞外钙内流有关，L-型钙通道和IP3R钙通道在调节［Ca²⁺］_i的过程中可能不独立发挥作用。     

脐血和外周血单个核细胞培养上清影响HIV-1感染的体外实验研究

目的：体外研究脐血和外周血单个核细胞（CBMC和PBMC）培养上清对HIV-1感染的影响，为发现抗HIV-1的可溶性因子奠定基础。 方法： PHA刺激CBMC和PBMC后5 h和12 h收集上清，加入荧光标记的HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞培养体系中，2 h后在倒置荧光显微镜下观察其对细胞融合的影响；用Luminex 100TM分析仪检测收集上清中细胞因子含量。 结果： PHA刺激CBMC和PBMC后5 h和12 h的上清均可抑制HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞融合，同一时间收集的PBMC和CBMC上清对HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞融合的抑制作用无差异，但5 h上清的抑制作用强于12 h的上清；CBMC 5 h上清中促炎症细胞因子比PBMC 5 h上清为低，而CCR5配体MIP-1α和RANTES则比PBMC 5 h上清高，差异显著（P＜0.05）。 结论： 通过脐血和外周血单个核细胞可以制备有效抗HIV感染的可溶性因子，可能为艾滋病治疗药物提供新的来源。     

钙离子载体在诱导人外周血单核细胞分化为树突状细胞中的作用

目的研究钙离子载体(CI)能否诱导人外周血单核细胞(PBMC)分化为树突状细胞(DC)，并初步探讨其信号转导途径。方法分离健康献血者的PBMC，在体外用CI(A23187)或人重组粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)和CI培养40h，或rhGM-CSF和白细胞介素4(IL-4)培养7d，部分PBMC预先用W-7或CsA或K35926处理30min后，再加入上述细胞因子或CI。相差显微镜下观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表面CD14、CD80、CD86、CD83等分子的表达，MTT比色法检测其对同种异体混合T淋巴细胞的刺激增殖作用。结果健康献血者的PBMC经CI培养40h，或rhGM—CSF与CI培养40h，或rhGM-CSF与IL-4培养7d，均可获得DC的典型形态和表面分子的表达，包括CD14表达下调、共刺激分子(CD80、CD86)表达上调，以及较强刺激同种异体混合T淋巴细胞增殖的作用；CI诱导的DC其CD14分子的下调及CD83分子的上调更明显，刺激混合T淋巴细胞的增殖能力更强；rhGM-CSF可协同CI诱导PBMC向DC的分化。经rhGM—CSF及CI处理的PBMC，其形态、表面标志物及对T细胞的刺激增殖能力，均受到W-7或CsA或KT5926不同程度的抑制；而rhGM-CSF及IL-4所诱导的PBMC其形态、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用却不受上述抑制剂的影响。结论CI可快速诱导PBMC向DC分化，其分化过程可能受控于Ca^2 /钙调蛋白及其下游的多个细胞信号转导途径的调节。     

二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究二十碳五烯酸(EPA)是否协同视黄酸(RA)影响HL-60细胞的凋亡及相应分子机制。方法 流式细胞仪(FCM)检测细胞周期相分布以测定细胞增殖和凋亡功能；Western blot法分析bcl-2和caspase—3表达。结果 与单独应用相比，EPA和RA联合应用可增强HL-60细胞的调亡效应，以及下调节bcl—2和增强caspase-3基因表达。结论 EPA和RA联合应用对HL-60细胞凋亡的增强效应，可能与它们增强caspase-3和降低bcl—2基因表达相关。     

慢性肾衰大鼠单个核细胞内游离钙浓度和白介素－1活性的变化

本文探讨了５／６肾切除术后慢性肾衰大鼠残肾纤维化的发生机理，发现术后１２０天，在残肾单个核炎性细胞浸润、残肾显著纤维化和肾功能损害的同时，残肾脂质过氧化物含量显著升高，抗氧化机制功能显著下降，钠钾ＡＴＰ酶活力显著下降，周围血单个核细胞内游离钙浓度显著升高，单个核细胞培养上清白介素－１活性增高。而摄入大量维生素Ｅ的大鼠，上述各指标有不同程度的改善，残肾纤维化显著减轻。提示残肾纤维化可能与单个核白细胞内游离钙浓度升高，进而产生白介素－１增多有关。     

不同参数次声对心肌细胞钙离子的影响

目的：观察不同参数次声对大鼠心肌 细胞钙离子浓度的影响。方法：用8 Hz的90、130 dB次声分别作用于大 鼠1、7、14、21和28 d，每日2 h，观察大鼠心肌细胞钙离子浓度的变化。结果:与对照组比较，次声作用组大鼠心肌细胞钙离子浓度随时间延长及声压级水平升高 而逐渐增加（P<0.01）。结论：次声可引起大鼠心肌细胞钙离子浓 度的变化，其变化与次声暴露参数有关。     

花生四烯酸对家兔心室肌细胞动作电位和L-型钙电流的影响

目的：研究花生四烯酸(AA)对家兔单个心室肌细胞动作电位和L-型钙电流的影响。方法：酶解法分离家兔单个心室肌细胞，用全细胞膜片钳技术记录其动作电位和L-型钙电流。结果：①AA明显缩短动作电位时程（APD），而对静息电位（RP）和动作电位幅值（APA）无明显影响。②AA使L- 型钙电流峰电流密度从(10.21±3.15) PA/PF减少到（6.53±2.17）PA/PF(n=6,P＜0.05）,I-V关系曲线上移，其形状和峰值电压保持不变。结论：花生四烯酸能抑制L-型钙电流，缩短动作电位时程，这可能是其心血管作用的重要机制之一。     

银杏内酯B对谷氨酸诱导脑皮质神经元凋亡及Ca2+超载的影响

目的：观察银杏内酯B对谷氨酸诱导培养脑皮质神经元凋亡的拮抗作用，并探讨这种作用与神经细胞内游离Ca2+浓度改变的关系。方法： 采用改良的方法原代培养胎小鼠脑皮质神经元，用噻唑兰（MTT）法检测神经元的存活情况；细胞凋亡采用形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳法和Hoechst 33258核染色方法进行分析；用Fura-2/AM荧光指示剂法测定细胞内Ca2+浓度。结果： 谷氨酸（0.8 mmol/L）能诱导神经细胞凋亡和胞内Ca2+超载，银杏内酯B（10-250 μmol/L）能减轻谷氨酸所致的细胞损伤，表现为神经元存活率提高，细胞形态的恢复和DNA断裂减少。结论： 银杏内酯B可拮抗谷氨酸所致的神经细胞毒性作用，这可能与其能竞争PAF受体并降低神经细胞内［Ca2+］从而抑制谷氨酸诱导的神经元凋亡有关。